Maht: 100 ml
Säilitamine: ≤ –15 °C
Steriilsus: steriilselt filtreeritud
Stabiilne glutamiinilahus (L-alanüül-L-glutamiin, 200 mM) on väga stabiilne L-glutamiini dipeptiidvorm, mis on loodud asendama tavapärast L-glutamiini rakukultuurikeskkonnas. L-glutamiin on oluline aminohape ja peamine energiaallikas kultiveeritud rakkudele, mängides olulist rolli rakkude kasvu, ainevahetuse ja valgusünteesi protsessides.
Kasutamine ja eelised
Tavalistes vedelates keskkondades laguneb L-glutamiin 37 °C juures suhteliselt kiiresti, mille tulemusena tekivad mürgised kõrvalsaadused, nagu ammooniumioonid, mis võivad negatiivselt mõjutada rakkude eluvõimelisust ja eksperimendi tulemusi. Stabiilne glutamiin ületab selle piirangu, pakkudes lagunematu dipeptiidvormi, mis jääb kultiveerimistingimustes muutumatuks.
Rakud lõhustavad dipeptiidsidet ensümaatiliselt, et vabastada L-glutamiini vastavalt vajadusele, tagades pideva värske varustuse ja vältides samal ajal kahjulike jääkproduktide kogunemist. See muudab lahuse eriti soodsaks pikaajaliste rakukultuuride ja suure tihedusega kasvatussüsteemide jaoks.
Koostis ja kasutus
L-alanüül-L-glutamiini lahendus valmistatakse rakukultuuri jaoks sobivas vees kontsentratsiooniga 200 mM ja see on steriliseeritud filtreeritud saastumisele tundlike rakenduste jaoks. Seda saab lahjendada otse täielikku kasvukeskkonda vastavalt eksperimendi nõuetele. Säilitada temperatuuril ≤ –15 °C ja vältida korduvaid külmutus-sulatus tsükleid, et säilitada toote stabiilsus.
Ainult teadusuuringuteks. Ei ole mõeldud kasutamiseks diagnostilistes või terapeutilistes protseduurides. Ei ole mõeldud kasutamiseks inimestel ega loomadel.
Maht: 100 ml
Säilitamine: +2 °C kuni +8 °C
Steriilsus: steriilselt filtreeritud
HEPES-puhverlahus (1 M), tuntud ka kui N-2-hüdroksüetüülpiperasiin-N-2-etaanesulfoonhape, on tsükliline orgaaniline puhveraine, mida kasutatakse laialdaselt rakukultuurikeskkonnas. See on mõeldud pH-taseme stabiilsena hoidmiseks füsioloogilises vahemikus 6,7–8,6, toetades optimaalset rakufunktsiooni in vitro rakendustes.
Kasutamine ja eelised
HEPES tagab usaldusväärse puhvri võime rakukultuuri süsteemides, eriti kui rakke käideldakse väljaspool CO₂ inkubaatorit. 10–25 mM HEPESi lisamine kultuurikeskkonnale tagab parema pH stabiilsuse pikemaajalise käitlemise ajal, aidates säilitada ühtlased katsetingimused.
See puhver on membraanile läbilaskmatu, mõjutab biokeemilisi reaktsioone minimaalselt ja on keemiliselt ja ensümaatiliselt väga stabiilne. Need omadused muudavad selle sobivaks mitmesugusteks rakukultuuri ja biokeemilisteks rakendusteks.
Koostis ja kasutamine
Lahus tarnitakse 1 M kontsentraadina, mis on valmistatud rakukultuuri jaoks sobivas vees ja on steriilselt filtreeritud kasutamiseks saastumisele tundlikes keskkondades. Seda saab lahjendada soovitud töökontsentratsioonini sõltuvalt rakenduse nõuetest. Säilitada +2 °C kuni +8 °C juures ja käsitseda aseptilistes tingimustes, et säilitada toote terviklikkus.
Ainult teadusuuringuteks. Ei ole mõeldud kasutamiseks diagnostilistes või terapeutilistes protseduurides. Ei ole mõeldud kasutamiseks inimestel ega loomadel.
Maht: 50 ml
Säilitamine: +2 °C kuni +8 °C
Steriilsus: steriilselt filtreeritud
D-(+)-glükoosilahus (dekstroosilahus) on steriilne, kasutusvalmis toidulisand, mis sisaldab looduslikult esinevat suhkrut D-(+)-glükoosi, mis on rakkude ainevahetuse keskne komponent. Glükoos osaleb olulistes bioloogilistes protsessides, nagu energia tootmine, glükosüülimine ja glükaanide moodustumine, mis aitavad kaasa rakkude struktuuri ja funktsioneerimisele.
Kasutamine ja eelised
Seda glükoosilahust kasutatakse laialdaselt lisandina rakukultuurikeskkonnas ja paljudes raku
- ja molekulaarbioloogia rakendustes. Glükoos on peamine süsiniku
- ja energiaallikas, mis toetab rakkude kasvu, paljunemist ja ainevahetust. Tema osalemine biosünteetilistes protsessides muudab ta oluliseks normaalse rakufüsioloogia ja eksperimentaalse järjepidevuse säilitamisel.
