Ląstelių kultūros terpės

Viena iš plačiausiai naudojamų sintetinių ląstelių kultūrų terpių yra "Minimum Essential Medium Eagle" (MEM). Ši terpė, kurią sukūrė Harry Eagle'as, pirmą kartą buvo pristatyta 1959 m. ir nuo to laiko tapo populiariu pasirinkimu įvairių tipų ląstelėms, auginamoms monosluoksniuose ir adherentinėse ląstelių linijose.
Kas yra EMEM?
EMEM yra modifikuota Eagle'o minimalios būtinosios terpės versija, kurioje yra Earle'o subalansuotas druskų tirpalas, nepagrindinės aminorūgštys, L-glutaminas, natrio piruvatas ir natrio bikarbonatas. Svarbu pažymėti, kad toks natrio bikarbonato kiekis skirtas naudoti 5 % CO2 ore. Kad terpė išliktų veiksminga, nenaudojamą terpę rekomenduojama laikyti 2-8 °C temperatūroje tamsoje.
Kam naudojama EMEM?
Eagle's minimal essential medium (EMEM)
- tai ląstelių kultūrų terpė, kurioje galima išlaikyti ląsteles audinių kultūroje. Šioje terpėje yra didesnė aminorūgščių koncentracija, todėl galima tiksliau priartinti auginamų žinduolių ląstelių baltymų sudėtį. EMEM gali būti naudojama įvairioms ląstelėms, įskaitant fibroblastus, žmogaus kepenų vėžio ląstelių linijos (HepG2) ląsteles ir žmogaus vaisiaus smegenų progenitorių astrocitų (PDA) ląsteles, auginti. Paprastai jis naudojamas su galvijų vaisiaus serumu (FBS), veršelių arba arklių serumais.
Kuo EMEM skiriasi nuo kitų ląstelių kultūrų terpių?
EMEM ir Dulbeko modifikuota Eagle'o terpė (DMEM) turi tam tikrų panašumų, tačiau jos taip pat skiriasi. Abiejose terpėse nėra baltymų, tačiau yra aminorūgščių, druskų, gliukozės ir vitaminų, reikalingų ląstelei aprūpinti energija ir išlaikyti ją audinių kultūroje. Tačiau DMEM sudėtis modifikuota taip, kad joje būtų iki keturių kartų daugiau vitaminų ir aminorūgščių bei nuo dviejų iki keturių kartų daugiau gliukozės nei EMEM. Verta paminėti, kad EMEM taip pat skiriasi nuo originalios MEM sudėties.


Kokybės kontrolė

Steriliai filtruotas


Laikymas ir galiojimo laikas

Laikyti nuo +2 °C iki +8 °C temperatūroje, saugoti nuo šviesos.
Atidarius laikyti 4°C temperatūroje ir sunaudoti per 6-8 savaites.


Gabenimo sąlygos

Aplinkos temperatūra


Priežiūra

Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsioje vietoje. Venkite užšaldymo ir dažno pašildymo iki +37°C, nes tai pablogina produkto kokybę.
Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37°C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pavyzdžiui, mikrobangų krosnelių.
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite iki kambario temperatūros.



Sudėtis



Kategorija
Sudedamosios dalys
Koncentracija (mg/l)


Aminorūgštys
L-arginino HCl
126.00


L-cistinas 2 HCl
31.30


L-glutaminas
292.00


L-histidinas HClH2O
42.00


L-izoleucinas
52.00


L-leucinas
52.00


L-lizinas HCl
72.50


L-metioninas
15.00


L-fenilalaninas
32.00


L-treoninas
48.00


L-triptofanas
10.00


L-tirozinas 2 Na 2H2O
51.90


L-Valinas
46.00


Vitaminai
Cholino chloridas
1.00


Vitaminai
D-kalcio pantotenatas
1.00


Folio rūgštis
1.00


mio-izitolis
2.00


Nikotinamidas
1.00


Piridoksalio HCl
1.00


Riboflavinas
0.10


Tiamino HCl
1.00


Neorganinės druskos
CaCl2 2H2O
265.00


Neorganinės druskos
KCl
400.00


MgSO4
97.67


NaCl
6800.00


NaHCO3
2200.00


NaH2PO4
122.00


Kiti komponentai
D-gliukozė
1000.00


Kiti komponentai
Fenolio raudonojo natrio druska
11.00

"Cytion" užšaldymo terpė CM-1 yra naujausia kriokonservavimo terpė, sukurta siekiant užtikrinti aukščiausio lygio ląstelių gyvybingumą ir funkcionalumą po atšildymo. Ši universali terpė tinka įvairiems ląstelių tipams, įskaitant ir žmogaus, ir gyvūnų ląsteles, todėl ji yra labai svarbi priemonė įvairiems tyrimams. Sudaryta iš kruopščiai subalansuoto krioprotektorių ir pagrindinių maistinių medžiagų derinio, užšaldymo terpė CM-1 sumažina ledo kristalų susidarymą ir ląstelių stresą šaldymo proceso metu, todėl išsaugo ląstelių vientisumą.
Pagrindinės "Freeze Medium CM-1" savybės:

Platus suderinamumas: Veiksminga įvairių tipų ląstelėms, įskaitant pirmines ląsteles, kamienines ląsteles ir nustatytas ląstelių linijas.
Didelis gyvybingumas: Optimizuota taip, kad po atšildymo ląstelės kuo geriau atsistatytų ir taptų gyvybingos, užtikrinant patikimus eksperimentų rezultatus.
Paruošta naudoti: Patogiai paruoštos ir sterilizuotos, kad būtų galima iš karto naudoti, todėl sutrumpėja paruošimo laikas ir sumažėja užteršimo rizika.
Geresnis stabilumas: Išlaikomas pastovus veikimas standartinėmis kriokonservavimo sąlygomis, užtikrinant atkuriamus rezultatus.
Ilgas galiojimo laikas: CM-1 yra serumo turinti, paruošta naudoti kriokonservavimo terpė, kurią šaldytuve galima laikyti iki vienerių metų.


