Tūris: 100 ml
Laikymo sąlygos: ≤ –15 °C
Sterilumas: Sterilus filtruotas
Stabilus glutamino tirpalas (L-alanil-L-glutaminas, 200 mM) yra labai stabili L-glutamino dipeptido forma, sukurta kaip tiesioginis tradicinio L-glutamino pakaitalas ląstelių kultūros terpėse. L-glutaminas yra būtina amino rūgštis ir pagrindinis energijos šaltinis kultivuojamoms ląstelėms, atliekantis svarbų vaidmenį ląstelių augime, metabolizme ir baltymų sintezėje.
Pritaikymas ir privalumai
Standartinėse skystosiose terpėse L-glutaminas 37 °C temperatūroje gana greitai suyra, dėl to susidaro toksiški šalutiniai produktai, pvz., amonio jonai, kurie gali neigiamai paveikti ląstelių gyvybingumą ir eksperimentų rezultatus. Stabilus glutaminas pašalina šį trūkumą, nes yra nesuyrantis dipeptidas, kuris išlieka nepakitęs kultūrinėse sąlygose.
Ląstelės fermentiniu būdu skaido dipeptidą, kad išlaisvintų L-glutaminą pagal poreikį, užtikrindamos nuolatinį šviežio tiekimą ir tuo pačiu užkertant kelią kenksmingų atliekų kaupimuisi. Tai daro šį tirpalą ypač naudingu ilgalaikiam ląstelių kultivavimui ir didelio tankio auginimo sistemoms.
Sudėtis ir naudojimas
L-alanil-L-glutamino tirpalas ruošiamas ląstelių kultūrai tinkamu vandeniu 200 mM koncentracijos ir yra steriliškai filtruojamas, kad būtų tinkamas naudoti jautrioms užteršimui aplinkoms. Jis gali būti tiesiogiai skiestas į visą terpę pagal eksperimentinius reikalavimus. Laikyti ≤ –15 °C temperatūroje ir vengti pakartotinių užšaldymo-atšildymo ciklų, kad būtų išlaikytas produkto stabilumas.
Tik moksliniams tyrimams. Nenaudoti diagnostinėms ar terapinėms procedūroms. Nenaudoti žmonėms ar gyvūnams.
Tūris: 100 ml
Laikymo sąlygos: nuo +2 °C iki +8 °C
Sterilumas: sterilus, filtruotas
HEPES buferinis tirpalas (1 M), taip pat žinomas kaip N-2-hidroksietilpiperazinas-N-2-etansulfonrūgštis, yra dvigubai joninis organinis buferinis agentas, plačiai naudojamas ląstelių kultūros terpėse. Jis skirtas palaikyti stabilias pH sąlygas fiziologiniame intervale nuo 6,7 iki 8,6, užtikrinant optimalų ląstelių funkcionavimą in vitro taikymuose.
Pritaikymas ir privalumai
HEPES užtikrina patikimą buferinį pajėgumą ląstelių kultūros sistemose, ypač kai ląstelės yra tvarkomos ne CO₂ inkubatoriuje. 10–25 mM HEPES pridėjimas į kultūros terpę užtikrina didesnį pH stabilumą ilgesnio tvarkymo laikotarpio metu, padėdamas išlaikyti pastovias eksperimentines sąlygas.
Šis buferis yra nepralaidus membranai, minimaliai trukdo biocheminėms reakcijoms ir pasižymi stipriu cheminiu ir fermentiniu stabilumu. Dėl šių savybių jis tinka plačiam ląstelių kultūros ir biocheminių taikymų spektrui.
Sudėtis ir naudojimas
Tirpalas tiekiamas kaip 1 M koncentratas, paruoštas ląstelių kultūrai tinkamu vandeniu ir steriliu filtruotu, kad būtų galima naudoti aplinkoje, jautrioje užteršimui. Jis gali būti skiestas iki norimos darbo koncentracijos, priklausomai nuo taikymo reikalavimų. Laikyti +2 °C iki +8 °C temperatūroje ir tvarkyti aseptinėmis sąlygomis, kad būtų išsaugotas produkto vientisumas.
Tik moksliniams tyrimams. Nenaudoti diagnostinėms ar terapinėms procedūroms. Nenaudoti žmonėms ar gyvūnams.
Tūris: 50 ml
Laikymo sąlygos: nuo +2 °C iki +8 °C
Sterilumas: sterilus, filtruotas
D-(+)-gliukozės tirpalas (dekstrozės tirpalas) yra sterilus, paruoštas vartoti papildas, kurio sudėtyje yra natūraliai randamas cukrus D-(+)-gliukozė, pagrindinis ląstelių metabolizmo komponentas. Gliukozė dalyvauja svarbiuose biologiniuose procesuose, pvz., energijos gamyboje, glikozilinime ir glikanų, kurie prisideda prie ląstelių struktūros ir funkcionavimo, formavimosi.
Pritaikymas ir nauda
Šis gliukozės tirpalas plačiai naudojamas kaip priedas ląstelių kultūros terpėse ir daugelyje ląstelių ir molekulinės biologijos taikymų. Kaip pagrindinis anglies ir energijos šaltinis, gliukozė palaiko ląstelių augimą, proliferaciją ir metabolinę veiklą. Jos dalyvavimas biosintezės procesuose taip pat daro ją labai svarbią normalios ląstelių fiziologijos ir eksperimentų nuoseklumo palaikymui.
Sudėtis ir naudojimas
Tirpalas tiekiamas didelės koncentracijos – 250 g/l gliukozės, todėl jį galima lanksčiai skiesti kultūrinėse terpėse pagal eksperimentinius reikalavimus. Jis yra sterilus, filtruotas, kad būtų tinkamas naudoti jautriose užteršimui aplikacijose. Laikyti +2 °C iki +8 °C temperatūroje ir tvarkyti aseptiškai, kad būtų išlaikyta produkto kokybė ir stabilumas.
Tik moksliniams tyrimams. Nenaudoti diagnostinėms ar terapinėms procedūroms. Nenaudoti žmonėms ar gyvūnams.
Tūris: 10 ml
Laikymas: nuo +2 °C iki +8 °C
Sterilumas: Steriliai filtruotas
Insulino-transferino-seleno (ITS) tirpalas (100x) yra chemiškai apibrėžtas priedas, skirtas plačiam ląstelių kultūrų taikymų spektrui. Dažniausiai jis naudojamas kaip priedas bazinėms ląstelių kultūrų terpėms, siekiant palaikyti ląstelių augimą sumažinto serumo arba be serumo sąlygomis.
Pritaikymas ir privalumai
Mūsų ITS priedas suteikia esminius komponentus, reikalingus optimaliam serumo neturinčių terpių veikimui. Papildant įprastas maistines terpes ITS, galima žymiai sumažinti veršelių serumo (FBS) poreikį daugelio ląstelių linijų įprastiniam palaikymui. Tai padeda sumažinti su serumo naudojimu susijusius svyravimus, tuo pačiu išlaikant nuoseklų ląstelių augimą ir gyvybingumą.
Insulinas palaiko ląstelių įsisavinimą ir pagrindinių maistinių medžiagų metabolizmą, transferinas palengvina geležies transportavimą, o selenas prisideda prie antioksidacinės apsaugos ir fermentinės veiklos. Kartu šie komponentai skatina subalansuotą ląstelių metabolizmą ir pagerina atkuriamumą apibrėžtose kultūrinėse sistemose.
Sudėtis ir naudojimas
Insulinas-transferinas-selenas (ITS) tiekiamas kaip 100 kartų koncentruotas tirpalas Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) be fenolio raudonojo. Standartiniam naudojimui praskiesti 1:100 atitinkamoje bazinėje terpėje, kad būtų pasiekta rekomenduojama darbinė koncentracija. Laikyti +2°C iki +8°C temperatūroje ir tvarkyti aseptinėmis sąlygomis, siekiant išlaikyti produkto stabilumą ir sterilumą.
Skirta tik moksliniams tyrimams. Nenaudoti diagnostinėse ar terapinėse procedūrose. Nenaudoti žmonėms ar gyvūnams.
Tūris: 5 ml
Laikymas: nuo +2 °C iki +8 °C
Sterilumas: filtruotas
Žmogaus rekombinantinio insulino tirpalas yra chemiškai apibrėžtas priedas, dažniausiai naudojamas žinduolių ląstelių linijų, įskaitant kinų žiurkėno kiaušidžių (CHO) ląsteles, kultivavimui. Šis ląstelių kultūrai skirtas tirpalas yra sudarytas iš Saccharomyces cerevisiae išreikšto rekombinantinio žmogaus insulino, užtikrinančio aukštą grynumą ir pastovų veikimą moksliniuose tyrimuose.
Pritaikymas ir privalumai
Insulinas paprastai dedamas į serumo neturinčias ir chemiškai apibrėžtas terpes, siekiant skatinti ląstelių augimą ir produktyvumą. Kaip pagrindinis reguliuojantis hormonas, insulinas palaiko gliukozės, amino rūgščių ir riebalų rūgščių įsisavinimą, panaudojimą ir kaupimą ląstelėse. Jis taip pat slopina glikogeno, baltymų ir lipidų skilimą, taip prisidėdamas prie geresnio ląstelių gyvybingumo ir metabolinio stabilumo kultūrinėse sistemose. Chemiškai apibrėžta formulė užtikrina atkuriamumą ir sumažina jautrių ląstelių kultūros procesų kintamumą.
Biologinės savybės ir naudojimas
Insulinas yra dvigrandis polipeptidinis hormonas, natūraliai gaminamas kasos salelių β-ląstelėse. Jo molekulinė masė yra apie 5 800 Da. α
- ir β-grandinės sujungtos dviem tarpgrandinėmis disulfidinėmis jungtimis, o α-grandinėje yra viena intragrandinė disulfidinė jungtis. Naudojant ląstelių kultūroms, tirpalą reikia tvarkyti aseptinėmis sąlygomis ir laikyti +2 °C iki +8 °C temperatūroje, kad būtų išlaikytas stabilumas ir veiksmingumas.