Koostis ja kasutamine
Lahus on saadaval kõrge kontsentratsiooniga 250 g/l glükoosi, mis võimaldab seda kultuurikeskkonnas eksperimendi nõuetele vastavalt paindlikult lahjendada. See on steriilselt filtreeritud, et tagada sobivus saastumisele tundlikeks rakendusteks. Säilitada +2 °C kuni +8 °C juures ja käsitseda aseptiliselt, et säilitada toote kvaliteet ja stabiilsus.
Ainult teadusuuringuteks. Ei ole mõeldud kasutamiseks diagnostilistes või terapeutilistes protseduurides. Ei ole mõeldud kasutamiseks inimestel ega loomadel.
Maht: 10 ml
Säilitamine: +2 °C kuni +8 °C
Sterilsus: steriilselt filtreeritud
Insuliin-transferriin-seleen (ITS) lahus (100x) on keemiliselt määratletud täiendusaine, mis on mõeldud laiale valikule rakukultuuri rakendustele. Seda kasutatakse kõige sagedamini lisandina rakukultuuri baaskeskkonnale, et toetada rakkude kasvu vähendatud seerumi või seerumivabas keskkonnas.
Kasutamine ja eelised
Meie ITS-lisand pakub olulisi komponente, mis on vajalikud seerumivaba keskkonna optimaalseks toimimiseks. Täiendades tavapärast toitainekeskkonda ITS-iga, saab oluliselt vähendada loote veise seerumi (FBS) vajadust paljude rakuliinide rutiinseks hooldamiseks. See aitab vähendada seerumi kasutamisega seotud variatiivsust, säilitades samal ajal rakkude kasvu ja eluvõime.
Insuliin toetab oluliste toitainete rakkudesse imendumist ja ainevahetust, transferriin hõlbustab raua transporti ning seleen aitab kaasa antioksüdantkaitsele ja ensüümiaktiivsusele. Koos soodustavad need komponendid tasakaalustatud rakuainevahetust ja paremat reprodutseeritavust määratletud kultuursüsteemides.
Koostis ja kasutamine
Insuliin-transferriin-seleen (ITS) tarnitakse 100-kordselt kontsentreeritud lahendusena Earle'i tasakaalustatud soolalahuses (EBSS) ilma fenoolpunaseta. Standardrakenduste puhul lahjendage 1:100 sobivasse baaskeskkonnas, et saavutada soovitatav töökontsentratsioon. Hoida temperatuuril +2 °C kuni +8 °C ja käsitseda aseptilistes tingimustes, et säilitada toote stabiilsus ja steriilsus.
Ainult teadusuuringuteks. Ei tohi kasutada diagnostilistes ega terapeutilistes protseduurides. Ei tohi kasutada inimestel ega loomadel.
Maht: 5 ml
Säilitamine: +2 °C kuni +8 °C
Sterilsus: steriilselt filtreeritud
Inimese rekombinantse insuliini lahus on keemiliselt määratletud täiendusaine, mida kasutatakse tavaliselt imetajate rakuliinide, sealhulgas hiina hamstri munasarja (CHO) rakkude kasvatamiseks. See rakukultuuri jaoks mõeldud lahus sisaldab Saccharomyces cerevisiae's ekspresseeritud rekombinantse inimese insuliini, mis tagab kõrge puhtuse ja stabiilse toimivuse teadusuuringutes.
Kasutamine ja eelised
Insuliini lisatakse tavaliselt seerumivabadele ja keemiliselt määratletud kasvukeskkondadele, et soodustada rakkude kasvu ja produktiivsust. Insuliin on oluline regulatiivne hormoon, mis toetab glükoosi, aminohapete ja rasvhapete rakkudesse imendumist, kasutamist ja ladustamist. Samuti pärsib see glükogeeni, valkude ja lipiidide lagunemist, aidates seeläbi parandada rakkude eluvõimelisust ja ainevahetuse stabiilsust kultuurisüsteemides. Keemiliselt määratletud koostis toetab reprodutseeritavust ja vähendab tundlike rakukultuuri töövoogude varieeruvust.
Bioloogilised omadused ja kasutus
Insuliin on kahe ahelaga polüpeptiidhormoon, mida toodavad loomulikult pankrease saarekeste β-rakud. Selle molekulmass on umbes 5800 Da. α
- ja β-ahelad on ühendatud kahe ahelatevahelise disulfiidsidemega ning α-ahel sisaldab ühte ahelasisest disulfiidsidet. Rakukultuuri rakenduste puhul tuleb lahust käsitseda aseptilistes tingimustes ja säilitada temperatuuril +2 °C kuni +8 °C, et säilitada stabiilsus ja toimivus.
Ainult teaduslikuks kasutamiseks. Ei tohi kasutada diagnostilistes ega terapeutilistes protseduurides. Ei tohi kasutada inimestel ega loomadel.
