AGS šūnas – kuņģa adenokarcinomas AGS šūnu izmantošana vēža pētījumos
AGS šūnas veido cilvēka kuņģa adenokarcinomas šūnu līniju, ko plaši izmanto biomedicīniskajos pētījumos. Tās tiek izmantotas īpaši, lai pētītu kuņģa vēža bioloģiju, tostarp audzēja augšanu, attīstību, progresēšanu un terapeitiskās intervences. Turklāt tās izmanto, lai pētītu saimnieka un patogēna mijiedarbību.
- Augšanas barotne
- AGS šūnu kultivēšanai izmanto DMEM barotni, kas satur 10 % FBS, 4 mM L-glutamīnu, 4,5 g/l glikozes, 1,5 g/l NaHCO3 un 1,0 mM nātrija piruvātu. Barotni jāmaina 2–3 reizes nedēļā.
- Dubultošanās laiks
- AGS šūnu dubultošanās laiks ir no 24 līdz 48 stundām.
- Augšanas veids
- AGS šūnas ir adhezīvas. Tās aug monoslāņos.
- Bioloģiskās drošības līmenis
- BSL-2
- Piegādātājs
- Cytion — Pasūtīt AGS
AGS šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
Pirms sākt darbu ar šūnu līniju, ir nepieciešams iepazīties ar tās izcelsmi un vispārīgajām īpašībām. Šajā sadaļā tiks aplūkoti šādi jautājumi: Kas ir AGS šūnas? Kāda ir AGS šūnu izcelsme? Kāda ir AGS vēža šūnu līnijas morfoloģija?
- AGS šūnu līnija tika iegūta no 54 gadus vecas kaukāziešu sievietes, kurai bija kuņģa adenokarcinoma, kuņģa audiem. Tā tika izdalīta 1979. gadā [1].
- AGS šūnām ir epitēlija tipa morfoloģija.
- Kuņģa epitēlija AGS šūnas ir hiperdiploīdas. AGS šūnu modālais hromosomu skaits ir 49, kas sastopams gandrīz 60 % šūnu. Poliploīdija sastopama aptuveni 3,6 % šūnu.
Informācija par AGS šūnu līnijas kultivēšanu
Lai pareizi rīkotos ar šūnu līniju un to pārvaldītu, jums jāzina tās kultivēšanas pamatprincipi. Jo īpaši jums jāapgūst: kāds ir AGS šūnu dubultošanās laiks? Kas ir AGS šūnu barotne? Kā veikt AGS šūnu subkultivēšanu? Kādas sasaldēšanas barotnes tiek izmantotas kuņģa epitēlija AGS šūnām?
Galvenie punkti AGS šūnu kultivēšanā
Dubultošanās laiks:
AGS šūnu dubultošanās laiks ir no 24 līdz 48 stundām.
Adhēzijas vai suspensijas stāvoklī:
AGS šūnas ir adhezīvas. Tās aug monoslānī.
Sēšanas blīvums:
AGS šūnas tiek sētas ar šūnu blīvumu 1 x 104 šūnas/cm2. Šādā blīvumā šūnas 3 līdz 5 dienu laikā veido konfluentu monoslāni. Pēc vecā barotnes noņemšanas šūnas tiek skalotas ar 1 x PBS un inkubētas ar Accutase disociācijas šķīdumu. Atdalītās šūnas tiek atkārtoti suspendētas kultūras barotnē un centrifugētas. Šūnu nogulsnes tiek atkārtoti suspendētas, un pēc AGS šūnu skaitīšanas tās tiek pārvietotas uz jaunu kolbu augšanai.
Augšanas barotne:
AGS šūnu kultivēšanai izmanto DMEM barotni, kas satur 10 % FBS, 4 mM L-glutamīnu, 4,5 g/l glikozes, 1,5 g/l NaHCO3 un 1,0 mM nātrija piruvātu. Barotni jāmaina 2–3 reizes nedēļā.
Augšanas apstākļi:
AGS šūnas tiek turētas mitrinātā inkubatorā (37 °C temperatūrā) ar 5 % CO2 pievadi.
Uzglabāšana:
Sasaldētas AGS šūnas tiek turētas elektriskās saldētavās temperatūrā zem -150 °C vai ilgāku laiku šķidrā slāpekļa tvaika fāzē.
Sasaldēšanas process un barotne:
AGS šūnu sasaldēšanai izmanto CM-1 vai CM-ACF barotni. Šūnu sasaldēšana notiek lēnā sasaldēšanas procesā, kas ļauj temperatūrai pazemināties tikai par 1 °C minūtē un saglabā šūnu dzīvotspēju.
