Tūris: 100 ml
Laikymo sąlygos: ≤ –15 °C
Sterilumas: Sterilus filtruotas
Stabilus glutamino tirpalas (L-alanil-L-glutaminas, 200 mM) yra labai stabili L-glutamino dipeptido forma, sukurta kaip tiesioginis tradicinio L-glutamino pakaitalas ląstelių kultūros terpėse. L-glutaminas yra būtina amino rūgštis ir pagrindinis energijos šaltinis kultivuojamoms ląstelėms, atliekantis svarbų vaidmenį ląstelių augime, metabolizme ir baltymų sintezėje.
Pritaikymas ir privalumai
Standartinėse skystosiose terpėse L-glutaminas 37 °C temperatūroje gana greitai suyra, dėl to susidaro toksiški šalutiniai produktai, pvz., amonio jonai, kurie gali neigiamai paveikti ląstelių gyvybingumą ir eksperimentų rezultatus. Stabilus glutaminas pašalina šį trūkumą, nes yra nesuyrantis dipeptidas, kuris išlieka nepakitęs kultūrinėse sąlygose.
Ląstelės fermentiniu būdu skaido dipeptidą, kad išlaisvintų L-glutaminą pagal poreikį, užtikrindamos nuolatinį šviežio tiekimą ir tuo pačiu užkertant kelią kenksmingų atliekų kaupimuisi. Tai daro šį tirpalą ypač naudingu ilgalaikiam ląstelių kultivavimui ir didelio tankio auginimo sistemoms.
Sudėtis ir naudojimas
L-alanil-L-glutamino tirpalas ruošiamas ląstelių kultūrai tinkamu vandeniu 200 mM koncentracijos ir yra steriliškai filtruojamas, kad būtų tinkamas naudoti jautrioms užteršimui aplinkoms. Jis gali būti tiesiogiai skiestas į visą terpę pagal eksperimentinius reikalavimus. Laikyti ≤ –15 °C temperatūroje ir vengti pakartotinių užšaldymo-atšildymo ciklų, kad būtų išlaikytas produkto stabilumas.
Tik moksliniams tyrimams. Nenaudoti diagnostinėms ar terapinėms procedūroms. Nenaudoti žmonėms ar gyvūnams.
Tūris: 100 ml
Laikymo sąlygos: nuo +2 °C iki +8 °C
Sterilumas: sterilus, filtruotas
HEPES buferinis tirpalas (1 M), taip pat žinomas kaip N-2-hidroksietilpiperazinas-N-2-etansulfonrūgštis, yra dvigubai joninis organinis buferinis agentas, plačiai naudojamas ląstelių kultūros terpėse. Jis skirtas palaikyti stabilias pH sąlygas fiziologiniame intervale nuo 6,7 iki 8,6, užtikrinant optimalų ląstelių funkcionavimą in vitro taikymuose.
Pritaikymas ir privalumai
HEPES užtikrina patikimą buferinį pajėgumą ląstelių kultūros sistemose, ypač kai ląstelės yra tvarkomos ne CO₂ inkubatoriuje. 10–25 mM HEPES pridėjimas į kultūros terpę užtikrina didesnį pH stabilumą ilgesnio tvarkymo laikotarpio metu, padėdamas išlaikyti pastovias eksperimentines sąlygas.
Šis buferis yra nepralaidus membranai, minimaliai trukdo biocheminėms reakcijoms ir pasižymi stipriu cheminiu ir fermentiniu stabilumu. Dėl šių savybių jis tinka plačiam ląstelių kultūros ir biocheminių taikymų spektrui.
Sudėtis ir naudojimas
Tirpalas tiekiamas kaip 1 M koncentratas, paruoštas ląstelių kultūrai tinkamu vandeniu ir steriliu filtruotu, kad būtų galima naudoti aplinkoje, jautrioje užteršimui. Jis gali būti skiestas iki norimos darbo koncentracijos, priklausomai nuo taikymo reikalavimų. Laikyti +2 °C iki +8 °C temperatūroje ir tvarkyti aseptinėmis sąlygomis, kad būtų išsaugotas produkto vientisumas.
Tik moksliniams tyrimams. Nenaudoti diagnostinėms ar terapinėms procedūroms. Nenaudoti žmonėms ar gyvūnams.
Tūris: 50 ml
Laikymo sąlygos: nuo +2 °C iki +8 °C
Sterilumas: sterilus, filtruotas
D-(+)-gliukozės tirpalas (dekstrozės tirpalas) yra sterilus, paruoštas vartoti papildas, kurio sudėtyje yra natūraliai randamas cukrus D-(+)-gliukozė, pagrindinis ląstelių metabolizmo komponentas. Gliukozė dalyvauja svarbiuose biologiniuose procesuose, pvz., energijos gamyboje, glikozilinime ir glikanų, kurie prisideda prie ląstelių struktūros ir funkcionavimo, formavimosi.
Pritaikymas ir nauda
Šis gliukozės tirpalas plačiai naudojamas kaip priedas ląstelių kultūros terpėse ir daugelyje ląstelių ir molekulinės biologijos taikymų. Kaip pagrindinis anglies ir energijos šaltinis, gliukozė palaiko ląstelių augimą, proliferaciją ir metabolinę veiklą. Jos dalyvavimas biosintezės procesuose taip pat daro ją labai svarbią normalios ląstelių fiziologijos ir eksperimentų nuoseklumo palaikymui.
Sudėtis ir naudojimas
Tirpalas tiekiamas didelės koncentracijos – 250 g/l gliukozės, todėl jį galima lanksčiai skiesti kultūrinėse terpėse pagal eksperimentinius reikalavimus. Jis yra sterilus, filtruotas, kad būtų tinkamas naudoti jautriose užteršimui aplikacijose. Laikyti +2 °C iki +8 °C temperatūroje ir tvarkyti aseptiškai, kad būtų išlaikyta produkto kokybė ir stabilumas.
Tik moksliniams tyrimams. Nenaudoti diagnostinėms ar terapinėms procedūroms. Nenaudoti žmonėms ar gyvūnams.
Tūris: 10 ml
Laikymas: nuo +2 °C iki +8 °C
Sterilumas: Steriliai filtruotas
Insulino-transferino-seleno (ITS) tirpalas (100x) yra chemiškai apibrėžtas priedas, skirtas plačiam ląstelių kultūrų taikymų spektrui. Dažniausiai jis naudojamas kaip priedas bazinėms ląstelių kultūrų terpėms, siekiant palaikyti ląstelių augimą sumažinto serumo arba be serumo sąlygomis.
Pritaikymas ir privalumai
Mūsų ITS priedas suteikia esminius komponentus, reikalingus optimaliam serumo neturinčių terpių veikimui. Papildant įprastas maistines terpes ITS, galima žymiai sumažinti veršelių serumo (FBS) poreikį daugelio ląstelių linijų įprastiniam palaikymui. Tai padeda sumažinti su serumo naudojimu susijusius svyravimus, tuo pačiu išlaikant nuoseklų ląstelių augimą ir gyvybingumą.
Insulinas palaiko ląstelių įsisavinimą ir pagrindinių maistinių medžiagų metabolizmą, transferinas palengvina geležies transportavimą, o selenas prisideda prie antioksidacinės apsaugos ir fermentinės veiklos. Kartu šie komponentai skatina subalansuotą ląstelių metabolizmą ir pagerina atkuriamumą apibrėžtose kultūrinėse sistemose.
Sudėtis ir naudojimas
Insulinas-transferinas-selenas (ITS) tiekiamas kaip 100 kartų koncentruotas tirpalas Earle's Balanced Salt Solution (EBSS) be fenolio raudonojo. Standartiniam naudojimui praskiesti 1:100 atitinkamoje bazinėje terpėje, kad būtų pasiekta rekomenduojama darbinė koncentracija. Laikyti +2°C iki +8°C temperatūroje ir tvarkyti aseptinėmis sąlygomis, siekiant išlaikyti produkto stabilumą ir sterilumą.
Skirta tik moksliniams tyrimams. Nenaudoti diagnostinėse ar terapinėse procedūrose. Nenaudoti žmonėms ar gyvūnams.
Tūris: 5 ml
Laikymas: nuo +2 °C iki +8 °C
Sterilumas: filtruotas
Žmogaus rekombinantinio insulino tirpalas yra chemiškai apibrėžtas priedas, dažniausiai naudojamas žinduolių ląstelių linijų, įskaitant kinų žiurkėno kiaušidžių (CHO) ląsteles, kultivavimui. Šis ląstelių kultūrai skirtas tirpalas yra sudarytas iš Saccharomyces cerevisiae išreikšto rekombinantinio žmogaus insulino, užtikrinančio aukštą grynumą ir pastovų veikimą moksliniuose tyrimuose.