Maht: 100 ml
Säilitamine: +2 °C kuni +8 °C
Steriilsus: steriilselt filtreeritud
Naatriumpüruvaadi lahus (100 mM) on steriilne, kasutusvalmis lisand, mis on mõeldud rakkude kasvatuskeskkondadele täiendava, kergesti kättesaadava energiaallika pakkumiseks. Naatriumpüruvaat mängib olulist rolli rakkude energiaainevahetuses ja toetab metaboolselt aktiivsete ja kiiresti paljunevate rakkude, näiteks kasvajarakkude kasvu. Lisand võib parandada rakkude eluvõimelisust ja aidata säilitada metaboolset stabiilsust kasvatussüsteemides.
Kasutamine ja eelised
Seda lahust kasutatakse laialdaselt rutiinsetes rakukultuurides, et rikastada keskkonda püruvaadiga ja soodustada optimaalseid kasvutingimusi. See toetab ATP tootmist, võib aidata vähendada oksüdatiivset stressi ja aitab parandada kultiveeritud rakkude ainevahetust. Toode on valmistatud rakukultuurikvaliteediga veest ja steriilselt filtreeritud, tagades uurimistööde käigus ühtlase kvaliteedi ja korratavuse.
Kasutamine ja ühilduvus
Enamiku rakukultuuri rakenduste soovitatav lõplik kontsentratsioon on 1 mM naatrium-püruvaat, mis saavutatakse 100 mM lahusega lahjendades 1:100 täielikku kultuurikeskkonna. Lahus on ühilduv paljude baaskeskkonna ja imetajate rakuliinidega. Säilitage +2 °C kuni +8 °C juures ja kaitse saastumise eest, et säilitada toote stabiilsus.
Ainult teadusuuringuteks. Ei ole mõeldud kasutamiseks diagnostilistes või terapeutilistes protseduurides. Ei ole mõeldud kasutamiseks inimestel ega loomadel.
Maht: 100 ml Säilitamine: ≤-15°C Steriilsus: Steriilselt filtreeritud
Antibiootikum/antimükootiline lahus (100x) on steriilne, kasutusvalmis kontsentraat, mis on mõeldud mikroobse saastumise riski vähendamiseks rakukultuurides ja nendega seotud laboratoorsetes rakendustes. See 100x lahus sisaldab penitsilliini, streptomütsiini ja amfoteritsiin B hästi tõestatud kombinatsiooni, mis tagab laia spektriga antimikroobse toime grampositiivsete ja gramnegatiivsete bakterite, pärmseente ja filamentsete seente vastu. Preparaat sobib kasutamiseks eukarüootilistes rakukultuurides, bakteriaalsetes keskkondades ja muudes saastetundlikes süsteemides, toetades puhtaid ja järjepidevaid laboritoiminguid.
Kasutamine ja eelised Seda rutiinsete teadusprotokollide jaoks optimeeritud lahust kasutatakse laialdaselt aseptiliste tingimuste säilitamiseks rakukultuuride tööprotsessides. See pakub usaldusväärset toimimist saastetundlikes keskkondades, aidates teadlastel vähendada mikroobide ülekasvu ohtu, ilma et see kahjustaks rakkude tervist või katsete reprodutseeritavust. Steriilne filtreeritud koostis välistab vajaduse täiendavate solubiliseerimisetappide järele, toetades ühtlustatud söötme ettevalmistamist ja vähendades igapäevaste laboriprotseduuride varieeruvust.
Kasutamine ja ühilduvus Standardsete töökontsentratsioonide saavutamiseks lahjendage lahust 1:100 teie täielikule kultuurikeskkonnale. Toode ühildub paljude imetajate rakuliinide ja põhikeskkondadega. Tänu pidevale varude kättesaadavusele saavad teadlased kasu usaldusväärsest tarnekindlusest ja lihtsustatud logistika planeerimisest. Stabiilsuse säilitamiseks tuleb lahust hoida temperatuuril ≤ -15 °C ja kaitsta korduvate külmutamis
- ja sulatamistsüklite eest. Ainult teaduslikuks kasutamiseks. Mitte kasutamiseks diagnostilistes või terapeutilistes protseduurides. Mitte kasutamiseks inimestel või loomadel.
Maht: 100 ml Säilitamine: +2°C kuni +8°C Steriilsus: Steriilne filtreeritud
MEM Non-Essential Amino Acids (100x) on steriilne toidulisand, mis on mõeldud rakkude kasvu ja elujõulisuse suurendamiseks imetajate rakukultuurisüsteemides. Koostis vastab 100x kontsentraadile mitteolemuslikest aminohapetest, mida leidub standardses minimaalses asendamatus keskkonnas (MEM), võimaldades baasmeediumide otsest täiendamist minimaalse ettevalmistusega.
Kasutamine ja eelised See täiendus annab täiendava aminohapete reservi kiiresti proliferatsiooni alustavatele rakkudele või rakuliinidele, mis on kaotanud võime sünteesida mitteolulisi aminohappeid de novo. Vähendades biosünteesi metaboolset koormust, toetab see paremat kasvukineetikat, pikemat elujõulisust ja suuremat katsete järjepidevust
- eriti toitainete suhtes tundlikes või suure tihedusega kultuurides.