Skirta tik moksliniams tyrimams. Nenaudoti diagnostikos ar terapijos procedūrose. Nenaudoti žmonėms ar gyvūnams.
Tūris: 100 ml
Laikymo temperatūra: nuo +2 °C iki +8 °C
Sterilumas: sterilus, filtruotas
Natrio piruvato tirpalas (100 mM) yra sterilus, paruoštas naudoti papildas, skirtas papildomam, lengvai prieinamam energijos šaltiniui ląstelių kultūros terpėje. Natrio piruvatas atlieka svarbų vaidmenį ląstelių energijos apykaitoje ir palaiko metaboliniu požiūriu aktyvių ir greitai besidauginančių ląstelių, pvz., naviko ląstelių, augimą. Papildas gali padidinti ląstelių gyvybingumą ir padėti išlaikyti metabolinį stabilumą kultūros sistemose.
Pritaikymas ir privalumai
Šis tirpalas plačiai naudojamas įprastinėje ląstelių kultūroje, siekiant praturtinti terpę piruvatu ir sudaryti optimalias augimo sąlygas. Jis palaiko ATP gamybą, gali padėti sumažinti oksidacinį stresą ir prisideda prie kultivuojamų ląstelių metabolizmo veiklos gerinimo. Pagamintas iš ląstelių kultūrai tinkamo vandens ir steriliškai filtruotas, produktas užtikrina nuoseklią kokybę ir atkuriamumą mokslinių tyrimų darbo eigoje.
Naudojimas ir suderinamumas
Rekomenduojama galutinė koncentracija daugumai ląstelių kultūros taikymų yra 1 mM natrio piruvatas, gaunamas 100 mM tirpalo 1:100 atskiestu tirpalu į visą kultūros terpę. Tirpalas suderinamas su įvairiomis bazinėmis terpėmis ir žinduolių ląstelių linijomis. Laikyti +2°C iki +8°C temperatūroje ir apsaugoti nuo užteršimo, kad būtų išlaikytas produkto stabilumas.
Tik moksliniams tyrimams. Nenaudoti diagnostinėms ar terapinėms procedūroms. Nenaudoti žmonėms ar gyvūnams.
Tūris: 100 ml Laikymas: ≤-15°C Sterilumas: Sterilus filtras
Antibiotikų ir antimikotinių medžiagų tirpalas (100x ) yra sterilus, paruoštas naudoti koncentratas, skirtas sumažinti mikrobinio užteršimo riziką ląstelių kultūrose ir susijusiose laboratorijose. Šiame 100x tirpale yra gerai žinomas penicilino, streptomicino ir amfotericino B derinys, užtikrinantis plataus spektro antimikrobinį veikimą prieš gramteigiamas ir gramneigiamas bakterijas, mieles ir gijinius grybelius. Preparatas tinka naudoti eukariotinių ląstelių kultūrose, bakterijų terpėse ir kitose užterštumui jautriose sistemose, taip užtikrinant švarią ir nuoseklią laboratorinę veiklą.
Taikymas ir privalumai Šis tirpalas, optimizuotas įprastiniams mokslinių tyrimų protokolams, plačiai naudojamas aseptinėms sąlygoms palaikyti ląstelių kultūrų darbo procesuose. Jis užtikrina patikimą veikimą užterštumui jautriose aplinkose, padėdamas tyrėjams sumažinti mikrobų peraugimo riziką, nepakenkiant ląstelių sveikatai ar eksperimentų atkuriamumui. Dėl steriliai filtruotos sudėties nereikia atlikti papildomų tirpinimo etapų, todėl galima supaprastinti terpės paruošimą ir sumažinti kasdienių laboratorinių procedūrų kintamumą.
Naudojimas ir suderinamumas Norint pasiekti standartinę darbinę koncentraciją, praskieskite tirpalą santykiu 1:100 į visą kultūros terpę. Produktas suderinamas su daugeliu žinduolių ląstelių linijų ir bazinių terpių. Nuolat turėdami atsargų, mokslininkai gali naudotis patikimu tiekimo tęstinumu ir supaprastintu logistikos planavimu. Tirpalas turi būti laikomas ≤ -15 °C temperatūroje ir saugomas nuo pakartotinių užšaldymo-atšildymo ciklų, kad išliktų stabilus. Skirtas tik moksliniams tyrimams. Negalima naudoti diagnostinėms ar terapinėms procedūroms. Negalima naudoti žmonėms ar gyvūnams.
Tūris: 100 ml Laikymas: sterilumas: nuo +2°C iki +8°C: Sterilus filtras
MEM nepagrindinės aminorūgštys (100x ) yra sterilus priedas, skirtas ląstelių augimui ir gyvybingumui žinduolių ląstelių kultūrų sistemose didinti. Sudėtis atitinka 100 kartų koncentruotas nepagrindines aminorūgštis, esančias standartinėje minimalioje pagrindinėje terpėje (MEM), todėl galima tiesiogiai papildyti pagrindinę terpę, ją ruošiant minimaliai.
Taikymas ir nauda Šis papildas suteikia papildomą aminorūgščių rezervą greitai besidauginančioms ląstelėms arba ląstelių linijoms, praradusioms gebėjimą sintetinti nepakeičiamąsias aminorūgštis de novo. Sumažindamas biosintezės metabolinę naštą, jis padeda pagerinti augimo kinetiką, prailginti gyvybingumą ir užtikrinti didesnį eksperimentinį nuoseklumą, ypač jautriose maistinėms medžiagoms arba didelio tankio kultūrose.
Sudėtis ir naudojimas Tirpalo sudėtyje yra glicino, L-alanino, L-asparagino, L-asparagino rūgšties, L-glutamo rūgšties, L-prolino ir L-serino. Jis suderinamas su MEM ir dauguma kitų standartinių terpių. Norėdami naudoti, praskieskite 1:100 į galutinę terpę. Šis produktas yra steriliai filtruotas ir paruoštas naudoti be papildomų apdorojimo etapų. Skirtas naudoti tik moksliniams tyrimams. Negalima naudoti diagnostinėms ar terapinėms procedūroms. Negalima naudoti žmonėms ar gyvūnams.
„Accutase“ yra paruoštas naudoti, steriliai filtruotas ląstelių atskyrimo tirpalas, sukurtas kaip švelni alternatyva tripsinui/EDTA, skirtas adhezyvinių žinduolių ląstelių atskyrimui nuo standartinių audinių kultūros plastikinių indų ir adhezyviniu sluoksniu padengtų paviršių. Jis derina proteolitinį ir kolagenolitinį fermentų aktyvumą subalansuotame druskos tirpale, kad užtikrintų veiksmingą, tačiau kontroliuojamą atskyrimą, išsaugant ląstelių paviršiaus baltymus ir palaikant aukštą gyvybingumą po perėjimo bei greitą pakartotinį prisijungimą.
„Accutase“ sudėtis pagrįsta Dulbecco fosfato buferiniu tirpalu (DPBS) su EDTA ir fenolio raudonuoju kaip vizualiu pH indikatoriumi. Fermentai yra ne žinduolių ir ne bakterijų kilmės, todėl „Accutase“ ypač tinka kamieninių ląstelių tyrimams, vakcinų gamybos procesams ir bet kokiam naudojimui, kur reikia kuo labiau sumažinti gyvūninės ar mikrobiologinės kilmės teršalus. Tirpalas savaime slopina veiklą 37 °C temperatūroje, todėl po atskyrimo nereikia neutralizuojančio reagento ar serumo turinčios terpės – ląstelės gali būti perkeltos tiesiai į šviežią terpę.
Pagrindinės savybės
Paruoštas naudoti 1x steriliai filtruotas skystis – nereikia skiesti ar atskiesti
Kombinuotas proteolitinis ir kolagenolitinis fermentų aktyvumas švelniam atskyrimui
Kiekviena partija standartizuota pagal nustatytą atskyrimo aktyvumą, siekiant užtikrinti partijų nuoseklumą
Nežinduolių ir nebakterinės kilmės fermentai
Savaiminis slopinimas 37 °C temperatūroje – nereikia neutralizuojančio tirpalo
Sudėtyje yra Dulbecco PBS su EDTA
Fenolio raudonasis įtrauktas kaip vizualus pH indikatorius
pH 6,8–7,8
Tipiniai taikymo atvejai
„Accutase“ švelniai atskiria įvairius adhezyvinius ir jautrius ląstelių tipus, įskaitant žmogaus embrionines kamienines ląsteles (hESCs), žmogaus indukuotas pluripotentines kamienines ląsteles (iPSCs), nervines kamienines ląsteles, pirminius neuronus ir įprastai kultivuojamas adhezyvines ląstelių linijas, tokias kaip HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 ir A549. Tipiniai naudojimo atvejai:
Įprastinis prisitvirtinusių žinduolių ląstelių subkultūravimas ir perėjimas
Švelnus hESCs, iPSCs ir kitų jautrių linijų vienos ląstelės atskyrimas
Mėginių paruošimas srauto citometrijai ir FACS analizei
Ląstelių paviršiaus žymenų analizė, kai svarbus epitopo vientisumas
Ląstelių migracijos, proliferacijos ir apoptozės tyrimai
Ramybės tyrimai, atliekant serumo badą ir onkogenų transfekcijos tyrimus
Naviko ląstelių ir nervų kamieno ląstelių migracijos tyrimai
Gamybos masto didinimas bioreaktorių darbo srautais
Atliekant įprastinius darbus, užpilkite maždaug 10 ml „Accutase“ ant 75 cm2 kultūros paviršiaus ir inkubuokite 5–10 minučių kambario temperatūroje. Optimalus inkubacijos laikas turėtų būti nustatomas kiekvienai ląstelių linijai atskirai ir neturėtų viršyti vienos valandos. Prieš pridedant, nuplaukite ląstelių sluoksnį druskos tirpalu be Ca2+/Mg2+, pvz., DPBS be kalcio ir magnio, kad pašalintumėte serumo likučius ir dvivalenčius katijonus.
