Calu-3 šūnu līnija
Calu-3 šūnas ir no cilvēka iegūta elpceļu epitēlija šūnu līnija, kas reprezentē nesmalikocelulāro plaušu karcinomu. Tās tiek plaši izmantotas biomedicīnas pētījumos, kas ietver plaušu vēža bioloģijas, elpošanas ceļu slimību, saimnieka un patogēna mijiedarbības un zāļu transporta elpceļos izpēti. Turklāt tās tiek izmantotas vairāku elpošanas ceļu slimību ārstēšanas metožu izstrādē.
Šis raksts sniegs jums vispusīgas zināšanas par Calu-3 šūnu līniju. Šeit jūs uzzināsiet:
- Calu-3 šūnu izcelsmi un vispārīgo raksturojumu
- Calu-3 šūnu līniju: Informāciju par kultivēšanu
- Calu-3 šūnu priekšrocības un trūkumi
- Calu-3 šūnu līnijas pielietojumu pētniecībā
- Calu-3 šūnas: Clu-3all-Call Cūgu sistēmas izmantošana Clu-3all Cūgu sistēmas pētniecībā
- Calu-3 šūnu resursi: Protokoli, videomateriāli un citi resursi
1. Calu-3 šūnu izcelsme un vispārīgas īpašības
Galvenā nepieciešamā informācija par šūnu līniju ir tās izcelsme un vispārīgās īpašības. Tas palīdzēs jums izlemt par tās izmantošanu jūsu pētnieciskajā darbā. Šī sadaļa palīdzēs jums uzzināt šo būtisko informāciju par Calu-3 šūnu līniju. Tajā būs ietverti šādi aspekti: Kas ir CALU-3 šūnu līnija? Kāda ir Calu-3 šūnu morfoloģija? Kāda ir Calu-3 šūnu izcelsme?
- Calu-3 šūnas tika iegūtas no pleiras izplūduma (metastātiskas vietas) vīrietim (25 gadi), kas ir baltādains, ar plaušu adenokarcinomu. Šūnu līniju 1975. gadā izveidoja Jorgen Fogh un Germain Trempe no Memorial Sloan Kettering Cancer Center.
- Calu-3 šūnām ir epitēlijam līdzīga morfoloģija.
- Calu-3 šūnu diametrs ir no 8-9 līdz 20 mikroniem.
- Tām ir K-RAS (G13D), TP53 un CDKN2A gēnu mutācijas, un tajās ir EGFR savvaļas tipa ekspresija.
A549 pret Calu-3
A549 un Calu-3 šūnas ir cilvēka plaušu adenokarcinomas šūnu līnijas, taču tām ir atšķirīgas īpašības. Galvenā atšķirība starp Calu-3 un A549 šūnu modeļiem ir gļotu slāņa biezums. Calu-3 šūnas veido plānāku gļotu slāni, tādējādi modelējot proksimālo elpceļu epitēliju. No otras puses, A549 šūnām nav šīs īpašības, un tās ir piemērotākas distālo elpceļu fizioloģiskās struktūras attēlošanai [1].
2. Calu-3 šūnu līnija: Kultivēšanas informācija
Šī sadaļa palīdzēs jums uzzināt galvenos punktus par Calu-3 šūnu līnijas kultivēšanu. Šeit mēs aplūkosim: Kāds ir Calu-3 šūnu dubultošanās laiks? Kas ir Calu-3 šūnu barotne? Kāds ir Calu-3 šūnu kultivēšanas protokols? Kā kultivēt Calu-3 šūnas?