Koostis ja kasutamine Lahus sisaldab glütsiini, L-alaniini, L-asparagiini, L-asparagiinhapet, L-glutamiinhapet, L-proliini ja L-seriini. See sobib kokku MEM-i ja enamiku teiste standardkeskkondadega. Kasutamiseks lahjendatakse 1:100 lõplikus kultuurikeskkonnas. See toode on steriilselt filtreeritud ja kasutusvalmis ilma täiendavate käitlemisetappideta. Ainult teaduslikuks kasutamiseks. Mitte kasutamiseks diagnostilistes või terapeutilistes protseduurides. Mitte kasutamiseks inimestel või loomadel.
- õrn alternatiiv trüpsiinile
Accutase on rakkude eralduslahus, mis on revolutsiooniliselt muutmas rakukultuuritööstust. See on proteolüütiliste ja kollagenolüütiliste ensüümide segu, mis jäljendab trüpsiini ja kollügenaasi toimet. Erinevalt trüpsiinist ei sisalda Accutase imetajate või bakterite komponente ja on rakkude suhtes palju leebem, mistõttu on see ideaalne lahendus rakkude rutiinseks eraldamiseks standardsetest koekultuuride plastmassidest ja adhesiooniga kaetud plastmassidest. Selles blogipostituses uurime Accutase'i eeliseid ja kasutusvõimalusi ning seda, kuidas see muudab rakukultuuride mängu.
Accutase'i eelised
Accutase'il on traditsiooniliste trüpsiinilahuste ees mitmeid eeliseid. Esiteks saab seda kasutada alati, kui on vaja õrnalt ja tõhusalt eraldada mis tahes kleepuvat rakuliini, mistõttu on see otsene asendaja trüpsiinile. Teiseks toimib Accutase väga hästi embrüonaalsete ja neuronaalsete tüvirakkude puhul ning on tõestatud, et see säilitab nende rakkude elujõulisuse pärast passageerimist. Kolmandaks säilitab Accutase enamiku epitoope hilisemaks voolutsütomeetriliseks analüüsiks, mistõttu on see ideaalne rakupinna markerite analüüsiks.
Lisaks ei ole Accutase'i vaja neutraliseerida adherentsete rakkude passageerimisel. Kui pärast rakkude jagamist lisatakse rohkem keskkonda, lahjendatakse Accutase, nii et see ei ole enam võimeline rakke eraldama. See välistab vajaduse inaktiveerimise etapi järele ja säästab rakukultuuritehnikute aega. Lõpuks ei ole vaja Accutase'i aliquotida ja pudel püsib külmkapis 2 kuud.
Accutase'i rakendused
Accutase on otsene trüpsiinilahuse asendaja ja seda saab kasutada rakuliinide passageerimiseks. Lisaks toimib Accutase hästi rakkude eraldamisel paljude rakupinna markerite analüüsiks voolutsütomeetria abil ja rakkude sorteerimiseks. Muud Accutase töötlemise rakendused hõlmavad rakupinna markerite analüüsi, viiruste kasvu analüüsi, rakkude proliferatsiooni, kasvajarakkude migratsiooni teste, rutiinset rakupassaaži, tootmise suurendamist (bioreaktor) ja voolutsütomeetriat.
Accutase koostis
Accutase ei sisalda imetajate või bakterite komponente ja on looduslik ensüümsegu, millel on proteolüütiline ja kollagenolüütiline ensüümiaktiivsus. See on formuleeritud palju madalamas kontsentratsioonis kui trüpsiin ja kollügenaas, mis muudab selle vähem toksiliseks ja õrnemaks, kuid sama tõhusaks.
Accutase tõhusus
Accutase on osutunud tõhusaks primaar
- ja tüvirakkude eraldamisel ja rakkude kõrge elujõulisuse säilitamisel võrreldes loomset päritolu ensüümidega, nagu trüpsiin. pärast 10 minutit on 100% rakkudest tagasi saadud ning tänu Accutase'i autodigestioonile ei ole kahjulik jätta rakke Accutase'ile kuni 45 minutiks.
Kokkuvõttes
Kokkuvõttes on Accutase võimas lahendus, mis muudab rakukultuuride mängu. Tänu oma õrnale olemusele, tõhususele ja mitmekülgsusele on Accutase ideaalne alternatiiv trüpsiinile. Kui otsite usaldusväärset ja tõhusat lahendust rakkude eraldamiseks, on Accutase teie jaoks õige lahendus.
Mida EMEM sisaldab?
EMEM on Eagle'i minimaalselt vajaliku söötme modifitseeritud versioon, mis sisaldab Earle'i tasakaalustatud soolalahust, mitteolulisi aminohappeid, L-glutamiini, naatriumpüruvaati ja naatriumbikarbonaati. Oluline on märkida, et see naatriumbikarbonaadi tase on mõeldud kasutamiseks 5% CO2 sisaldusega õhus. Selle tõhususe säilitamiseks on soovitatav säilitada keskkonda 2 °C kuni 8 °C juures pimedas, kui seda ei kasutata.