Naudojimas ir laikymas
Neatidarytą buteliuką laikykite užšaldytą -15 °C ar žemesnėje temperatūroje. Atšildykite kambario temperatūroje arba per naktį +2 °C – +8 °C temperatūroje. Neatšildykite „Accutase“ 37 °C vandens vonioje, nes aukšta temperatūra sumažina fermentų aktyvumą. Atšildžius tirpalą galima laikyti iki 2 mėnesių +2 °C – +8 °C temperatūroje; nelaikykite kambario temperatūroje. Prieš naudojimą nereikia iš anksto pašildyti reagento iki 37 °C – jį reikia tiesiogiai įpilti į nuplautas ląsteles kambario temperatūroje. Siekiant užtikrinti ilgą galiojimo laiką, rekomenduojama naudoti vienkartines alikvotas, kad būtų išvengta pakartotinių atšildymo ciklų. Visada dirbkite aseptinėmis sąlygomis.
Kokybė
Pagaminta laikantis griežtų kokybės standartų. Kiekviena „Accutase“ partija yra steriliškai filtruojama ir tikrinama dėl sterilumo, pH, išvaizdos ir disociacijos aktyvumo, siekiant užtikrinti nuoseklų, atkartojamą veikimą iš partijos į partiją.
Produkto specifikacijos
Specifikacija
Išsami
Produkto tipasLąstelių atskyrimo / disociacijos reagentas
FormatasSteriliai filtruotas skystis, paruoštas naudoti
Tūris100 ml
Darbinė koncentracija1x (paruoštas naudoti)
Fermentų aktyvumasKombinuotas proteolitinis ir kolagenolitinis
Fermentų kilmėNe iš žinduolių ir ne iš bakterijų
Buferinė sistemaDulbecco PBS su EDTA
pH indikatoriusFenolio raudonasis
pH diapazonas6,8 – 7,8
IšvaizdaSkaidrus, nuo šviesiai raudonos iki oranžinės spalvos tirpalas
Laikymo temperatūra-15 °C arba žemesnė
Stabilumas po atšildymoIki 2 mėnesių +2 °C iki +8 °C temperatūroje
Rekomenduojamas naudojimo tūris~10 ml 75 cm2 kultūros paviršiaus
Tipinis inkubacijos laikas5–10 minučių kambario temperatūroje
Pristatymo sąlygosUžšaldyta sausuoju ledu
PaskirtisTik moksliniams tyrimams ir tolesnei gamybai
Sudėtis (sudėtis viename litre)
Komponentas
Koncentracija (mg/l)
Neorganinės druskos
Natrio chloridas (NaCl)8000,00
Dinatrio hidrogenfosfatas (Na2HPO4)1150,00
Kalio chloridas (KCl)200,00
Kalio dihidrogeno fosfatas (KH2PO4)200,00
Kiti komponentai
EDTA · 4Na (tetranatrio EDTA)220,00
Fenolio raudonasis3,00
Patentuotas fermentų mišinys (proteolitinis ir kolagenolitinis aktyvumas)1x
„Accutase“ yra „Innovative Cell Technologies, Inc.“ registruotas prekės ženklas.
Ši paruošta naudoti, steriliu filtru filtruota skysta formulė yra papildyta Earle’s Balanced Salt Solution (EBSS), 2 mM L-glutaminu, D-gliukoze (1,0 g/l) ir 2,2 g/l natrio bikarbonatu (NaHCO3), todėl ji tinka naudoti CO2 kontroliuojamoje inkubatoriaus atmosferoje (paprastai 5 % CO2). Įtrauktas fenolio raudonasis veikia kaip pH indikatorius, leidžiantis patogiai vizualiai stebėti terpės būklę ląstelių kultūros metu.
Pagrindinės savybės
Klasikinė „Eagle’s MEM“ formulė su Earle’s Balanced Salt Solution (EBSS)
Sudėtyje yra 2 mM L-glutamino – paruošta nedelsiant naudoti
2,2 g/l natrio bikarbonato – buferizuota 5 % CO2 inkubacijai
Su D-gliukoze (1,0 g/l) kaip pagrindiniu anglies šaltiniu
Su fenolio raudonu kaip pH indikatoriumi
Be HEPES ir be natrio piruvato
Steriliai filtruota skysta terpė, paruošta naudoti
pH 7,0–7,6
Tipiniai pritaikymai
EMEM tinka įvairių žinduolių ląstelių linijų, įskaitant HeLa, HEK 293, Vero, MRC-5, L-929, BHK-21 ir daugelio pirminių ląstelių, kultivavimui. Dažniausiai naudojama:
Įprastinis adhezyvinių ląstelių linijų palaikymas ir dauginimas
Virusų dauginimo ir vakcinų gamybos procesai
Citotoksiškumo ir biologinių tyrimų taikymus
Transfekcijos ir baltymų ekspresijos tyrimai
Pagrindinius ląstelių biologijos ir molekulinės biologijos tyrimus
Siekiant užtikrinti optimalų ląstelių augimą, EMEM paprastai papildoma 5–10 % veršelių serumu (FBS) ir, priklausomai nuo ląstelių linijos, neesminėmis amino rūgštimis (NEAA) bei antibiotikais, pvz., penicilinu ir streptomicinu.
Naudojimas ir laikymas
Neatidarytą butelį laikykite +2 °C – +8 °C temperatūroje, apsaugotą nuo šviesos. Atidarius, naudokite aseptinėmis sąlygomis. Tirpale esantis L-glutaminas palaipsniui skaidosi – norint pasiekti geriausius rezultatus, rekomenduojame terpę sunaudoti per 4 savaites nuo atidarymo arba, jei ji buvo laikoma ilgiau, prieš naudojimą papildyti šviežiu L-glutaminu. Prieš įpilant į ląsteles, leiskite terpei sušilti iki 37 °C.
Kokybė
Pagaminta laikantis griežtų kokybės standartų. Kiekviena partija yra tikrinama dėl sterilumo, pH, osmolalumo ir endotoksinų lygio, siekiant užtikrinti pastovų veikimą ląstelių kultūrų taikymuose.
Produkto specifikacijos
Specifikacija
Išsami
Produkto tipasMEM
Produkto kategorijaLąstelių kultūros terpės
FormatasSkystis
SterilusTaip
Talpa500 ml
L-glutaminasSu L-glutaminu (2 mM)
GliukozėSu gliukoze (1,0 g/l)
Natrio bikarbonatasSu NaHCO3 (2,2 g/l)
HEPESBe HEPES
Natrio piruvatasBe natrio piruvato
Fenolio raudonasisSu fenolio raudonuoju
Druskos tirpalasEarle'io subalansuotas druskos tirpalas (EBSS)
pH7,0 – 7,6
Endotoksinų kiekisNenurodyta
Laikymas+2 °C iki +8 °C
Sudėtis (sudėtis viename litre)
Komponentas
Koncentracija (mg/l)
Neorganinės druskos
Kalcio chloridas · 2H2O265,00
Magnio sulfatas97,72
Kalio chloridas400,00
Natrio chloridas6 800,00
Natrio dihidrogeno fosfatas, bevandenis122,00
Natrio bikarbonatas (NaHCO3)2 200,00
Amino rūgštys
L-argininas · HCl126,00
L-cistinas · 2HCl31,30
L-glutaminas292,00
L-histidinas · HCl · H2O42,00
L-izoleucinas52,00
L-leucinas52,00
L-lizinas · HCl72,50
L-metioninas15,00
L-fenilalaninas32,00
L-treoninas48,00
L-triptofanas10,00
L-tirozinas · 2Na · 2H2O51,90
L-valinas46,00
Vitaminai
D-kalcio pantotenatas1,00
Cholino chloridas1,00
Folio rūgštis1,00
mio-inozitolis2,00
Nikotinamidas1,00
Piridoksalas · HCl1,00
Riboflavinas0,10
Tiaminas · HCl1,00
Kiti komponentai
D(+)-gliukozė1 000,00
Fenolio raudonasis10,00
Pagrindinės "Freeze Medium CM-1" savybės:
Platus suderinamumas: Veiksminga įvairių tipų ląstelėms, įskaitant pirmines ląsteles, kamienines ląsteles ir nustatytas ląstelių linijas.
Didelis gyvybingumas: Optimizuota taip, kad po atšildymo ląstelės kuo geriau atsistatytų ir taptų gyvybingos, užtikrinant patikimus eksperimentų rezultatus.
Paruošta naudoti: Patogiai paruoštos ir sterilizuotos, kad būtų galima iš karto naudoti, todėl sutrumpėja paruošimo laikas ir sumažėja užteršimo rizika.
Geresnis stabilumas: Išlaikomas pastovus veikimas standartinėmis kriokonservavimo sąlygomis, užtikrinant atkuriamus rezultatus.
Ilgas galiojimo laikas: CM-1 yra serumo turinti, paruošta naudoti kriokonservavimo terpė, kurią šaldytuve galima laikyti iki vienerių metų.
CM-1 naudojimas ląstelėms šaldyti
Norėdami naudoti CM-1 adherentinėms ir suspensijos ląstelėms užšaldyti, atlikite šiuos veiksmus
Jei ląstelės yra adherentinės, nuplaukite ir atskirkite jas nuo kultūros substrato. Jei tai yra suspensijos ląstelės, pereikite tiesiai prie kito veiksmo.