CM-1 naudojimas ląstelėms šaldyti

Norėdami naudoti CM-1 adherentinėms ir suspensijos ląstelėms užšaldyti, atlikite šiuos veiksmus

Jei ląstelės yra adherentinės, nuplaukite ir atskirkite jas nuo kultūros substrato. Jei tai yra suspensijos ląstelės, pereikite tiesiai prie kito veiksmo.
Suskaičiuokite ląsteles, kad įsitikintumėte, jog jos yra tinkamos koncentracijos.
Centrifuguokite ląsteles, kad jos subyrėtų, tada vėl ištirpinkite CM-1 užšaldymo terpėje.
Resuspenduotas ląsteles perkelkite į kriokameras.
Prieš perkeldami ląsteles į ilgalaikį saugojimą, naudokite lėto šaldymo metodą





Metodas
Aprašymas
Žingsniai





❄️
Rankinis užšaldymas

Žingsnis po žingsnio taikomas metodas, kai temperatūra palaipsniui mažinama, kad būtų užtikrintas ląstelių gyvybingumas

1️⃣ Įdėkite ląsteles į užšaldymo terpę ir 40 min. palaikykite 4 °C temperatūros šaldiklyje.
2️⃣ Perkelkite į -80 °C šaldiklį 24 valandoms.
3️⃣ Ilgalaikiam saugojimui ląsteles laikykite skystame azote



❄️
"Mr. Frosty" naudojimas

Patogus prietaisas, leidžiantis kontroliuoti užšaldymo greitį be elektros energijos

1️⃣ Paruoškite ląsteles kriokūnelėse su užšaldymo terpe.
2️⃣ Įdėkite kriovialus į "Mr. Frosty" konteinerį.
3️⃣ Prieš perkeliant į skystą azotą, 24 valandas laikykite -80 °C temperatūroje



❄️
Kontroliuojamo greičio šaldiklis

Labai tikslus "Thermo Fisher" ar kitų gamintojų šaldiklis, skirtas kontroliuojamam temperatūros sumažinimui

1️⃣ Užprogramuokite prietaisą taip, kad jis palaipsniui mažintų temperatūrą.
2️⃣ Į šaldiklį įdėkite paruoštas ląsteles.
3️⃣ Po šaldymo ciklo ląsteles perkelkite į skystą azotą









Laikykite kriokūnelius žemesnėje nei -130 °C temperatūroje arba skystame azote, kad būtų galima ilgai saugoti.


Sudėtis

Sudėtyje yra FBS, DMSO, gliukozės, druskų
Buferinė geba: pH = 7,2-7,6


"Cytion" užšaldymo terpė CM-1 yra patikimas kriokonservavimo sprendimas, užtikrinantis aukštą ląstelių gyvybingumą ir funkcionalumą po atšildymo įvairiems tyrimams.

Pristatome "Ham's F-12K" (Kaighn's) terpę
- specializuotą "Ham's F-12" terpės modifikaciją, sukurtą atsižvelgiant į unikalius biologinių tyrimų reikalavimus. Ši patobulinta terpė pasižymi išskirtiniais privalumais, nes pagerina pirminių žmogaus hepatocitų, taip pat žiurkių ir vištų kepenų ląstelių kultivavimą, ypač esant sumažintam serumo kiekiui.

Ham's F-12K (Kaighn's) terpė yra kruopščiai sukurta siekiant optimizuoti ląstelių auginimo sąlygas. Jos sudėtis yra praturtinta, todėl joje yra padidintas pagrindinių komponentų, tokių kaip aminorūgštys ir natrio piruvatas, kiekis, taip pat papildomų elementų, įskaitant putresciną, timidiną, hipoksantiną ir cinką. Šie priedai leidžia tyrėjams papildyti terpę minimaliu serumo kiekiu arba tam tikrų ląstelių tipų komponentais, taip palengvinant tikslių eksperimentų sąlygas.

Pažymėtina, kad Ham's F-12K (Kaighn's) terpėje nėra baltymų ar augimo veiksnių. Todėl dažnai reikia papildyti augimo veiksniais ir galvijų vaisiaus serumu (FBS), todėl tyrėjai gali pritaikyti terpę pagal konkrečių ląstelių linijų reikalavimus. Siekiant optimalių rezultatų, FBS koncentracija turi būti kruopščiai optimizuota kiekvienai ląstelių linijai, kad būtų užtikrintas optimalus augimas ir funkcionalumas.

Siekiant palaikyti fiziologinį pH, Ham's F-12K (Kaighn's) terpėje naudojama natrio bikarbonato buferinė sistema (2,5 g/l), todėl auginimo metu būtina palaikyti kontroliuojamą 5-10 % CO2 aplinką. Tai užtikrina, kad terpės pH išliktų idealioje ląstelių augimui ir gyvybingumui ribose
Kokybės kontrolė

pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C temperatūroje.
Kiekviena partija buvo patikrinta dėl sterilumo ir mikoplazmos bei bakterijų nebuvimo.

Priežiūra

Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsoje. Užšaldymas ir pašildymas iki +37°C sumažina produkto kokybę.
Nešildykite terpės iki aukštesnės nei 37°C temperatūros ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių (pvz., mikrobangų krosnelės prietaisų).
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, išimkite šį kiekį iš buteliuko ir pašildykite jį kambario temperatūroje.
Bet kurios terpės, išskyrus pagrindinę terpę, galiojimo laikas yra 8 savaitės nuo pagaminimo datos.