Galvenie punkti Calu-3 šūnu kultivēšanai
|
Dubultošanās laiks: |
Calu-3 šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 35 stundas. |
|
Adhēzijas vai suspensijas veidā: |
Calu-3 ir adherēta plaušu adenokarcinomas šūnu līnija. |
|
Sadalījuma attiecība: |
Calu-3 šūnu līnijas subkultivācijas attiecība ir no 1:2 līdz 1:4. Subkultivēšanai; šūnas skalo ar 1 x fosfātu buferšķīduma fizioloģisko šķīdumu (PBS) un inkubē ar Accutase (pasāžas šķīdumu) istabas temperatūrā gandrīz 10 minūtes. Pēc tam pievieno svaigu šūnu barotni un atdalītās šūnas centrifugē. Šūnu granulas uzmanīgi resuspendē, un šūnas iepilda kolbā ar svaigu barotni augšanai. |
|
Augšanas barotne: |
Calu-3 šūnu kultivēšanai izmanto EMEM barotni, kas satur 10 % FBS, 2 mM L-glutamīnu, 1,5 g/l NaHCO3, EBSS, 1 mM nātrija piruvātu un NEAA. Calu-3 šūnu barotne jāmaina 2 līdz 3 reizes nedēļā. |
|
Augšanas apstākļi: |
Calu-3 šūnas audzē mitrinātā inkubatorā 37 °C temperatūrā un pie 5 % CO2. |
|
Uzglabāšana: |
Lai aizsargātu šūnu dzīvotspēju ilgāku laiku, sasaldētas šūnas jāuzglabā šķidrā slāpekļa tvaika fāzē vai temperatūrā zem -150 °C. |
|
Sasaldēšanas process un barotne: |
Calu-3 plaušu šūnu līnijas sasaldēšanai galvenokārt izmanto CM-1 vai CM-ACF sasaldēšanas barotni. Lai saglabātu šūnu dzīvotspēju un pasargātu šūnas no jebkāda šoka, šūnas tiek lēni sasaldētas, ļaujot temperatūrai pazemināties tikai par 1 °C minūtē. |
|
Atkausēšanas process: |
Šūnas atkausē, ievietojot flakonu ūdens vannā, kas iepriekš iestatīta 37 °C temperatūrā, apmēram uz 1 minūti vai līdz brīdim, kad paliek neliels ledus gabaliņš. Pievieno svaigu barotni, un šūnas centrifugē, lai atdalītu sasalstošās barotnes sastāvdaļas. Pēc tam šūnu granulas resuspendē, un šūnas ielej jaunā kolbā, kas satur barotni. |
|
Bioloģiskās drošības līmenis: |
Calu-3 šūnu līnijas apstrādei ir nepieciešami 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorijas apstākļi. |
3. Calu-3 šūnu priekšrocības un trūkumi
Tāpat kā citām cilvēka šūnu līnijām, arī Calu-3 šūnām ir savas priekšrocības un trūkumi. Šeit mēs aplūkosim dažas svarīgākās no tām.
Priekšrocības
-
In vitro elpceļu epitēlija modelis:
Calu-3 šūnas elpošanas ceļu pētniecībā kalpo kā efektīvs elpceļu epitēlija in vitro modelis. Tās atspoguļo cilvēka elpceļu gļotādas īpašības, ļauj veikt pētījumus par zāļu transportu, saimnieka un patogēna mijiedarbības pētījumus un mucīna ražošanu.
-
Polarizācija:
Calu-3 šūnas veido polarizētus monoslāņus, tāpēc tās plaši izmanto zāļu transporta un saimnieka un patogēna mijiedarbības pētījumiem reālākā kontekstā.
Trūkumi
-
Vēža šūnu līnija:
Calu-3 šūnas tika iegūtas no plaušu adenokarcinomas, tāpēc ir svarīgi ņemt vērā, ka tās var pilnībā neatspoguļot veselus plaušu audus. Pētniekiem tas jāņem vērā, izmantojot tās kā modeli pētījumos.
4. Calu-3 šūnu līnijas pielietojums pētniecībā
Calu-3 var izmantot biomedicīnas pētījumos. Šajā raksta sadaļā tiks izgaismotas dažas visdaudzsološākās no tām.
- Elpošanas ceļu slimību pētījumi: Calu-3 plaušu šūnas izmanto, lai pētītu dažādas elpošanas ceļu slimības vai traucējumus, piemēram, cistisko fibrozi, astmu un hronisku obstruktīvu plaušu slimību (HOPS). Chiara Papi un kolēģu pētījumā tika pētīta anti-miR-101-3p peptīda-nukleīnskābes (PNA) ietekme uz miRNA-101-3p, izmantojot Calu 3 cistiskās fibrozes in vitro modeli. Pētījumā konstatēja, ka PNA apstrādei ir tendence palielināt cistiskās fibrozes transmembrānas vadītspējas regulatora (CFTR) gēna ekspresiju, kas liecina par potenciālu terapijas stratēģiju cistiskās fibrozes un ar to saistīto slimību ārstēšanai [2].
- Zāļu izstrāde: Calu-3 šūnas kalpo kā modelis zāļu testēšanai un izstrādei vairāku elpošanas ceļu slimību ārstēšanai. Turklāt šīs šūnas tiek izmantotas arī zāļu transportēšanas caur elpceļu epitēliju izpētei. Piemēram, 2021. gadā veiktajā pētījumā tika pētīta Andrographis paniculata augu ekstrakta un tā bioaktīvā androgrāfolīda pretvīrusu iedarbība uz Calu-3 šūnu sars-cov-2 infekciju [3].