Suskaičiuokite ląsteles, kad įsitikintumėte, jog jos yra tinkamos koncentracijos.
Centrifuguokite ląsteles, kad jos subyrėtų, tada vėl ištirpinkite CM-1 užšaldymo terpėje.
Resuspenduotas ląsteles perkelkite į kriokameras.
Prieš perkeldami ląsteles į ilgalaikį saugojimą, naudokite lėto šaldymo metodą
Metodas
Aprašymas
Žingsniai
❄️
Rankinis užšaldymas
Žingsnis po žingsnio taikomas metodas, kai temperatūra palaipsniui mažinama, kad būtų užtikrintas ląstelių gyvybingumas
1️⃣ Įdėkite ląsteles į užšaldymo terpę ir 40 min. palaikykite 4 °C temperatūros šaldiklyje.
2️⃣ Perkelkite į -80 °C šaldiklį 24 valandoms.
3️⃣ Ilgalaikiam saugojimui ląsteles laikykite skystame azote
❄️
"Mr. Frosty" naudojimas
Patogus prietaisas, leidžiantis kontroliuoti užšaldymo greitį be elektros energijos
1️⃣ Paruoškite ląsteles kriokūnelėse su užšaldymo terpe.
2️⃣ Įdėkite kriovialus į "Mr. Frosty" konteinerį.
3️⃣ Prieš perkeliant į skystą azotą, 24 valandas laikykite -80 °C temperatūroje
❄️
Kontroliuojamo greičio šaldiklis
Labai tikslus "Thermo Fisher" ar kitų gamintojų šaldiklis, skirtas kontroliuojamam temperatūros sumažinimui
1️⃣ Užprogramuokite prietaisą taip, kad jis palaipsniui mažintų temperatūrą.
2️⃣ Į šaldiklį įdėkite paruoštas ląsteles.
3️⃣ Po šaldymo ciklo ląsteles perkelkite į skystą azotą
Laikykite kriokūnelius žemesnėje nei -130 °C temperatūroje arba skystame azote, kad būtų galima ilgai saugoti.
Sudėtis
Sudėtyje yra FBS, DMSO, gliukozės, druskų
Buferinė geba: pH = 7,2-7,6
"Cytion" užšaldymo terpė CM-1 yra patikimas kriokonservavimo sprendimas, užtikrinantis aukštą ląstelių gyvybingumą ir funkcionalumą po atšildymo įvairiems tyrimams.
- specializuotą "Ham's F-12" terpės modifikaciją, sukurtą atsižvelgiant į unikalius biologinių tyrimų reikalavimus. Ši patobulinta terpė pasižymi išskirtiniais privalumais, nes pagerina pirminių žmogaus hepatocitų, taip pat žiurkių ir vištų kepenų ląstelių kultivavimą, ypač esant sumažintam serumo kiekiui.
Ham's F-12K (Kaighn's) terpė yra kruopščiai sukurta siekiant optimizuoti ląstelių auginimo sąlygas. Jos sudėtis yra praturtinta, todėl joje yra padidintas pagrindinių komponentų, tokių kaip aminorūgštys ir natrio piruvatas, kiekis, taip pat papildomų elementų, įskaitant putresciną, timidiną, hipoksantiną ir cinką. Šie priedai leidžia tyrėjams papildyti terpę minimaliu serumo kiekiu arba tam tikrų ląstelių tipų komponentais, taip palengvinant tikslių eksperimentų sąlygas.
Pažymėtina, kad Ham's F-12K (Kaighn's) terpėje nėra baltymų ar augimo veiksnių. Todėl dažnai reikia papildyti augimo veiksniais ir galvijų vaisiaus serumu (FBS), todėl tyrėjai gali pritaikyti terpę pagal konkrečių ląstelių linijų reikalavimus. Siekiant optimalių rezultatų, FBS koncentracija turi būti kruopščiai optimizuota kiekvienai ląstelių linijai, kad būtų užtikrintas optimalus augimas ir funkcionalumas.
Siekiant palaikyti fiziologinį pH, Ham's F-12K (Kaighn's) terpėje naudojama natrio bikarbonato buferinė sistema (2,5 g/l), todėl auginimo metu būtina palaikyti kontroliuojamą 5-10 % CO2 aplinką. Tai užtikrina, kad terpės pH išliktų idealioje ląstelių augimui ir gyvybingumui ribose
Kokybės kontrolė
pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C temperatūroje.
Kiekviena partija buvo patikrinta dėl sterilumo ir mikoplazmos bei bakterijų nebuvimo.
Priežiūra
Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsoje. Užšaldymas ir pašildymas iki +37°C sumažina produkto kokybę.
Nešildykite terpės iki aukštesnės nei 37°C temperatūros ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių (pvz., mikrobangų krosnelės prietaisų).
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, išimkite šį kiekį iš buteliuko ir pašildykite jį kambario temperatūroje.
Bet kurios terpės, išskyrus pagrindinę terpę, galiojimo laikas yra 8 savaitės nuo pagaminimo datos.
Sudėtis
Sudedamosios dalys
mg/l
Neorganinės druskos
Kalcio chloridas x 2H2O
135,24
Vario(II) sulfatas x 5H2O
0,00
Geležies (II) sulfatas x 7H2O
0,83
Magnio chloridas x 6H2O
105,72
Magnio sulfatas x 7H2O
394,49
Kalio chloridas
283,29
Kalio dihidrogenfosfatas
58,52
Natrio chloridas
7597,20
dinatrio vandenilio fosfatasbevandenis
115,02
Cinko sulfatas x 7H2O
0,14
Kiti komponentai
D(+)-gliukozė, bevandenė
1260,00
Hipoksantinas
4,08
DL-α-lipoinė rūgštis
0,21
Raudonasis fenolis
3,00
Putrescinas x 2HCl
0,32
Natrio piruvatas
220,00
NaHCO3
2500,00
Timidinas
0,73
Amino rūgštys
L-alaninas
17,82
L-argininas x HCl
421,40
L-asparaginas x H2O
30,02
L-asparagino rūgštis
26,62
L-cisteinas x HCl x H2O
70,24
L-glutaminas
292,20
L-gliutamo rūgštis
29,42
Glicinas
15,01
L-histidinas x HCl x H2O
41,92
L-izoleucinas
7,87
L-leucinas
26,24
L-lizinas x HCl
73,04
L-metioninas
8,95
L-fenilalaninas
9,91
L-prolinas
69,06
L-serinas
21,02
L-treoninas
23,82
L-triptofanas
4,08
L-tirozinas
10,87
L-Valinas
23,42
Vitaminai
D(+)-biotinas
0,07
D-kalcio pantotenatas
0,48
Cholino chloridas
13,96
Folio rūgštis
1,32
mio-izitolis
18,02
Nikotinamidas
0,04
Piridoksinas x HCl
0,06
Riboflavinas
0,04
Tiaminas x HCl
0,34
Vitaminas B12
1,36
Fosfatu buferizuotas fiziologinis tirpalas (PBS) yra plačiai naudojamas buferinis tirpalas biologiniuose ir cheminiuose tyrimuose. Jis atlieka svarbų vaidmenį palaikant pH pusiausvyrą ir osmoliariškumą atliekant įvairias eksperimentines procedūras, įskaitant audinių apdorojimą ir ląstelių auginimą. Mūsų PBS tirpalas yra kruopščiai sukurtas iš didelio grynumo ingredientų, kad būtų užtikrintas kiekvieno eksperimento stabilumas ir patikimumas. Mūsų PBS tirpalo osmoliariškumas ir jonų koncentracija tiksliai atitinka žmogaus organizmo osmoliariškumą ir jonų koncentraciją, todėl jis yra izotoninis ir netoksiškas daugumai ląstelių.
Mūsų PBS tirpalo sudėtis
Mūsų PBS tirpalas yra pH sureguliuotas itin grynų fosfatinių buferių ir fiziologinių tirpalų mišinys. 1X darbinės koncentracijos tirpale yra:
8000 mg/l natrio chlorido (NaCl)
200 mg/l kalio chlorido (KCl)
1150 mg/l natrio fosfato dibazinio bevandenio (Na2HPO4)
200 mg/L Kalio fosfatas vienbazis bevandenis (KH2PO4)
Ši sudėtis užtikrina optimalią pH ir jonų pusiausvyrą, tinkančią įvairioms biologinėms reikmėms.
Mūsų PBS tirpalo taikymas
Mūsų PBS tirpalas idealiai tinka įvairioms biologinių tyrimų reikmėms. Dėl izotoninių ir netoksiškų savybių jis tinka medžiagoms skiesti ir ląstelių talpykloms skalauti. PBS tirpalai, kurių sudėtyje yra EDTA, efektyviai išlaisvina prisitvirtinusias ir susitelkusias ląsteles. Tačiau į PBS negalima dėti dvivalenčių metalų, pavyzdžiui, cinko, nes tai gali sukelti nuosėdų susidarymą. Tokiais atvejais rekomenduojama naudoti Good's buferius. Be to, mūsų PBS tirpalas yra priimtina alternatyva virusų transportavimo terpei RNR virusams, įskaitant SARS-CoV-2, transportuoti ir laikyti.
Kokybės kontrolė
Steriliai filtruotas
Laikymas ir galiojimo laikas
Laikyti nuo +2 °C iki +25 °C temperatūroje, saugoti nuo šviesos.
Atidarytą laikykite nuo 2 °C iki 25 °C temperatūroje ir sunaudokite per 24 mėnesius.
Gabenimo sąlygos
Aplinkos temperatūra
Priežiūra
Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsioje vietoje. Venkite užšaldymo ir dažno pašildymo iki +37°C, nes tai pablogina produkto kokybę.
Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37°C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pavyzdžiui, mikrobangų krosnelių.