Pritaikymas ir privalumai
Insulinas paprastai dedamas į serumo neturinčias ir chemiškai apibrėžtas terpes, siekiant skatinti ląstelių augimą ir produktyvumą. Kaip pagrindinis reguliuojantis hormonas, insulinas palaiko gliukozės, amino rūgščių ir riebalų rūgščių įsisavinimą, panaudojimą ir kaupimą ląstelėse. Jis taip pat slopina glikogeno, baltymų ir lipidų skilimą, taip prisidėdamas prie geresnio ląstelių gyvybingumo ir metabolinio stabilumo kultūrinėse sistemose. Chemiškai apibrėžta formulė užtikrina atkuriamumą ir sumažina jautrių ląstelių kultūros procesų kintamumą.
Biologinės savybės ir naudojimas
Insulinas yra dvigrandis polipeptidinis hormonas, natūraliai gaminamas kasos salelių β-ląstelėse. Jo molekulinė masė yra apie 5 800 Da. α
- ir β-grandinės sujungtos dviem tarpgrandinėmis disulfidinėmis jungtimis, o α-grandinėje yra viena intragrandinė disulfidinė jungtis. Naudojant ląstelių kultūroms, tirpalą reikia tvarkyti aseptinėmis sąlygomis ir laikyti +2 °C iki +8 °C temperatūroje, kad būtų išlaikytas stabilumas ir veiksmingumas.
Skirta tik moksliniams tyrimams. Nenaudoti diagnostikos ar terapijos procedūrose. Nenaudoti žmonėms ar gyvūnams.
Tūris: 100 ml
Laikymo temperatūra: nuo +2 °C iki +8 °C
Sterilumas: sterilus, filtruotas
Natrio piruvato tirpalas (100 mM) yra sterilus, paruoštas naudoti papildas, skirtas papildomam, lengvai prieinamam energijos šaltiniui ląstelių kultūros terpėje. Natrio piruvatas atlieka svarbų vaidmenį ląstelių energijos apykaitoje ir palaiko metaboliniu požiūriu aktyvių ir greitai besidauginančių ląstelių, pvz., naviko ląstelių, augimą. Papildas gali padidinti ląstelių gyvybingumą ir padėti išlaikyti metabolinį stabilumą kultūros sistemose.
Pritaikymas ir privalumai
Šis tirpalas plačiai naudojamas įprastinėje ląstelių kultūroje, siekiant praturtinti terpę piruvatu ir sudaryti optimalias augimo sąlygas. Jis palaiko ATP gamybą, gali padėti sumažinti oksidacinį stresą ir prisideda prie kultivuojamų ląstelių metabolizmo veiklos gerinimo. Pagamintas iš ląstelių kultūrai tinkamo vandens ir steriliškai filtruotas, produktas užtikrina nuoseklią kokybę ir atkuriamumą mokslinių tyrimų darbo eigoje.
Naudojimas ir suderinamumas
Rekomenduojama galutinė koncentracija daugumai ląstelių kultūros taikymų yra 1 mM natrio piruvatas, gaunamas 100 mM tirpalo 1:100 atskiestu tirpalu į visą kultūros terpę. Tirpalas suderinamas su įvairiomis bazinėmis terpėmis ir žinduolių ląstelių linijomis. Laikyti +2°C iki +8°C temperatūroje ir apsaugoti nuo užteršimo, kad būtų išlaikytas produkto stabilumas.
Tik moksliniams tyrimams. Nenaudoti diagnostinėms ar terapinėms procedūroms. Nenaudoti žmonėms ar gyvūnams.
Tūris: 100 ml Laikymas: ≤-15°C Sterilumas: Sterilus filtras
Antibiotikų ir antimikotinių medžiagų tirpalas (100x ) yra sterilus, paruoštas naudoti koncentratas, skirtas sumažinti mikrobinio užteršimo riziką ląstelių kultūrose ir susijusiose laboratorijose. Šiame 100x tirpale yra gerai žinomas penicilino, streptomicino ir amfotericino B derinys, užtikrinantis plataus spektro antimikrobinį veikimą prieš gramteigiamas ir gramneigiamas bakterijas, mieles ir gijinius grybelius. Preparatas tinka naudoti eukariotinių ląstelių kultūrose, bakterijų terpėse ir kitose užterštumui jautriose sistemose, taip užtikrinant švarią ir nuoseklią laboratorinę veiklą.
Taikymas ir privalumai Šis tirpalas, optimizuotas įprastiniams mokslinių tyrimų protokolams, plačiai naudojamas aseptinėms sąlygoms palaikyti ląstelių kultūrų darbo procesuose. Jis užtikrina patikimą veikimą užterštumui jautriose aplinkose, padėdamas tyrėjams sumažinti mikrobų peraugimo riziką, nepakenkiant ląstelių sveikatai ar eksperimentų atkuriamumui. Dėl steriliai filtruotos sudėties nereikia atlikti papildomų tirpinimo etapų, todėl galima supaprastinti terpės paruošimą ir sumažinti kasdienių laboratorinių procedūrų kintamumą.
Naudojimas ir suderinamumas Norint pasiekti standartinę darbinę koncentraciją, praskieskite tirpalą santykiu 1:100 į visą kultūros terpę. Produktas suderinamas su daugeliu žinduolių ląstelių linijų ir bazinių terpių. Nuolat turėdami atsargų, mokslininkai gali naudotis patikimu tiekimo tęstinumu ir supaprastintu logistikos planavimu. Tirpalas turi būti laikomas ≤ -15 °C temperatūroje ir saugomas nuo pakartotinių užšaldymo-atšildymo ciklų, kad išliktų stabilus. Skirtas tik moksliniams tyrimams. Negalima naudoti diagnostinėms ar terapinėms procedūroms. Negalima naudoti žmonėms ar gyvūnams.
Tūris: 100 ml Laikymas: sterilumas: nuo +2°C iki +8°C: Sterilus filtras
MEM nepagrindinės aminorūgštys (100x ) yra sterilus priedas, skirtas ląstelių augimui ir gyvybingumui žinduolių ląstelių kultūrų sistemose didinti. Sudėtis atitinka 100 kartų koncentruotas nepagrindines aminorūgštis, esančias standartinėje minimalioje pagrindinėje terpėje (MEM), todėl galima tiesiogiai papildyti pagrindinę terpę, ją ruošiant minimaliai.
Taikymas ir nauda Šis papildas suteikia papildomą aminorūgščių rezervą greitai besidauginančioms ląstelėms arba ląstelių linijoms, praradusioms gebėjimą sintetinti nepakeičiamąsias aminorūgštis de novo. Sumažindamas biosintezės metabolinę naštą, jis padeda pagerinti augimo kinetiką, prailginti gyvybingumą ir užtikrinti didesnį eksperimentinį nuoseklumą, ypač jautriose maistinėms medžiagoms arba didelio tankio kultūrose.
Sudėtis ir naudojimas Tirpalo sudėtyje yra glicino, L-alanino, L-asparagino, L-asparagino rūgšties, L-glutamo rūgšties, L-prolino ir L-serino. Jis suderinamas su MEM ir dauguma kitų standartinių terpių. Norėdami naudoti, praskieskite 1:100 į galutinę terpę. Šis produktas yra steriliai filtruotas ir paruoštas naudoti be papildomų apdorojimo etapų. Skirtas naudoti tik moksliniams tyrimams. Negalima naudoti diagnostinėms ar terapinėms procedūroms. Negalima naudoti žmonėms ar gyvūnams.
- švelni alternatyva tripsinui
"Accutase"
- tai ląstelių atskyrimo tirpalas, kuris iš esmės keičia ląstelių kultūrų pramonę. Tai proteolitinių ir kolagenolitinių fermentų mišinys, imituojantis tripsino ir kolagenazės veikimą. Skirtingai nei tripsino, "Accutase" sudėtyje nėra jokių žinduolių ar bakterijų komponentų ir yra daug švelnesnis ląstelėms, todėl yra idealus sprendimas įprastam ląstelių atskyrimui nuo standartinių audinių kultūrų plastikinių indų ir adhezija padengtų plastikinių indų. Šiame tinklaraščio įraše nagrinėsime "Accutase" privalumus ir panaudojimo būdus bei tai, kaip ji keičia ląstelių kultūrų kultūrų naudojimo principus.
"Accutase" privalumai
Accutase turi keletą privalumų, palyginti su tradiciniais tripsino tirpalais. Pirma, ji gali būti naudojama, kai reikia švelniai ir efektyviai atskirti bet kokią adhezyvinę ląstelių liniją, todėl ja galima tiesiogiai pakeisti tripsiną. Antra, "Accutase" labai gerai veikia embrionines ir neuronines kamienines ląsteles, be to, įrodyta, kad ji išlaiko šių ląstelių gyvybingumą ir po pasaugojimo. Trečia, "Accutase" išsaugo daugumą epitopų vėlesnei srauto citometrijos analizei, todėl ji idealiai tinka ląstelių paviršiaus žymenų analizei.
Be to, "Accutase" nereikia neutralizuoti perkeliant adherentines ląsteles. Po to, kai ląstelės padalijamos, įpilus daugiau terpės, Accutase praskiedžiama, todėl ji nebegali atskirti ląstelių. Dėl to nereikia atlikti inaktyvavimo etapo, o ląstelių kultūrų specialistai sutaupo laiko. Galiausiai "Accutase" nereikia alikvotuoti, o buteliukas šaldytuve išlieka stabilus 2 mėnesius.