- Saimnieka un patogēna mijiedarbība: Calu-3 šūnas ir ideāli piemērotas patogēnu mijiedarbības ar elpceļu epitēliju izpētei, palīdzot izprast tādas elpceļu infekcijas kā SARS-CoV-2. Piemēram, Byoung Kwon Park un kolēģi pētīja Calu-3 un Vero šūnu atbildes reakcijas un vīrusa veidošanos, reaģējot uz SARS-CoV-2 infekciju [4].
5. Calu-3 šūnas: Pētniecības publikācijas
Turpmāk ir sniegti daži aizraujoši un bieži citēti pētījumi, kuros izmantotas Calu-3 šūnas:
Šis pētījums tika publicēts Eiropas medicīnas un farmakoloģijas zinātņu pārskatā 2018. gadā. Pētījumā tika ierosināts, ka oglekļa monoksīdu atbrīvojošās molekulas-2 (CORM-2) veicina plaušu nemaliklo šūnu vēža (Calu-3) šūnu apoptozi un nomāc to proliferāciju, migrāciju un invazi.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā Clinical and Translational Allergy (2018), salīdzinātas Calu-3 šūnu līnijas un svaigi kultivētu primāro deguna epitēlija šūnu imūnās un epitēlija barjeras atbildes reakcijas.
Hinīns inhibē cilvēka šūnu līniju inficēšanos ar SARS-CoV-2
Šajā rakstā žurnālā Viruses (2021) ierosināts izmantot hinīnu kā potenciālu SARS-CoV-2 infekcijas ārstēšanas līdzekli, novērtējot tā ietekmi uz dažādām ar vīrusu inficētām šūnu līnijām, piemēram, Calu-3.
BMC Molecular and Cell Biology (2022) publicētajā pētījumā ierosināts, ka augsts D-glikozes līmenis veicina Calu-3 šūnu ACE2 ekspresiju, regulējot GLUT1 gēnu.
Dolosigranulum pigrum modulē imunitāti pret SARS-CoV-2 elpceļu epitēlija šūnās
Šajā rakstā žurnālā Pathogens (2021) tika pētīta Dolosigranulum pigrum 040417 imūnmodulējošā ietekme uz plaušu epitēlija šūnām. Turklāt tajā tika pētīts šīs imūnbiotiskās baktērijas potenciāls aizsardzībā pret SARS-CoV-2 infekciju.
6. Calu-3 šūnu resursi: Protokoli, videomateriāli un citi resursi
Par Calu-3 šūnām ir pieejami daudzi tiešsaistes resursi, kas ietver informāciju par šūnu kultivēšanu un transfekciju.
- Calu-3 šūnu transfekcijas protokols: Šis resurss sniegs svarīgas zināšanas par Calu-3 šūnu transfekciju.
- Calu-3 transfekcija: Šis video pamācības materiāls ir soli pa solim, lai apgūtu Calu-3 transfekcijas protokolu in vitro.
Šeit ir minēts Calu-3 šūnu kultūras protokols.
- Calu-3 šūnas: Šajā dokumentā ir ietverta informācija par Calu-3 šūnu barotni un subkulturēšanas vai pasāžas protokolu.
Atsauces
- Wiese-Rischke, C., R.S. Murkar, and H. Walles, Biological Models of the Lower Human Airways-Challenges and Special Requirements of Human 3D Barrier Models for Biomedical Research. Pharmaceutics, 2021. 13(12).
- Fabbri, E., et al. cilvēka elpceļu epitēlija Calu-3 šūnu apstrāde ar peptīdu nukleīnskābi (PNA), kas vērsta pret mikroRNA miR-101-3p, ir saistīta ar cistiskās fibrozes transmembrānas vadītspējas regulatora () gēna () pastiprinātu ekspresiju. European Journal of Medicinal Chemistry, 2021. 209: p. 112876.
- Sa-Ngiamsuntorn, K., et al., Andrographis paniculata ekstrakta un tā galvenās sastāvdaļas androgrāfolīda anti-SARS-CoV-2 aktivitāte cilvēka plaušu epitēlija šūnās un citotoksicitātes novērtējums galveno orgānu šūnu pārstāvjiem. Journal of natural products, 2021. 84(4): p. 1261-1270.
- Park, B.K., et al., Differential Signaling and Virus Production in Calu-3 Cells and Vero Cells upon SARS-CoV-2 Infection. Biomol Ther (Seula), 2021. 29(3): p. 273-281.