Atkausēšanas process:
Sasaldētās kuņģa epitēlija šūnas ātri tiek sakratītas 37 °C ūdens vannā 40–60 sekundes. Atkausētās šūnas tiek atkārtoti suspendētas svaigā kultūras vidē un ielietas jaunās kolbās augšanai. Pēc 24 stundu inkubācijas barotne tiek atjaunota, lai noņemtu sasaldēšanas barotnes sastāvdaļas. Pretēji tam, atkausētās šūnas tiek centrifugētas, un sasaldēšanas barotnes elementi tiek noņemti. Tad ievāktās šūnas tiek atkārtoti suspendētas un izdalītas kolbā, kas satur kultūras barotni.
Bioloģiskās drošības līmenis:
AGS šūnu kultivēšanai ir nepieciešama 2. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorija.
AGS šūnu līnija: priekšrocības un ierobežojumi
Šajā raksta sadaļā tiks izskaidroti daži no galvenajiem AGS šūnu priekšrocībām un ierobežojumiem.
Priekšrocības
Galvenās kuņģa epitēlija AGS šūnu priekšrocības ir šādas:
Viegli kultivējamas
AGS kuņģa karcinomas šūnu līnija ir viegli uzturam šūnu kultūras laboratorijās. Tai nav sarežģītu un prasīgu šūnu kultūras uzturēšanas prasību. Turklāt tai ir labas augšanas īpašības, kas to padara par ideālu izvēli kuņģa vēža bioloģijas pētījumiem.
Saistība ar kuņģa vēzi
AGS šūnas ir iegūtas no cilvēka kuņģa adenokarcinomas, tādēļ tās plaši izmanto kuņģa karcinomas bioloģijas un terapeitisko intervenču pētīšanai.
Ierobežojumi
Ar AGS šūnu līniju saistītie ierobežojumi ir šādi:
In vitro šūnu modelis
AGS šūnas tiek kultivētas biomedicīnas pētniecības laboratorijās mākslīgos apstākļos. Tāpēc tās varētu nepilnīgi atspoguļot in vivo kuņģa vēža mikrovidē un citas šūnu un molekulārās mijiedarbības.
AGS šūnu pielietojumi
AGS šūnas tiek izmantotas īpaši kuņģa vēža bioloģijas pētījumiem. Tām ir daudzi citi daudzsološi pielietojumi biomedicīnas jomā. Daži no interesantākajiem AGS šūnu pētniecības pielietojumiem ir:
- Kuņģa vēža pētījumi: AGS šūnas ir lielisks pētniecības instruments, lai izpētītu šūnu un molekulāros mehānismus, kas ir pamatā kuņģa vēža augšanai, metastāzēm un invāzijai. Pētnieki izmanto arī kuņģa epitēlija AGS šūnas, lai pētītu dažādus šūnu procesus, ģenētiskās mutācijas un signālu pārraides ceļus kuņģa vēža attīstībā. Pētījumā, kas publicēts žurnālā Oncology Reports (2019), tika atklāts, ka mikroRNA-183-5p.1 veicina audzēja šūnu proliferāciju, migrāciju un invāziju, inhibējot Bcl 2/P53 signālceļu. Turklāt tas arī nomāc TPM1 gēnu, lai izraisītu šos efektus. Tādējādi gan mikroRNA, gan TPM1 tiek ieteikti kā efektīvi molekulāri mērķi mērķtiecīgu pretvēža terapiju izstrādei [2].
- Zāļu skrīnings: AGS šūnas tiek plaši izmantotas, lai skrīnētu jaunus un efektīvus pretvēža zāļu pretvēža zāles. Pētnieki novērtē potenciālo zāļu citotoksicitāti un efektivitāti, izmantojot AGS šūnu līniju. Ir veikti arī pētījumi par jaunu molekulāro mērķmolekulu identificēšanu un jaunu mērķtiecīgu terapiju izstrādi kuņģa karcinomu apkarošanai. 2021. gadā veiktajā pētījumā tika izmantotas AGS kuņģa vēža šūnas un pētīta paklitaksela zāļu terapeitiskā iedarbība. Rezultāti atklāja, ka paklitakselis izraisa mitotisko katastrofu, kas ir neatņemama apoptozes jeb šūnu nāves mehānisma sastāvdaļa AGS šūnās. Turklāt tas veicināja arī autofāgiju kuņģa vēža šūnās [3].