Sudėtis




Sudedamosios dalys
mg/l


Neorganinės druskos
Kalcio chloridas x 2H2O
135,24



Vario(II) sulfatas x 5H2O
0,00



Geležies (II) sulfatas x 7H2O
0,83



Magnio chloridas x 6H2O
105,72



Magnio sulfatas x 7H2O
394,49



Kalio chloridas
283,29



Kalio dihidrogenfosfatas
58,52



Natrio chloridas
7597,20



dinatrio vandenilio fosfatasbevandenis
115,02



Cinko sulfatas x 7H2O
0,14


Kiti komponentai
D(+)-gliukozė, bevandenė
1260,00



Hipoksantinas
4,08



DL-α-lipoinė rūgštis
0,21



Raudonasis fenolis
3,00



Putrescinas x 2HCl
0,32



Natrio piruvatas
220,00



NaHCO3
2500,00



Timidinas
0,73


Amino rūgštys
L-alaninas
17,82



L-argininas x HCl
421,40



L-asparaginas x H2O
30,02



L-asparagino rūgštis
26,62



L-cisteinas x HCl x H2O
70,24



L-glutaminas
292,20



L-gliutamo rūgštis
29,42



Glicinas
15,01



L-histidinas x HCl x H2O
41,92



L-izoleucinas
7,87



L-leucinas
26,24



L-lizinas x HCl
73,04



L-metioninas
8,95



L-fenilalaninas
9,91



L-prolinas
69,06



L-serinas
21,02



L-treoninas
23,82



L-triptofanas
4,08



L-tirozinas
10,87



L-Valinas
23,42


Vitaminai
D(+)-biotinas
0,07



D-kalcio pantotenatas
0,48



Cholino chloridas
13,96



Folio rūgštis
1,32



mio-izitolis
18,02



Nikotinamidas
0,04



Piridoksinas x HCl
0,06



Riboflavinas
0,04



Tiaminas x HCl
0,34



Vitaminas B12
1,36

RPMI 1640 terpė, dar žinoma kaip RPMI terpė, yra labai universali ląstelių kultūrų terpė, plačiai naudojama biologiniuose tyrimuose įvairioms žinduolių ląstelėms auginti. Šios terpės pavadinimą 1966 m. sukūrė George'as E. Moore'as, Robertas E. Gerneris ir H. Addisonas Franklinas garsiajame Roswell Park Comprehensive Cancer Center, o jos pavadinimas kilo iš Roswell Park Memorial Institute (RPMI).
Iš pradžių sukurta žmogaus leukeminėms ląstelėms auginti suspensinėse ir viensluoksnėse kultūrose, RPMI 1640 terpė, mokslininkams ir komerciniams tiekėjams ją modifikavus, tapo tinkama įvairioms žinduolių ląstelėms. Ji itin suderinama su tokiomis ląstelių linijomis kaip HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrocitais ir karcinomomis.
RPMI 1640 terpė išsiskiria iš kitų ląstelių kultūrų terpių dėl savo unikalios sudėties. Joje yra daug fosfatų, aminorūgščių ir vitaminų. Ypač daug biotino, vitamino B12 ir PABA, kurių nėra Eagle's Minimal Essential Medium arba Dulbecco's Modified Eagle Medium. Be to, RPMI 1640 terpėje yra gerokai didesnė vitaminų inozitolio ir cholino koncentracija. Tačiau joje nėra baltymų, lipidų ir augimo veiksnių. Todėl norint sudaryti optimalias sąlygas ląstelėms augti, paprastai reikia papildyti 10 % galvijų vaisiaus serumo (FBS).
RPMI 1640 terpės buferinė sistema priklauso nuo natrio bikarbonato, o fiziologiškai tinkamam pH palaikyti būtina 5-10 % CO2 aplinka. Šią terpę iš kitų terpių dar labiau išskiria tai, kad joje yra redukuojamosios medžiagos glutationo.
Kokybės kontrolė

Steriliai filtruota


Laikymas ir galiojimo laikas

Laikyti nuo +2 °C iki +8 °C temperatūroje, saugoti nuo šviesos.
Atidarytą laikykite 4 °C temperatūroje ir sunaudokite per 6-8 savaites.


Gabenimo sąlygos

Aplinkos temperatūra


Priežiūra

Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsioje vietoje. Venkite užšaldymo ir dažno pašildymo iki +37°C, nes tai pablogina produkto kokybę.
Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37°C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pavyzdžiui, mikrobangų krosnelių.
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite iki kambario temperatūros.



Sudėtis




Kategorija
Sudedamosios dalys
Koncentracija (mg/l)


Aminorūgštys
Glicinas
10.00



L-alanil-L-gliutaminas
434.40



L-argininas
200.00



L-asparaginasH2O
56.82



L-asparagino rūgštis
20.00



L-cistinas 2HCl
65.20



L-gliutamo rūgštis
20.00



L-histidinas HClH2O
20.27



L-Hidroksi-L-Prolinas
20.00



L-izoleucinas
50.00



L-leucinas
50.00



L-lizinas HCl
40.00



L-metioninas
15.00



L-fenilalaninas
15.00



L-prolinas
20.00



L-serinas
30.00



L-treoninas
20.00



L-triptofanas
5.00



L-tirozinas 2Na 2H2O
28.83



L-Valinas
20.00


Vitaminai
p-amino benzenkarboksirūgštis
1.00



D-biotinas
0.20



Cholino chloridas
3.00



D-kalcio pantotenatas
0.25



Folio rūgštis
1.00



mio-izitolis
35.00



Nikotinamidas
1.00



Piridoksino HCl
1.00



Riboflavinas
0.20



Tiamino HCl
1.00



Vitaminas B12
0.005


Neorganinės druskos
Ca(NO3)2 4H2O
100.00



KCl
400.00



MgSO4 7H2O
100.00



NaCl
6000.00



NaHCO3
2000.00



Na2HPO4
800.00


Kiti komponentai
D-gliukozė
2000.00



L-Glutationas redukuotas
1.00



Fenolio raudonojo natrio druska
5.30

DMEM: Ham's F12 yra plačiai pripažinta ir plačiai naudojama bazinė terpė ląstelių kultūroms biologiniuose tyrimuose. Ji yra pagrindinis maistinių medžiagų šaltinis įvairioms žinduolių ląstelių linijoms auginti, ypač kai ji papildyta galvijų vaisiaus serumu (FBS).