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite iki kambario temperatūros.
Sudėtis
Kategorija
Sudedamosios dalys
Koncentracija (mg/l)
Druskos
Kalio chloridas
200
Kalio fosfatas monobazinis bevandenis
200
Natrio chloridas
8000
Natrio fosfatas dvibazis bevandenis
1150
Iš pradžių sukurta žmogaus leukeminėms ląstelėms auginti suspensinėse ir viensluoksnėse kultūrose, RPMI 1640 terpė, mokslininkams ir komerciniams tiekėjams ją modifikavus, tapo tinkama įvairioms žinduolių ląstelėms. Ji itin suderinama su tokiomis ląstelių linijomis kaip HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocitais ir karcinomomis.
RPMI 1640 terpė išsiskiria iš kitų ląstelių kultūrų terpių dėl savo unikalios sudėties. Joje yra daug fosfatų, aminorūgščių ir vitaminų. Ypač daug biotino, vitamino B12 ir PABA, kurių nėra Eagle's Minimal Essential Medium arba Dulbecco's Modified Eagle Medium. Be to, RPMI 1640 terpėje yra gerokai didesnė vitaminų inozitolio ir cholino koncentracija. Tačiau joje nėra baltymų, lipidų ir augimo veiksnių. Todėl norint sudaryti optimalias sąlygas ląstelėms augti, paprastai reikia papildyti 10 % galvijų vaisiaus serumo (FBS).
RPMI 1640 terpės buferinė sistema priklauso nuo natrio bikarbonato, o fiziologiškai tinkamam pH palaikyti būtina 5-10 % CO2 aplinka. Šią terpę iš kitų terpių dar labiau išskiria tai, kad joje yra redukuojamosios medžiagos glutationo.
Kokybės kontrolė
Steriliai filtruota
Laikymas ir galiojimo laikas
Laikyti nuo +2 °C iki +8 °C temperatūroje, saugoti nuo šviesos.
Atidarytą laikykite 4 °C temperatūroje ir sunaudokite per 6-8 savaites.
Gabenimo sąlygos
Aplinkos temperatūra
Priežiūra
Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsioje vietoje. Venkite užšaldymo ir dažno pašildymo iki +37°C, nes tai pablogina produkto kokybę.
Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37°C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pavyzdžiui, mikrobangų krosnelių.
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite iki kambario temperatūros.
Sudėtis
Kategorija
Sudedamosios dalys
Koncentracija (mg/l)
Aminorūgštys
Glicinas
10.00
L-alanil-L-gliutaminas
434.40
L-argininas
200.00
L-asparaginasH2O
56.82
L-asparagino rūgštis
20.00
L-cistinas 2HCl
65.20
L-gliutamo rūgštis
20.00
L-histidinas HClH2O
20.27
L-Hidroksi-L-Prolinas
20.00
L-izoleucinas
50.00
L-leucinas
50.00
L-lizinas HCl
40.00
L-metioninas
15.00
L-fenilalaninas
15.00
L-prolinas
20.00
L-serinas
30.00
L-treoninas
20.00
L-triptofanas
5.00
L-tirozinas 2Na 2H2O
28.83
L-Valinas
20.00
Vitaminai
p-amino benzenkarboksirūgštis
1.00
D-biotinas
0.20
Cholino chloridas
3.00
D-kalcio pantotenatas
0.25
Folio rūgštis
1.00
mio-izitolis
35.00
Nikotinamidas
1.00
Piridoksino HCl
1.00
Riboflavinas
0.20
Tiamino HCl
1.00
Vitaminas B12
0.005
Neorganinės druskos
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Kiti komponentai
D-gliukozė
2000.00
L-Glutationas redukuotas
1.00
Fenolio raudonojo natrio druska
5.30
Ši unikali formulė sujungia Dulbecco modifikuotą Eagle terpę (DMEM) ir Ham's F-12 (Ham's maistinių medžiagų mišinį F-12) tiksliu 1:1 santykiu. L-glutamino pridėjimas dar labiau pagerina jos sudėtį.
DMEM, kilusi iš Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), pasižymi didesne amino rūgščių ir vitaminų koncentracija, palyginti su savo pirmtake. Tuo tarpu Ham's F-12 yra pagrįsta Ham's F-10 terpe, suteikiančia papildomą būtinų komponentų rinkinį.
Siekiant palaikyti optimalų ląstelių augimą, įprasta DMEM:Ham's F12 papildyti FBS, kurio koncentracija paprastai yra 5–10 %. Šis priedas yra būtinas, nes terpėje trūksta augimo hormonų, lipidų ir baltymų, kurie yra svarbūs ląstelių vystymuisi.
DMEM:Ham's F12 sudėtyje yra pH buferinė sistema, o dažnai ji papildoma fenolio raudonuoju, kuris yra pH indikatorius. Ląstelės, auginamos DMEM:Ham's F12 arba bet kurioje terpėje, kurioje naudojama bikarbonato buferinė sistema, reikalauja kontroliuojamos 5–10 % CO2 aplinkos, kad būtų išlaikytas tinkamas pH lygis.
Kokybės kontrolė
Steriliškai filtruota
Laikymas ir galiojimo laikas
Laikyti +2 °C – +8 °C temperatūroje, apsaugotą nuo šviesos.
Atidarius, laikyti 4 °C temperatūroje ir sunaudoti per 6–8 savaites.
Pristatymo sąlygos
Aplinkos temperatūra
Laikymas
Laikyti šaldytuve +2 °C iki +8 °C temperatūroje, tamsioje vietoje. Venkite užšaldymo ir dažno šildymo iki +37 °C, nes tai sumažina produkto kokybę.
Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37 °C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pvz., mikrobangų krosnelių.
Jei ketinate naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite jį iki kambario temperatūros.
Sudėtis
Kategorija
Komponentai
Koncentracija (mg/l)
Amino rūgštys
Glicinas
18,75
L-alaninas
4,45
L-argininas HCl
147,50
L-asparaginas H₂O
7,50
L-asparto rūgštis
6,65
L-cisteinas HCl H₂O
17,56
L-cistinas 2 HCl
31,29
L-glutamo rūgštis
7,35
L-glutaminas
365,00
L-histidino HCl H₂O
31,48
L-izoleucinas
54,47
L-leucinas
59,05
L-lizinas HCl
91,25
L-metioninas
17,24
L-fenilalaninas
35,48
L-prolinas
17,25
L-serinas
26,25
L-treoninas
53,45
L-triptofanas
9,02
L-tirozinas 2 Na 2 H2O
55,79
L-valinas
52,85
Vitaminai
D-biotinas
0,0035
Cholino chloridas
8,98
D-kalcio pantotenatas
2,24
Folio rūgštis
2,66
mio-inozitolis
12,60
Nikotinamidas
2,02
Piridoksino HCl
0,031
Piridoksalo HCl
2,00
Riboflavinas
0,219
Tiamino HCl
2,17
Vitaminas B12
0,68
Neorganinės druskos
CaCl2 2 H2O
154,50
CuSO4 5 H2O
0,0013
Fe(NO3)3 9 H2O
0,05
FeSO4 7 H2O
0,417
KCl
311,80
MgCl2 6 H2O
61,20
MgSO4 7 H2O
100,00
NaCl
6996,00
NaHCO3
1200,00
Na2HPO4
71,02
NaH2PO4 2 H2O
70,87
ZnSO4 7 H2O
0,432
Kiti komponentai
D-gliukozė
3151,00
Hipoksantinas
2,40
HEPES
3574,50
Linolo rūgštis
0,042
Lipoinė rūgštis
0,105
Fenolio raudonojo natrio druska
8,63
Putrescinas 2 HCl
0,081
Natrio piruvatas
55,00
Timidinas
0,365
- 0,02 esant 20–25 °C temperatūrai. Kiekviena partija buvo patikrinta dėl sterilumo ir mikoplazmos bei bakterijų nebuvimo. Laikymas Laikyti šaldytuve +2 °C iki +8 °C temperatūroje, tamsioje vietoje. Užšaldymas ir atšildymas iki +37 °C sumažina produkto kokybę. Negalima kaitinti terpės iki aukštesnės nei 37 °C temperatūros arba naudoti nekontroliuojamų šilumos šaltinių (pvz., mikrobangų krosnelių). Jei ketinate naudoti tik dalį terpės, išimkite šį kiekį iš butelio ir pašildykite kambario temperatūroje. Visų terpių, išskyrus bazinę terpę, galiojimo laikas yra 6–8 savaitės nuo atidarymo dienos. Sudėtis Komponentai mg/L Neorganinės druskosKalcio chloridas x 2H2O132,0 Magnio sulfatas97 Kalio chloridas400 Natrio chloridas6 460 Dinatrio vandenilio fosfatas (bevandenis)504 Kiti komponentaiD(+)-gliukozė (bevandenė)3 000 Glutationas (redukuotas)0 Mėsos peptonas600 Fenolio raudonoji natrio druska11 Amino rūgštysL-alaninas13 L-argininas x HCl42,1 L-asparaginas x H2O45,03 L-asparto rūgštis19,9 L-cisteinas x HCl x H2O31,75 L-glutaminas (stabilus)219,15 L-glutamo rūgštis22,07 Glicinas7 L-histidinas x HCl x H2O20,96 L-hidroksiprolinas19,67 L-izoleucinas39,3 L-leucinas39,36 L-lizinas x HCl36,54 L-metioninas14,92 L-fenilalaninas16,52 L-prolinas17,27 L-serinas26,28 L-treoninas17,87 L-triptofanas3,06 L-tirozino dinatrio druska26,1 L-valinas17,57 Vitaminaip-Aminobenzoinė rūgštis1 Askorbo rūgštis0,56 D(+)-biotinas0 D-kalcio pantotenatas0 Cholino chloridas5 Folio rūgštis10 Mio-inozitol36 Nikotinamidas0 Nikotino rūgštis0 Piridoksalo HCl0,5 Piridoksino HCl0,5 Riboflavinas0 Tiamino HCl0 Vitaminas B122
199 terpė siūlo daugybę pritaikymo sričių. Ji gali veiksmingai palaikyti kumulusų ir aocitų kompleksą (COC) ir palaikyti oocitų brendimą in vitro. Be to, ji naudojama skalaujant aspiracines linijas renkant kiaušialąstes iš Vokietijos holšteinų veislės karvių. Be to, 199 terpė yra puiki terpė iš žiurkių gautoms širdies endotelio ląstelėms auginti. Šie taikymai rodo terpės 199 universalumą ir pritaikomumą įvairiems eksperimentiniams poreikiams.