Accutase" taikymas
Accutase tiesiogiai pakeičia tripsino tirpalą ir gali būti naudojama ląstelių linijų pasažavimui. Be to, "Accutase" gerai veikia atskyrus ląsteles daugelio ląstelių paviršiaus žymenų analizei naudojant srauto citometriją ir ląstelių rūšiavimui. Kiti tolesni "Accutase" apdorojimo būdai: ląstelių paviršiaus žymenų analizė, virusų augimo tyrimas, ląstelių proliferacijos, navikinių ląstelių migracijos tyrimai, įprastinis ląstelių perėjimas, gamybos didinimas (bioreaktorius) ir srauto citometrija.
Accutase sudėtis
Accutase sudėtyje nėra žinduolių ar bakterijų komponentų, tai natūralus fermentų mišinys, pasižymintis proteolitiniu ir kolagenolitiniu fermentų aktyvumu. Jo sudėtis yra daug mažesnės koncentracijos nei tripsino ir kolagenazės, todėl jis yra mažiau toksiškas ir švelnesnis, bet toks pat veiksmingas.
Accutase veiksmingumas
Įrodyta, kad "Accutase" veiksmingai atskiria pirmines ir kamienines ląsteles ir išlaiko didelį ląstelių gyvybingumą, palyginti su gyvūninės kilmės fermentais, tokiais kaip tripsinas. 100 % ląstelių atgaunama po 10 minučių, o dėl savaiminio "Accutase" virškinimo "Accutase" nekenkia palikti ląsteles "Accutase" iki 45 minučių.
Apibendrinant
Apibendrinant galima teigti, kad "Accutase" yra galingas sprendimas, kuris keičia ląstelių kultūrų žaidimo taisykles. Dėl savo švelnumo, veiksmingumo ir universalumo "Accutase" yra ideali tripsino alternatyva. Jei ieškote patikimo ir veiksmingo ląstelių atskyrimo sprendimo, "Accutase" yra jums tinkamas sprendimas.
Kas yra EMEM?
EMEM yra modifikuota Eagle'o minimalios būtinosios terpės versija, kurioje yra Earle'o subalansuotas druskų tirpalas, nepagrindinės aminorūgštys, L-glutaminas, natrio piruvatas ir natrio bikarbonatas. Svarbu pažymėti, kad toks natrio bikarbonato kiekis skirtas naudoti 5 % CO2 ore. Kad terpė išliktų veiksminga, nenaudojamą terpę rekomenduojama laikyti 2-8 °C temperatūroje tamsoje.
Kam naudojama EMEM?
Eagle's minimal essential medium (EMEM)
- tai ląstelių kultūrų terpė, kurioje galima išlaikyti ląsteles audinių kultūroje. Šioje terpėje yra didesnė aminorūgščių koncentracija, todėl galima tiksliau priartinti auginamų žinduolių ląstelių baltymų sudėtį. EMEM gali būti naudojama įvairioms ląstelėms, įskaitant fibroblastus, žmogaus kepenų vėžio ląstelių linijos (HepG2) ląsteles ir žmogaus vaisiaus smegenų progenitorių astrocitų (PDA) ląsteles, auginti. Paprastai jis naudojamas su galvijų vaisiaus serumu (FBS), veršelių arba arklių serumais.
Kuo EMEM skiriasi nuo kitų ląstelių kultūrų terpių?
EMEM ir Dulbeko modifikuota Eagle'o terpė (DMEM) turi tam tikrų panašumų, tačiau jos taip pat skiriasi. Abiejose terpėse nėra baltymų, tačiau yra aminorūgščių, druskų, gliukozės ir vitaminų, reikalingų ląstelei aprūpinti energija ir išlaikyti ją audinių kultūroje. Tačiau DMEM sudėtis modifikuota taip, kad joje būtų iki keturių kartų daugiau vitaminų ir aminorūgščių bei nuo dviejų iki keturių kartų daugiau gliukozės nei EMEM. Verta paminėti, kad EMEM taip pat skiriasi nuo originalios MEM sudėties.
Kokybės kontrolė
Steriliai filtruotas
Laikymas ir galiojimo laikas
Laikyti nuo +2 °C iki +8 °C temperatūroje, saugoti nuo šviesos.
Atidarius laikyti 4°C temperatūroje ir sunaudoti per 6-8 savaites.
Gabenimo sąlygos
Aplinkos temperatūra
Priežiūra
Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsioje vietoje. Venkite užšaldymo ir dažno pašildymo iki +37°C, nes tai pablogina produkto kokybę.
Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37°C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pavyzdžiui, mikrobangų krosnelių.
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite iki kambario temperatūros.
Sudėtis
Kategorija
Sudedamosios dalys
Koncentracija (mg/l)
Aminorūgštys
L-arginino HCl
126.00
L-cistinas 2 HCl
31.30
L-glutaminas
292.00
L-histidinas HClH2O
42.00
L-izoleucinas
52.00
L-leucinas
52.00
L-lizinas HCl
72.50
L-metioninas
15.00
L-fenilalaninas
32.00
L-treoninas
48.00
L-triptofanas
10.00
L-tirozinas 2 Na 2H2O
51.90
L-Valinas
46.00
Vitaminai
Cholino chloridas
1.00
Vitaminai
D-kalcio pantotenatas
1.00
Folio rūgštis
1.00
mio-izitolis
2.00
Nikotinamidas
1.00
Piridoksalio HCl
1.00
Riboflavinas
0.10
Tiamino HCl
1.00
Neorganinės druskos
CaCl2 2H2O
265.00
Neorganinės druskos
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Kiti komponentai
D-gliukozė
1000.00
Kiti komponentai
Fenolio raudonojo natrio druska
11.00
Pagrindinės "Freeze Medium CM-1" savybės:
Platus suderinamumas: Veiksminga įvairių tipų ląstelėms, įskaitant pirmines ląsteles, kamienines ląsteles ir nustatytas ląstelių linijas.
Didelis gyvybingumas: Optimizuota taip, kad po atšildymo ląstelės kuo geriau atsistatytų ir taptų gyvybingos, užtikrinant patikimus eksperimentų rezultatus.
Paruošta naudoti: Patogiai paruoštos ir sterilizuotos, kad būtų galima iš karto naudoti, todėl sutrumpėja paruošimo laikas ir sumažėja užteršimo rizika.
Geresnis stabilumas: Išlaikomas pastovus veikimas standartinėmis kriokonservavimo sąlygomis, užtikrinant atkuriamus rezultatus.
Ilgas galiojimo laikas: CM-1 yra serumo turinti, paruošta naudoti kriokonservavimo terpė, kurią šaldytuve galima laikyti iki vienerių metų.
CM-1 naudojimas ląstelėms šaldyti
Norėdami naudoti CM-1 adherentinėms ir suspensijos ląstelėms užšaldyti, atlikite šiuos veiksmus
Jei ląstelės yra adherentinės, nuplaukite ir atskirkite jas nuo kultūros substrato. Jei tai yra suspensijos ląstelės, pereikite tiesiai prie kito veiksmo.
Suskaičiuokite ląsteles, kad įsitikintumėte, jog jos yra tinkamos koncentracijos.
Centrifuguokite ląsteles, kad jos subyrėtų, tada vėl ištirpinkite CM-1 užšaldymo terpėje.
Resuspenduotas ląsteles perkelkite į kriokameras.
Prieš perkeldami ląsteles į ilgalaikį saugojimą, naudokite lėto šaldymo metodą
Metodas
Aprašymas
Žingsniai
❄️
Rankinis užšaldymas
Žingsnis po žingsnio taikomas metodas, kai temperatūra palaipsniui mažinama, kad būtų užtikrintas ląstelių gyvybingumas
1️⃣ Įdėkite ląsteles į užšaldymo terpę ir 40 min. palaikykite 4 °C temperatūros šaldiklyje.
2️⃣ Perkelkite į -80 °C šaldiklį 24 valandoms.
3️⃣ Ilgalaikiam saugojimui ląsteles laikykite skystame azote
❄️
"Mr. Frosty" naudojimas
Patogus prietaisas, leidžiantis kontroliuoti užšaldymo greitį be elektros energijos
1️⃣ Paruoškite ląsteles kriokūnelėse su užšaldymo terpe.
2️⃣ Įdėkite kriovialus į "Mr. Frosty" konteinerį.
3️⃣ Prieš perkeliant į skystą azotą, 24 valandas laikykite -80 °C temperatūroje
❄️
Kontroliuojamo greičio šaldiklis
Labai tikslus "Thermo Fisher" ar kitų gamintojų šaldiklis, skirtas kontroliuojamam temperatūros sumažinimui
1️⃣ Užprogramuokite prietaisą taip, kad jis palaipsniui mažintų temperatūrą.
2️⃣ Į šaldiklį įdėkite paruoštas ląsteles.
3️⃣ Po šaldymo ciklo ląsteles perkelkite į skystą azotą
Laikykite kriokūnelius žemesnėje nei -130 °C temperatūroje arba skystame azote, kad būtų galima ilgai saugoti.
