Neuro-2a šūnu līnija
Neuro-2a ir no pelēm iegūta neironu šūnu līnija, ko plaši izmanto neirozinātnes pētījumos. Galvenokārt šīs šūnas izmanto neironu attīstības, diferenciācijas, neirotoksicitātes, šūnu signālceļu un aksonu augšanas pētīšanai. Turklāt tās izmanto zāļu izstrādei un skrīningam.
Šis raksts ir veltīts svarīgiem aspektiem par Neuro-2a neiroblastomas šūnām, kas varētu palīdzēt jums, pirms sākat darbu ar tām. Tajā galvenokārt tiks aplūkoti:
- Neuro-2a šūnu vispārīgās īpašības un izcelsmi
- Informāciju par Neuro-2a šūnu līnijas kultivēšanu
- Neuro-2a šūnu līnijas priekšrocības un trūkumi
- Neuro-2a šūnu līnijas izmantošanu pētniecībā
- Zinātniskās publikācijas, kurās aprakstītas Neuro-2a šūnas
- Resursi par Neuro-2a šūnām: protokoli, video un citi materiāli
Neuro-2a šūnu vispārīgās īpašības un izcelsme
Šajā raksta daļā tiks aplūkota Neuro-2a šūnu līnijas vēsture un pamatīpašības, kas ir būtiski jāzina, pirms sākt darbu ar to. Šeit jūs uzzināsiet: Kas ir Neuro-2a šūnu līnija? Kāda ir Neuro-2a šūnu līnijas izcelsme? Kas ir Neuro-2a šūnu diferenciācija? Kāds ir Neuro-2a šūnas izmērs? Kāda ir Neuro-2a šūnu morfoloģija?
- Neuro-2a šūnas cēlušās no albīna peles (A šķirne) spontāna audzēja (neiroblastomas). Šo šūnu līniju izveidoja R.J. Klebe un F.H. Ruddle.
- Neuro-2a neiroblastomas šūnas uzrāda gan neironu, gan ameboīdu cilmes šūnu morfoloģiju.
- Neuro-2a šūnu augstums ir 12 mikrometri [1].
- Neuro-2a šūnu hromosomu skaits var svārstīties no 59 līdz 193, ar modālo skaitli 95. Šo neiroblastomas šūnu kariotips ir nestabils diapazonā no 94 līdz 98 hromosomām.
Informācija par Neuro-2a šūnu līnijas kultivēšanu
Neuro-2a šūnas tiek plaši izmantotas neirozinātnes pētniecības laboratorijās. Pirms sākat darbu ar šīm šūnām, jums jāiepazīstas ar zemāk minēto obligāto informāciju par šūnu kultivēšanu. Tas var palīdzēt jums vieglāk tikt galā ar šo uzdevumu. Jūs uzzināsiet: Kas ir Neuro-2a šūnu kultivēšanas barotne? Kā kultivēt Neuro-2a šūnas? Kāds ir Neuro-2a šūnu dubultošanās laiks? Kāda ir Neuro-2a sēšanas blīvums? Kāds ir Neuro-2a šūnu kultivēšanas protokols? Kāds ir Neuro-2a šūnu barotne?
Galvenie punkti Neuro-2a šūnu kultivēšanā
Dubultošanās laiks:
Neuro-2a šūnu dubultošanās laiks ir aptuveni 70 stundas.
Adherenta vai suspensijā:
Neuro-2a ir adhezīva šūnu līnija.
Sēšanas blīvums:
Optimizētais šūnu sēšanas blīvums Neuro-2a šūnu līnijai ir 1 x 104 šūnas/cm2. Pirms sēšanas šūnas mazgā ar magnija un kalcija nesaturošu fosfāta buferšķīdumu (1x). Pēc tam pievieno pasāžēšanas šķīdumu (Accutase) un šūnas inkubē 8–10 minūtes istabas temperatūrā. Pēc šūnu disociācijas pievieno svaigu barotni un šūnas centrifugē. Savāktos šūnu nogulsnes uzmanīgi atkārtoti suspendē un šūnas ielej kultivēšanas traukā augšanai.
Augšanas barotne:
Neuro-2a šūnu kultivēšanai izmanto EMEM. Tajā ir 10 % FBS, 2 mM L-glutamīns, 1,5 g/l NaHCO₃, EBSS, 1 mM nātrija piruvāts un NEAA, kas nodrošina ideālu šūnu augšanu. Barotni jāmaina 1–2 reizes nedēļā.
Augšanas apstākļi:
Neuro-2a kultūras tiek uzturētas 37 °C mitrinātā inkubatorā, kas pieslēgts 5 % CO₂ padevei.