Milleks kasutatakse EMEMi?
Eagle's minimal essential medium (EMEM) on rakukultuurikeskkond, millega saab säilitada rakke koekultuuris. Keskkond sisaldab suuremaid aminohapete kontsentratsioone, mis võimaldab täpsemalt lähendada kultiveeritud imetajarakkude valkude koostist. EMEMi võib kasutada erinevate rakkude, sealhulgas fibroblastide, inimese maksavähi rakuliini (HepG2) rakkude ja inimese loote aju progenitaatoritest saadud astrotsüütide rakkude (PDA) kasvatamiseks. Seda kasutatakse tavaliselt veise loote seerumi (FBS), vasika
- või hobuse seerumi juuresolekul.
Kuidas erineb EMEM teistest rakukultuurikeskkondadest?
Kuigi EMEM ja Dulbecco modifitseeritud Eagle's medium (DMEM) omavad mõningaid sarnasusi, erinevad nad ka üksteisest. Mõlemas söötmes puudub valk ja see sisaldab aminohappeid, soolasid, glükoosi ja vitamiine, mis on vajalikud raku energiaga varustamiseks ja selle säilitamiseks koekultuuris. Kuid DMEM on modifitseeritud, et sisaldada kuni neli korda rohkem vitamiine ja aminohappeid ning kaks kuni neli korda rohkem glükoosi kui EMEM. Väärib märkimist, et EMEM erineb ka algsest MEM-formulatsioonist.
Kvaliteedikontroll
Steriilselt filtreeritud
Säilitamine ja säilivusaeg
Säilitada +2°C kuni +8°C juures, valguse eest kaitstult.
Pärast avamist säilitada 4°C ja kasutada 6-8 nädala jooksul.
Veotingimused
Keskkonnatemperatuur
Hooldus
Hoida külmkapis +2°C kuni +8°C juures pimedas. Vältida külmutamist ja sagedast soojendamist kuni +37°C, kuna see vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37°C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid, näiteks mikrolaineahjusid.
Kui kasutatakse ainult osa söötmest, võtke vajalik kogus välja ja soojendage see enne kasutamist toatemperatuurini.
Koostis
Kategooria
Komponendid
Kontsentratsioon (mg/l)
Aminohapped
L-arginiini HCl
126.00
L-tsütsiin 2 HCl
31.30
L-glutamiin
292.00
L-Histidiin HClH2O
42.00
L-isoleutsiin
52.00
L-leutsiin
52.00
L-Lüsiin HCl
72.50
L-metioniin
15.00
L-Fenüülalaniin
32.00
L-treoniin
48.00
L-trüptofaan
10.00
L-Türosiin 2 Na 2H2O
51.90
L-valiin
46.00
Vitamiinid
Koliinkloriid
1.00
Vitamiinid
D-kaltsium-pantotenaat
1.00
Foolhape
1.00
myo-Inositool
2.00
Nikotiinamiid
1.00
Püridoksaal-HCl
1.00
Riboflaviin
0.10
Tiamiini HCl
1.00
Anorgaanilised soolad
CaCl2 2H2O
265.00
Anorgaanilised soolad
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Muud komponendid
D-glükoos
1000.00
Muud komponendid
Fenoolpunane naatriumsool
11.00
- kui ka loomsetele rakkudele, muutes selle oluliseks vahendiks mitmesuguste teadusrakenduste jaoks. Freeze Medium CM-1, mis on koostatud hoolikalt tasakaalustatud krüoprotektiivide ja oluliste toitainete kombinatsiooniga, minimeerib jääkristallide moodustumist ja rakkude stressi külmutamise ajal, säilitades seega rakkude terviklikkuse.
Freeze Medium CM-1 põhiomadused on järgmised:
Laiaulatuslik kokkusobivus: Tõhus paljude rakutüüpide, sealhulgas primaarsete rakkude, tüvirakkude ja väljakujunenud rakuliinide puhul.
Kõrge elujõulisus: Optimeeritud selleks, et maksimeerida rakkude taastumist ja elujõulisust pärast sulatamist, tagades usaldusväärsed katsetulemused.
Kasutusvalmis: Mugav valmistada ja steriliseerida koheseks kasutamiseks, vähendades ettevalmistusaega ja saastumisohtu.
Suurendatud stabiilsus: Säilitab järjepideva tulemuslikkuse standardsetes krüokonserveerimistingimustes, tagades reprodutseeritavad tulemused.
Pikk säilivusaeg: CM-1 on seerumit sisaldav, kasutusvalmis krüokonserveerimissöötme, mida võib säilitada külmkapis kuni üks aasta.
CM-1 kasutamine rakkude külmutamiseks
CM-1 kasutamiseks nii adherentsete kui ka suspensioonirakkude külmutamiseks järgige järgmisi samme
Adherentsete rakkude puhul peske ja eraldage need kultuurisubstraadist. Suspensioonirakkude puhul jätkake otse järgmise sammuga.
