Šūnu līnija A375 — rokasgrāmata par melanomas pētījumiem

A375 ir cilvēka melanomas šūnu līnija, ko plaši izmanto toksikoloģijas un imūnonkoloģijas pētījumos. Pētnieki izmanto šo šūnu līniju, lai pētītu vēža bioloģiju un signālu pārraides ceļus, testētu vai atlasītu potenciālos pretvēža līdzekļus, kā arī izstrādātu jaunus un efektīvus ārstniecības līdzekļus.

A375 šūnu izcelsme un vispārējās īpašības

Zināšanas par šūnu līnijas izcelsmi un vispārīgajām īpašībām var palīdzēt plānot tās izmantošanu pētniecībā. Šajā raksta sadaļā tiks aplūkota A375 šūnu līnijas izcelsme un īpašības. Piemēram, kas ir A375 šūnu līnija? Kādas ir A375 šūnu līnijas īpašības? No kurienes nāk A375 šūnas? Kāda ir A375 melanomas šūnu morfoloģija? Kāds ir A375 šūnu izmērs?

• Ādas vēža šūnu līnija A375 cēlusies no 54 gadus vecas sievietes ar ļaundabīgu melanomu cietā audzēja eksplantāta kultūras [1].
• A375 šūnām ir epitēlija tipa morfoloģija.
• A375 šūnu izmērs ir salīdzinoši mazāks nekā citām šūnu līnijām. To diametrs ir aptuveni 12 µm.
• A375 melanomas šūnas ir hipotriploīdas. Šīs šūnu līnijas modālais hromosomu skaits ir 62. Parasti katrai šūnai ir deviņas marķierhromosomas un viena kopija normālajām N2, N6 un N22 hromosomām.

A375 šūnas: informācija par šūnu kultūru

A375 šūnu kultūras ir viegli uzturēt. Tām nav nekādu sarežģītu šūnu kultūras prasību. Šī sadaļa palīdzēs jums uzzināt nepieciešamo informāciju par šūnu kultūru. Piemēram, kāds ir A375 dubultošanās laiks. Kas ir A375 šūnu līnijas barotne? Kāda ir A375 sēšanas blīvums? Vai A375 melanomas šūnas ir adhezīvas?

Galvenie punkti A375 šūnu kultivēšanā

Populācijas dubultošanās laiks:

A375 dubultošanās laiks ir 20 stundas.

Adhēzijas vai suspensijas:

A375 ir adhezīva cilvēka melanomas šūnu līnija.

Sēšanas blīvums:

1 x 10⁴ šūnas/cm² šūnu blīvums ir ideāls A375 šūnu kultūrām. Adherentās šūnas tiek skalotas ar 1 x fosfāta buferšķīdumu (PBS) un inkubētas ar pasāžēšanas šķīdumu (Accutase). Pēc tam šūnām pievieno kultūras barotni un centrifugē. Novāktās šūnas tiek atkārtoti suspendētas kultūras barotnē un izdalītas jaunās kolbās augšanai.

Augšanas barotne:

DMEM ir ieteicams kā ideāls A375 barotne, ja to papildina ar 10 % embriju liellopu serumu (FBS), 4,5 g/l glikozes, 1,5 g/l NaHCO3, 4 mM L-glutamīnu un 1,0 mM nātrija piruvātu. A375 barotne jāmaina 2–3 reizes nedēļā.

Augšanas apstākļi:

A375 melanomas šūnas audzē mitrinātā inkubatorā (37 °C) ar 5 % CO2 pievadi.

Uzglabāšana:

Sasaldētās A375 šūnas jāuzglabā temperatūrā zem -150 °C šķidrā slāpekļa tvaika fāzē vai elektriskajā saldētavā.

Sasaldēšanas process un barotne:

A375 šūnu līnijas sasaldēšanai izmanto CM-1 vai CM-ACF barotnes. Lai aizsargātu šūnu dzīvotspēju, izvēlēts lēns sasaldēšanas process, kas ļauj temperatūru pazemināt pakāpeniski par 1 °C.

Atkausēšanas process:

Sasaldēto A375 melanomas šūnu flakonu ātri sakrata ūdens vannā 40–60 sekundes, līdz paliek tikai neliels ledus gabals. Šūnām pievieno svaigu barotni un centrifugē, lai atdalītu sasaldēšanas barotnes elementus. Iegūto šūnu nogulsni atkārtoti suspendē un ielej jaunās kolbās.

Bioloģiskās drošības līmenis:

A375 kultūras tiek apstrādātas un uzturētas 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorijas apstākļos.

A375 šūnu līnijas izmantošana pētniecībā

A375 šūnu līnijai ir plašs pielietojums vēža pētniecībā. Šeit ir daži no visbiežākajiem jomām, kurās tiek izmantotas A375 šūnas.