Šiame unikaliame preparate tiksliu santykiu 1:1 derinama Dulbeko modifikuota Eagle terpė (DMEM) ir Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12). Jos sudėtį dar labiau pagerina pridėtas L-glutaminas.

DMEM, gauta iš Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), pasižymi didesne aminorūgščių ir vitaminų koncentracija, palyginti su ankstesne terpe. Tuo tarpu Ham's F-12 sukurta iš Ham's F-10 terpės, todėl joje yra papildomas būtiniausių komponentų rinkinys.

Siekiant palaikyti optimalų ląstelių augimą, įprasta DMEM:Ham's F12 papildyti FBS, kurio koncentracija paprastai yra 5-10 %. Šis priedas būtinas, nes terpėje trūksta augimo hormonų, lipidų ir baltymų, būtinų ląstelių vystymuisi.

DMEM:Ham's F12 turi pH buferinę sistemą ir dažnai papildoma pH indikatoriumi
- fenol raudonuoju. DMEM:Ham's F12 arba bet kokioje terpėje, kurioje naudojama bikarbonatinė buferinė sistema, kultivuojamoms ląstelėms reikia kontroliuojamos 5-10 % CO2 aplinkos, kad būtų palaikomas tinkamas pH lygis.


Kokybės kontrolė

Steriliai filtruota


Laikymas ir galiojimo laikas

Laikyti nuo +2 °C iki +8 °C temperatūroje, saugoti nuo šviesos.
Atidarytą laikyti 4 °C temperatūroje ir sunaudoti per 6-8 savaites.


Gabenimo sąlygos

Aplinkos temperatūra


Priežiūra

Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsioje vietoje. Venkite užšaldymo ir dažno pašildymo iki +37°C, nes tai pablogina produkto kokybę.
Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37°C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pavyzdžiui, mikrobangų krosnelių.
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite iki kambario temperatūros.


Sudėtis



Kategorija
Sudedamosios dalys
Koncentracija (mg/l)