Istorija
XX a. šeštajame dešimtmetyje sukūrus terpę Nr. 199, padaryta didelė pažanga audinių kultūrų terpių srityje. Iki šios terpės atsiradimo daugelyje kultūrų terpių buvo naudojami gyvūninės kilmės produktai ir audinių ekstraktai. Tačiau Morganas ir jo kolegos padarė revoliuciją šioje srityje, sukurdami visiškai apibrėžtą mitybos šaltinį ląstelių kultūroms. Atlikdami eksperimentus su įvairiais vitaminų, aminorūgščių ir kitų veiksnių deriniais, jie atrado išskirtines augimą skatinančias 199 terpės savybes.
Kokybės kontrolė
pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C temperatūroje.
Kiekviena partija buvo patikrinta dėl sterilumo ir mikoplazmos bei bakterijų nebuvimo.
Priežiūra
Laikykite šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsoje. Užšaldymas ir pašildymas iki +37 °C sumažina produkto kokybę.
Nešildykite terpės iki aukštesnės nei 37° C temperatūros ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių (pvz., mikrobangų krosnelės prietaisų).
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, išimkite šį kiekį iš buteliuko ir pašildykite jį kambario temperatūroje.
Bet kurios terpės, išskyrus pagrindinę terpę, galiojimo laikas yra 8 savaitės nuo pagaminimo datos.
Sudėtis
Sudedamosios dalys
mg/l
Neorganinės druskos
Kalcio chloridas x 2H2O
264,92
Geležies (III) nitratas x 9H2O
0,72
Magnio sulfatas
97,67
Kalio chloridas
400,00
Natrio acetatas x 3H2O
82,95
Natrio chloridas
6,800.00
Natrio dihidrogenfosfatas x H2O
140,00
Kiti komponentai
Adenino sulfatas
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Cholesterolis
0,20
2'-deoksiribozė
0,50
D(+)-gliukozė bevandenė
1,000.00
Glutationas (raudonas)
0,05
Guaninas x HCl
0,30
Hipoksantinas
0,30
Raudonasis fenolis
10,00
D-ribozė
0,50
Timinas
0,30
Tween 80
4,90
Uracilas
0,30
Ksantinas
0,30
NaHCO3
2,200.00
Amino rūgštys
L-alaninas
25,00
L-argininas x HCl
70,00
L-asparto rūgštis
30,00
L-cisteinas x HCl x H2O
0,10
L-cistinas
20,00
L-Glutaminas stabilus
149,00
L-gliutamo rūgštis
67,00
Glicinas
50,00
L-histidinas x HCl x H2O
21,88
L-hidroksiprolinas
10,00
L-izoleucinas
20,00
L-leucinas
60,00
L-lizinas x HCl
70,00
L-metioninas
15,00
L-fenilalaninas
25,00
L-prolinas
40,00
L-serinas
25,00
L-treoninas
30,00
L-triptofanas
10,00
L-tirozinas
40,00
L-Valinas
25,00
Vitaminai
4-amino benzenkarboksirūgštis
0,05
Askorbo rūgštis
0,05
D(+)-biotinas
0,01
Kalciferolis
0,10
D-kalcio pantotenatas
0,01
Cholino chloridas
0,50
Folio rūgštis
0,01
mio-izitolis
0,05
Menadionas
0,01
Nikotino rūgštis
0.025
Nikotinamidas
0.025
Piridoksalio x HCl
0.025
Piridoksolis x HCl
0.025
Riboflavinas
0,01
DL-α-tokoferolio fosfato dinatrio druska
0,01
Tiaminas x HCl
0,01
Vitamino A acetatas
0,14
IMDM gerai tinka greitai besidauginančioms, didelio tankio ląstelių kultūroms, įskaitant Jurkat, COS-7 ir makrofagų ląsteles. Įvairias IMDM modifikacijas, skirtas įvairioms ląstelių kultūrų reikmėms, galite rasti naudodamiesi terpių pasirinkimo įrankiu. Skystosios terpės suteikia svarbiausių maistinių medžiagų visoms ląstelių kultūrų naudojimo sritims. Kiekviena mūsų aukštos kokybės ląstelių kultūrų terpė gaminama pagal iš pradžių paskelbtą formulę arba jos modifikacijas, būtinas nuosekliam kultūros terpės veikimui ir stabilumui užtikrinti.
IMDM ir DMEM
IMDM sudėtyje yra kalio nitrato vietoj geležies nitrato ir HEPES bei natrio piruvato. Dėl papildomų komponentų IMDM yra tinkamesnė specializuotiems ląstelių tipams ir specifiniams taikymams nei DMEM.
IMDM ir RPMI
IMDM ir RPMI turi skirtingas sudėtis, kurios gali būti svarbios PMA ir jonomicino stimuliacijai. Vienas iš reikšmingų skirtumų yra Ca2+ koncentracija. RPMI yra 0,42 mM Ca2+, o IMDM
- 1,49 mM.
Kokybės kontrolė
pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C temperatūroje.
Kiekviena partija buvo patikrinta dėl sterilumo ir mikoplazmos bei bakterijų nebuvimo.
Priežiūra
Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsoje. Užšaldymas ir pašildymas iki +37 °C sumažina produkto kokybę.
Nešildykite terpės iki aukštesnės nei 37° C temperatūros ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių (pvz., mikrobangų krosnelės prietaisų).
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, išimkite šį kiekį iš buteliuko ir pašildykite jį kambario temperatūroje.
Bet kurios terpės, išskyrus pagrindinę terpę, galiojimo laikas yra 8 savaitės nuo pagaminimo datos.
Sudėtis
Sudedamosios dalys
mg/l
Neorganinės druskos
Kalcio chloridas x 2 H2O
219,00
Kalio chloridas
330,00
Kalio nitratas
0.076
Bevandenis magnio sulfatas
97,73
Natrio chloridas
4,505.00
Bevandenis natrio dihidrogenfosfatas
109,00
Natrio selenitas
0,02
Kiti komponentai
D(+)-gliukozė bevandenė
4,500.00
HEPES
5,958.00
Natrio piruvatas
110,00
Raudonasis fenolis
15,00
Amino rūgštys
L-alaninas
25,00
L-argininas x HCl
84,00
L-asparaginas x H2O
25,00
L-asparagino rūgštis
30,00
L-cistinas x 2HCl
91,24
L-glutaminas
584,00
L-gliutamo rūgštis
75,00
Glicinas
30,00
L-histidinas x HCl x H2O
42,00
L-izoleucinas
104,80
L-leucinas
104,80
L-lizinas x HCl
146,20
L-metioninas
30,00
L-fenilalaninas
66,00
L-prolinas
40,00
L-serinas
42,00
L-treoninas
95,20
L-triptofanas
16,00
L-tirozinas x 2Na
104,20
L-Valinas
93,60
Vitaminai
D(+)-biotinas
0.013
D-kalcio pantotenatas
4,00
Cholino chloridas
4,00
Folio rūgštis
4,00
mio-izitolis
7,20
Ląstelių kultūros terpės: apžvalga
Gamtos mokslų srityje viena iš svarbiausių metodikų yra ląstelių kultūra. Terminas „ląstelių kultūra“ reiškia ląstelių, audinių ar organų paėmimą iš gyvūno ar augalo ir vėlesnį tų ląstelių, audinių ar organų implantavimą į dirbtinę aplinką, palankią jų išlikimui ir (arba) augimui. Pagrindiniai aplinkos reikalavimai, būtini optimaliam ląstelių vystymuisi, yra kontroliuojama temperatūra, substratas, prie kurio ląstelės gali prisitvirtinti, tinkama auginimo terpė ir inkubatorius, palaikantis optimalų pH ir osmolalumą. Kad ląstelės galėtų išaugti iki savo pilno potencialo, joms būtinos šios sąlygos.
Tinkamos auginimo terpės parinkimas in vitro kultivavimui yra ląstelių kultūros etapas, kuris yra ir svarbiausias, ir gyvybiškai būtinas. Augimo terpė, dar vadinama kultūrinė terpe, yra skystis arba gelis, sukurtas skatinti organizmų vystymąsi mikroskopiniu, ląstelių arba augalų lygiu. Ląstelių auginimui naudojama terpė dažnai turi pakankamą energijos kiekį ir medžiagų, reguliuojančių ląstelių ciklą. Pagrindiniai kultūrinės terpės komponentai yra amino rūgštys, vitaminai, neorganinės druskos, gliukozė ir serumas. Serumas į terpią įdedamas, nes jis veikia kaip augimo veiksnių, hormonų ir prisijungimo veiksnių šaltinis. Be maistinių medžiagų tiekimo, terpė taip pat padeda palaikyti pH ir osmolalumo lygį.
Ląstelių kultūroje naudojamų terpių rūšys
Tiek žmogaus, tiek gyvūnų ląstelės gali būti auginamos dirbtinėje arba sintetinėje terpėje, taip pat visiškai natūralioje terpėje, papildytoje natūraliais elementais. Toliau pateiksime apžvalgą apie įvairius šiuo metu prieinamus terpių tipus.
