B16 šūnas - fundamentāls ceļvedis par B16 melanomas šūnām onkoloģiskajos pētījumos

B16 ir peļu izcelsmes ādas vēža (melanomas) šūnu līnija. Šī šūnu līnija ir efektīvs in vitro modelis cilvēka ādas vēža izpētei. To bieži izmanto, lai pētītu vēža šūnu cietā audzēja veidošanos un metastāzes.

Šis raksts palīdzēs jums izprast B16 melanomas šūnu līnijas pamatus. Konkrētāk, tajā tiks aplūkoti šādi jautājumi:

1.b16 šūnu līnijas vispārīgās īpašības un izcelsme

Šajā raksta sadaļā tiks aplūkotas B16 melanomas šūnu līnijas raksturīgās iezīmes. Jūs uzzināsiet atbildes uz šādiem bieži uzdotiem jautājumiem. Piemēram, kas ir B16 vēža šūnu līnija? No kurienes ir iegūtas B16 šūnas? Kāds ir B16 šūnu izmērs?

B16 šūnu līnija tika izveidota 1954. gadā. Šīs šūnas tika iegūtas no C57BL/6J pelēm, kurām Meksikas laboratorijās Menas štatā spontāni izveidojās ādas audzējs.
Tās ir melanīnu ražojošas epitēlija šūnas, kas spēj metastazēt liesā, aknās un plaušās.
Melanomas B16 šūnas aug kā monoslāņi, un tām piemīt epitēlijveidīga un vārpstas formas šūnu morfoloģija.
B16 šūnu līnijas izmērs ir aptuveni 15,4 μm.
Ir atšķirīgi B16 šūnu subkloni, tostarp B16GMCSF, B164A5, B16FLT3 un B16F10. Šīs apakšlīnijas atšķiras no mātes B16 šūnām un saglabā dažas specifiskas iezīmes. Piemēram, tām ir atšķirīga morfoloģija, šūnu izmērs un citas īpašības. B16F10 piemīt augsta metastātiska spēja plaušās, un B164A5 ir agresīvākā ādas vēža šūnu līnija salīdzinājumā ar B16F10, B16-GMCSF un B16FLT3 [1].

3D animācija, kurā tuvplānā redzams augošs ādas vēzis, piemēram, ļaundabīga melanoma, kas izraisa apkārtējo audu iekaisumu.

2.informācija par B16 šūnu līnijas kultivēšanu

Pirms šūnu līnijas uzturēšanas vai kultivēšanas var meklēt galveno informāciju par dubultošanās laiku, šūnu tipu, augšanas barotni, kultivēšanas apstākļiem utt. Šajā sadaļā ir iekļauta visa nepieciešamā informācija par B16 šūnu kultivēšanu.

B16 šūnu kultivēšanas galvenie punkti

Populācijas dubultošanās laiks:	B16 šūnu vidējais populācijas dubultošanās laiks tiek lēsts 24 stundas.
Adhēzijas vai suspensijas veidā:	B16 šūnas ir salipušas un aug monoslānī.
Sēšanas blīvums:	B16 šūnas ieteicams sēt ar 1 līdz 2 x¹⁰⁴ ^šūnas/cm2 šūnu blīvumu. Pieķērušās B16 šūnas skalo ar 1 x PBS un disociē no virsmas, izmantojot Accutase šķīdumu. Šūnas centrifugē, un šūnu granulas resuspendē barotnē. Vēlāk šīs šūnas iepilda jaunā kolbā audzēšanai.
Augšanas barotne:	B16 šūnas kultivē EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) barotnē, kas satur 10 % liellopu fetālā seruma (FBS). Augšanas barotne jāatjauno 2-3 reizes nedēļā.
Augšanas apstākļi:	B16 šūnu līnijas audzēšanai izmanto mitrinātu inkubatoru ar 5 %_CO2 pieplūdi un 37 °C temperatūru.
Uzglabāšana:	Šūnas uzglabā temperatūrā, kas zemāka par -150 °C, vai šķidrā slāpeklī tvaika fāzē, lai aizsargātu šūnu dzīvotspēju.
Sasaldēšanas process un barotne:	B16 šūnu sasaldēšanai izmanto CM-1 vai CM-ACF sasaldēšanas barotni, izmantojot lēnu sasaldēšanas procesu.
Atkausēšanas process:	Sasaldētās B16 šūnas atkausē 37 °C temperatūrā ūdens vannā, kas satur antimikrobiālu līdzekli. Atkausētās šūnas var tieši kultivēt, iepildot tās kolbās ar barotni. Turklāt šīs šūnas var centrifugēt, lai atdalītu sasalšanas barotnes sastāvdaļas, un pēc tam kultivēt jaunā barotnē.
Bioloģiskās drošības līmenis:	B16 šūnu līnija jāapstrādā vai jāuztur pirmā bioloģiskās drošības līmeņa laboratorijā.