Sudėtis
Sudėtyje yra FBS, DMSO, gliukozės, druskų
Buferinė geba: pH = 7,2-7,6
"Cytion" užšaldymo terpė CM-1 yra patikimas kriokonservavimo sprendimas, užtikrinantis aukštą ląstelių gyvybingumą ir funkcionalumą po atšildymo įvairiems tyrimams.
- specializuotą "Ham's F-12" terpės modifikaciją, sukurtą atsižvelgiant į unikalius biologinių tyrimų reikalavimus. Ši patobulinta terpė pasižymi išskirtiniais privalumais, nes pagerina pirminių žmogaus hepatocitų, taip pat žiurkių ir vištų kepenų ląstelių kultivavimą, ypač esant sumažintam serumo kiekiui.
Ham's F-12K (Kaighn's) terpė yra kruopščiai sukurta siekiant optimizuoti ląstelių auginimo sąlygas. Jos sudėtis yra praturtinta, todėl joje yra padidintas pagrindinių komponentų, tokių kaip aminorūgštys ir natrio piruvatas, kiekis, taip pat papildomų elementų, įskaitant putresciną, timidiną, hipoksantiną ir cinką. Šie priedai leidžia tyrėjams papildyti terpę minimaliu serumo kiekiu arba tam tikrų ląstelių tipų komponentais, taip palengvinant tikslių eksperimentų sąlygas.
Pažymėtina, kad Ham's F-12K (Kaighn's) terpėje nėra baltymų ar augimo veiksnių. Todėl dažnai reikia papildyti augimo veiksniais ir galvijų vaisiaus serumu (FBS), todėl tyrėjai gali pritaikyti terpę pagal konkrečių ląstelių linijų reikalavimus. Siekiant optimalių rezultatų, FBS koncentracija turi būti kruopščiai optimizuota kiekvienai ląstelių linijai, kad būtų užtikrintas optimalus augimas ir funkcionalumas.
Siekiant palaikyti fiziologinį pH, Ham's F-12K (Kaighn's) terpėje naudojama natrio bikarbonato buferinė sistema (2,5 g/l), todėl auginimo metu būtina palaikyti kontroliuojamą 5-10 % CO2 aplinką. Tai užtikrina, kad terpės pH išliktų idealioje ląstelių augimui ir gyvybingumui ribose
Kokybės kontrolė
pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C temperatūroje.
Kiekviena partija buvo patikrinta dėl sterilumo ir mikoplazmos bei bakterijų nebuvimo.
Priežiūra
Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsoje. Užšaldymas ir pašildymas iki +37°C sumažina produkto kokybę.
Nešildykite terpės iki aukštesnės nei 37°C temperatūros ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių (pvz., mikrobangų krosnelės prietaisų).
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, išimkite šį kiekį iš buteliuko ir pašildykite jį kambario temperatūroje.
Bet kurios terpės, išskyrus pagrindinę terpę, galiojimo laikas yra 8 savaitės nuo pagaminimo datos.
Sudėtis
Sudedamosios dalys
mg/l
Neorganinės druskos
Kalcio chloridas x 2H2O
135,24
Vario(II) sulfatas x 5H2O
0,00
Geležies (II) sulfatas x 7H2O
0,83
Magnio chloridas x 6H2O
105,72
Magnio sulfatas x 7H2O
394,49
Kalio chloridas
283,29
Kalio dihidrogenfosfatas
58,52
Natrio chloridas
7597,20
dinatrio vandenilio fosfatasbevandenis
115,02
Cinko sulfatas x 7H2O
0,14
Kiti komponentai
D(+)-gliukozė, bevandenė
1260,00
Hipoksantinas
4,08
DL-α-lipoinė rūgštis
0,21
Raudonasis fenolis
3,00
Putrescinas x 2HCl
0,32
Natrio piruvatas
220,00
NaHCO3
2500,00
Timidinas
0,73
Amino rūgštys
L-alaninas
17,82
L-argininas x HCl
421,40
L-asparaginas x H2O
30,02
L-asparagino rūgštis
26,62
L-cisteinas x HCl x H2O
70,24
L-glutaminas
292,20
L-gliutamo rūgštis
29,42
Glicinas
15,01
L-histidinas x HCl x H2O
41,92
L-izoleucinas
7,87
L-leucinas
26,24
L-lizinas x HCl
73,04
L-metioninas
8,95
L-fenilalaninas
9,91
L-prolinas
69,06
L-serinas
21,02
L-treoninas
23,82
L-triptofanas
4,08
L-tirozinas
10,87
L-Valinas
23,42
Vitaminai
D(+)-biotinas
0,07
D-kalcio pantotenatas
0,48
Cholino chloridas
13,96
Folio rūgštis
1,32
mio-izitolis
18,02
Nikotinamidas
0,04
Piridoksinas x HCl
0,06
Riboflavinas
0,04
Tiaminas x HCl
0,34
Vitaminas B12
1,36
Fosfatu buferizuotas fiziologinis tirpalas (PBS) yra plačiai naudojamas buferinis tirpalas biologiniuose ir cheminiuose tyrimuose. Jis atlieka svarbų vaidmenį palaikant pH pusiausvyrą ir osmoliariškumą atliekant įvairias eksperimentines procedūras, įskaitant audinių apdorojimą ir ląstelių auginimą. Mūsų PBS tirpalas yra kruopščiai sukurtas iš didelio grynumo ingredientų, kad būtų užtikrintas kiekvieno eksperimento stabilumas ir patikimumas. Mūsų PBS tirpalo osmoliariškumas ir jonų koncentracija tiksliai atitinka žmogaus organizmo osmoliariškumą ir jonų koncentraciją, todėl jis yra izotoninis ir netoksiškas daugumai ląstelių.
Mūsų PBS tirpalo sudėtis
Mūsų PBS tirpalas yra pH sureguliuotas itin grynų fosfatinių buferių ir fiziologinių tirpalų mišinys. 1X darbinės koncentracijos tirpale yra:
8000 mg/l natrio chlorido (NaCl)
200 mg/l kalio chlorido (KCl)
1150 mg/l natrio fosfato dibazinio bevandenio (Na2HPO4)
200 mg/L Kalio fosfatas vienbazis bevandenis (KH2PO4)
Ši sudėtis užtikrina optimalią pH ir jonų pusiausvyrą, tinkančią įvairioms biologinėms reikmėms.
Mūsų PBS tirpalo taikymas
Mūsų PBS tirpalas idealiai tinka įvairioms biologinių tyrimų reikmėms. Dėl izotoninių ir netoksiškų savybių jis tinka medžiagoms skiesti ir ląstelių talpykloms skalauti. PBS tirpalai, kurių sudėtyje yra EDTA, efektyviai išlaisvina prisitvirtinusias ir susitelkusias ląsteles. Tačiau į PBS negalima dėti dvivalenčių metalų, pavyzdžiui, cinko, nes tai gali sukelti nuosėdų susidarymą. Tokiais atvejais rekomenduojama naudoti Good's buferius. Be to, mūsų PBS tirpalas yra priimtina alternatyva virusų transportavimo terpei RNR virusams, įskaitant SARS-CoV-2, transportuoti ir laikyti.
Kokybės kontrolė
Steriliai filtruotas
Laikymas ir galiojimo laikas
Laikyti nuo +2 °C iki +25 °C temperatūroje, saugoti nuo šviesos.
Atidarytą laikykite nuo 2 °C iki 25 °C temperatūroje ir sunaudokite per 24 mėnesius.
Gabenimo sąlygos
Aplinkos temperatūra
Priežiūra
Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsioje vietoje. Venkite užšaldymo ir dažno pašildymo iki +37°C, nes tai pablogina produkto kokybę.
Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37°C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pavyzdžiui, mikrobangų krosnelių.
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite iki kambario temperatūros.
Sudėtis
Kategorija
Sudedamosios dalys
Koncentracija (mg/l)
Druskos
Kalio chloridas
200
Kalio fosfatas monobazinis bevandenis
200
Natrio chloridas
8000
Natrio fosfatas dvibazis bevandenis
1150
Iš pradžių sukurta žmogaus leukeminėms ląstelėms auginti suspensinėse ir viensluoksnėse kultūrose, RPMI 1640 terpė, mokslininkams ir komerciniams tiekėjams ją modifikavus, tapo tinkama įvairioms žinduolių ląstelėms. Ji itin suderinama su tokiomis ląstelių linijomis kaip HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocitais ir karcinomomis.
RPMI 1640 terpė išsiskiria iš kitų ląstelių kultūrų terpių dėl savo unikalios sudėties. Joje yra daug fosfatų, aminorūgščių ir vitaminų. Ypač daug biotino, vitamino B12 ir PABA, kurių nėra Eagle's Minimal Essential Medium arba Dulbecco's Modified Eagle Medium. Be to, RPMI 1640 terpėje yra gerokai didesnė vitaminų inozitolio ir cholino koncentracija. Tačiau joje nėra baltymų, lipidų ir augimo veiksnių. Todėl norint sudaryti optimalias sąlygas ląstelėms augti, paprastai reikia papildyti 10 % galvijų vaisiaus serumo (FBS).
