4T1 šūnas – būtiska informācija par krūts vēža šūnu pētījumiem un pielietojumiem
4T1 ir transplantējama peles krūts vēža šūnu līnija. To plaši izmanto kā ģenētiski identisku in vitro audzēja modeli cilvēka krūts vēža izpētei. 4T1 šūnas ir ļoti invazīvas un tumorogēnas; tām ir tendence metastāzēt no primārā audzēja vietas piena dziedzerī uz citām vietām, tostarp aknām, limfmezgliem, plaušām, kauliem un smadzenēm, tādējādi tās ir ideāli piemērotas krūts vēža metastāžu pētīšanai [1].
- Augšanas barotne
- 4T1 šūnu kultivēšanai izmanto RPMI 1640 barotni. Ideālai šūnu augšanai kultivēšanas barotnē pievieno 10 % embriju liellopu serumu (FBS), 2,0 g/l NaHCO3 un 2,1 mM stabilu glutamīnu.
- Dubultošanās laiks
- Vidējais 4T1 krūts vēža šūnu populācijas dubultošanās laiks ir 14 stundas.
- Augšanas tips
- 4T1 ir adhezīva šūnu līnija.
- Bioloģiskās drošības līmenis
- BSL-1
- Pieejams
- Cytion — Pasūtīt 4T1
- 4T1 šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
- Informācija par 4T1 šūnu līnijas kultivēšanu
- T1 šūnu līnija: priekšrocības un trūkumi
- Iegādājieties 4T1 šūnu līniju: augstas kvalitātes krūts vēža modelis
- T1 šūnu līnija: pielietojums vēža pētniecībā
- 4T1 šūnas: pētniecības publikācijas
- Resursi par 4T1 šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
- Bieži uzdotie jautājumi par 4T1 šūnu līniju
- Atsauces
- Bieži uzdotie jautājumi
4T1 šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
Pirms sākt darbu ar šūnu līniju, ir būtiski zināt tās izcelsmi un vispārīgās īpašības. Šajā sadaļā esam aprakstījuši 4T1 krūts vēža šūnu pamatinformāciju. Piemēram, kas ir 4T1 šūnas? Kādas ir 4T1 šūnu līnijas īpašības? Kāda ir 4T1 šūnu līnijas izcelsme? Kāda ir 4T1 šūnu līnijas morfoloģija?
- 4T1 ir krūts audzēja šūnu līnija, kas cēlusies no piena dziedzera audzēja, kas spontāni izveidojās BALB/c šķirnes pelēm. Šīs ļoti invazīvās un tumorogēnās šūnas augšanas un metastāžu izplatības ziņā ļoti līdzinās cilvēka krūts vēža uzvedībai. Konkrēti, 4T1 audzēja modelis pēta trīskārši negatīvo krūts vēzi (TNBC).
- 4T1 šūnas ir adhezīvas un tām ir epitēlija šūnu līdzīga morfoloģija.
4T1 salīdzinājumā ar EMT-6 šūnu līniju
4T1 un EMT-6 ir neimunogēni peles šūnu modeļi trīskārši negatīva krūts vēža pētījumiem. Šajā gadījumā 4T1 ir agresīvākas un invazīvākas audzēja šūnas nekā EMT-6, kurām ir mazāk invazīvas īpašības [2].
4T1 pret 4T07 šūnām
4T07 arī ir peles vēža šūnu līnija. Galvenā atšķirība starp 4T1 un 4T07 šūnām ir tāda, ka 4T1 šūnas var atstāt primāro audzēja vietu un izplatīties, veidojot redzamas sekundāras metastāzes, savukārt 4T07 šūnas nevar veidot redzamas metastāzes, lai gan tās atstāj primāro vietu [3].
Informācija par 4T1 šūnu līnijas kultivēšanu
4T1 krūts vēža šūnu līnija piedāvā plašas pētniecības iespējas biomedicīnas jomā. Lai kultivētu šīs šūnas, jums jāiepazīstas ar šādiem galvenajiem punktiem: kas ir 4T1 dubultošanās laiks? Kā tiek kultivētas 4T1 šūnas? Kāda ir 4T1 šūnu sēšanas blīvums?
