B16-F10 šūnas – B16-F10 melanomas šūnu līnijas izpēte metastāžu pētījumos
B16-F10 šūnas veido melanomas šūnu līniju, kas iegūta no C57BL/6J peles. Tās plaši izmanto ādas vēža pētījumos. Pētnieki izmanto šīs šūnas, lai pētītu audzēja attīstību un progresēšanu, kā arī terapeitiskās intervences. Šajā rakstā tiks aplūkoti B16-F10 melanomas šūnu pamataspekti. Konkrēti, tajā tiks iekļauts:
- Augšanas barotne
- B16-F10 šūnas kultivē DMEM vidē. Lai nodrošinātu ideālu šūnu augšanu, vidē pievieno 10 % FBS, 4 mM L-glutamīnu, 1,5 g/l NaHCO3, 4,5 g/l glikozes un 1,0 mM nātrija piruvātu. Barotni jāmaina 2–3 reizes nedēļā.
- Dubultošanās laiks
- B16-F10 šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 20,1 stunda. Tas var svārstīties no 17 līdz 21 stundai atkarībā no kultivēšanas apstākļiem.
- Augšanas veids
- B16-F10 ir adhezīva šūnu līnija. Šūnas aug ātri un veido monoslāņus.
- Bioloģiskās drošības līmenis
- BSL-1
- Piegādātājs
- Cytion — Pasūtīt B16-F10
- B16-F10 šūnu līnijas izcelsme un vispārējās īpašības
- Informācija par B16-F10 šūnu kultivēšanu
- B16-F10 šūnas: priekšrocības un trūkumi
- B16-F10 šūnu izmantošana pētniecībā
- Publikācijas par B16-F10 šūnu līniju
- Resursi par B16-F10 šūnu līniju: protokoli, video un cits
- B16-F10 šūnu līnijas izcelsme un vispārējās īpašības
- Informācija par B16-F10 šūnu kultivēšanu
- B16-F10 šūnas: priekšrocības un trūkumi
- B16-F10 šūnu izmantošana pētniecībā
- 5. Publikācijas par B16-F10 šūnu līniju
- Resursi par B16-F10 šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
- Bieži uzdotie jautājumi
B16-F10 šūnu līnijas izcelsme un vispārējās īpašības
Šajā sadaļā Jūs iegūsiet ieskatu B16F10 melanomas audzēja šūnu izcelsmē un raksturīgajās īpašībās. Tas palīdzēs Jums efektīvi izmantot šūnu līniju savā pētnieciskajā darbā. Galvenokārt Jūs uzzināsiet: Kas ir B16-F10 šūnas? No kā ir atvasināta B16F10? Kāda ir B16F12 šūnu līnijas morfoloģija? Kāds ir B16F10 šūnas izmērs?
- B16-F10 ir B16 audzēja šūnu līnijas subklons, kas iegūts no C57BL/6J peles ādas audiem. Šajā gadījumā B16F10 melanomas šūnas tika attīstītas pēc B16 līnijas intravenozas injekcijas imūndeficītiem vai singēniem pelēm. Šīs šūnas tika atlasītas to potenciāla dēļ veidot metastāzes plaušu kolonijās in vivo un pēc tam izveidotas pēc desmit cikliem plaušu koloniju veidošanās in vitro [1]. To izstrādāja Fidler un kolēģi 1976. gadā.
- B16-F10 šūnu līnijām ir epitēlija šūnu līdzīgs un vārpstas formas izskats.
- B16-F10 šūnu aptuvenais izmērs ir 15,4 ± 1,4 μm [2].
B16-F1 un B16-F10 šūnas
B16-F1 un B16-F10 šūnas tika iegūtas no B16 pamatšūnu līnijas. Abas ir cēlušās no vienas un tās pašas šūnas un tām ir gandrīz vienādas īpašības. Tomēr galvenā atšķirība ir to metastāzes spēja. B16-F10 šūnām ir augsta, bet B16-F1 — zema metastāzes spēja [3].
Informācija par B16-F10 šūnu kultivēšanu
Pirms šūnu līnijas apstrādes un kultivēšanas ir jāzina tās dubultošanās laiks, augšanas barotnes, apstākļi un šūnu kultivēšanas protokoli. Šajā sadaļā tiks apspriests: Kāds ir B16-F10 šūnu dubultošanās laiks? Kā kultivēt B16-F10 šūnas? Kāda ir B16-F10 šūnu barotne? Kādi kultivēšanas apstākļi ir ieteicami B16-F10 šūnām?
Galvenie punkti par B16-F10 šūnu kultivēšanu
Dubultošanās laiks:
B16-F10 šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 20,1 stunda. Tas var svārstīties no 17 līdz 21 stundai atkarībā no kultivēšanas apstākļiem.
Pielipušas vai suspensijā:
B16-F10 ir adhezīva šūnu līnija. Šūnas aug ātri un veido monoslāņus.