RPMI 1640 terpės buferinė sistema priklauso nuo natrio bikarbonato, o fiziologiškai tinkamam pH palaikyti būtina 5-10 % CO2 aplinka. Šią terpę iš kitų terpių dar labiau išskiria tai, kad joje yra redukuojamosios medžiagos glutationo.
Kokybės kontrolė
Steriliai filtruota
Laikymas ir galiojimo laikas
Laikyti nuo +2 °C iki +8 °C temperatūroje, saugoti nuo šviesos.
Atidarytą laikykite 4 °C temperatūroje ir sunaudokite per 6-8 savaites.
Gabenimo sąlygos
Aplinkos temperatūra
Priežiūra
Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsioje vietoje. Venkite užšaldymo ir dažno pašildymo iki +37°C, nes tai pablogina produkto kokybę.
Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37°C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pavyzdžiui, mikrobangų krosnelių.
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite iki kambario temperatūros.
Sudėtis
Kategorija
Sudedamosios dalys
Koncentracija (mg/l)
Aminorūgštys
Glicinas
10.00
L-alanil-L-gliutaminas
434.40
L-argininas
200.00
L-asparaginasH2O
56.82
L-asparagino rūgštis
20.00
L-cistinas 2HCl
65.20
L-gliutamo rūgštis
20.00
L-histidinas HClH2O
20.27
L-Hidroksi-L-Prolinas
20.00
L-izoleucinas
50.00
L-leucinas
50.00
L-lizinas HCl
40.00
L-metioninas
15.00
L-fenilalaninas
15.00
L-prolinas
20.00
L-serinas
30.00
L-treoninas
20.00
L-triptofanas
5.00
L-tirozinas 2Na 2H2O
28.83
L-Valinas
20.00
Vitaminai
p-amino benzenkarboksirūgštis
1.00
D-biotinas
0.20
Cholino chloridas
3.00
D-kalcio pantotenatas
0.25
Folio rūgštis
1.00
mio-izitolis
35.00
Nikotinamidas
1.00
Piridoksino HCl
1.00
Riboflavinas
0.20
Tiamino HCl
1.00
Vitaminas B12
0.005
Neorganinės druskos
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Kiti komponentai
D-gliukozė
2000.00
L-Glutationas redukuotas
1.00
Fenolio raudonojo natrio druska
5.30
Šiame unikaliame preparate tiksliu santykiu 1:1 derinama Dulbeko modifikuota Eagle terpė (DMEM) ir Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12). Jos sudėtį dar labiau pagerina pridėtas L-glutaminas.
DMEM, gauta iš Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), pasižymi didesne aminorūgščių ir vitaminų koncentracija, palyginti su ankstesne terpe. Tuo tarpu Ham's F-12 sukurta iš Ham's F-10 terpės, todėl joje yra papildomas būtiniausių komponentų rinkinys.
Siekiant palaikyti optimalų ląstelių augimą, įprasta DMEM:Ham's F12 papildyti FBS, kurio koncentracija paprastai yra 5-10 %. Šis priedas būtinas, nes terpėje trūksta augimo hormonų, lipidų ir baltymų, būtinų ląstelių vystymuisi.
DMEM:Ham's F12 turi pH buferinę sistemą ir dažnai papildoma pH indikatoriumi
- fenol raudonuoju. DMEM:Ham's F12 arba bet kokioje terpėje, kurioje naudojama bikarbonatinė buferinė sistema, kultivuojamoms ląstelėms reikia kontroliuojamos 5-10 % CO2 aplinkos, kad būtų palaikomas tinkamas pH lygis.
Kokybės kontrolė
Steriliai filtruota
Laikymas ir galiojimo laikas
Laikyti nuo +2 °C iki +8 °C temperatūroje, saugoti nuo šviesos.
Atidarytą laikyti 4 °C temperatūroje ir sunaudoti per 6-8 savaites.
Gabenimo sąlygos
Aplinkos temperatūra
Priežiūra
Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsioje vietoje. Venkite užšaldymo ir dažno pašildymo iki +37°C, nes tai pablogina produkto kokybę.
Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37°C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pavyzdžiui, mikrobangų krosnelių.
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite iki kambario temperatūros.
Sudėtis
Kategorija
Sudedamosios dalys
Koncentracija (mg/l)
Aminorūgštys
Glicinas
18.75
L-alaninas
4.45
L-arginino HCl
147.50
L-asparaginas H₂O
7.50
L-asparto rūgštis
6.65
L-cisteino HCl H₂O
17.56
L-Cistinas 2 HCl
31.29
L-gliutamo rūgštis
7.35
L-gliutaminas
365.00
L-histidino HCl H₂O
31.48
L-izoleucinas
54.47
L-leucinas
59.05
L-lizinas HCl
91.25
L-metioninas
17.24
L-fenilalaninas
35.48
L-prolinas
17.25
L-serinas
26.25
L-treoninas
53.45
L-triptofanas
9.02
L-tirozino dinatrio druska
48.10
L-Valinas
52.85
Vitaminai
D-biotinas
0.0035
Cholino chloridas
8.98
D-kalcio pantotenatas
2.24
Folio rūgštis
2.66
mio-izitolis
12.60
Nikotinamidas
2.02
Piridoksino HCl
0.031
Piridoksalio HCl
2.00
Riboflavinas
0.219
Tiamino HCl
2.17
Vitaminas B12
0.68
Neorganinės druskos
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Kiti komponentai
D-gliukozė
3151.00
Hipoksantinas
2.40
HEPES
3574.50
Linolo rūgštis
0.042
Lipoinė rūgštis
0.105
Fenolio raudonojo natrio druska
8.63
Putrescinas 2 HCl
0.081
Natrio piruvatas
55.00
Timidinas
0.365
- 0,02 esant 20–25 °C temperatūrai. Kiekviena partija buvo patikrinta dėl sterilumo ir mikoplazmos bei bakterijų nebuvimo. Laikymas Laikyti šaldytuve +2 °C iki +8 °C temperatūroje, tamsioje vietoje. Užšaldymas ir atšildymas iki +37 °C sumažina produkto kokybę. Negalima kaitinti terpės iki aukštesnės nei 37 °C temperatūros arba naudoti nekontroliuojamų šilumos šaltinių (pvz., mikrobangų krosnelių). Jei ketinate naudoti tik dalį terpės, išimkite šį kiekį iš butelio ir pašildykite kambario temperatūroje. Visų terpių, išskyrus bazinę terpę, galiojimo laikas yra 6–8 savaitės nuo atidarymo dienos. Sudėtis Komponentai mg/L Neorganinės druskosKalcio chloridas x 2H2O132,0 Magnio sulfatas97 Kalio chloridas400 Natrio chloridas6 460 Dinatrio vandenilio fosfatas (bevandenis)504 Kiti komponentaiD(+)-gliukozė (bevandenė)3 000 Glutationas (redukuotas)0 Mėsos peptonas600 Fenolio raudonoji natrio druska11 Amino rūgštysL-alaninas13 L-argininas x HCl42,1 L-asparaginas x H2O45,03 L-asparto rūgštis19,9 L-cisteinas x HCl x H2O31,75 L-glutaminas (stabilus)219,15 L-glutamo rūgštis22,07 Glicinas7 L-histidinas x HCl x H2O20,96 L-hidroksiprolinas19,67 L-izoleucinas39,3 L-leucinas39,36 L-lizinas x HCl36,54 L-metioninas14,92 L-fenilalaninas16,52 L-prolinas17,27 L-serinas26,28 L-treoninas17,87 L-triptofanas3,06 L-tirozino dinatrio druska26,1 L-valinas17,57 Vitaminaip-Aminobenzoinė rūgštis1 Askorbo rūgštis0,56 D(+)-biotinas0 D-kalcio pantotenatas0 Cholino chloridas5 Folio rūgštis10 Mio-inozitol36 Nikotinamidas0 Nikotino rūgštis0 Piridoksalo HCl0,5 Piridoksino HCl0,5 Riboflavinas0 Tiamino HCl0 Vitaminas B122
199 terpė siūlo daugybę pritaikymo sričių. Ji gali veiksmingai palaikyti kumulusų ir aocitų kompleksą (COC) ir palaikyti oocitų brendimą in vitro. Be to, ji naudojama skalaujant aspiracines linijas renkant kiaušialąstes iš Vokietijos holšteinų veislės karvių. Be to, 199 terpė yra puiki terpė iš žiurkių gautoms širdies endotelio ląstelėms auginti. Šie taikymai rodo terpės 199 universalumą ir pritaikomumą įvairiems eksperimentiniams poreikiams.
Istorija
XX a. šeštajame dešimtmetyje sukūrus terpę Nr. 199, padaryta didelė pažanga audinių kultūrų terpių srityje. Iki šios terpės atsiradimo daugelyje kultūrų terpių buvo naudojami gyvūninės kilmės produktai ir audinių ekstraktai. Tačiau Morganas ir jo kolegos padarė revoliuciją šioje srityje, sukurdami visiškai apibrėžtą mitybos šaltinį ląstelių kultūroms. Atlikdami eksperimentus su įvairiais vitaminų, aminorūgščių ir kitų veiksnių deriniais, jie atrado išskirtines augimą skatinančias 199 terpės savybes.