B16 melanomas šūnu daļēji saplūstošs slānis 10x un 20x palielinājumā.

3. b16 šūnu līnija: Priekšrocības un trūkumi

Tāpat kā citām šūnu līnijām, arī B16 ir unikāls priekšrocību un trūkumu apvienojums. Šajā sadaļā ir uzskaitīti daži nozīmīgi šīs melanomas šūnu līnijas plusi un mīnusi.

Priekšrocības

B16 ir pirmais efektīvais peļu dzimtas instruments, ko plaši izmanto metastāžu pētniecībā, jo tā piedāvā priekšrocības. Dažas šīs ādas vēža šūnu līnijas priekšrocības ir šādas:

Viegli audzējamas	B16 šūnu līniju ir viegli kultivēt pētniecības laboratorijās. To plaši izmanto vēža šūnu bioloģijas, signalizācijas ceļu un citu faktoru izpētei.
Ātra augšana	B16 melanomas šūnu līnijai ir augsts proliferācijas ātrums, tāpēc tā ir piemērota šūnu dalīšanās un augšanas procesu izpētei.
Tumorigenitāte	B16 ir tumorogēna šūnu līnija ar audzējiem līdzīgām īpašībām, piemēram, invazi, migrāciju un proliferāciju. Tā ir vērtīga audzēju veidošanās, progresēšanas un metastāžu pētīšanai.

Trūkumi

Ar B16 šūnu līniju saistītie trūkumi ir šādi:

Neatbilstība cilvēku vajadzībām	Tā kā B16 ir peļu melanomas šūnu līnija, tā precīzi neatspoguļo cilvēka ādas vēža bioloģiju, kas ierobežo pētījumu rezultātu pielietojamību.
Heterogenitāte	B16 šūnas ir heterogēnas, tām ir atšķirīgas ģenētiskās un fenotipiskās īpašības vienā kultūrā. Tas var ietekmēt rezultātu ticamību un reproducējamību.

4. b16 šūnu lietojumi

B16 šūnu līniju plaši izmanto pētījumos. Daži daudzsološi šīs šūnu līnijas lietojumi ir šādi:

Audzēju bioloģija: Šī peļu ādas vēža šūnu līnija ir tumorigēna un tiek plaši izmantota, lai izprastu audzēju bioloģiju. Ir veikti vairāki pētījumi, lai, izmantojot B16 šūnas, izpētītu audzēja šūnu augšanas, proliferācijas un metastāžu veidošanās šūnu mehānismus. Pētījumā, kas tika veikts 2020. gadā, tika izmantotas B16 šūnas, lai izpētītu garās nekodējošās RNS, LncRNA MEG3, lomu melanomas veidošanās, augšanas un metastāžu veidošanās procesā. Šajā pētījumā tika konstatēts, ka nekodējošā RNS modulē miRNA-21/E-Cadherin asi, lai stimulētu šos šūnu procesus [2]. Līdzīgi tika veikts pētījums, lai izpētītu Notch1 signalizācijas potenciālo lomu audzēja izraisītā imūnsupresijā, izmantojot B16 šūnas [3].
Zāļu atklāšana: B16 šūnas tiek izmantotas, lai apstiprinātu un pārbaudītu potenciālo zāļu kandidātu terapeitisko iedarbību. Pētījumā tika novērtēta neogambogīnskābes, dabiska savienojuma, pretvēža iedarbība, izmantojot B16 šūnu līniju. Pētījuma rezultāti atklāja, ka šis savienojums modulē PI3K/Akt/mTOR signalizācijas ceļu, izraisot vēža šūnu nāvi [4]. Citā pētījumā tika pētīta saponīna ginsenozīda Rg3 pretmelanomas iedarbība, izmantojot B16 šūnu līniju. Pētījumā tika ierosināts, ka šis dabīgais savienojums izraisa pretvēža iedarbību, samazinot ERK un Akt ceļu [5].

430,00 €*

Saturs: 1.5 milliliter

Cenas bez nodokļiem un piegādes izmaksām

cryovial

Produkta numurs: 305154

5.pētniecības publikācijas ar B16 šūnām

Šeit ir dažas nozīmīgas pētniecības publikācijas, kurās izmantota B16 melanomas šūnu līnija.

LncRNA MEG3 veicina melanomas augšanu, metastāžu veidošanos un veidošanos, modulējot miR-21/E-kadherīna asi

Šajā publikācijā žurnālā Cancer Cell International (2020) ierosināts, ka garā nekodējošā RNS MEG3 veicina B16 melanomas šūnu veidošanos, augšanu un metastāzēšanu, modulējot miRNA-21/E-kadherīna asi.