Galvenie punkti 4T1 šūnu kultivēšanai
Dubultošanās laiks:
Vidējais 4T1 krūts vēža šūnu populācijas dubultošanās laiks ir 14 stundas.
Adhēzijas vai suspensijas:
4T1 ir adhezīva šūnu līnija.
Subkultivācijas attiecība:
4T1 trīskārši negatīvajai krūts vēža šūnu līnijai ieteicams sadalīšanas koeficients 1:6 un 1:8. Lai veiktu sadalīšanu, šūnas noskalo ar PBS un inkubē ar Accutase enzīmu 8–10 minūtes. Disociētās šūnas savāc ar centrifugēšanu un atkārtoti suspendē svaigā barotnē. Atkārtoti suspendētās šūnas tiek pārvietotas uz jaunu kolbu augšanai.
Augšanas barotne:
4T1 šūnu kultivēšanai izmanto RPMI 1640 barotni. Ideālai šūnu augšanai kultivēšanas barotnē pievieno 10 % embriju liellopu serumu (FBS), 2,0 g/l NaHCO3 un 2,1 mM stabilu glutamīnu.
Augšanas apstākļi:
4T1 audzēja šūnas tiek turētas 37 °C mitrinātā inkubatorā ar 5 % CO2 pievadi.
Uzglabāšana:
Lai saglabātu šūnu dzīvotspēju, 4T1 šūnas jāuzglabā temperatūrā zem -150 °C, t. i., elektriskajā saldētavā vai šķidrā slāpekļa tvaika fāzē.
Sasaldēšanas process un barotne:
4T1 šūnu līnijai ieteicams izmantot CM-1 vai CM-ACF. Ieteicams izmantot lēnas sasaldēšanas metodi, jo tā aizsargā šūnu dzīvotspēju, ļaujot temperatūrai pakāpeniski pazemināties par 1 °C.
Atkausēšanas process:
Sasaldēto šūnu flakonu tur 37 °C ūdens vannā dažas sekundes, līdz šūnas atkūst un paliek tikai neliels ledus gabaliņš. Šīs šūnas atkārtoti suspendē svaigā barotnē un ielej kolbā kultivēšanai. Pēc 24 stundu inkubācijas barotni nomaina, lai noņemtu sasaldēšanas barotnes sastāvdaļas.
Bioloģiskās drošības līmenis:
4T1 krūts vēža šūnu kultivēšanai ieteicams izmantot 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratoriju.
T1 šūnu līnija: priekšrocības un trūkumi
Šajā raksta sadaļā tiks aplūkotas priekšrocības un trūkumi, kas saistīti ar 4T1 metastātisko modeli.
Priekšrocības
4T1 šūnu līnijas galvenās priekšrocības ir šādas:
- Tumorigenitāte:
4T1 ir ļoti tumorogēna šūnu līnija. Šīs šūnas, injicējot pelēm, spēj veidot 4T1 singēnisko peles modeli krūts vēža pētījumiem. Tāpēc 4T1 modelis ir ideāli piemērots audzēja attīstības, augšanas un metastāžu pētījumiem. Turklāt tas ir noderīgs terapeitisko zāļu skrīningam un novērtēšanai.
- In vitro metastāžu modelis:
4T1 modelim piemīt dabiska metastāžu tendence, kas ļauj pētniekiem efektīvi izpētīt metastāžu procesā iesaistītos pamatmehānismus un ceļus. Turklāt 4T1 šūnas ir rezistentas pret 6-tioguanīnu. Tas palīdz efektīvi noteikt mikrometastātiskās šūnas ar uzlabotu precizitāti salīdzinājumā ar citiem modeļiem, jo novērš nepieciešamību nosvērt mērķa orgānus un skaitīt mezglus.