Uzglabāšana:
Šūnas ilgtermiņā jāuzglabā temperatūrā zem -150 °C ultra-zemas temperatūras elektriskajā saldētavā vai šķidrā slāpekļa tvaika fāzē.
Sasaldēšanas process un barotne:
Neuro-2a šūnu sasaldēšanai izmanto CM-1 vai CM-ACF barotnes. Šūnas sasaldē, izmantojot lēnu sasaldēšanas procesu, kas ļauj temperatūrai pazemināties tikai par 1 °C minūtē. Tas pasargā šūnas no šoka un saglabā to dzīvotspēju.
Atkausēšanas process:
Lai atkausētu sasaldētās kultūras, flakonu 40–60 sekundes ievieto 37 °C ūdens vannā, līdz paliek tikai neliels ledus gabals. Pēc tam pievieno kultūras barotni, un šūnas tiek centrifugētas. Šis solis palīdz atbrīvoties no sasaldēšanas barotnes sastāvdaļām. Pēc tam šūnu nogulsnes tiek atkārtoti suspendētas, un šūnas pārnes uz jaunu kolbu, kas piepildīta ar kultūras barotni. Pēc tam šūnas vismaz uz 24 stundām ievieto inkubatorā 37 °C temperatūrā.
Bioloģiskās drošības līmenis:
Neuro-2a kultūru apstrādei un uzturēšanai obligāti ir nepieciešama 1. bioloģiskās drošības līmeņa laboratorija.
- Neuro-2a šūnu līnijas priekšrocības un trūkumi
- Neuro-2a šūnu līnijas izmantošana pētniecībā
- Informācija par Neuro-2a šūnu līnijas kultivēšanu
- Neuro-2a šūnu vispārējās īpašības un izcelsme
- 5. Zinātniskās publikācijas par Neuro-2a šūnām
- Resursi par Neuro-2a šūnām: protokoli, video un cits
- Bieži uzdotie jautājumi
Neuro-2a šūnu līnijas priekšrocības un trūkumi
Neuro-2a šūnām ir dažas priekšrocības un trūkumi, kas tās atšķir no citām neironu šūnu līnijām. Šeit ir uzskaitītas dažas nozīmīgākās šo šūnu priekšrocības un trūkumi.
Priekšrocības
Neuro-2a peles neiroblastomas šūnu līnijas priekšrocības ir šādas:
-
Viegli uzturamas:
Neuro-2a šūnu līnija nav saistīta ar sarežģītām vai komplicētām šūnu kultivēšanas procedūrām. Tās ir viegli kultivēt un uzturēt pētniecības laboratorijās.
-
In vitro neironu šūnu modelis:
Neuro-2a ir ērts neironu šūnu modelis, ko pētnieki plaši izmanto neironu attīstības un diferenciācijas pētījumos.
Trūkumi
Neuro-2a šūnu trūkumi ir šādi:
-
Peles izcelsme:
Neuro-2a ir peles izcelsmes, un pētniekiem jāievēro piesardzība, ekstrapolējot rezultātus no pētījumiem ar pelēm uz cilvēku veselību un slimībām, jo peles un cilvēka bioloģija var būtiski atšķirties.
Neuro-2a šūnu līnijas izmantošana pētniecībā
Neuro-2a šūnas piedāvā daudzus pielietojumus neirozinātnes pētniecības jomā. Šeit tiek apspriesti daži daudzsološi šīs šūnu līnijas pielietojumi:
- Neironu attīstība: Neuro-2a ir in vitro neironu šūnu modelis, ko plaši izmanto neironu attīstības un ar to saistītu procesu, piemēram, diferenciācijas, aksonu augšanas un sinapšu veidošanās, pētīšanai. 2020. gadā veiktajā pētījumā tika izmantotas Neuro-2a šūnas, lai izpētītu mikroRNA-124 lomu retinoīnskābes inducētā neironu šūnu diferenciācijā [2]. Citā pētījumā tika izpētīta Neuro-2a retinoīnskābes receptora gamma (RARG) un miRNA-124 ekspresija neiroblastomas šūnu līnijā (N2A). Šajā pētījumā tika izvirzīts pieņēmums, ka miR-124 iedarbojas uz RARG un nomāc neirītu izaugšanu [3].
- Neirotoksicitāte: „Neuro-2a” šūnas izmanto arī, lai novērtētu zāļu, ķīmisko vielu vai vides faktoru toksisko ietekmi uz neironu šūnām. Piemēram, pētījumā, ko veica Zhihong Yin un kolēģi, izmantojot Neuro-2a šūnas, tika pētīta vides ķīmiskās vielas bisfenola A (BPA) neirotoksicitāte. Tika novērots, ka BPA nomāc neironu šūnu diferenciāciju un proliferāciju, traucējot to šūnu un sinaptisko integritāti [4].