Kokybės kontrolė
pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C temperatūroje.
Kiekviena partija buvo patikrinta dėl sterilumo ir mikoplazmos bei bakterijų nebuvimo.
Priežiūra
Laikykite šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsoje. Užšaldymas ir pašildymas iki +37 °C sumažina produkto kokybę.
Nešildykite terpės iki aukštesnės nei 37° C temperatūros ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių (pvz., mikrobangų krosnelės prietaisų).
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, išimkite šį kiekį iš buteliuko ir pašildykite jį kambario temperatūroje.
Bet kurios terpės, išskyrus pagrindinę terpę, galiojimo laikas yra 8 savaitės nuo pagaminimo datos.
Sudėtis
Sudedamosios dalys
mg/l
Neorganinės druskos
Kalcio chloridas x 2H2O
264,92
Geležies (III) nitratas x 9H2O
0,72
Magnio sulfatas
97,67
Kalio chloridas
400,00
Natrio acetatas x 3H2O
82,95
Natrio chloridas
6,800.00
Natrio dihidrogenfosfatas x H2O
140,00
Kiti komponentai
Adenino sulfatas
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Cholesterolis
0,20
2'-deoksiribozė
0,50
D(+)-gliukozė bevandenė
1,000.00
Glutationas (raudonas)
0,05
Guaninas x HCl
0,30
Hipoksantinas
0,30
Raudonasis fenolis
10,00
D-ribozė
0,50
Timinas
0,30
Tween 80
4,90
Uracilas
0,30
Ksantinas
0,30
NaHCO3
2,200.00
Amino rūgštys
L-alaninas
25,00
L-argininas x HCl
70,00
L-asparto rūgštis
30,00
L-cisteinas x HCl x H2O
0,10
L-cistinas
20,00
L-Glutaminas stabilus
149,00
L-gliutamo rūgštis
67,00
Glicinas
50,00
L-histidinas x HCl x H2O
21,88
L-hidroksiprolinas
10,00
L-izoleucinas
20,00
L-leucinas
60,00
L-lizinas x HCl
70,00
L-metioninas
15,00
L-fenilalaninas
25,00
L-prolinas
40,00
L-serinas
25,00
L-treoninas
30,00
L-triptofanas
10,00
L-tirozinas
40,00
L-Valinas
25,00
Vitaminai
4-amino benzenkarboksirūgštis
0,05
Askorbo rūgštis
0,05
D(+)-biotinas
0,01
Kalciferolis
0,10
D-kalcio pantotenatas
0,01
Cholino chloridas
0,50
Folio rūgštis
0,01
mio-izitolis
0,05
Menadionas
0,01
Nikotino rūgštis
0.025
Nikotinamidas
0.025
Piridoksalio x HCl
0.025
Piridoksolis x HCl
0.025
Riboflavinas
0,01
DL-α-tokoferolio fosfato dinatrio druska
0,01
Tiaminas x HCl
0,01
Vitamino A acetatas
0,14
IMDM gerai tinka greitai besidauginančioms, didelio tankio ląstelių kultūroms, įskaitant Jurkat, COS-7 ir makrofagų ląsteles. Įvairias IMDM modifikacijas, skirtas įvairioms ląstelių kultūrų reikmėms, galite rasti naudodamiesi terpių pasirinkimo įrankiu. Skystosios terpės suteikia svarbiausių maistinių medžiagų visoms ląstelių kultūrų naudojimo sritims. Kiekviena mūsų aukštos kokybės ląstelių kultūrų terpė gaminama pagal iš pradžių paskelbtą formulę arba jos modifikacijas, būtinas nuosekliam kultūros terpės veikimui ir stabilumui užtikrinti.
IMDM ir DMEM
IMDM sudėtyje yra kalio nitrato vietoj geležies nitrato ir HEPES bei natrio piruvato. Dėl papildomų komponentų IMDM yra tinkamesnė specializuotiems ląstelių tipams ir specifiniams taikymams nei DMEM.
IMDM ir RPMI
IMDM ir RPMI turi skirtingas sudėtis, kurios gali būti svarbios PMA ir jonomicino stimuliacijai. Vienas iš reikšmingų skirtumų yra Ca2+ koncentracija. RPMI yra 0,42 mM Ca2+, o IMDM
- 1,49 mM.
Kokybės kontrolė
pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C temperatūroje.
Kiekviena partija buvo patikrinta dėl sterilumo ir mikoplazmos bei bakterijų nebuvimo.
Priežiūra
Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsoje. Užšaldymas ir pašildymas iki +37 °C sumažina produkto kokybę.
Nešildykite terpės iki aukštesnės nei 37° C temperatūros ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių (pvz., mikrobangų krosnelės prietaisų).
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, išimkite šį kiekį iš buteliuko ir pašildykite jį kambario temperatūroje.
Bet kurios terpės, išskyrus pagrindinę terpę, galiojimo laikas yra 8 savaitės nuo pagaminimo datos.
Sudėtis
Sudedamosios dalys
mg/l
Neorganinės druskos
Kalcio chloridas x 2 H2O
219,00
Kalio chloridas
330,00
Kalio nitratas
0.076
Bevandenis magnio sulfatas
97,73
Natrio chloridas
4,505.00
Bevandenis natrio dihidrogenfosfatas
109,00
Natrio selenitas
0,02
Kiti komponentai
D(+)-gliukozė bevandenė
4,500.00
HEPES
5,958.00
Natrio piruvatas
110,00
Raudonasis fenolis
15,00
Amino rūgštys
L-alaninas
25,00
L-argininas x HCl
84,00
L-asparaginas x H2O
25,00
L-asparagino rūgštis
30,00
L-cistinas x 2HCl
91,24
L-glutaminas
584,00
L-gliutamo rūgštis
75,00
Glicinas
30,00
L-histidinas x HCl x H2O
42,00
L-izoleucinas
104,80
L-leucinas
104,80
L-lizinas x HCl
146,20
L-metioninas
30,00
L-fenilalaninas
66,00
L-prolinas
40,00
L-serinas
42,00
L-treoninas
95,20
L-triptofanas
16,00
L-tirozinas x 2Na
104,20
L-Valinas
93,60
Vitaminai
D(+)-biotinas
0.013
D-kalcio pantotenatas
4,00
Cholino chloridas
4,00
Folio rūgštis
4,00
mio-izitolis
7,20
Ląstelių kultūrų terpės: Apžvalga
Gyvybės mokslų srityje viena svarbiausių metodikų yra ląstelių kultūros. Ląstelių, audinių ar organų paėmimas iš gyvūno ar augalo ir vėlesnis šių ląstelių, audinių ar organų implantavimas į dirbtinę aplinką, palankią jų išgyvenimui ir (arba) augimui, yra tai, ką reiškia žodžių junginys "ląstelių kultūra" Pagrindiniai aplinkos poreikiai optimaliam ląstelių vystymuisi yra kontroliuojama temperatūra, substratas ląstelėms prisitvirtinti, tinkama augimo terpė ir inkubatorius, kuriame palaikomas optimalus pH ir osmoliškumas. Ląstelėms turi būti sudarytos šios sąlygos, kad jos galėtų augti iki galo.
Tinkamos auginimo terpės parinkimas auginant in vitro yra svarbiausias ir gyvybiškai svarbiausias ląstelių auginimo etapas. Augimo terpė, dar vadinama auginimo terpe, yra skystis arba gelis, sukurtas organizmų vystymuisi mikroskopiniu, ląsteliniu arba augaliniu mastu skatinti. Ląstelėms auginti naudojamoje terpėje dažnai būna pakankamai energijos ir medžiagų, kontroliuojančių ląstelių ciklą. Pagrindiniai terpės komponentai yra aminorūgštys, vitaminai, neorganinės druskos, gliukozė ir serumas. Serumo į terpę dedama todėl, kad jis yra augimo veiksnių, hormonų ir prisijungimo veiksnių šaltinis. Be maistinių medžiagų, terpė taip pat padeda palaikyti pH ir osmoliškumo lygį.
Ląstelių kultūroje naudojamos terpės tipai
Tiek žmogaus, tiek gyvūnų ląsteles galima auginti dirbtinėje ar sintetinėje terpėje arba visiškai natūralioje terpėje, papildytoje natūraliais elementais. Toliau apžvelgsime įvairias šiuo metu prieinamas terpes.
Natūralios terpės
Natūraliose terpėse gali būti tik natūraliai egzistuojantys biologiniai skysčiai. Natūralios terpės yra labai naudingos ir nesudėtingos auginant įvairius gyvūnų ląstelių tipus. Tikslių natūralias terpes sudarančių komponentų supratimo trūkumas yra pagrindinis veiksnys, lemiantis mažą rezultatų, gautų naudojant natūralias terpes, pakartojamumą.