Trūkumi
Trūkums, kas saistīts ar 4T1 šūnu līniju, ir:
- Agresivitāte/ātrs augšanas temps:
4T1 šūnu līnija ir ļoti agresīva trīskārši negatīva krūts vēža šūnu līnija. Ātrās augšanas dēļ šīs šūnu līnijas izmantošana ilgtermiņa eksperimentos un eksperimentālo mainīgo lielumu kontrole kļūst par izaicinājumu.
Iegādājieties 4T1 šūnu līniju: augstas kvalitātes krūts vēža modelis
T1 šūnu līnija: pielietojums vēža pētniecībā
4T1 peles modeļa šūnu līnija ir vērtīgs pētniecības instruments vēža bioloģijas izpētei un jaunu ārstēšanas metožu novērtēšanai. Galvenās 4T1 šūnu pielietojuma jomas ir uzskaitītas šeit:
Vēža bioloģija
4T1 šūnu līnija tiek plaši izmantota vēža attīstības un izaugsmes pētīšanai. Tā ir ideāls in vitro modelis, lai izpētītu un izpētītu dažādus šūnu un molekulāros mehānismus, kas iesaistīti audzēja progresēšanā un metastāzēs. Turklāt tā var atklāt šūnu signālu ceļu, mikroapvidus un gēnu ekspresijas lomu šajos procesos. 2019. gadā veiktajā pētījumā tika izmantotas 4T1 šūnas, lai atklātu vēža šūnu invāzijas un migrācijas virzošos mehānismus. Rezultāti atklāja, ka tajos ir iesaistīti STAT3, MMP2 un MMP9 gēni, un šo gēnu inhibīcija var ievērojami ierobežot vēža šūnu migrāciju un invāziju [4]. Līdzīgi pētījumi ir norādījuši arī uz vairākiem citiem signālceļiem, kas ir iesaistīti audzēja attīstībā un metastāzēs.
Turklāt 4T1 modelis ir ļoti noderīgs, lai izprastu krūts vēža mikrovidē, tostarp imūno šūnu infiltrāciju un primārā audzēja augšanu. Pētījumi, kas vērsti uz 4T1 audzēja mikrovidē, ir snieguši nozīmīgas atziņas par imūno šūnu un citokīnu, piemēram, CXCL13 ekspresijas, lomu audzēja progresēšanā. Modelis palīdz arī pētīt metastāžu nišas un audzēja metastāzes, jo īpaši vēlīnā stadijā esošā krūts vēža gadījumā, kurā ir izplatīta piena dziedzera karcinomas kolonizācija.
Vēža terapijas pētījumi
4T1 šūnu līnija tiek plaši izmantota vēža terapijas pētījumos, lai atlasītu un novērtētu jaunus ārstēšanas veidus. Vienā pētījumā tika izpētīts zaļo sintēzes dzelzs nanodaļiņu no rozmarīna ekstrakta (Rosemary-FeNPs) un tīra rozmarīna ekstrakta citotoksiskais potenciāls uz 4T1 šūnu līniju. Pētījuma rezultāti liecina, ka Rosemary-FeNPs ir daudzsološākas nekā tīrais ekstrakts [5]. Līdzīgi, 2021. gadā veiktajā pētījumā tika izvērtēts ingvera ekstrakta pretvēža potenciāls 4T1 krūts vēža šūnās un 4T1 peles modelī [6].
Papildus dabīgajiem ekstraktiem 4T1 šūnu līnija tiek izmantota, lai novērtētu tradicionālo ķīmijterapijas līdzekļu efektivitāti. Piemēram, pētījumi, kuros tika izmantota cisplatīna kombinācija ar citām terapijām, ir parādījuši paaugstinātu audzēja šūnu nāvi un samazinātu audzēja progresēšanu 4T1 modelī. Ugunskrēsliņu luciferāzes ievadīšana 4T1 šūnās ir ļāvusi reāllaikā attēlot audzēja augšanu un metastātisko fenotipu, atvieglojot dažādu ārstēšanas metožu ietekmes novērtēšanu.