Aminorūgštys
Glicinas
18.75


L-alaninas
4.45


L-arginino HCl
147.50


L-asparaginas H₂O
7.50


L-asparto rūgštis
6.65


L-cisteino HCl H₂O
17.56


L-Cistinas 2 HCl
31.29


L-gliutamo rūgštis
7.35


L-gliutaminas
365.00


L-histidino HCl H₂O
31.48


L-izoleucinas
54.47


L-leucinas
59.05


L-lizinas HCl
91.25


L-metioninas
17.24


L-fenilalaninas
35.48


L-prolinas
17.25


L-serinas
26.25


L-treoninas
53.45


L-triptofanas
9.02


L-tirozino dinatrio druska
48.10


L-Valinas
52.85


Vitaminai
D-biotinas
0.0035


Cholino chloridas
8.98


D-kalcio pantotenatas
2.24


Folio rūgštis
2.66


mio-izitolis
12.60


Nikotinamidas
2.02


Piridoksino HCl
0.031


Piridoksalio HCl
2.00


Riboflavinas
0.219


Tiamino HCl
2.17


Vitaminas B12
0.68


Neorganinės druskos
CaCl₂ 2 H₂O
154.50



CuSO₄ 5 H₂O
0.0013



Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05



FeSO₄ 7 H₂O
0.417



KCl
311.80



MgCl₂ 6 H₂O
61.20



MgSO₄
48.84



NaCl
6996.00



NaHCO₃
1200.00



Na₂HPO₄
71.02



NaH₂PO₄
54.30



ZnSO₄ 7 H₂O
0.432


Kiti komponentai
D-gliukozė
3151.00


Hipoksantinas
2.40


HEPES
3574.50


Linolo rūgštis
0.042


Lipoinė rūgštis
0.105


Fenolio raudonojo natrio druska
8.63


Putrescinas 2 HCl
0.081


Natrio piruvatas
55.00


Timidinas
0.365

McCoy's 5A Medium yra labai rekomenduojama ir specializuota terpė, sukurta siekiant palengvinti virusų augimą ir replikaciją pirminėse ląstelių kultūrose. Ji pelnė didelį pripažinimą dėl išskirtinio našumo įvairiose biologinių tyrimų srityse. Viena iš žinomiausių McCoy's 5A terpės taikymo sričių yra jos naudojimas žmogaus storosios žarnos karcinomos ląstelių linijų kultūrose. Konkrečiai, ji buvo naudojama tirti leucino turtingą kartotinę G-baltymų jungtį turintį receptorių (LGR5) ir jo vaidmenį storosios žarnos vėžio metastazėse. Ši terpė buvo veiksmingai naudojama kelių storosios žarnos karcinomos ląstelių linijų, įskaitant HCT116, RKO, FET, CBS, HCT116b ir TENN, kultivavimui, leidžiant tyrėjams giliau ištirti storosios žarnos vėžio metastazių mechanizmus. Be to, kad McCoy's 5A terpė naudojama vėžio tyrimams, ji pasirodė esanti nepakeičiama osteoblastų tyrimams. Mokslininkai, tiriantys kalcio trūkumo hidroksiapatito jonų reaktyvumą standartinėse ląstelių kultūros terpėse, naudojo šią terpę osteoblastų kultūrai. Šis taikymas padėjo geriau suprasti osteoblastų ir kalcio trūkumo hidroksiapatito sąveiką, prisidėdamas prie pažangos kaulų tyrimų srityje. McCoy's 5A terpė buvo kruopščiai suformuluota modifikuojant amino rūgštis, esančias bazinėje terpėje Eagle, siekiant užtikrinti optimalų palaikymą kepenų naviko ląstelėms. Ši praturtinta formulė leidžia ją pritaikyti įvairioms žinomoms ląstelių linijoms, taip pat pirminėms ląstelėms, dar labiau padidindama jos universalumą ir pritaikomumą įvairiose tyrimų aplinkose. McCoy's 5A terpė turi biocheminį ir fiziologinį poveikį ne tik kepenų naviko ląstelėms. Ji sėkmingai naudojama pirminių kaulų čiulpų, odos, dantenų, inkstų, omentumo, antinksčių, plaučių, blužnies, žiurkių embrionų ir kitų ląstelių tipų augimui palaikyti. Šis platus taikymo spektras liudija apie McCoy's 5A terpės naudingumą palaikant įvairių ląstelių tipų augimą ir išlikimą visapusiškiems biologiniams tyrimams. Sudėtis Ši McCoy's 5A terpė (modifikuota) sudėtyje turi 3,0 g/l gliukozės, stabilaus glutamino, 2,0 mM natrio piruvato ir 2,2 g/l NaHCO3. Kokybės kontrolė pH = 7,2 +/
- 0,02 esant 20–25 °C temperatūrai.  Kiekviena partija buvo patikrinta dėl sterilumo ir mikoplazmos bei bakterijų nebuvimo. Laikymas Laikyti šaldytuve +2 °C iki +8 °C temperatūroje, tamsioje vietoje. Užšaldymas ir atšildymas iki +37 °C sumažina produkto kokybę.  Negalima kaitinti terpės iki aukštesnės nei 37 °C temperatūros arba naudoti nekontroliuojamų šilumos šaltinių (pvz., mikrobangų krosnelių).  Jei ketinate naudoti tik dalį terpės, išimkite šį kiekį iš butelio ir pašildykite kambario temperatūroje. Visų terpių, išskyrus bazinę terpę, galiojimo laikas yra 6–8 savaitės nuo atidarymo dienos. Sudėtis Komponentai mg/L Neorganinės druskosKalcio chloridas x 2H2O132,0 Magnio sulfatas97 Kalio chloridas400 Natrio chloridas6 460 Dinatrio vandenilio fosfatas (bevandenis)504 Kiti komponentaiD(+)-gliukozė (bevandenė)3 000 Glutationas (redukuotas)0 Mėsos peptonas600 Fenolio raudonoji natrio druska11 Amino rūgštysL-alaninas13 L-argininas x HCl42,1 L-asparaginas x H2O45,03 L-asparto rūgštis19,9 L-cisteinas x HCl x H2O31,75 L-glutaminas (stabilus)219,15 L-glutamo rūgštis22,07 Glicinas7 L-histidinas x HCl x H2O20,96 L-hidroksiprolinas19,67 L-izoleucinas39,3 L-leucinas39,36 L-lizinas x HCl36,54 L-metioninas14,92 L-fenilalaninas16,52 L-prolinas17,27 L-serinas26,28 L-treoninas17,87 L-triptofanas3,06 L-tirozino dinatrio druska26,1 L-valinas17,57 Vitaminaip-Aminobenzoinė rūgštis1 Askorbo rūgštis0,56 D(+)-biotinas0 D-kalcio pantotenatas0 Cholino chloridas5 Folio rūgštis10 Mio-inozitol36 Nikotinamidas0 Nikotino rūgštis0 Piridoksalo HCl0,5 Piridoksino HCl0,5 Riboflavinas0 Tiamino HCl0 Vitaminas B122

199 terpė yra universali ir plačiai naudojama ląstelių kultūrų terpė, specialiai sukurta pirminiams eksplantams auginti. Šioje visapusiškoje terpėje derinami svarbiausi vitaminai, aminorūgštys ir kiti veiksniai, kad būtų visiškai apibrėžtas maistinių medžiagų šaltinis įvairių tipų ląstelėms. Ji ypač tinka netransformuotoms ląstelėms, todėl yra neįkainojama biologinių tyrimų priemonė.
199 terpė siūlo daugybę pritaikymo sričių. Ji gali veiksmingai palaikyti kumulusų ir aocitų kompleksą (COC) ir palaikyti oocitų brendimą in vitro. Be to, ji naudojama skalaujant aspiracines linijas renkant kiaušialąstes iš Vokietijos holšteinų veislės karvių. Be to, 199 terpė yra puiki terpė iš žiurkių gautoms širdies endotelio ląstelėms auginti. Šie taikymai rodo terpės 199 universalumą ir pritaikomumą įvairiems eksperimentiniams poreikiams.
Istorija
XX a. šeštajame dešimtmetyje sukūrus terpę Nr. 199, padaryta didelė pažanga audinių kultūrų terpių srityje. Iki šios terpės atsiradimo daugelyje kultūrų terpių buvo naudojami gyvūninės kilmės produktai ir audinių ekstraktai. Tačiau Morganas ir jo kolegos padarė revoliuciją šioje srityje, sukurdami visiškai apibrėžtą mitybos šaltinį ląstelių kultūroms. Atlikdami eksperimentus su įvairiais vitaminų, aminorūgščių ir kitų veiksnių deriniais, jie atrado išskirtines augimą skatinančias 199 terpės savybes.
Kokybės kontrolė

pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C temperatūroje.
Kiekviena partija buvo patikrinta dėl sterilumo ir mikoplazmos bei bakterijų nebuvimo.

Priežiūra

Laikykite šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsoje. Užšaldymas ir pašildymas iki +37 °C sumažina produkto kokybę.
Nešildykite terpės iki aukštesnės nei 37° C temperatūros ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių (pvz., mikrobangų krosnelės prietaisų).
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, išimkite šį kiekį iš buteliuko ir pašildykite jį kambario temperatūroje.
Bet kurios terpės, išskyrus pagrindinę terpę, galiojimo laikas yra 8 savaitės nuo pagaminimo datos.