Dirbtinės terpės
Ruošiant dirbtines arba sintetines terpes pridedama maistinių medžiagų (organinių ir neorganinių), serumo baltymų, angliavandenių, kofaktorių, vitaminų ir druskų, taip pat O2 ir CO2 dujų fazių [1].
Sukurta įvairių tipų dirbtinių terpių, kad jos atliktų vieną ar kelias toliau išvardytas funkcijas: 1) nedelsiant išgyventi (subalansuotas druskų tirpalas su tiksliu pH ir osmosiniu slėgiu). 2) Ilgalaikis išgyvenimas (subalansuotas druskų tirpalas, papildytas įvairių sudėčių organinėmis cheminėmis medžiagomis ir (arba) serumu). 3) Neribotas vystymasis. 4) Specializuotos funkcijos.
Yra keturios skirtingos dirbtinių terpių klasifikacijos:
Serumo turinčios terpės
Dažniausiai pasitaikanti papildų rūšis, randama terpėse, naudojamose gyvūninėms ląstelėms auginti, yra fetalinis galvijų serumas. Jis dedamas į mitybos terpę kaip pigus priedas, kad būtų pasiektos kuo geresnės augimo sąlygos. Serumas ne tik perneša arba chelatuoja nestabilias arba vandenyje netirpias maistines medžiagas, hormonus ir augimo veiksnius, proteazės inhibitorius ir kitas medžiagas, bet ir suriša bei neutralizuoja kenksmingas molekules.
Serumo neturinti terpė
Serumo buvimas terpėje turi nemažai trūkumų ir gali sukelti didelių interpretavimo klaidų atliekant imunologinius tyrimus [2, 3]. Sukurta daug įvairių terpių be serumo [4, 5]. Šios terpės paprastai yra specialiai sukurtos vieno tipo ląstelių kultūrai palaikyti, pavyzdžiui, Thermo Fisher Scientific Knockout Serum Replacement ir Knockout DMEM, Stem Cell Technologies mTESR terpė [6], skirta kamieninėms ląstelėms [7].
Be to, į šias terpes įeina apibrėžti kiekiai išgrynintų augimo veiksnių, lipoproteinų ir kitų baltymų, kurie kitu atveju paprastai gaunami iš serumo [8]. Šios terpės dažnai vadinamos "apibrėžtomis kultūrinėmis terpėmis", nes jas sudarantys komponentai yra gerai žinomi.
Chemiškai apibrėžtos terpės
Šias terpes sudaro itin gryni neorganiniai ir organiniai komponentai, kurie nebuvo užteršti jokiais teršalais. Jose taip pat gali būti grynų baltymų priedų, pavyzdžiui, augimo veiksnių.
genetiškai modifikuojant bakterijas ar mieles ir pridedant tam tikrų riebalų rūgščių, vitaminų, cholesterolio ir aminorūgščių, gaminamos jų sudedamosios dalys [9].
Bebaltyminės terpės
Bebaltyminės terpės - tai tokios terpės, į kurių sudėtį iš viso neįeina baltymai, o tik nebaltyminiai elementai. Palyginti su terpėmis, į kurias pridėta serumo, terpės be baltymų skatina didesnį ląstelių dauginimąsi ir baltymų raišką, be to, lengviau išgryninti bet kokį tolesnio proceso metu susidariusį produktą [10-12]. Į tokias terpes, kaip MEM ir RPMI-1640, baltymai neįtraukiami. Tačiau, jei reikia, baltyminis priedas gali būti skiriamas.
Kultūrų terpė ir pagrindiniai jos komponentai
Komercinę mitybinę terpę galima įsigyti miltelių arba skysčio pavidalu, į jos sudėtį dažnai įeina įvairios maistinės medžiagos, pavyzdžiui, aminorūgštys, gliukozė, druskos, vitaminai ir kiti maisto papildai.
Šių komponentų poreikis kiekvienai ląstelių linijai yra skirtingas, ir šie skirtumai lemia daugybę skirtingų terpių sudėčių. Kiekvienas komponentas yra atsakingas už tam tikrą funkciją, kuri bus aprašyta tolesniuose punktuose:
Buferinės sistemos
Norint palaikyti optimalias auginimo sąlygas, reikia kontroliuoti pH, o tai dažnai daroma naudojant vieną iš dviejų buferinių sistemų:
Natūrali buferinė sistema
Atmosferoje esantis CO2 ir H2CO3 santykis yra lygus terpės santykiui, todėl sukuriamas natūralus buferinis mechanizmas. Siekiant išsaugoti natūralų buferinį mechanizmą, kultūros turi būti laikomos oro aplinkoje, kurioje yra 5-10 % CO2, o tai dažnai pasiekiama naudojant CO2 inkubatorių. Vienas iš geriausių natūralaus buferinio mechanizmo naudojimo aspektų yra tai, kad jis yra pigus ir saugus.
HEPES
Cheminė buferizacija naudojant cviterjoną HEPES pasižymi didesniu buferiškumu 7,2-7,4 pH intervale ir jam nereikia reguliuojamos dujinės aplinkos. Tam tikrų tipų ląstelėms didesnė HEPES dozė gali būti kenksminga. Terpės, kuriose yra HEPES, taip pat daug jautresnės fluorescencinės šviesos fototoksiniam poveikiui [13].
Raudonasis fenolis
PH indikatoriaus fenolio raudonojo dažnai dedama į komerciškai prieinamas mitybines terpes, todėl galima nuolat stebėti pH. Plečiantis ląstelėms, jų gaminami metabolitai sukelia pH pokytį, todėl keičiasi terpės spalva. Fenolo raudonasis turi dvejopą poveikį terpės spalvai: esant rūgštiniam pH ji tampa geltona, o esant šarminiam pH - violetinė. pH 7,4 - optimali vertė ląstelių kultūroms - lemia, kad terpė tampa fluorescuojančiai raudona.
Tačiau fenolio raudonasis turi keletą trūkumų: Pirma, fenolio raudonasis gali imituoti daugelio steroidinių hormonų, pirmiausia estrogeno, veikimą [14]. Todėl tiriant estrogenams jautrias ląsteles, pavyzdžiui, krūties audinį, rekomenduojama naudoti terpę be fenolio raudonojo. Natrio ir kalio pusiausvyra sutrinka dėl to, kad keliuose preparatuose be serumo yra fenolio raudonojo. Į terpę pridėjus serumo arba galvijų hipofizės hormono, šis poveikis gali būti neutralizuotas [15]. Trečia, fenolo raudonojo kiekis trukdo aptikti kraujo kūnelius atliekant srauto citometrinius eksperimentus.
Neorganinės druskos
Neorganinių druskų, tokių kaip natrio, kalio ir kalcio jonai, turinčios terpės padeda palaikyti osmosinę pusiausvyrą ir reguliuoti membranos potencialą.
Aminorūgštys
Kadangi aminorūgštys yra pagrindinės baltymų sudedamosios dalys, jos yra būtina visų kada nors sukurtų ląstelių augimo terpių sudedamoji dalis. Kadangi ląstelės negali pačios pasigaminti tam tikrų aminorūgščių, labai svarbu, kad auginimo terpėje būtų nepakeičiamųjų aminorūgščių. Jos būtinos ląstelėms daugintis, o nuo jų koncentracijos priklauso, koks didžiausias ląstelių tankis gali būti pasiektas. Ypač svarbi yra nepakeičiamoji aminorūgštis L-glutaminas.
L-glutaminas veikia kaip antrinis energijos šaltinis medžiagų apykaitai ir prisideda azotu prie NAD, NADPH ir nukleotidų gamybos. Kadangi L-glutaminas yra nestabili aminorūgštis, kuri laikui bėgant pasikeičia į formą, kurios ląstelės negali panaudoti, jo turi būti duodama į terpę.
Be to, į terpę gali būti tiekiamos nepagrindinės aminorūgštys, kad būtų papildytos per augimo procesą sunaudotos aminorūgštys. Ląstelių augimas pagreitėja, o jų gyvybingumas padidėja, kai augimo terpė papildoma nepagrindinėmis aminorūgštimis.
Angliavandeniai
Angliavandeniai cukrų pavidalu yra pagrindinis energijos šaltinis. Į daugelį terpių, be labiau paplitusių gliukozės ir galaktozės cukrų, taip pat įeina maltozė ir fruktozė.
Baltymai ir peptidai
Dažniausiai naudojami baltymai ir peptidai yra albuminas, transferinas ir fibronektinas. Jie ypač svarbūs terpėse, kuriose nėra serumo. Albuminas, transferinas, aprotininas, fetuinas ir fibronektinas yra kai kurie baltymai, kurių galima rasti serume, kuriame gausu baltymų.
Albuminas yra pagrindinis kraujyje esantis baltymas, kurio funkcija - surišti ir pernešti įvairias medžiagas, įskaitant vandenį, druskas, laisvąsias riebalų rūgštis, hormonus ir vitaminus, tarp įvairių organų ir ląstelių. Dėl gebėjimo prisijungti prie cheminių medžiagų albuminas yra veiksmingas kandidatas šalinti kenksmingus junginius iš terpės, kurioje kultivuojamos ląstelės.