Turklāt 4T1 šūnu līnijas rezistence pret 6-tioguanīnu ir veicinājusi pētījumus par mikrometastātiskām šūnām, uzlabojot metastāžu noteikšanu un analīzi. Šai šūnu līnijai ir arī izšķiroša loma pretvēža imunitātes un imūnterapijas ietekmes pētījumos, jo īpaši ortotopisko peles modeļu kontekstā, kur pētnieki var precīzi imitēt cilvēka vēzi.
Kopumā 4T1 šūnu līnija joprojām ir neaizstājams instruments onkoloģijas pētījumos, sākot no vēža bioloģijas pamatmehānismu izpratnes līdz jaunu terapeitisko stratēģiju izstrādei un testēšanai.
4T1 šūnas: Pētījumu publikācijas
Šajā raksta sadaļā tiks apskatītas dažas interesantas un visbiežāk citētas publikācijas par 4T1 šūnām.
Šis raksts tika publicēts 2018. gadā žurnālā „Journal of Photochemistry and Photobiology”. Pētījumā tika izvirzīts pieņēmums, ka no Madhuca longifolia sintezētie sudraba nanodaļiņas izraisa antiproliferatīvu iedarbību 4T1 audzēja šūnās, izraisot šūnu sienu degradāciju un ROS veidošanos.
Verbaskosīda citotoksicitāte un apoptozes efekti uz krūts vēža 4T1 šūnu līniju
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā BMC Pharmacology and Toxicology (2021), tika izvirzīts pieņēmums, ka dabiskais savienojums verbaskosīds izraisa apoptozes efektu 4T1 krūts vēža šūnās, izmantojot TLR4 signālu.
Eupatorīns nomāca audzēja progresēšanu un uzlaboja imunitāti 4T1 peles krūts vēža modelī
Šis pētījums tika publicēts žurnālā Integrative Cancer Therapies 2020. gadā. Šajā pētījumā tika izmantotas 4T1 šūnas, lai izstrādātu 4T1 singēnisko peles modeli, un, izmantojot to, tika pētīts eupatorīna pretvēža potenciāls. Eupatorīns aizkavēja audzēja attīstību 4T1 peles modelī.
Viola odorata ekstrakta inhibējošā ietekme uz audzēja augšanu un metastāzēm 4T1 krūts vēža modelī
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā „Iranian Journal of Pharmaceutical Research” (2018), tika izvirzīts pieņēmums, ka ārstniecības augs Viola odorata varētu būt citotoksisks pret 4T1 šūnām.
Šajā pētījumā tika izvirzīts pieņēmums, ka ar docetaxel piepildītas cietās lipīdu nanodaļiņas (DTX-piepildītas SLN) var būt daudzsološs līdzeklis krūts vēža ārstēšanai un metastāžu novēršanai, jo tās ierobežo 4T1 šūnu vēža augšanu un metastāzes plaušās.
Resursi par 4T1 šūnu līniju: protokoli, video un citi materiāli
Tālāk ir uzskaitīti daži resursi par 4T1 šūnām:
- 4T1 transfekcijas pamācība: Šis video ir soli pa solim izstrādāta pamācība 4T1 šūnu līnijas transfekcijas veikšanai.
- Šūnu līnijas subkultivēšana: Šajā videoklipā ir izskaidrots subkultivēšanas protokols adhezīvām šūnu līnijām.
Šajā saitē ir atrodams 4T1 šūnu kultivēšanas protokols:
- 4T1 šūnu līnija: Šajā tīmekļa vietnes saitē ir visa noderīgā informācija par 4T1 kultūru apstrādi. Tajā ir informācija par kultūras barotnēm, kā arī apstrādes protokoli kriokonservētām un proliferējošām kultūrām.
Biežāk uzdotie jautājumi par 4T1 šūnu līniju
Blogā „4T1“ tiek publicēti pārskati, jaunākā informācija par pētījumiem un eksperimentālās metodes, kas saistītas ar 4T1 piena dziedzera karcinomas šūnu līniju, kuru plaši izmanto pētījumos par krūts vēža attīstību un metastāzēm.