Arvutage rakke, et tagada nende õige kontsentratsioon.
Pelleteerimiseks tsentrifuugige rakud, seejärel resuspenseerige need CM-1 külmutuskeskkonnas.
Ülekandke resuspendeeritud rakud krüoklaasidesse.
Kasutage enne rakkude pikaajalisse säilitamisse viimist aeglast külmutamist
Meetod
Kirjeldus
Sammud
❄️
Käsitsi külmutamine
Järkjärguline meetod, mis hõlmab järk-järgulist temperatuuri vähendamist rakkude elujõulisuse tagamiseks
1️⃣ Asetage rakud külmutuskeskkonda 4 °C sügavkülmikusse 40 minutiks.
2️⃣ Viiakse 24 tunniks -80 °C sügavkülmikusse.
3️⃣ Säilitada rakke pikaajalise säilitamise eesmärgil vedelas lämmastikus
❄️
Mr. Frosty kasutamine
Mugav seade, mis võimaldab kontrollitud külmutamiskiirust ilma elektrienergiata
1️⃣ Valmistage rakud krüoviaalides külmutuskeskkonnaga ette.
2️⃣ Asetage krüoviaalid Mr. Frosty konteinerisse.
3️⃣ Säilitage 24 tundi temperatuuril -80 °C enne vedela lämmastiku sisse viimist
❄️
Reguleeritava kiirusega sügavkülmik
Thermo Fisheri või teiste tootjate kõrge täpsusega sügavkülmik, mis on ette nähtud temperatuuri kontrollitud langetamiseks
1️⃣ Programmeerige seade nii, et temperatuur langeb järk-järgult.
2️⃣ Asetage ettevalmistatud rakud sügavkülmikusse.
3️⃣ Pärast külmutamistsüklit viige rakud üle vedela lämmastikuga
Säilitage krüoviaalid temperatuuril alla -130 °C või pikaajalise säilitamise eesmärgil vedelas lämmastikus.
Koostisosad
Sisaldab FBS, DMSO, glükoosi, soolasid
Puhverdusvõime: pH = 7,2 kuni 7,6
Cytion's Freeze Medium CM-1 pakub usaldusväärset lahendust krüokonserveerimiseks, tagades rakkude kõrge elujõulisuse ja funktsionaalsuse pärast sulatamist mitmesuguste teadusrakenduste jaoks.
- ja kanamaksa rakkude kasvatamist, eriti vähendatud seerumi tingimustes.
Ham's F-12K (Kaighn's) Medium on hoolikalt koostatud rakukultuuritingimuste optimeerimiseks. Sellel on rikastatud koostis, mis pakub kõrgendatud koguseid olulisi komponente, nagu aminohappeid ja naatriumpüruvaati, samuti täiendavaid elemente, sealhulgas putressiini, tümidiini, hüpoksantiini ja tsinki. Need lisandid võimaldavad teadlastel täiendada keskkonda minimaalse seerumi või konkreetsete rakutüüpide jaoks määratletud komponentidega, hõlbustades täpseid katsetingimusi.
Eelkõige ei sisalda Ham's F-12K (Kaighn's) keskkond valke ega kasvufaktoreid. Sellest tulenevalt on sageli vaja lisada kasvufaktoreid ja veiste loote seerumit (FBS), mis võimaldab teadlastel kohandada keskkonda vastavalt oma konkreetsete rakuliinide nõuetele. Optimaalse tulemuslikkuse tagamiseks tuleb FBS-i kontsentratsioon iga rakuliini jaoks hoolikalt optimeerida, tagades optimaalse kasvu ja funktsionaalsuse.
Füsioloogilise pH säilitamiseks kasutatakse Ham's F-12K (Kaighn's) keskkonnas naatriumbikarbonaatpuhvrisüsteemi (2,5 g/l), mis eeldab kasvatamise ajal kontrollitud 5-10% CO2-keskkonda. See tagab, et keskkonna pH jääb rakkude kasvu ja elujõulisuse jaoks ideaalsesse vahemikku
Kvaliteedikontroll
pH = 7,2 +/
- 0,02 temperatuuril 20-25 °C.
Iga partii on testitud steriilsuse ning mükoplasma ja bakterite puudumise suhtes.
Hooldus
Hoida külmikus +2°C kuni +8°C juures pimedas. Külmutamine ja soojendamine kuni +37°C vähendavad toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37°C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid (nt mikrolaineahjusid).
Kui on vaja kasutada ainult osa söötmest, võtke see kogus pudelist välja ja soojendage seda toatemperatuuril.
Kõikide söötmete, välja arvatud põhisöötme säilivusaeg on 8 nädalat alates tootmiskuupäevast.