Sudėtis




Sudedamosios dalys
mg/l


Neorganinės druskos
Kalcio chloridas x 2H2O
264,92



Geležies (III) nitratas x 9H2O
0,72



Magnio sulfatas
97,67



Kalio chloridas
400,00



Natrio acetatas x 3H2O
82,95



Natrio chloridas
6,800.00



Natrio dihidrogenfosfatas x H2O
140,00


Kiti komponentai
Adenino sulfatas
10,00



AMP
0,20



ATP
1,00



Cholesterolis
0,20



2'-deoksiribozė
0,50



D(+)-gliukozė bevandenė
1,000.00



Glutationas (raudonas)
0,05



Guaninas x HCl
0,30



Hipoksantinas
0,30



Raudonasis fenolis
10,00



D-ribozė
0,50



Timinas
0,30



Tween 80
4,90



Uracilas
0,30



Ksantinas
0,30



NaHCO3
2,200.00


Amino rūgštys
L-alaninas
25,00



L-argininas x HCl
70,00



L-asparto rūgštis
30,00



L-cisteinas x HCl x H2O
0,10



L-cistinas
20,00



L-Glutaminas stabilus
149,00



L-gliutamo rūgštis
67,00



Glicinas
50,00



L-histidinas x HCl x H2O
21,88



L-hidroksiprolinas
10,00



L-izoleucinas
20,00



L-leucinas
60,00



L-lizinas x HCl
70,00



L-metioninas
15,00



L-fenilalaninas
25,00



L-prolinas
40,00



L-serinas
25,00



L-treoninas
30,00



L-triptofanas
10,00



L-tirozinas
40,00



L-Valinas
25,00


Vitaminai
4-amino benzenkarboksirūgštis
0,05



Askorbo rūgštis
0,05



D(+)-biotinas
0,01



Kalciferolis
0,10



D-kalcio pantotenatas
0,01



Cholino chloridas
0,50



Folio rūgštis
0,01



mio-izitolis
0,05



Menadionas
0,01



Nikotino rūgštis
0.025



Nikotinamidas
0.025



Piridoksalio x HCl
0.025



Piridoksolis x HCl
0.025



Riboflavinas
0,01



DL-α-tokoferolio fosfato dinatrio druska
0,01



Tiaminas x HCl
0,01



Vitamino A acetatas
0,14

Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM) yra sudėtinga ir praturtinta ląstelių kultūrų augimo terpė. IMDM yra DMEM modifikacija, kurioje yra seleno, ir, palyginti su DMEM, turi papildomų aminorūgščių, vitaminų ir neorganinių druskų. Joje trūksta geležies, todėl ją reikia papildyti vaisiaus galvijų serumu (FBS). IMDM naudojama natrio bikarbonato buferinė sistema, o fiziologiniam pH palaikyti reikia 5-10 % CO2 aplinkos.
IMDM gerai tinka greitai besidauginančioms, didelio tankio ląstelių kultūroms, įskaitant Jurkat, COS-7 ir makrofagų ląsteles. Įvairias IMDM modifikacijas, skirtas įvairioms ląstelių kultūrų reikmėms, galite rasti naudodamiesi terpių pasirinkimo įrankiu. Skystosios terpės suteikia svarbiausių maistinių medžiagų visoms ląstelių kultūrų naudojimo sritims. Kiekviena mūsų aukštos kokybės ląstelių kultūrų terpė gaminama pagal iš pradžių paskelbtą formulę arba jos modifikacijas, būtinas nuosekliam kultūros terpės veikimui ir stabilumui užtikrinti.
IMDM ir DMEM
IMDM sudėtyje yra kalio nitrato vietoj geležies nitrato ir HEPES bei natrio piruvato. Dėl papildomų komponentų IMDM yra tinkamesnė specializuotiems ląstelių tipams ir specifiniams taikymams nei DMEM.
IMDM ir RPMI
IMDM ir RPMI turi skirtingas sudėtis, kurios gali būti svarbios PMA ir jonomicino stimuliacijai. Vienas iš reikšmingų skirtumų yra Ca2+ koncentracija. RPMI yra 0,42 mM Ca2+, o IMDM
- 1,49 mM.
Kokybės kontrolė

pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C temperatūroje.
Kiekviena partija buvo patikrinta dėl sterilumo ir mikoplazmos bei bakterijų nebuvimo.

Priežiūra

Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsoje. Užšaldymas ir pašildymas iki +37 °C sumažina produkto kokybę.
Nešildykite terpės iki aukštesnės nei 37° C temperatūros ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių (pvz., mikrobangų krosnelės prietaisų).
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, išimkite šį kiekį iš buteliuko ir pašildykite jį kambario temperatūroje.
Bet kurios terpės, išskyrus pagrindinę terpę, galiojimo laikas yra 8 savaitės nuo pagaminimo datos.
Sudėtis