Natūralios terpės
Natūraliose terpėse gali būti tik natūralioje būsenoje esantys biologiniai skysčiai. Natūralios terpės yra labai naudingos ir patogios įvairių gyvūnų ląstelių tipų auginimui. Nepakankamas supratimas apie tikslius natūralių terpių komponentus yra pagrindinis veiksnys, lemiantis mažą rezultatų, gautų naudojant natūralias terpes, pakartojamumą.
Dirbtinės terpės
Dirbtinių arba sintetinių terpių paruošimas apima maistinių medžiagų (tiek organinių, tiek neorganinių), serumo baltymų, angliavandenių, kofaktorių, vitaminų ir druskų, taip pat O₂ ir CO₂ dujų fazių pridėjimą [1].
Siekiant užtikrinti vieną ar kelias iš šių funkcijų, buvo sukurti įvairių tipų dirbtiniai terpe: 1) Greitas išgyvenimas (subalansuotas druskų tirpalas su tiksliu pH ir osmosiniu slėgiu). 2) Ilgalaikis išgyvenimas (subalansuotas druskų tirpalas, papildytas įvairiais organinių cheminių medžiagų ir (arba) serumo mišiniais). 3) Neribotas vystymasis. 4) Specializuotos funkcijos.
Dirbtinės terpės skirstomos į keturias atskiras klases:
Terpės, kurių sudėtyje yra serumo
Dažniausiai gyvūnų ląstelių auginimui naudojamose terpėse randamas priedas yra veršelių serumas. Jis į kultūrinę terpę dedamas kaip nebrangus priedas, siekiant užtikrinti kuo geresnes augimo sąlygas. Be to, kad serumas veikia kaip nestabilių ar vandenyje netirpių maistinių medžiagų, hormonų ir augimo veiksnių, proteazės inhibitorių bei kitų medžiagų pernešėjas ar chelatorius, jis taip pat suriša ir neutralizuoja kenksmingas molekules.
Serumo neturinti terpė
Serumo buvimas terpėje turi nemažai trūkumų ir gali sukelti rimtų interpretavimo klaidų imunologiniuose tyrimuose [2, 3]. Buvo sukurta įvairių be serumo terpių [4, 5]. Paprastai šios terpės yra specialiai suformuluotos tam, kad palaikytų vieno ląstelių tipo kultūrą, pavyzdžiui, „Knockout Serum Replacement“ ir „Knockout DMEM“ iš „Thermo Fisher Scientific“ bei „mTESR“ terpė iš „Stem Cell Technologies“ [6], skirta kamieninėms ląstelėms [7].
Be to, į šias terpes įtraukiami nustatyti kiekiai išgrynintų augimo veiksnių, lipoproteinų ir kitų baltymų, kuriuos paprastai teikia serumas [8]. Šios terpes dažnai vadinamos „apibrėžtomis kultūrinėmis terpėmis“, nes jų sudedamosios dalys yra gerai žinomos.
Chemiškai apibrėžtos terpės
Šios terpės sudėtyje yra ypač grynų neorganinių ir organinių komponentų, kurie nėra užteršti jokiais teršalais. Jos taip pat gali būti papildytos grynais baltymais, pavyzdžiui, augimo faktoriais.
Genetiškai modifikavus bakterijas ar mieles ir pridedant tam tikrų riebalų rūgščių, vitaminų, cholesterolio bei amino rūgščių, gaunami jų sudedamieji komponentai [9].
Baltyminių medžiagų neturinčios terpės
Baltyminių medžiagų neturinčios terpės yra tokios, kuriose visiškai nėra baltymų, o yra tik nebaltyminiai elementai. Palyginti su terpėmis, į kurias pridėta serumo, baltyminių medžiagų neturinčių terpių naudojimas skatina didesnį ląstelių dauginimąsi ir baltymų ekspresiją bei palengvina bet kurio tolesniame procese susidariusio produkto gryninimą [10–12]. Baltymai neįeina į tokias formules kaip MEM ir RPMI-1640. Tačiau prireikus gali būti įdedamas baltymų papildas.
Kultūrinės terpės ir jų pagrindiniai komponentai
Komercinę kultūrinę terpę galima įsigyti miltelių arba skysčio pavidalu; dažnai joje yra įvairių maistinių medžiagų, pavyzdžiui, amino rūgščių, gliukozės, druskų, vitaminų ir kitų maisto papildų.
Kiekvienai ląstelių linijai šių komponentų poreikis skiriasi, o būtent šie skirtumai lemia didelę terpės sudėčių įvairovę. Kiekvienas komponentas atlieka tam tikrą funkciją, kuri bus aprašyta tolesniuose skyriuose:
Buferinės sistemos
Siekiant išlaikyti optimalias auginimo sąlygas, būtina kontroliuoti pH, o tai dažniausiai daroma naudojant vieną iš dviejų buferinių sistemų:
Natūrali buferinė sistema
CO₂/H₂CO₃ santykis atmosferoje yra toks pat kaip ir terpėje, todėl susidaro natūralus buferinis mechanizmas. Siekiant išsaugoti šį natūralų buferinį mechanizmą, kultūros turi būti laikomos aplinkoje, kurioje CO₂ koncentracija sudaro 5–10 %; tai dažniausiai pasiekiama naudojant CO₂ inkubatorių. Vienas iš didžiausių natūralaus buferio privalumų – jo pigumas ir saugumas.
HEPES
Cheminis buferavimas naudojant zwitterjoną HEPES pasižymi didesniu buferavimo pajėgumu pH intervale 7,2–7,4 ir nereikalauja reguliuojamos dujinės aplinkos. Tam tikrų tipų ląstelėms didesnė HEPES dozė gali būti žalinga. Terpės, kurių sudėtyje yra HEPES, taip pat yra daug jautresnės fluorescencinės šviesos fototoksiniam poveikiui [13].
Fenolio raudonasis
pH indikatorius fenolio raudonasis dažnai įtraukiamas į komerciškai parduodamas kultūrinės terpės, leidžiant nuolat stebėti pH. Ląstelėms dauginantis, jų gaminami metabolitai sukelia pH pokytį ir dėl to pasikeičia terpės spalva. Fenolio raudonasis turi dvejopą poveikį terpės spalvai: rūgščiame pH ji tampa geltona, o šarminiame pH – violetinė. Esant pH 7,4 – optimaliam ląstelių kultūrai – terpė tampa fluorescuojančiai raudona.
Tačiau fenolio raudonasis turi keletą trūkumų: pirma, fenolio raudonasis gali imituoti daugelio steroidinių hormonų, visų pirma estrogeno, veikimą [14]. Todėl tiriant estrogenui jautrias ląsteles, pavyzdžiui, krūties audinį, rekomenduojama naudoti terpę be fenolio raudonojo. Natrio ir kalio pusiausvyra sutrinka dėl fenolio raudonojo buvimo kai kuriose be serumo sudėtyse. Šio poveikio galima išvengti į terpę įdedant serumo arba galvijų hipofizės hormono [15]. Trečia, fenolio raudonojo buvimas trukdo aptikti ląsteles atliekant srauto citometrijos eksperimentus.
Neorganinės druskos
Terpės, kurių sudėtyje yra neorganinių druskų, pvz., natrio, kalio ir kalcio jonų, padeda išlaikyti osmosinę pusiausvyrą ir reguliuoja membranos potencialą.
Amino rūgštys
Kadangi aminorūgštys yra pagrindiniai baltymų komponentai, jos yra būtina kiekvienos kada nors sukurto ląstelių auginimo terpės sudėtinė dalis. Kadangi ląstelės pačios negali pagaminti tam tikrų aminorūgščių, svarbu, kad kultūrinėje terpėje būtų būtinųjų aminorūgščių. Jos yra būtinos ląstelių proliferacijai, o jų koncentracija lemia didžiausią pasiekiamą ląstelių tankį. Ypač svarbi yra būtinoji amino rūgštis – L-glutaminas.
L-glutaminas veikia kaip antrinis energijos šaltinis medžiagų apykaitai ir tiekia azotą NAD, NADPH bei nukleotidų sintezei. Kadangi L-glutaminas yra nestabili amino rūgštis, kuri laikui bėgant virsta forma, kurios ląstelės negali panaudoti, ją būtina papildomai įtraukti į terpę.
Be to, į auginimo terpę galima įtraukti nepagrindinių amino rūgščių, siekiant papildyti tas, kurios buvo sunaudotos augimo proceso metu. Ląstelių augimas paspartėja, o jų gyvybingumas padidėja, kai auginimo terpė papildoma nepagrindinėmis amino rūgštimis.
Angliavandeniai
Angliavandeniai cukrų pavidalu yra pagrindinis energijos šaltinis. Daugelyje terpių, be labiau paplitusių gliukozės ir galaktozės, taip pat yra maltozės ir fruktozės.
Baltymai ir peptidai
Albuminas, transferinas ir fibronektinas yra dažniausiai naudojami baltymai ir peptidai. Jie ypač svarbūs terpėse, kurių sudėtyje nėra serumo. Albuminas, transferinas, aprotininas, fetuinas ir fibronektinas yra tik keletas baltymų, kurių galima rasti serume – turtingame baltymų šaltinyje.
Albuminas yra pagrindinis kraujyje randamas baltymas, kurio funkcija – jungti ir transportuoti įvairias medžiagas, įskaitant vandenį, druskas, laisvąsias riebalų rūgštis, hormonus ir vitaminus, tarp skirtingų organų ir ląstelių. Albumino gebėjimas jungtis prie cheminių medžiagų daro jį veiksmingu kandidatu pašalinti kenksmingus junginius iš terpės, kurioje auginamos ląstelės.