Jauns psoralēna atvasinājums-MPFC pastiprina melanogēzi, aktivizējot p38 MAPK un PKA signalizācijas ceļus B16 šūnās

Šis raksts tika publicēts 2018. gadā žurnālā International Journal of Molecular Medicine. Šajā pētījumā tika pētīta psoralēna atvasinājuma - 4-metil-6-fenil-2H-furo[3,2-g] hromen-2-ona (MPFC) melanogēnā iedarbība un mehānismi B16 šūnās. Pētījumā tika ierosināts, ka šis atvasinājums veicina melanogēzi, stimulējot PKA un p38 MAPK šūnu signalizāciju.

Notch1 signalizācija melanomas šūnās veicina audzēja izraisītu imūnsupresiju, paaugstinot TGF-β1 regulāciju

Šis pētījums tika publicēts 2018. gadā žurnālā Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. Pētījuma rezultāti liecina, ka Notch1 signalizācijas aktivizēšana B16 šūnās var kavēt pretvēža imunitāti, paaugstinot TGF-β1 gēna ekspresiju.

Neogambogīnskābe izraisa melanomas B16 šūnu apoptozi, izmantojot PI3K/Akt/mTOR signalizācijas ceļu

Šo pētījumu veica Chunlan Wu un viņa kolēģi 2020. gadā un publicēja žurnālā Acta Biochimica Polonica. Šajā pētījumā teikts, ka neogambogīnskābe, dabīgs savienojums, var izraisīt B16 melanomas šūnu nāvi, modulējot PI3K/Akt/mTOR signalizācijas kaskādi.

Irīcija (III) komplekss kā spēcīgs pretvēža līdzeklis izraisa apoptozi un autofāziju B16 šūnās, inhibējot AKT/mTOR ceļu

Šis pētnieciskais darbs tika publicēts 2018. gadā žurnālā European Journal of Medicinal Chemistry. Šajā pētījumā zinātnieki pētīja savienojuma - iridija (III) kompleksa - pretvēža aktivitāti, izmantojot B16 melanomas šūnas.

Ailantons izraisa šūnu cikla apstāšanos un apoptozi melanomas B16 un A375 šūnās

Šajā pētījumā ierosināts, ka augu bioloģiski aktīvai vielai - ailantonam - piemīt pretvēža potenciāls, jo tas var izraisīt apoptozi un šūnu cikla apstāšanos B16 un A375 melanomas šūnās. Šis raksts tika publicēts 2019. gadā žurnālā Biomolecules.

6. b16 šūnu līnijas resursi: Rīknes: protokoli, videoklipi un citi resursi

Ir ierobežoti resursi par B16 šūnu līniju, kuros izskaidroti tās kultivēšanas un transfekcijas protokoli.

Melanomas šūnu kultivēšana: Šajā videoklipā sniegti vērtīgi padomi melanomas šūnu līniju kultivēšanai.
Šūnu līnijas subkultivēšana: Šajā videoklipā izskaidrots vispārīgs šūnu līnijas subkulturēšanas protokols.
B16F10 šūnu līnijas transfekcija: . Šajā videoklipā izskaidrots transfekcijas protokols B16 melanomas šūnu apakšlīnijai. Tas var palīdzēt optimizēt B16 šūnu transfekcijas protokolu.

Turpmāk sniegti daži šūnu kultūru protokoli B16 šūnām.

B16 šūnu kultivēšana: Šajā tīmekļa vietnē ir sniegta visa nepieciešamā informācija par B16 šūnu kultivēšanu, tostarp par barotnēm, subkultivēšanu, šūnu atkausēšanu un sasaldēšanu.

Atsauces

Danciu, C., et al., Behaviour of four different B 16 murine melanoma cell sublines: C57 BL/6J ādas. International journal of experimental pathology, 2015. 96(2): p. 73-80.
Wu, L., et al., LncRNA MEG3 promotes melanoma growth, metastasis and formation through modulating miR-21/E-cadherin axis. Cancer cell international, 2020. 20: p. 1-14.
Yang, Z., et al., Notch1 signalizācija melanomas šūnās veicina audzēja izraisītu imūnsupresiju caur TGF-β1 augšējo regulāciju. Journal of Experimental & Clinical Cancer Research, 2018. 37(1): p. 1-13.
Wu, C., et al., Neogambogīnskābe inducē melanomas B16 šūnu apoptozi, izmantojot PI3K/Akt/mTOR signalizācijas ceļu. Acta Biochimica Polonica, 2020. 67(2): p. 197-202.
Meng, L., et al., Ginsenosīda Rg3 pretvēža aktivitāte melanomai, samazinot ERK un Akt ceļu regulāciju. International Journal of Oncology, 2019. 54(6): p. 2069-2079.