- Zāļu skrīnings: Neuro-2a šūnas izmanto arī, lai novērtētu vairāku zāļu, savienojumu un dabas produktu terapeitisko iedarbību. Piemēram, vienā pētījumā, izmantojot Neuro-2a šūnas, tika pētīts Ginkgo biloba augu ekstrakta antioksidatīvais potenciāls. Turklāt pētījumā tika izvirzīts pieņēmums, ka tas samazina Aβ agregāciju un var būt potenciāls Alcheimera slimības ārstēšanas līdzeklis [5].
5. Zinātniskie raksti, kuros aprakstītas Neuro-2a šūnas
Šeit ir daži interesanti pētnieciskie raksti, kuros aprakstīta Neuro-2a šūnu līnija.
Šajā 2018. gadā žurnālā „Journal of Natural Medicines” publicētajā pētījumā tika izpētīta no baltā pipara (P. nigrum) izdalīto alkamīdu terapeitiskā iedarbība uz Neuro-2a neironu šūnām.
Šajā pētījumā, kas 2020. gadā publicēts žurnālā „Acta Biochimica et Biophysica Sinica”, tika izvirzīts pieņēmums, ka Nkx2.1 gēns spēlē svarīgu lomu peles smadzeņu attīstībā, regulējot Shh signālkaskādi.
Šis raksts tika publicēts žurnālā „Toxicology and Industrial Health“ (2023) un tajā tika izvirzīts pieņēmums, ka vides ķīmiskā viela bisfenols A izraisa neirotoksicitāti „Neuro-2a“ šūnās un traucē to sinaptisko un citoskeleta darbību.
Šajā rakstā, kas publicēts žurnālā „Pharmaceuticals“ (2021), tiek izvirzīts pieņēmums, ka zāles heksarelīns modulē PI3K/AKT un MAPK kaskādi neiroblastomas šūnās (Neuro-2a) un inhibē ūdeņraža peroksīda izraisīto Neuro-2a šūnu apoptozi.
Šajā pētījumā, kas publicēts žurnālā „Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine“ (2021), tiek izvirzīts pieņēmums, ka Emblica officinalis augļu ekstrakts nomāc neiroiekaisumu Neuro-2a šūnās un tādējādi var būt noderīgs neiroiekaisuma slimību ārstēšanā.
Resursi par Neuro-2a šūnām: protokoli, video un citi materiāli
Tālāk ir uzskaitīti tiešsaistes resursi par Neuro-2a šūnām. Tie ietver Neuro-2a šūnu kultūras un transfekcijas protokolu.
- Neuro-2a transfekcijas protokols: Neuro-2a ir piemērots transfekcijas saimnieks. Šī saite sniegs norādījumus par šīs šūnu līnijas transfekcijas protokolu. Neuro-2a transfekcijas efektivitāte atšķiras atkarībā no reaģenta.
Šajā saitē ir atrodams Neuro-2a šūnu kultivēšanas protokols.
- Neuro-2a šūnu kultivēšanas protokols: Šī saite palīdzēs jums iepazīties ar Neuro-2a šūnu subkultivēšanas protokolu.
- Neuro-2a šūnas: Šajā tīmekļa vietnē ir sniegta vispusīga informācija par Neuro-2a šūnu barotnēm, sēšanas blīvumu, kā arī par subkultivēšanas un krioprezervētu un proliferatīvu kultūru apstrādes protokoliem.
Atsauces
- Lulevich, V., et al., Vienšūnu mehānika nodrošina jutīgu un kvantitatīvu metodi amiloīda-beta peptīda un neironu šūnu mijiedarbības izpētei. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): 13872–7. lpp.
- You, Q., et al., miR-124 loma retinoīnskābes inducētās Neuro-2A šūnu diferenciācijas regulācijā. Neural Regen Res, 2020. 15(6): 1133.–1139. lpp.
- Su, X., et al., MikroRNA-124 iedarbojas uz retinoīnskābes receptoru gamma un inhibē neirītu izaugsmi. Neuropharmacology, 2020. 163: 107657. lpp.
- Yin, Z., et al., Bisfenola-A iedarbība izraisa neirotoksicitāti, kas saistīta ar sinapsēm un citoskeletu Neuro-2A šūnās. Toxicology in Vitro, 2020. 67: 104911. lpp.
- Chen, L., et al., Ginkgo biloba ekstrakts (EGb) nomāc oksidatīvo stresu Neuro-2A šūnās, kurās notiek APPsw pārmērīga ekspresija. BioMed Research International, 2019. 2019.