Piena dziedzera karcinomas šūnu līnija, tostarp 4T1 modelis, ir būtiska, lai pētītu audzēja augšanu un metastāzes, kā arī imūno šūnu infiltrāciju krūts vēža mikrovidē.
CXCL13 ekspresija ir ļoti svarīga krūts vēža pētījumos, jo tā ir saistīta ar imūno šūnu infiltrāciju un metastāžu nišu veidošanos, sniedzot ieskatu audzēja progresēšanā un metastāžu veidošanā.
Dziedzeru audzēja modeli, piemēram, 4T1 modeli, izmanto, lai simulētu vēlīnā stadijā esošu krūts vēzi un krūts dziedzera karcinomas izplatību, palīdzot pētniekiem izprast slimības attīstību un iespējamos ārstēšanas veidus.
Primārā audzēja izaugsme ir izšķirošs faktors vēža metastāžu pētījumos, veidojot pamatu izpētei par to, kā audzēji izplatās uz citiem orgāniem, piemēram, intraduktālajā peles modelī.
Peles 4T1 krūts vēža modelis tiek izmantots, lai pētītu pretvēža imunitāti, kombinēto terapiju ar cisplatīnu un audzēja šūnu nāvi, sniedzot visaptverošu ieskatu krūts vēža ārstēšanas efektivitātē.
Ortotopiskie peles modeļi, tostarp 4T1 modelis, ir ļoti svarīgi, lai pētītu audzēja mikrovidē, imūno reakciju un metastāzes apstākļos, kas ļoti precīzi atgādina cilvēka krūts vēzi.
Attēlojams 4T1 modelis ļauj pētniekiem reāllaikā vizualizēt audzēja izaugsmi un metastāzes, atvieglojot pētījumus par kaulu metastāzēm, 4T1 audzēju apjomu un tādu ārstēšanas metožu kā cisplatīna efektivitāti.
Vēža imūnterapija vēršas pret metastāžu nišām, pastiprinot imūnsistēmas spēju cīnīties pret vēža šūnām, bieži vien to lietojot kopā ar citām ārstēšanas metodēm, piemēram, cisplatīnu, lai uzlabotu kopējo efektivitāti.
Firefly luciferāze tiek izmantota 4T1 šūnu transformācijā, lai novērotu audzēja augšanu un metastāžu fenotipu, tādējādi pētniekiem nodrošinot spēcīgu instrumentu vēža progresēšanas un terapeitisko pasākumu izpētei.
Atsauces
- Pulaski, B.A. un S. Ostrand-Rosenberg, Peles 4T1 krūts audzēja modelis. Curr Protoc Immunol, 2001. 20. nodaļa: 20.2. vienība.
- Maxwell, K.G., Krūts vēža šūnu imūnmodulācija vispārējai audzēja vakcinācijai. 2016.
- Walker, I. u.c., Piena dziedzeru audzēji izraisa centrālo proinflamatoro citokīnu ekspresiju, bet ne uzvedības traucējumus Balb/C pelēm. Scientific Reports, 2017. 7(1): 1.–13. lpp.
- Li, Y., et al., Stat3 signālceļa inhibīcija ar dabisko produktu pektolinarigenīnu vājinā krūts vēža metastāzes. Frontiers in Pharmacology, 2019. 10: 1195. lpp.
- Farshchi, H.K., et al., Dzelzs nanodaļiņu zaļā sintēze ar rozmarīna ekstraktu un citotoksicitātes ietekmes novērtējums uz vēža šūnu līnijām. Biocatalysis and agricultural biotechnology, 2018. 16: 54.–62. lpp.
- Gholizadeh, A.P., et al., Ingvera ekstrakta ietekme uz 4T1 krūts vēža šūnu līniju Balb/c pelēm. Clinical Cancer Drugs, 2021. 8(1): 43.–49. lpp.