Koostis
Koostisosad
mg/l
Anorgaanilised soolad
Kaltsiumkloriid x 2H2O
135,24
Vask(II)-sulfaat x 5H2O
0,00
Raud(II)-sulfaat x 7H2O
0,83
Magneesiumkloriid x 6H2O
105,72
Magneesiumsulfaat x 7H2O
394,49
Kaaliumkloriid
283,29
Kaaliumdivesinikfosfaat
58,52
Naatriumkloriid
7597,20
dinaatriumvesinikfosfaatveevaba
115,02
Tsinksulfaat x 7H2O
0,14
Muud komponendid
D(+)-glükoos veevaba
1260,00
Hüpoksantiin
4,08
DL-α-lipoehape
0,21
Fenool punane
3,00
Putressiin x 2HCl
0,32
Naatriumpüruvaat
220,00
NaHCO3
2500,00
Tümidiin
0,73
Aminohapped
L-alaniin
17,82
L-arginiin x HCl
421,40
L-asparagiin x H2O
30,02
L-asparagiinhape
26,62
L-tsüsteiin x HCl x H2O
70,24
L-glutamiin
292,20
L-glutamiinhape
29,42
Glütsiin
15,01
L-Histidiin x HCl x H2O
41,92
L-isoleutsiin
7,87
L-leutsiin
26,24
L-Lüsiin x HCl
73,04
L-metioniin
8,95
L-fenüülalaniin
9,91
L-proliin
69,06
L-Seriin
21,02
L-treoniin
23,82
L-trüptofaan
4,08
L-Türosiin
10,87
L-valiin
23,42
Vitamiinid
D(+)-Biotiin
0,07
D-kaltsium-pantotenaat
0,48
Koliinkloriid
13,96
Foolhape
1,32
müo-Inositool
18,02
Nikotiinamiid
0,04
Püridoksiin x HCl
0,06
Riboflaviin
0,04
Tiamiin x HCl
0,34
B12-vitamiin
1,36
Fosfaadiga puhverdatud soolalahus (PBS) on bioloogilistes ja keemilistes uuringutes laialdaselt kasutatav puhverlahus. See mängib olulist rolli pH-tasakaalu ja osmolaarsuse säilitamisel erinevate katsete, sealhulgas kudede töötlemise ja rakukultuuride käigus. Meie PBS-lahus on hoolikalt formuleeritud kõrge puhtusastmega koostisosadest, et tagada stabiilsus ja usaldusväärsus igas eksperimendis. Meie PBS-i osmolaarsus ja ioonide kontsentratsioonid jäljendavad täpselt inimkeha omast, mistõttu on see isotooniline ja enamikule rakkudele mittetoksiline.
Meie PBS-lahuse koostis
Meie PBS-lahus on ülipuhaste fosfaatpuhvrite ja soolalahuste pH-ga kohandatud segu. 1X töökontsentratsioonis sisaldab see järgmist:
8000 mg/l naatriumkloriidi (NaCl)
200 mg/l kaaliumkloriidi (KCl)
1150 mg/L naatriumfosfaat kahealuseline veevaba (Na2HPO4)
200 mg/L Kaaliumfosfaat monobaasiline veevaba (KH2PO4)
See koostis tagab optimaalse pH ja ioonitasakaalu, mis sobib mitmesuguste bioloogiliste rakenduste jaoks.
Meie PBS-lahuse rakendused
Meie PBS-lahus sobib ideaalselt mitmesugusteks rakendusteks bioloogilistes uuringutes. Selle isotoonilised ja mittetoksilised omadused muudavad selle sobivaks ainete lahjendamiseks ja rakukonteinerite loputamiseks. EDTA-d sisaldavad PBS-lahused on tõhusad kinnitunud ja klompunud rakkude eraldamiseks. PBS-i ei tohiks siiski lisada kahevalentseid metalle, nagu tsink, kuna see võib põhjustada sadestumist. Sellistel juhtudel soovitatakse kasutada Good's puhvreid. Lisaks on meie PBS-lahus vastuvõetav alternatiiv viiruste transpordikeskkonnale RNA-viiruste, sealhulgas SARS-CoV-2 transportimiseks ja säilitamiseks.
Kvaliteedikontroll
Steriilselt filtreeritud
Säilitamine ja säilivusaeg
Säilitada +2°C kuni +25°C juures, valguse eest kaitstult.
Pärast avamist säilitada temperatuuril 2°C kuni 25°C ja kasutada 24 kuu jooksul.
Veotingimused
Keskkonnatemperatuur
Hooldus
Hoida külmkapis +2°C kuni +8°C juures pimedas. Vältida külmutamist ja sagedast soojendamist kuni +37°C, kuna see vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37°C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid, näiteks mikrolaineahjusid.
Kui kasutatakse ainult osa söötmest, võtke vajalik kogus välja ja soojendage see enne kasutamist toatemperatuurini.
Koostis
Kategooria
Komponendid
Kontsentratsioon (mg/l)
Soolad
Kaaliumkloriid
200
Kaaliumfosfaat monobaasiline veevaba
200
Naatriumkloriid
8000
Naatriumfosfaat kahealuseline veevaba
1150
Esialgu inimleukeemiarakkude kasvu toetamiseks nii suspensiooni
- kui ka monokihiliste kultuuride puhul loodud RPMI 1640 keskkond on teadlaste ja kaubanduslike tarnijate muudatuste kaudu muutunud sobivaks mitmesuguste imetajarakkude jaoks. See sobib erakordselt hästi selliste rakuliinidega nagu HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, astrotsüüdid ja kartsinoomid.
