ARPE-19 šūnas – specializēts pārskats par tīklenes pigmenta epitēlija šūnu pētījumiem ar ARPE-19
ARPE-19 ir cilvēka izcelsmes spontāni radušās tīklenes pigmenta epitēlija šūnas. Tās tiek izmantotas, lai pētītu dažādus tīklenes bioloģijas aspektus, patoloģiskos stāvokļus un terapeitiskās intervences (farmakoloģija). Šī raksta mērķis ir sniegt visaptverošu ieskatu ARPE-19 imortalizētajās šūnās. Galvenokārt tiks apspriestas šīs šūnu līnijas vispārīgās īpašības, kultivēšanas apstākļi un dažādie pētniecības pielietojumi. Tādējādi, izlasot šo rakstu, jūs iegūsiet padziļinātu izpratni par:
- Augšanas barotne
- ARPE-19 šūnu līnijas kultivēšanai izmanto DMEM vai Ham’s F12 barotni. ARPE-19 barotne ir papildināta ar 5 % FBS, 3,1 g/l glikozes, 15 mM HEPES, 1,6 mM L-glutamīna, 1,0 mM nātrija piruvāta un 1,2 g/l NaHCO3. Barotni nomaina 2–3 reizes nedēļā.
- Dubultošanās laiks
- ARPE-19 dubultošanās laiks ir aptuveni 55–65 stundas. Tās var piedzīvot līdz pat 48 populācijas dubultošanās cikliem.
- Augšanas veids
- ARPE-19 ir adhezīva šūnu līnija.
- Bioloģiskās drošības līmenis
- BSL-1
- Piegādātājs
- Cytion — Pasūtīt ARPE-19
- ARPE-19 šūnas: izcelsme un vispārējās īpašības
- ARPE-19 šūnu līnija: Informācija par kultivēšanu
- ARPE-19 šūnu priekšrocības un ierobežojumi
- ARPE-19 šūnu līnijas pielietojums pētniecībā
- ARPE-19 šūnas: pētniecības publikācijas
- Resursi par ARPE-19 šūnu līniju: protokoli, video un cits
- ARPE-19 šūnas: izcelsme un vispārējās īpašības
- ARPE-19 šūnu līnija: informācija par kultivēšanu
- ARPE-19 šūnu priekšrocības un ierobežojumi
- ARPE-19 šūnu līnijas pielietojums pētniecībā
- 5. ARPE-19 šūnas: pētniecības publikācijas
- Resursi par ARPE-19 šūnu līniju: protokoli, video un cits
- Bieži uzdotie jautājumi
ARPE-19 šūnas: izcelsme un vispārējās īpašības
Šīs raksta sadaļā tiks apkopota visa informācija par ARPE šūnu līniju. Piemēram, kas ir ARPE-19 šūnu līnija? Kāpēc izmantot ARPE-19 šūnas? Kas ir ARPE-19/HPV-16 šūnu līnija? Vai ARPE-19 šūnas ir nemirstīgas? Kāda ir ARPE 19 šūnu morfoloģija un izmērs?
- Nemirstīgo tīklenes pigmenta epitēlija šūnu līnija ARPE-19 tika iegūta no 19 gadus veca vīrieša acīm, kurš gāja bojā negadījumā, gūstot galvas traumu. To 1986. gadā izveidoja Amy Aotaki-Keen.
- Šīs šūnas ekspresē tīklenes pigmenta epitēlija šūnu marķierus, t.i., CRALBP un RPE-65, kas liecina, ka tās var veidot stabilus monoslāņus, kuriem raksturīga morfoloģiska un funkcionāla polaritāte.
- ARPE-19 šūnām ir epitēlija šūnu morfoloģija.
- ARPE-19 šūnām galvenokārt ir normāls kariotips, izņemot vienu deleciju un pievienojumu attiecīgi 9. un 19. hromosomas garajā plecā. Turklāt novēro arī dažas aneuploidijas [1].
ARPE-19 šūnu līnija: informācija par kultivēšanu
Pamatinformācija par šūnu kultivēšanu ir ļoti svarīga, lai pareizi rīkotos ar šūnu līniju un to uzturētu. Šī sadaļa palīdzēs jums apgūt galvenos punktus par ARPE-19 šūnu līnijas kultivēšanu. Jūs uzzināsiet: kāds ir ARPE-19 dubultošanās laiks? Kāda ir ARPE-19 sēšanas blīvums? Kāds ir ARPE-19 šūnu blīvums? Kas ir ARPE-19 sasaldēšanas barotne? Kā kultivēt ARPE-19 šūnu līniju?
Galvenie punkti ARPE-19 šūnu kultivēšanā
Populācijas dubultošanās laiks:
ARPE-19 dubultošanās laiks ir aptuveni 55–65 stundas. Tās var piedzīvot līdz pat 48 populācijas dubultojumiem.
Adherenta vai suspensijā:
ARPE-19 ir adhezīva šūnu līnija.