Aprotininas yra apsauginė medžiaga ląstelių kultūrų sistemose, nes jis yra stabilus esant neutraliam ir rūgštiniam pH, taip pat atsparus aukštai temperatūrai ir proteolitinių fermentų sukeliamam irimui. Jis gali slopinti daugelį serino proteazių, tarp jų – tripsiną.
Fetuinas yra glikoproteinas, kurio kiekis gyvūnų vaisiaus ir naujagimio serume gali būti didesnis nei suaugusiųjų serume. Be to, jis veikia kaip serino proteazės inhibitorius. Baltymas fibronektinas yra esminis komponentas ląstelių adhezijos procese. Transferinas yra baltymas, kuris transportuoja geležį ir yra atsakingas už jos pristatymą į ląstelių membranas.
Riebalų rūgštys ir lipidai
Jos atlieka lemiamą vaidmenį beserumėje terpėje, kai nėra serumo.
Vitaminai
Ląstelių vystymuisi ir dauginimuisi reikalingi įvairūs vitaminai. Ląstelės negali pačios pagaminti pakankamo vitaminų kiekio, todėl audinių kultūroje jie yra būtini kaip maisto papildai.
Ląstelių kultūroje serumas yra pagrindinis vitaminų šaltinis; tačiau terpės taip pat praturtinamos įvairiais vitaminais, kad tiktų konkrečiam ląstelių tipui. Dažniausiai augimui skatinti naudojami B grupės vitaminai.
Mikroelementai
Cheminiai elementai, tokie kaip varis, cinkas, selenas ir trikarboksirūgšties tarpinių junginių, vadinami mikroelementais. Mikroelementai dažnai pridedami į terpes, kurių sudėtyje nėra serumo, siekiant pakeisti tuos, kurie paprastai yra serume. Šie elementai yra svarbūs cheminiai komponentai, reikalingi sveikam ląstelių vystymuisi. Daugelis biocheminių reakcijų, pavyzdžiui, fermentų aktyvumas, priklauso nuo tam tikrų mikroelementų.
Terpės priedai
Tam tikroms ląstelių linijoms rekomenduojamoms pilnoms auginimo terpėms reikalingi papildomi komponentai, kurių nėra bazinėse terpėse ir serume. Šie maisto papildai palaiko ląstelių augimą ir tinkamą medžiagų apykaitą.
Nors hormonai, augimo faktoriai ir signalinės molekulės yra būtini tam tikrų ląstelių linijų tinkamai proliferacijai, visada reikėtų laikytis šių atsargumo priemonių: kadangi priedų įdėjimas gali pakeisti visos auginimo terpės osmolalumą, o tai gali slopinti ląstelių vystymąsi, visada patartina patikrinti osmolalumą po priedų įdėjimo. Daugumai ląstelių linijų optimalus osmolalumas svyruoja nuo 260 iki 320 mOSM/kg.
Antibiotikai
Antibiotikai dažnai naudojami bakterinių ir grybelinių teršalų plitimui slopinti [16], nors jie nėra būtini ląstelių augimui. Kadangi antibiotikai gali paslėpti mikoplazmų ir atsparių bakterijų sukeltą užteršimą, jų reguliarus naudojimas ląstelių kultūrose nerekomenduojamas [17, 18].
Be to, antibiotikai gali sutrikdyti jautrių ląstelių medžiagų apykaitą. Dažnai naudojami „MilliporeSigma“ ir „Life Technologies“ gaminami penicilino ir streptomicino deriniai. „Plasmocin“ buvo naudojamas gliomos ląstelių linijų TS603, TS516 ir BT260 kultūrose [19], ir buvo įrodyta, kad jis veiksmingai pašalina mikoplazmų užteršimą (20).
Serumas
Serume yra albuminų, augimo veiksnių ir augimo inhibitorių. Serumas yra viena iš svarbiausių ląstelių kultūros terpės sudedamųjų dalių, nes jis aprūpina amino rūgštimis, baltymais, vitaminais (ypač riebaluose tirpiais vitaminais, tokiais kaip A, D, E ir K), angliavandeniais, lipidais, hormonais, augimo veiksniais, mineralais ir mikroelementais.
Kultivuojamų ląstelių vystymuisi skatinti dažnai naudojamas veršelių ir galvijų vaisiaus serumas. Vaisiaus serumas yra gausus augimo veiksnių šaltinis ir tinka ląstelių klonavimui bei jautrių ląstelių vystymuisi. Dėl sumažėjusių augimą skatinančių savybių veršelių serumas naudojamas kontaktinio slopinimo eksperimentuose. Įprastose auginimo terpėse dažnai yra nuo 2 % iki 10 % serumo. Serumo įmaišymas į kultūrinę terpę atlieka šias funkcijas [21]:
-
Serumas tiekia ląstelėms būtinas maistines medžiagas (tiek tirpale, tiek prisijungusias prie baltymų).
-
Serume yra keletas augimo veiksnių ir hormonų, dalyvaujančių augimo skatinime ir specializuotoje ląstelių veikloje.
-
Jame yra daug rišamųjų baltymų, pavyzdžiui, albumino ir transferino, kurie perneša kitas chemines medžiagas į ląstelę. Pavyzdžiui, albuminas į ląsteles perneša riebalus, vitaminus, hormonus ir pan.
-
Jis taip pat suteikia baltymų, pavyzdžiui, fibronektino, kurie padidina ląstelių adheziją prie substrato. Be to, jis gamina plitimo elementus, kurie padeda ląstelėms išsiplėsti prieš dalijimąsi.
-
Jis tiekia proteazės inhibitorius, kurie užkerta kelią proteolizei ląstelėse.
-
Jame taip pat yra mineralų, pvz., Na+, K+, Zn2+ ir Fe2+.
-
Jis padidina terpės klampumą, taip apsaugodamas ląsteles nuo mechaninių pažeidimų maišant suspensijos kultūrą.
-
Be to, jis veikia kaip buferis.
Nuorodos
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Gyvūnų ląstelių mityba audinių kultūroje; pradiniai tyrimai su sintetinėmis terpėmis. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. Greita veršelių vaisiaus serumo komponento adsorbcija kultūroje auginamose žinduolių ląstelėse. Galimas artefaktų šaltinis atliekant tyrimus su antiserumais, nukreiptais prieš ląstelių specifinius antigenus. Immunology. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Serumo įmaišymas į terpę, naudojamą ląstelių suspensijoms paruošti, kaip galimas artefaktų šaltinis ląstelių tarpininkaujamose reakcijose, tiriamose naudojant poplitealinio limfmazgio testą. J Immunogenet. 1980;7:483–9
[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Komercinės serumo neturinčios terpės: hibridomų auginimas ir monokloninių antikūnų gamyba. J Immunol Methods. 1991;145:175–83
[5] Barnes D, Sato G. Kultivuojamų ląstelių auginimo be serumo terpėje metodai. Anal Biochem. 1980;102:255-70
[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O ir kt. HSP70 chaperonai perkelia RNR neturintį TDP-43 į anizotropinius intranuklearinius skystus sferinius apvalkalus. „Science“. 2021;371:
[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J ir kt. Dauno sindromo sukeltas senėjimas sutrikdo nervinių progenitorinių ląstelių branduolio struktūrą. „Cell Stem Cell“. 2022;29:116–130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. Visiškas serumo pakeitimas albuminu, transferinu ir sojos riebalais lipopolisacharidams reaguojančių B limfocitų kultūrose. „J Exp Med“. 1978;147:923–33
[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Chemiškai apibrėžtos baltymų neturinčios terpės, skirtos hibridomų auginimui ir monokloninių antikūnų gamybai, sistemingas tobulinimas. „J Biotechnol“. 1996;45:111–23
[10] Darfler F. Baltymių neturinti terpė hibridomų ir kitų imuninės sistemos ląstelių auginimui. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769–78
[11] Barnes D, Sato G. Serumo neturinti ląstelių kultūra: vieningas požiūris. „Cell“. 1980;22:649–55
[12] Hamilton W, Ham R. Kinų žiurkių ląstelių linijų kloninis augimas baltymų neturinčiose terpėse. In Vitro. 1977;13:537–47
[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Šviesai veikiamos HEPES turinčios kultūros terpės citotoksinio poveikio analizė. „In Vitro Cell Dev Biol“. 1985;21:282–7
[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Fenolio raudonasis audinių kultūros terpėse yra silpnas estrogenas: pasekmės, susijusios su estrogenui jautrių ląstelių tyrimais kultūroje. „Proc Natl Acad Sci U S A“. 1986;83:2496–500
[15] Karmiol S. Serumo neturinčių terpių kūrimas. Į: Master JRW, red. „Animal Cell culture“, 3-iasis leidimas. Oksfordas: Oxford University Press; 2000.
[16] Perlman D. Antibiotikų naudojimas ląstelių kultūros terpėse. Methods Enzymol. 1979;58:110-6
[17] McGarrity G. Ląstelių kultūrų mikoplazminės infekcijos plitimas ir kontrolė. In Vitro. 1976;12:643–8
[18] Masters J, Stacey G. Terpės keitimas ir ląstelių linijų perauginimas. „Nat Protoc“. 2007;2:2276–84
[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M ir kt. Histonų demetilazė KDM6A tiesiogiai reaguoja į deguonį, reguliuodama chromatino būklę ir ląstelių likimą. „Science“. 2019;363:1217–1222
[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M ir kt. „Plasmocin™“ veiksmingumas įvairiose molikutų užkrėstose žinduolių ląstelių linijose, palyginti su ląstelių kultūrose dažniausiai naudojamais antibiotikais: vietinė patirtis. „Cytotechnology“. 2011;63:609–20
[21] Kragh Hansen U. Ligando prisijungimo prie serumo albumino molekuliniai aspektai. „Pharmacol Rev.“ 1981;33:17–53