Dalīšanās attiecība:
B16-F10 šūnas tiek subkultivētas ar sadalīšanas attiecību no 1:2 līdz 1:4. Šūnas mazgā ar fosfāta buferšķīdumu (1x) un pēc tam inkubē ar Accutase pasāžēšanas šķīdumu 8 līdz 10 minūtes istabas temperatūrā. Šūnām pievieno svaigu barotni un centrifugē. Iegūto šūnu nogulsni atkārtoti suspendē, un šūnas sadala jaunā kolbā, kas satur svaigu kultūras barotni, atbilstoši sadalīšanas attiecībai.
Augšanas barotne:
B16-F10 šūnas kultivē DMEM barotnē. Barotnei pievieno 10 % FBS, 4 mM L-glutamīnu, 1,5 g/l NaHCO3, 4,5 g/l glikozes un 1,0 mM nātrija piruvātu, lai nodrošinātu ideālu šūnu augšanu. Barotni jāmaina 2–3 reizes nedēļā.
Augšanas apstākļi:
B16-F10 šūnas audzē mitrinātā inkubatorā 37 °C temperatūrā ar 5 % CO2 pievadi.
Uzglabāšana:
Sasaldētās šūnas uzglabā temperatūrā zem -150 °C elektriskā ultra-zemas temperatūras saldētavā vai šķidrā slāpekļa tvaika fāzē, lai saglabātu šūnu dzīvotspēju.
Sasaldēšanas process un barotne:
B16-F10 šūnas uzglabāšanai tiek sasaldētas CM-1 vai CM-ACF barotnēs. Lai novērstu šūnu šoku, ieteicams izmantot lēnu sasaldēšanas procesu, kas ļauj temperatūrai pazemināties tikai par 1 °C minūtē.
Atkausēšanas process:
Sasaldētās B16-F10 šūnas atkausē iepriekš iestatītā 37 °C ūdens vannā 40–60 sekundes. Pēc tam šūnas pievieno svaigai barotnei un centrifugē, lai atdalītu sasaldēšanas barotnes sastāvdaļas. Savāktās šūnas atkārtoti suspendē augšanas barotnē un ielej kolbās kultivēšanai.
Bioloģiskās drošības līmenis:
B16-F10 šūnu līnijas apstrādei un uzturēšanai ir nepieciešama 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorija.
B16-F10 šūnas: priekšrocības un trūkumi
Tāpat kā citas šūnu līnijas, arī B16-F10 šūnu līnijai ir savas priekšrocības un trūkumi. Šajā sadaļā ir aprakstīti daži nozīmīgākie šīs ādas melanomas šūnu līnijas plusi un mīnusi.
Priekšrocības
B16-F10 šūnu līnija tiek plaši izmantota vēža pētniecībā. B16-F10 šūnu priekšrocības ir šādas:
Metastāžu veidošanās potenciāls
Ādas melanomas B16F10 šūnas izrāda augstu metastāzes potenciālu, padarot tās vērtīgas vēža metastāžu un to pamatā esošo mehānismu izpētei.
In vitro audzēja modelis
B16-F10 šūnas kalpo kā in vitro modelis vēža progresēšanas un augšanas pētīšanai, palīdzot pētniekiem izprast vēzi izraisošos šūnu un molekulāros mehānismus.
Trūkumi
Ar B16-F10 šūnu līniju saistītie trūkumi ir šādi:
No pelēm iegūta šūnu līnija
B16-F10 ir no pelēm iegūta šūnu līnija, kas ierobežo tās piemērojamību pētījumos, kas attiecas uz cilvēkiem. No šīm šūnām iegūtie pētījumu rezultāti ne vienmēr var tikt pilnībā attiecināti uz cilvēka bioloģiju.
B16-F10 šūnu izmantošana pētniecībā
B16-F10 šūnu līnija tiek plaši izmantota vēža pētījumos. Šeit tiek aprakstīti daži daudzsološi šīs šūnu līnijas pielietojumi.
- Vēža pētījumi: B16-F10 šūnu līnija ir vērtīgs modelis vēža šūnu procesu pētīšanai, tostarp proliferācijai, invāzijai, migrācijai un šūnu nāvei jeb apoptozei. Turklāt tā palīdz pētniekiem gūt ieskatu molekulārajos mehānismos un ceļos, kas virza šos šūnu procesus. 2018. gadā veiktajā pētījumā tika izpētīta CCR5 (C-C ķīmisko kinīnu receptora 5. tips) loma melanomas šūnu pārejas no epitēlija uz mezenhīmu un metastāžu procesā. Rezultāti atklāja, ka CCR5 deficīts ierobežo audzēja augšanu un metastāzes, savukārt augsta ekspresija izraisa B16-F10 šūnu pastiprinātu augšanu un metastāzes. Turpmākie pētījumi liecināja, ka CCR5 regulē TGFβ1 ekspresiju, kas savukārt regulē PI3K/AKT/GSK3β signālu ceļu, veicinot epitēlija-mezodermālo pāreju un šūnu migrāciju [4].