• Vēža pētniecība: A375 šūnas plaši izmanto melanomas pētniecībā. Pētnieki izmantoja šīs šūnas, lai pētītu ādas vēža bioloģiju, procesus un pamatā esošos šūnu signālu mehānismus, tostarp šūnu proliferāciju, migrāciju un invāziju. Tas var palīdzēt pētniekiem identificēt jaunus molekulāros terapeitiskos mērķus. Pētījumā, ko 2019. gadā veica Lin Zhu un kolēģi, tika izmantotas ļoti agresīvas melanomas šūnas A375 un atklāta mikroRNA-3662 loma A375 melanomas šūnu augšanā un invāzijā. Pētījuma rezultāti liecina, ka mikroRNA-3662 iedarbojas uz ZEB1 gēnu un regulē melanomas šūnu augšanu in vitro un in vivo A375 audzēja modelī [2]. Līdzīgi, 2018. gadā veiktajā pētījumā tika konstatēts, ka PI3K/AKT un MAPK/ERK ceļi ir iesaistīti A375 šūnu līnijas proliferācijā un metastāzē [3].
• Zāļu atklāšana un testēšana: A375 šūnu līnija ir noderīgs in vitro audzēja modelis, lai testētu un atlasītu potenciālos pretvēža līdzekļus. Pētnieki izmanto šīs A375 melanomas šūnas, lai novērtētu jauno ķīmijterapijas zāļu, savienojumu un citu terapiju toksicitāti un efektivitāti. Piemēram, vienā pētījumā tika izpētītas greipfrūtu izcelsmes mikro- un nanovesikulu pretvēža īpašības uz A375 cilvēka melanomas vēža šūnām. Rezultāti atklāja, ka mikro- un nanovesikulas izraisa šūnu cikla apstāšanos un apoptozi, kā arī kavē gēnu ekspresiju šūnu proliferācijā, migrācijā un invāzijā [4].

A375 šūnas: publikācijas

Šeit ir minētas dažas nozīmīgas pētniecības publikācijas, kurās aprakstītas A375 šūnas.

D vitamīns un tā zema kalcēmiskā iedarbība analogi modulē cisplatīna un dakarbazīna pretvēža īpašības cilvēka melanomas A375 šūnu līnijā

Šis pētījums tika publicēts žurnālā „Journal of Oncology” 2019. gadā. Pētījumā tika izvirzīts pieņēmums, ka vienlaicīga ārstēšana ar D vitamīnu un tā analogiem uzlabo cisplatīna un dakarbazīna pretvēža aktivitāti A375 melanomas šūnās.

In vitro novērtējums par izvēlētu alvejas sugu želejas un veselu lapu ekstraktu pretmelanomas iedarbību (A375 šūnu līnija)

Šis pētījums tika publicēts žurnālā „Journal of Herbal Medicine” 2022. gadā. Šajā pētījumā tika pētīta alvejas gēla pretmelanomas iedarbība uz A375 melanomas šūnām.

Fermitīna ģimenes loceklis 2 veicina melanomas progresēšanu, pastiprinot p-α-Pix saistīšanos ar Rac1, lai aktivizētu MAPK ceļu

Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā „Oncogene” (2021), tika izvirzīta hipotēze, ka fermitīna ģimenes loceklis 2 (FERMT2 vai kindlin-2) veicina melanomas progresēšanu, aktivizējot MAPK, saistoties ar p-α-Pix un Rac1.

FARP1 veicina šūnu proliferāciju, modulējot MAPK signālceļu ādas melanomā

Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā The American Journal of Dermatopathology (2019), tika izvirzīts pieņēmums, ka FARP1 var veicināt ādas melanomas attīstību un progresēšanu. Tādējādi tas var būt noderīgs terapeitiskais mērķis.

Phyllodium elegans ekstraktu citotoksiskais un apoptozes potenciāls cilvēka vēža šūnu līnijās

Šis pētījuma raksts tika publicēts žurnālā Bioengineered (2019). Šajā pētījumā tika pētīta auga Phyllodium elegans ekstrakta citotoksiskā un apoptozes aktivitāte cilvēka karcinomu šūnu līnijās, tostarp A375.

Resursi par A375 šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli

Tālāk ir uzskaitīti daži tiešsaistes resursi, kuros aprakstītas A375 šūnas.

• A375 šūnu transfekcija: Šis video pamācības materiāls palīdzēs jums soli pa solim apgūt A375 šūnu transfekciju.
• Šūnu kultivēšana: Šajā videoklipā ir ļoti noderīga informācija par šūnu līniju kultivēšanu.

Šeit ir uzskaitīti A375 šūnu kultivēšanas protokoli.

• A375 šūnu līnija: Šajā saitē ir noderīga informācija par A375 šūnu līnijas kultivēšanu un uzturēšanu, tostarp par A375 barotnēm un sasaldētu un proliferējošu A375 kultūru apstrādi.

Atsauces

1. Avram, S., et al., A375 cilvēka melanomas modeļu standartizācija uz cāļu embriju horioallantoiskās membrānas un Balb/c nude pelēm. Oncol Rep, 2017. 38(1): 89.–99. lpp.
2. Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 mērķē uz ZEB1 un vājinā ļoti agresīvās melanomas šūnu līnijas A375 invāziju. Cancer Manag Res, 2019. 11: 5845.–5856. lpp.
3. Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C inhibē melanomas A375 šūnu proliferāciju un metastāzes, nomācot PI3K/Akt un MAPK/ERK ceļus. Life sciences, 2018. 206: 35.–44. lpp.
4. Stanly, C., et al., No greipfrūtiem iegūtas mikro- un nanovesikulas uzrāda atšķirīgus metabolomu profilus un pretvēža aktivitāti cilvēka melanomas šūnu līnijā A375. Cells, 2020. 9(12): 2722. lpp.