Aprotininas yra apsauginė medžiaga ląstelių kultūrų sistemose, nes jis yra stabilus esant neutraliam ir rūgščiam pH, taip pat atsparus aukštai temperatūrai ir destrukcijai, kurią gali sukelti proteolitiniai fermentai. Jis gali slopinti daugelį serino proteazių, tarp jų ir tripsiną.
Fetuinas yra glikoproteinas, kurio vaisiaus ir naujagimio serume galima aptikti didesnį kiekį, palyginti su suaugusių gyvūnų serumu. Be to, jis veikia kaip serininių proteazių inhibitorius. Baltymas fibronektinas yra esminis ląstelių sukibimo proceso komponentas. Transferinas yra baltymas, pernešantis geležį ir atsakingas už geležies perdavimą ląstelių membranoms.
Riebalų rūgštys ir lipidai
Jie atlieka svarbų vaidmenį terpėje be serumo, kai serumo nėra.
Vitaminai
Daugybė vitaminų yra būtini ląstelių vystymuisi ir dauginimuisi. Ląstelės negali pasigaminti pakankamo kiekio vitaminų, todėl jie yra būtini audinių kultūroje kaip maisto papildai.
Ląstelių kultūroje pagrindinis vitaminų šaltinis yra serumas, tačiau terpės taip pat apdorojamos įvairiais vitaminais, kad būtų tinkamos konkrečiam ląstelių tipui. Dažniausiai augimui skatinti naudojami B grupės vitaminai.
Mikroelementai
Cheminiai elementai, tokie kaip varis, cinkas, selenas ir tarpiniai trikarboksirūgščių junginiai, vadinami mikroelementais. Mikroelementų dažnai dedama į terpę, kurioje nėra serumo, siekiant pakeisti tuos, kurių paprastai yra serume. Šie elementai yra svarbūs cheminiai komponentai, reikalingi sveikam ląstelių vystymuisi. Daugelis biocheminių reakcijų priklauso nuo tam tikrų mikroelementų, pavyzdžiui, fermentų aktyvumo.
Terpės papildai
Tam tikroms ląstelių linijoms siūlomai visavertei augimo terpei reikia papildomų komponentų, kurių nėra bazinėje terpėje ir serume. Šie mitybos papildai palaiko ląstelių augimą ir tinkamą medžiagų apykaitos funkciją.
Nors hormonai, augimo veiksniai ir signalinės molekulės yra būtini tinkamam tam tikrų ląstelių linijų dauginimuisi, visada reikėtų imtis toliau nurodytų atsargumo priemonių: Kadangi papildai gali pakeisti visos augimo terpės osmoliškumą, o tai gali slopinti ląstelių vystymąsi, visada patartina patikrinti osmoliškumą po papildų pridėjimo. Daugumai ląstelių linijų optimalus osmolalumas svyruoja nuo 260 iki 320 mOSM/kg.
Antibiotikai
Antibiotikai dažnai naudojami bakterijų ir grybelinių teršalų vystymuisi slopinti [16], nors ląstelių augimui jie nėra būtini. Kadangi antibiotikai gali slėpti užterštumą mikoplazma ir atspariomis bakterijomis, jų įprastai naudoti ląstelių kultūroje nesiūloma [17, 18].
Be to, antibiotikai gali sutrikdyti padidėjusio jautrumo ląstelių medžiagų apykaitą. Dažnai naudojami "MilliporeSigma" ir "Life Technologies" gaminami penicilino ir streptomicino deriniai. Plasmocinas buvo naudojamas kultivuojant gliomos ląstelių linijas TS603, TS516 ir BT260 [19], be to, įrodyta, kad jis veiksmingai pašalina mikoplazminę taršą [20].
Serumas
Serume yra albuminų, augimo veiksnių ir augimo inhibitorių. Serumas yra vienas svarbiausių ląstelių kultūrų terpės komponentų, nes jame yra aminorūgščių, baltymų, vitaminų (ypač riebaluose tirpių vitaminų, tokių kaip A, D, E ir K), angliavandenių, lipidų, hormonų, augimo veiksnių, mineralų ir mikroelementų.
Kultūrinių ląstelių vystymuisi skatinti dažnai naudojamas vaisiaus ir veršelių serumas. Fetalinis serumas yra gausus augimo veiksnių šaltinis ir tinka ląstelių klonavimui bei jautrių ląstelių vystymuisi. Dėl mažesnių augimo skatinimo galimybių veršelių serumas naudojamas kontaktinio slopinimo eksperimentams. Įprastose augimo terpėse dažnai būna nuo 2 iki 10 % serumo. Serumo į auginimo terpę pridedama šiais tikslais [21]:
-
Serumas suteikia ląstelėms būtinų maistinių medžiagų (tiek tirpale, tiek prisijungęs prie baltymų).
-
Į serumo sudėtį įeina keletas augimo veiksnių ir hormonų, susijusių su augimo skatinimu ir specializuota ląstelių veikla.
-
Jame yra daug jungiamųjų baltymų, pavyzdžiui, albumino ir transferino, kurie perneša kitas chemines medžiagas į ląstelę. Pavyzdžiui, albuminas į ląsteles perneša riebalus, vitaminus, hormonus ir kt.
-
Jame taip pat yra baltymų, pavyzdžiui, fibronektino, kurie didina ląstelių sukibimą su substratu. Be to, jis gamina plitimo elementus, kurie padeda ląstelei plėstis prieš dalijimąsi.
-
Jis tiekia proteazės inhibitorius, kurie apsaugo ląsteles nuo proteolizės.
-
Jame taip pat yra mineralinių medžiagų, tokių kaip Na+, K+, Zn2+ ir Fe2+.
-
Jis didina terpės klampumą, todėl apsaugo ląsteles nuo mechaninio pažeidimo maišant suspensijos kultūrą.
-
Jis taip pat yra buferinė medžiaga.
Nuorodos
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Gyvūnų ląstelių mityba audinių kultūroje; pirmieji sintetinės terpės tyrimai. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. Rapid adsorption of a foetal calf serum component by mammalian cells in culture. Galimas artefaktų šaltinis tiriant antiserumus ląstelėms būdingiems antigenams. Immunology. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Serumo pridėjimas į terpę, naudojamą ląstelių suspensijoms ruošti, kaip galimas artefaktų šaltinis atliekant ląstelėmis tarpininkaujamų reakcijų tyrimus poplitealinio limfmazgio testu. J Immunogenet. 1980;7:483-9
[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Komercinės terpės be serumo: hibridomų augimas ir monokloninių antikūnų gamyba. J Immunol Methods. 1991;145:175-83
[5] Barnes D, Sato G. Methods for growth of cultured cells in serumo neturinčioje terpėje. Anal Biochem. 1980;102:255-70
[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O,et al. HSP70 chaperones RNA-free TDP-43 into anisotropic intranuclear liquid spherical shells. Science. 2021;371:
[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J,et al. Down-syndrome-induced senescence disrupts nuclear architecture of neural progenitors. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. Visiškas serumo pakeitimas albuminu, transferinu ir sojos lipidais lipopolisacharidui jautrių B limfocitų kultūrose. J Exp Med. 1978;147:923-33
[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Systematic improvement of a chemically-defined protein-free medium for hybridoma growth and monoclonal antibody production. J Biotechnol. 1996;45:111-23
[10] Darfler F. A protein-free medium for growth of hybridomas and other cells of the immune system. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78
[11] Barnes D, Sato G. Serumo neturinčios ląstelių kultūros: vienijantis požiūris. Cell. 1980;22:649-55
[12] Hamilton W, Ham R. Clonal growth of chinese hamster cell lines in protein-free media. In Vitro. 1977;13:537-47
[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Analysis of the cytotoxic effects of light-exposed HEPES-containing culture medium. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7
[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Phenol red in tissue culture media is a weak estrogen: implications concerning the study of estrogen-responsive cells in culture. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500
[15] Karmiol S. Serumo neturinčių terpių kūrimas. In: Master JRW, redaktorius. Animal Cell culture, 3rd ed. Oxford: Oxford University Press; 2000.
[16] Perlman D. Antibiotikų naudojimas ląstelių kultūrų terpėse. Methods Enzymol. 1979;58:110-6
[17] McGarrity G. Mikoplazminės infekcijos plitimas ir kontrolė ląstelių kultūrose. In Vitro. 1976;12:643-8
[18] Masters J, Stacey G. Changing medium and passaging cell lines (terpės keitimas ir ląstelių linijų perėjimas). Nat Protoc. 2007;2:2276-84
[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M,et al. Histonų demetilazė KDM6A tiesiogiai jaučia deguonį, kad kontroliuotų chromatiną ir ląstelių likimą. Science. 2019;363:1217-1222
[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M,et al. Efficiency of Plasmocin™ on various mammalian cell lines infected by mollicutes in comparison with commonly used antibiotics in cell culture: a local experience. Cytotechnologija. 2011;63:609-20
[21] Kragh Hansen U. Molecular aspects of ligand binding to serum albumin (Molekuliniai ligandų prisijungimo prie serumo albumino aspektai). Pharmacol Rev. 1981;33:17-53