- Saimnieka un patogēna mijiedarbība: AGS vēža šūnu līnija tiek izmantota arī saimnieka un patogēna mijiedarbības pētījumos. Tas palīdz pētniekiem izprast infekcijā iesaistītos šūnu mehānismus un reakcijas. Piemēram, 2020. gadā veiktajā pētījumā tika novērots, ka mazās nekodējošās RNS, kas atrodas Helicobacter pylori ārējās membrānas pūslīšos, samazina interleikīna 8 sekrēciju cilvēka AGS šūnās [4].
5. Zinātniskie raksti par AGS šūnu līniju
Šajā raksta sadaļā tiks apskatītas dažas interesantas un visbiežāk citētas pētnieciskās publikācijas par AGS šūnām.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā Biomedicine & Pharmacotherapy (2020), tika izvirzīta hipotēze, ka salidrosīds, kas ir dabīgs savienojums, izraisa aizsargājošu autofāgiju un šūnu nāvi kuņģa epitēlija AGS šūnās, modulējot PI3K/AKT/mTOR signālceļu.
Šis pētījums tika publicēts žurnālā „Biomedicine & Pharmacotherapy” (2018). Tajā tika pētīta astragalus polisaharīda un zāļu apatiniba sinerģiskā pretvēža iedarbība AGS šūnās. Pētījuma rezultāti atklāja, ka astragalus pastiprina apatiniba pretvēža iedarbību, nomācot AKT signālceļu.
Šis pētījums, kas publicēts žurnālā „Journal of Ethnopharmacology” (2018), liecina, ka kurkuzedoalīds, dabīgs savienojums no Curcuma zedoaria Roscoe auga, veicina tā citotoksisko iedarbību pret AGS šūnām.
FOXA1 pārmērīga ekspresija inhibē cilvēka kuņģa vēža AGS šūnu proliferāciju un EMT
Šajā publikācijā žurnālā „Gene” (2018) tika izvirzīts pieņēmums, ka FOXA1 ekspresijas paaugstināšanās nomāc AGS kuņģa adenokarcinomas šūnu proliferāciju, epitēlija-mezodermālo pāreju (EMT) un invāziju.
Šis pētījuma raksts tika publicēts žurnālā International Journal of Medical Microbiology 2020. gadā. Šajā pētījumā AGS šūnas tika izmantotas, lai pētītu saimnieka un patogēna mijiedarbību. Rezultāti atklāja, ka Helicobacter pylori ārējās membrānas vezikulās ir daži nekodējoši RNS, kas ietekmē IL-8 līmeni AGS šūnās.
Resursi par AGS šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
Tālāk ir uzskaitīti daži resursi par AGS šūnām.
- AGS šūnu transfekcijas protokols: Šis video ir soli pa solim izstrādāts ceļvedis, lai apgūtu transfekcijas protokolu kuņģa epitēlija AGS šūnām.
Šajā saitē ir AGS šūnu kultivēšanas protokols.
- AGS šūnu kultivēšanas protokols: Šajā tīmekļa vietnē ir noderīga informācija par AGS šūnu barotnēm un šūnu kultivēšanas protokoliem. Īsumā tajā ir sniegts protokols kuņģa epitēlija AGS šūnu subkultivēšanai un proliferējošu un kriokonservētu AGS kultūru apstrādei.
- AGS šūnu subkultivēšana: Šajā vietnē ir sīki izskaidrots AGS šūnu subkultivēšanas process.
Atsauces
- Phuc, B.H., et al., Divu Vjetnamas Helicobacter pylori celmu salīdzinošā genomika, CHC155 no pacienta ar kuņģa vēzi ārpus kardijas un VN1291 no pacienta ar divpadsmitpirkstu zarnas čūlu. Zinātniskie ziņojumi, 2023. 13(1): 8869. lpp.
- Lin, J., et al., miRNA‑183‑5p. 1 veicina kuņģa vēža AGS šūnu migrāciju un invāziju, iedarbojoties uz TPM1. Labojums in/10.3892/or. 2020.7902. Oncology reports, 2019. 42(6): 2371.–2381. lpp.
- Khing, T.M., et al., Paklitaksela ietekme uz apoptozi, autofāgiju un mitotisko katastrofu AGS šūnās. Zinātniskie ziņojumi, 2021. 11(1): 23490. lpp.
- Zhang, H., et al., Helicobacter pylori ārējās membrānas vezikulās iepakotie sncRNA vājinā IL-8 sekrēciju cilvēka šūnās. International Journal of Medical Microbiology, 2020. 310(1): 151356. lpp.