- Zāļu testēšana un attīstība: B16F10 melanomas audzēja šūnas ir ļoti agresīvas un tādējādi piemērotas potenciālo pretvēža zāļu un ārstēšanas metožu testēšanai. Pētnieki izmanto šīs šūnas un novērtē dažādu savienojumu ietekmi uz šūnu augšanu, proliferāciju un metastāzēm, tādējādi palīdzot zāļu attīstībā. 2018. gadā Valentina Nanni un kolēģi veica pētījumu, kurā izpētīja Spartium junceumziedu hidroalkoholiskā ekstrakta terapeitisko iedarbību. Pētījumā tika izvirzīts pieņēmums, ka ziedu ekstrakts efektīvi izraisa B16-F10 šūnu novecošanos, kas savukārt nomāc šūnu augšanu un melanogēnēzi, tādējādi tam var būt potenciāla pretvēža iedarbība [5].
5. Publikācijas, kurās izmantota B16-F10 šūnu līnija
Šeit ir daži nozīmīgi pētījumu publikācijas, kurās aprakstīta B16-F10 melanomas šūnu līnija:
Šis pētījums tika publicēts žurnālā Nutrients (2020). Tajā tika izvirzīta hipotēze, ka Sorghum bicolor etanola ekstraktam ir pretmelanogēna iedarbība uz ādas melanomas B16F10 šūnām.
Kalcitriols inhibē proliferāciju un potenciāli inducē apoptozi B16–F10 šūnās
Pētījumā, kas publicēts žurnālā Medical Science Monitor Basic Research (2022), tika izvirzīts pieņēmums, ka kalcitriola preparāts izraisa pretvēža iedarbību uz B16-F10 melanomas šūnām, inhibējot proliferāciju un inducējot apoptozi.
Šis raksts publicēts žurnālā Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). Pētījuma rezultāti liecina, ka kardoli, resorcīna lipīdi, izraisa intensīvu citotoksicitāti B16-F10 šūnu līnijā.
Pētījumā, kas publicēts žurnālā Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018), tika pētīts Ginkgo biloba eksokarpa ekstrakta pretmetastāzes potenciāls, izmantojot B16-F10 šūnas.
Šis pētījums, kas publicēts žurnālā World Neurosurgery (2018), liecina, ka timokinons var būt efektīva terapija pret intracerebrālām metastātiskām izmaiņām, jo tas nomāc B16-F10 šūnu augšanu un izraisa apoptozi.
Resursi par B16-F10 šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
B16F10 endotēlija šūnas tiek plaši izmantotas ādas vēža pētījumos. Šeit ir daži tiešsaistes resursi, kuros izskaidroti to kultivēšanas un transfekcijas protokoli:
- B16F10 melanomas šūnu transfekcija: Šis video pamācības materiāls palīdzēs jums apgūt B16-F10 šūnu transfekcijas protokolu.
- B16-F10 transfekcija: Šis dokuments izskaidro in vitro DNS transfekcijas protokolu ādas melanomas B16F10 šūnām.
Šajā saitē ir atrodams B16-F10 šūnu kultivēšanas protokols:
- B16-F10 subkultivēšana: Šajā tīmekļa vietnē ir noderīga informācija par B16F10 melanomas audzēja šūnām. Tajā ir iekļauti augšanas barotnes, dubultošanās laiks, kultivēšanas apstākļi un protokols šūnu subkultivēšanai, kā arī informācija par krioprezervētu un proliferatīvu kultūru apstrādi.
Atsauces
- Poste, G., et al., No kultivētām šūnu līnijām, zemādas audzējiem un atsevišķām plaušu metastāzēm izdalīto B16 melanomas klonu metastātisko īpašību salīdzinājums. Cancer Research, 1982. 42(7): 2770.–2778. lpp.
- Nakamura, M., D. Ono un S. Sugita, B16 melanomas šūnu variantu mehānofenotipēšana, lai novērtētu (-)-epigallokatehīna gallāta ārstēšanas efektivitāti, izmantojot konisku mikrofluīdisko ierīci. Micromachines, 2019. 10(3): 207. lpp.
- Danciu, C. u.c., Četru dažādu B16 peles melanomas šūnu sublīniju uzvedība: C57BL/6J āda. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): 73.–80. lpp.
- Liu, J., et al., Augsta CCR5 ekspresija melanomā pastiprina epitēlija–mezenhīma pāreju un metastāzes ar TGFβ1 starpniecību. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): 481.–493. lpp.
- Nanni, V., et al., Spartium junceum L. ziedu hidroalkoholiskais ekstrakts inhibē augšanu un melanogēnēzi B16-F10 šūnās, inducējot senescenci. Phytomedicine, 2018. 46: 1.–10. lpp.