Subkultivācijas attiecība:
ARPE-19 subkultivācijas attiecība ir 1:3 līdz 1:5. Adherentās šūnas noskalo ar 1x PBS un inkubē ar disociācijas šķīdumu, akutāzi, 8–10 minūtes. Atdalītās šūnas pievieno svaigam barotnei un centrifugē. Šūnu nogulsnes atkārtoti suspendē un ielej kultūras kolbā, kas satur svaigu barotni.
Augšanas barotne:
ARPE-19 šūnu līnijas kultivēšanai izmanto DMEM vai Ham’s F12 barotni. ARPE-19 barotni papildina ar 5 % FBS, 3,1 g/l glikozes, 15 mM HEPES, 1,6 mM L-glutamīna, 1,0 mM nātrija piruvāta un 1,2 g/l NaHCO3. Barotni nomaina 2–3 reizes nedēļā.
Augšanas apstākļi:
ARPE-19 šūnas tiek turētas mitrinātā inkubatorā 37 °C temperatūrā ar 5 % CO2 pievadi.
Uzglabāšana:
Šūnu līniju var uzglabāt šķidrā slāpekļa tvaika fāzē vai temperatūrā zem -150 °C, lai ilgtermiņā saglabātu šūnu dzīvotspēju.
Sasaldēšanas process un barotne:
Kā ARPE-19 sasaldēšanas vidi izmanto CM-1 vai CM-ACF. Īsumā, šūnas sasaldē, izmantojot lēnas sasaldēšanas metodi, kas ļauj temperatūrai pazemināties tikai par 1 °C minūtē un aizsargā šūnas no šoka.
Atkausēšanas process:
Šūnas atkausē ūdens vannā, kas iepriekš iestatīta uz 37 °C. Kad paliek neliels ledus gabaliņš, šūnas pievieno svaigai kultūras barotnei un centrifugē. Tādējādi tiek noņemti sasaldēšanas barotnes elementi. Pēc tam šūnu nogulsnes atkārtoti suspendē un šūnas ievieto kolbā kultivēšanai.
Bioloģiskās drošības līmenis:
ARPE-19 šūnas tiek apstrādātas 1. bioloģiskās drošības laboratorijās.
ARPE-19 šūnu priekšrocības un ierobežojumi
ARPE-19 šūnas tiek plaši izmantotas tīklenes šūnu bioloģijas pētījumos. Tāpat kā citas šūnas, arī tām ir savas priekšrocības un ierobežojumi. Daži no tiem ir uzskaitīti šajā sadaļā:
Priekšrocības
Galvenās ARPE-19 šūnu līnijas priekšrocības ir šādas:
Tīklenes šūnu modelis
ARPE-19 šūnas ir ļoti līdzīgas cilvēka tīklenes pigmenta epitēlija šūnām, tādēļ tās ir ideāli piemērotas tīklenes slimību pētīšanai un zāļu testēšanai.
Stabils augšanas temps
Šīs šūnas izrāda stabilu augšanu un var tikt uzturētas ilgstoši, kas atvieglo ilgtermiņa eksperimentus.
Piemērotība transfekcijai
ARPE-19 šūnu līnija ir lielisks transfekcijas saimnieks, ko plaši izmanto gan pārejošas, gan stabilas ekspresijas pētījumos.
Ierobežojumi
Šeit ir daži ierobežojumi, kas saistīti ar ARPE-19 šūnu līniju:
Ierobežota diferenciācija
Salīdzinājumā ar primārajām tīklenes šūnām ARPE-19 diferenciācija ir ierobežota. Tas var potenciāli ietekmēt noteiktus ar diferenciāciju saistītus pētījumus.
ARPE-19 šūnu līnijas pielietojums pētniecībā
ARPE-19 šūnu līnijai ir daudzveidīgs pielietojums tīklenes pētniecībā. Šeit mēs esam apsprieduši dažus konkrētus un nozīmīgus šīs tīklenes pigmenta epitēlija šūnu līnijas izmantošanas veidus pētniecībā.
- Tīklenes slimību pētījumi: ARPE-19 šūnas sniedz vērtīgu informāciju par tīklenes patogēnēzi. Pētnieki izmanto šūnas, lai pētītu slimību mehānismus un iespējamos ārstēšanas veidus. 2020. gadā veiktajā pētījumā tika atklāts, ka cirkulārā RNS hsa_circ_0041795 mijiedarbojas ar miRNA-646 un VEGFC, veicinot augsta glikozes līmeņa izraisītu bojājumu cilvēka tīklenes pigmenta epitēlija šūnās ARPE-19. Tāpēc pētījumā šī cirkulārā RNS tiek ieteikta kā efektīvs terapeitiskais un diagnostiskais mērķis cīņā pret diabētisko retinopātiju [2]. Līdzīgi Jing Yang un kolēģi izmantoja ARPE-19 šūnas un sniedza ieskatu diabētiskās retinopātijas patogēnēzē. Viņi pētīja, ka lncRNA SNHG1 (Small Nucleolar RNA Host Gene 1) inhibīcija var nomākt iekaisuma reakciju un epitelio-mezohinēzes pāreju ARPE-19 šūnās, kas apstrādātas ar augstu glikozes līmeni [3].