Sudedamosios dalys
mg/l


Neorganinės druskos
Kalcio chloridas x 2 H2O
219,00



Kalio chloridas
330,00



Kalio nitratas
0.076



Bevandenis magnio sulfatas
97,73



Natrio chloridas
4,505.00



Bevandenis natrio dihidrogenfosfatas
109,00



Natrio selenitas
0,02


Kiti komponentai
D(+)-gliukozė bevandenė
4,500.00



HEPES
5,958.00



Natrio piruvatas
110,00



Raudonasis fenolis
15,00


Amino rūgštys
L-alaninas
25,00



L-argininas x HCl
84,00



L-asparaginas x H2O
25,00



L-asparagino rūgštis
30,00



L-cistinas x 2HCl
91,24



L-glutaminas
584,00



L-gliutamo rūgštis
75,00



Glicinas
30,00



L-histidinas x HCl x H2O
42,00



L-izoleucinas
104,80



L-leucinas
104,80



L-lizinas x HCl
146,20



L-metioninas
30,00



L-fenilalaninas
66,00



L-prolinas
40,00



L-serinas
42,00



L-treoninas
95,20



L-triptofanas
16,00



L-tirozinas x 2Na
104,20



L-Valinas
93,60


Vitaminai
D(+)-biotinas
0.013



D-kalcio pantotenatas
4,00



Cholino chloridas
4,00



Folio rūgštis
4,00



mio-izitolis
7,20

"Ham's F-12" terpė, dar žinoma kaip "Ham's F-12 Nutrient Mix", yra plačiai naudojama bazinė terpė, specialiai sukurta ląstelių kultūroms. Ji plačiai naudojama be serumo, vienaląstelėms Kinijos žiurkėnų kiaušinėlių (CHO) ląstelėms, plaučių ląstelėms ir pelių L ląstelėms dėti. Be to, Ham's F-12 yra terpė, kuri pasirenkama atliekant kloninio toksiškumo tyrimą (CTA).
Vienas iš svarbiausių jos privalumų
- galimybė palaikyti ląstelių augimą be serumo papildymo. Taip pašalinami galimi serumo komponentų sukeliami trukdžiai ir užtikrinami nuoseklūs ir patikimi eksperimentų rezultatai. Suteikdama kultūrų aplinką be serumo, Ham's F-12 terpė suteikia tyrėjams didesnę tyrimų kontrolę.
Kita svarbi "Ham's F-12" terpės savybė
- jos tinkamumas pavienių ląstelių dengimui. Dėl to ji puikiai tinka įvairioms ląstelių linijoms, įskaitant CHO ląsteles, plaučių ląsteles ir pelių L ląsteles. Optimizuota terpės maistinių medžiagų sudėtis palengvina efektyvų atskirų ląstelių prisitvirtinimą ir augimą, todėl galima sukurti homogenines ląstelių kultūras, kurių atkuriamumas yra geresnis.
Be to, "Ham's F-12" terpė pripažinta kaip tinkamiausia terpė, skirta kloninio toksiškumo tyrimui (CTA) atlikti. Šis tyrimas yra labai svarbus vertinant citotoksinį medžiagų poveikį ląstelėms. Naudodami Ham's F-12 terpę CTA, tyrėjai gali tiksliai įvertinti įvairių junginių ar gydymo būdų poveikį atskiroms ląstelėms ir gauti vertingų įžvalgų apie toksikologinius profilius.
Kokybės kontrolė

pH = 7,2 +/
- 0,02 20-25 °C temperatūroje.
Kiekviena partija buvo patikrinta dėl sterilumo ir mikoplazmos bei bakterijų nebuvimo.

Priežiūra

Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsoje. Užšaldymas ir pašildymas iki +37 °C sumažina produkto kokybę.
Nešildykite terpės iki aukštesnės nei 37° C temperatūros ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių (pvz., mikrobangų krosnelės prietaisų).
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, išimkite šį kiekį iš buteliuko ir pašildykite jį kambario temperatūroje.
Bet kurios terpės, išskyrus pagrindinę terpę, galiojimo laikas yra 8 savaitės nuo pagaminimo datos.

Sudėtis




Sudedamosios dalys
mg/l


Neorganinės druskos
Kalcio chloridas x 2H2O
44,00



Vario(II) sulfatas x 5H2O
0,00



Geležies (II) sulfatas x 7H2O
0,83



Magnio chloridas x 6H2O
122,00



Kalio chloridas
223,65



Natrio chloridas
7599,00



natrio vandenilio fosfatasbevandenis
142,04



Cinko sulfatas x 7H2O
0,86


Kiti komponentai
D(+)-gliukozė, bevandenė
1801,60



Hipoksantinas
4,08



Linolo rūgštis
0,08



DL-α-lipoinė rūgštis
0,21



Raudonasis fenolis
1,20



Putrescinas x 2HCl
0,16



Natrio piruvatas
110,00



Timidinas
0,73



NaHCO3
1176,00


Aminorūgštys
L-alaninas
8,91



L-argininas x HCl
210,70



L-asparaginas x H2O
15,01



L-asparagino rūgštis
13,31



L-cisteinas x HCl x H2O
35,12



L-alanil-L-gliutaminas
217,30



L-gliutamo rūgštis
14,71



Glicinas
7,51



L-histidinas x HCl x H2O
20,96



L-izoleucinas
3,94



L-leucinas
13,12



L-lizinas x HCl
36,54



L-metioninas
4,48



L-fenilalaninas
4,96



L-prolinas
34,53



L-serinas
10,51



L-treoninas
11,91



L-triptofanas
2,04



L-tirozinas
5,44



L-Valinas
11,71


Vitaminai
D(+)-biotinas
0,01



D-kalcio pantotenatas
0,24



Cholino chloridas
13,96



Folio rūgštis
1,32



mio-izitolis
18,02



Nikotinamidas
0,04



Piridoksinas x HCl
0,06



Riboflavinas
0,04



Tiaminas x HCl
0,34



Vitaminas B12
1,36

NCI-H295R ląstelių augimo terpė
Atraskite pažangią NCI-H295R ląstelių augimo terpę
- meistriškai paruoštą maistinių medžiagų tirpalą, specialiai sukurtą žinduolių ląstelių linijų, įskaitant specializuotas NCI-H295R ląsteles, augimui ir palaikymui. Ši terpė išsiskiria unikaliu Dulbeko modifikuotos "Eagle" terpės (DMEM) ir Hamo F-12 (maistinių medžiagų mišinio F-12) mišiniu tiksliu santykiu 1:1, praturtintu svarbiausiais papildais, kad būtų patenkinti sudėtingi ląstelių kultūros poreikiai.
Patobulinta formulė, užtikrinanti geresnį ląstelių kultūrų veikimą

Papildyta bazinė terpė: Pagrindinė terpė jau yra turtinga, nes joje DMEM didelė aminorūgščių ir vitaminų koncentracija derinama su įvairiomis Ham's F-12 maistinėmis medžiagomis. Į šį stiprų mišinį pridėjome 5 % vaisiaus galvijų serumo (FBS), kuris suteikia svarbiausių augimo veiksnių, hormonų ir baltymų.
Pritaikyti priedai: Be FBS, ši terpė papildyta svarbiais priedais, įskaitant insuliną, transferiną, galvijų serumo albuminą, seleno rūgštį ir linelinę rūgštį. Šie priedai atitinka specifinius ląstelių poreikius, skatina geresnį ląstelių augimą, medžiagų apykaitos funkciją ir bendrą sveikatą.
L-glutamino padidinimas: L-glutamino kiekis dar labiau padidina terpės veiksmingumą, palaikydamas esminius medžiagų apykaitos procesus ir skatindamas stiprų ląstelių dauginimąsi.