- Zāļu testēšana: ARPE-19 šūnas tiek izmantotas, lai novērtētu zāļu un savienojumu efektivitāti un drošību, palīdzot izstrādāt ārstēšanas metodes vai terapijas tīklenes slimībām. Piemēram, 2019. gadā veiktajā pētījumā tika atklāta Syzygium malaccense bioaktīvo vielu aizsargājošā iedarbība pret ūdeņraža peroksīda izraisītu stresu cilvēka tīklenes pigmenta epitēlija šūnās ARPE-19 [4]. Pēc tam pētījumā tika atklāta Prunella vulgaris var. L ekstrakta terapeitiskā loma pret zilas gaismas izraisītiem bojājumiem ARPE-19 šūnās un peles modelī [5].
5. ARPE-19 šūnas: zinātniskās publikācijas
Tālāk ir minētas dažas interesantas pētniecības publikācijas, kurās aprakstītas ARPE-19 tīklenes pigmenta epitēlija šūnas.
MikroRNA reakciju novērtējums ARPE-19 šūnās pret oksidatīvo stresu
Šis pētījuma raksts tika publicēts 2018. gadā žurnālā Cutaneous and Ocular Toxicology. Šajā pētījumā tika novērtēta miRNA ekspresija reakcijā uz oksidatīvo stresu, kas tika izraisīts ARPE-19 cilvēka tīklenes pigmenta epitēlija šūnās, izmantojot ūdeņraža peroksīda apstrādi.
Šajā publikācijā žurnālā „World Journal of Stem Cells” (2021) tika izvirzīts pieņēmums, ka ARPE-19 šūnu kondicionētajā vidē ir augšanas faktori, kas veicina no taukaudiem iegūtu mezenhālās cilmes šūnu neiroloģisko diferenciāciju.
Šis pētījums tika publicēts žurnālā „International Journal of Molecular Sciences” (2019). Tajā norādīts, ka kvercetīns aizsargā pret IL-1β stimulētu ķīmisko vielu atbrīvošanos ARPE-19 šūnās, novēršot MAPK un NF-κB kaskāžu aktivizēšanos, lai uzlabotu iekaisuma reakciju.
Šis pētījuma raksts tika publicēts žurnālā International Journal of Molecular Sciences (2018). Šajā pētījumā tika novērtēta oksidatīvā stresa un iekaisuma iespējamā ietekme uz SIRT1 (Sirtuin 1) un DNMT (DNS metiltransferāžu) funkcijām, kā arī uz LINE-1 (garš izkliedēts kodola elements-1) metilāciju ARPE-19 šūnās.
Šajā rakstā žurnālā Antioxidants (2022) tika konstatēts, ka Chrysanthemum boreale ziedu ekstraktiem ir aizsargājoša iedarbība pret N-retinilidēna-N-retiniletanolamīna (A2E) izraisītiem tīklenes bojājumiem ARPE-19 šūnās.
Resursi par ARPE-19 šūnu līniju: protokoli, video un cits
ARPE-19 ir plaši izmantota tīklenes epitēlija šūnu līnija. Šeit ir uzskaitīti pieejamie resursi, kas aptver ARPE-19 šūnu kultivēšanas un transfekcijas protokolus:
- ARPE-19 transfekcija: Šis video ir soli pa solim izstrādāts ceļvedis, lai apgūtu transfekcijas protokolu ARPE-19 šūnu līnijai.
Šeit ir daži resursi, kas apraksta ARPE-19 šūnu kultivēšanas protokolu:
- ARPE-19 šūnu kultivēšanas protokols: Šajā saitē ir informācija par ARPE-19 šūnu kultivēšanu un uzturēšanu. Tajā ir informācija par ARPE-19 barotni, kultivēšanas apstākļiem, subkultivēšanas protokoliem, kā arī par proliferatīvo un kriokonservēto kultūru apstrādi.
Atsauces
- Schnichels, S., et al., Retina in a dish: Cell cultures, retinal explants and animal models for common diseases of the retina. Progress in retinal and eye research, 2021. 81: p. 100880.
- Sun, H. un X. Kang, hsa_circ_0041795 veicina cilvēka tīklenes pigmenta epitēlija šūnu (ARPE 19) bojājumus, ko izraisa augsts glikozes līmenis, absorbējot miR-646 un aktivizējot VEGFC. Gene, 2020. 747: 144654. lpp.
- Yang, J., et al., Apklusinātais SNHG1 inhibēja ARPE-19 šūnu epitēlija-mezenhīma pāreju un iekaisuma reakciju, ko izraisīja augsts glikozes līmenis. J Inflamm Res, 2021. 14: 1563–1573.
- Arumugam, B., et al., Syzygium malaccense miricetīna atvasinājumu aizsargājošā iedarbība pret ūdeņraža peroksīda izraisītu stresu ARPE-19 šūnās. Molecular vision, 2019. 25: 47. lpp.
- Kim, J., K. Cho un S.-Y. Choung, Prunella vulgaris var. L ekstrakta aizsargājošā iedarbība pret zilas gaismas izraisītiem bojājumiem ARPE-19 šūnās un peles tīklenē. Free Radical Biology and Medicine, 2020. 152: 622.–631. lpp.