Optimizuota ląstelių kultūroms

pH kontroliuojama aplinka: Į terpę įtraukta bikarbonatinė buferinė sistema ir fenolo raudonasis indikatorius, todėl terpė užtikrina stabilią pH aplinką. Ji optimizuota 5 % CO2 atmosferai, todėl galima tiksliai stebėti ir reguliuoti pH.
Kokybė ir grynumas: Kiekviena bazinės terpės partija griežtai tikrinama dėl sterilumo, mikoplazmos ir bakterijų, taip užtikrinant terpės vientisumą. Naudodami pH palaikomą terpę, galite pasitikėti nuolatine šios terpės kokybe ir veiksmingumu.

Tvarkymas ir laikymas
Išlaikykite terpės kokybę laikydami ją šaldytuve nuo +2 °C iki +8 °C temperatūroje, atokiau nuo šviesos. Venkite ekstremalių sąlygų, tokių kaip užšaldymas ar perkaitinimas, kad išsaugotumėte jos veiksmingumą. Naudojant iš dalies, reikiamą kiekį švelniai pašildykite kambario temperatūroje, užtikrindami, kad terpė būtų tinkamos būklės, nepažeidžiant jos sudedamųjų dalių.
Galiojimo laikas
NCI-H295R ląstelių augimo terpė yra patikimas pasirinkimas jūsų ląstelių kultūrų poreikiams tenkinti, užtikrinantis jūsų tyrimų gyvybingumą ir produktyvumą.

DMEM (Dulbeko modifikuota Eagle terpė) yra labai universali ir plačiai naudojama bazinė terpė, skirta įvairių žinduolių ląstelių auginimui biologiniuose tyrimuose. Tai ideali terpė pirminiams fibroblastams, neuronams, glijos ląstelėms, HUVEC, lygiųjų raumenų ląstelėms ir populiarioms ląstelių linijoms, tokioms kaip HeLa, 293, Cos-7 ir PC-12, auginti.
DMEM nuo kitų terpių skiriasi unikalia sudėtimi. Palyginti su originalia Eagle's Minimal Essential Medium terpe, joje keturis kartus padidinta aminorūgščių ir vitaminų koncentracija. Iš pradžių sukurta su mažu gliukozės kiekiu (1 g/l) ir natrio piruvatu, DMEM dažnai naudojama su didesniu gliukozės kiekiu, su natrio piruvatu arba be jo. Pažymėtina, kad DMEM sudėtyje nėra baltymų, lipidų ir augimo veiksnių, todėl ją reikia papildyti. Norint pasiekti optimalų augimą, įprasta DMEM papildyti 10 % galvijų vaisiaus serumo (FBS). Be to, DMEM naudojama natrio bikarbonato buferinė sistema, todėl fiziologiniam pH palaikyti reikia 5-10 % CO2 aplinkos.
Dulbeko modifikuota "Eagle" terpė (DMEM) yra labai vertinama tarp apibrėžtų terpių, skirtų ląstelių ir audinių kultūroms, ir atitinka įvairių adherentinių ląstelių fenotipų augimo poreikius. Ji pranoksta originalią Eagle'o terpę, sukurtą 1950 m. vištienos ląstelėms auginti, nes yra patobulinta papildoma formulė, vadinama Dulbeko modifikacija. Dėl šios modifikacijos atrinktų aminorūgščių ir vitaminų kiekis, palyginti su originalia terpe, padidėja iki keturių kartų.
Ląstelių kultūrų srityje DMEM yra labai svarbi terpė įvairių tipų ląstelėms, įskaitant pirmines ląsteles, kamienines ląsteles ir transformuotas ląsteles, auginti. Mokslininkai modifikuotą DMEM versiją taip pat naudoja įvairiems moksliniams tyrimams, pavyzdžiui, vaistų atradimui, audinių inžinerijai ir ląstelių signalinių kelių tyrimams.

Kokybės kontrolė

Steriliai filtruota


Laikymas ir galiojimo laikas

Laikyti nuo +2 °C iki +8 °C temperatūroje, apsaugotoje nuo šviesos.
Atidarytą laikyti 4 °C temperatūroje ir sunaudoti per 6-8 savaites.


Gabenimo sąlygos

Aplinkos temperatūra


Priežiūra

Laikyti šaldytuve nuo +2°C iki +8°C temperatūroje, tamsioje vietoje. Venkite užšaldymo ir dažno pašildymo iki +37°C, nes tai pablogina produkto kokybę.
Nešildykite terpės aukštesnėje nei 37°C temperatūroje ir nenaudokite nekontroliuojamų šilumos šaltinių, pavyzdžiui, mikrobangų krosnelių.
Jei reikia naudoti tik dalį terpės, prieš naudojimą paimkite reikiamą kiekį ir pašildykite iki kambario temperatūros.


Sudėtis



Kategorija
Sudedamosios dalys
Koncentracija (mg/l)


Aminorūgštys
Glicinas
30.00



L-argininas HCl
84.00



L-cistinas 2 HCl
62.57



L-glutaminas
584.00



L-histidinas HClH2O
42.00



L-izoleucinas
105.00



L-leucinas
105.00



L-lizinas HCl
146.00



L-metioninas
30.00



L-fenilalaninas
66.00



L-serinas
42.00



L-treoninas
95.00



L-triptofanas
16.00



L-tirozinas 2 Na 2H2O
103.79



L-Valinas
94.00


Vitaminai
Cholino chloridas
4.00



D-kalcio pantotenatas
4.00



Folio rūgštis
4.00



mio-izitolis
7.20



Nikotinamidas
4.00



Piridoksalio HCl
4.00



Riboflavinas
0.40



Tiamino HCl
4.00


Neorganinės druskos
CaCl2 2H2O
265.00



Fe(NO3)3 9H2O
0.10



KCl
400.00



MgSO4 7H2O
200.10



NaCl
6400.00



NaHCO3
3700.00



NaH2PO4 2H2O
141.73


Kiti komponentai
D-gliukozė
4500.00



Fenolio raudonojo natrio druska
15.90



Natrio piruvatas
110.00