RPMI 1640 Medium eristub teistest rakukultuurikeskkondadest oma unikaalse koostise poolest. See sisaldab märkimisväärses koguses fosfaate, aminohappeid ja vitamiine. Eelkõige sisaldab see biotiini, B12-vitamiini ja PABA-d, mis puuduvad Eagle's Minimal Essential Medium'is või Dulbecco's Modified Eagle Medium'is. Lisaks sellele on RPMI 1640 Mediumis oluliselt kõrgemad inositooli ja koliini vitamiinide kontsentratsioonid. See ei sisalda aga valke, lipiide ega kasvufaktoreid. Sellest tulenevalt on rakkude optimaalsete kasvutingimuste tagamiseks tavaliselt vaja lisada 10% veiste loote seerumit (FBS).
RPMI 1640 keskkonda puhverdav süsteem põhineb naatriumbikarbonaadil ja vajab 5-10% CO2 keskkonda, et säilitada füsioloogiliselt sobiv pH. Redutseeriva aine glutatiooni lisamine eristab seda keskkonda teistest veelgi.
Kvaliteedikontroll
Steriilselt filtreeritud
Säilitamine ja säilivusaeg
Säilitada +2°C kuni +8°C juures, valguse eest kaitstult.
Pärast avamist säilitada 4°C ja kasutada 6-8 nädala jooksul.
Veotingimused
Keskkonnatemperatuur
Hooldus
Hoida külmkapis +2°C kuni +8°C juures pimedas. Vältida külmutamist ja sagedast soojendamist kuni +37°C, kuna see vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37°C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid, näiteks mikrolaineahjusid.
Kui kasutatakse ainult osa söötmest, võtke vajalik kogus välja ja soojendage see enne kasutamist toatemperatuurini.
Koostis
Kategooria
Komponendid
Kontsentratsioon (mg/l)
Aminohapped
Glütsiin
10.00
L-Alanüül-L-glutamiin
434.40
L-arginiin
200.00
L-asparagiinH2O
56.82
L-asparagiinhape
20.00
L-tsüstiin 2HCl
65.20
L-glutamiinhape
20.00
L-Histidiin HClH2O
20.27
L-Hüdroksü-L-proliin
20.00
L-isoleutsiin
50.00
L-leutsiin
50.00
L-Lüsiin HCl
40.00
L-metioniin
15.00
L-Fenüülalaniin
15.00
L-proliin
20.00
L-Seriin
30.00
L-treoniin
20.00
L-trüptofaan
5.00
L-Türosiin 2Na 2H2O
28.83
L-Valiin
20.00
Vitamiinid
p-Aminobensoehape
1.00
D-Biotiin
0.20
Koliinkloriid
3.00
D-kaltsium-pantotenaat
0.25
Foolhape
1.00
myo-Inositool
35.00
Nikotiinamiid
1.00
Püridoksiin HCl
1.00
Riboflaviin
0.20
Tiamiini HCl
1.00
B12-vitamiin
0.005
Anorgaanilised soolad
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Muud komponendid
D-glükoos
2000.00
L-glutatioon redutseeritud
1.00
Fenoolpunane naatriumsool
5.30
See ainulaadne koostis ühendab Dulbecco modifitseeritud Eagle's Medium (DMEM) ja Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) täpses vahekorras 1:1. L-glutamiini lisamine parandab selle koostist veelgi.
DMEM, mis on saadud Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), pakub võrreldes oma eelkäijaga suuremat aminohapete ja vitamiinide kontsentratsiooni. Seevastu Ham's F-12 põhineb Ham's F-10 keskkonnas, pakkudes täiendavat komplekti olulisi komponente.
Rakkude optimaalse kasvu toetamiseks on tavaline tava täiendada DMEM:Ham's F12-d FBSiga, mille tüüpiline kontsentratsioon on 5-10%. See lisamine on vajalik, kuna keskkonnas puuduvad kasvuhormoonid, lipiidid ja rakkude arenguks olulised valgud.
DMEM:Ham's F12 sisaldab pH-puhvrisüsteemi ja sellele lisatakse sageli pH-indikaatorit fenoolpunast. DMEM:Ham's F12 või mis tahes bikarbonaatpuhvrisüsteemi kasutavas keskkonnas kasvatatavad rakud vajavad kontrollitud CO2-keskkonda 5-10%, et säilitada sobiv pH-tase.
Kvaliteedikontroll
Steriilselt filtreeritud
Säilitamine ja säilivusaeg
Säilitada +2°C kuni +8°C juures, valguse eest kaitstult.
Pärast avamist säilitada 4°C ja kasutada 6-8 nädala jooksul.
Veotingimused
Keskkonnatemperatuur
Hooldus
Hoida külmkapis +2°C kuni +8°C juures pimedas. Vältida külmutamist ja sagedast soojendamist kuni +37°C, kuna see vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37°C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid, näiteks mikrolaineahjusid.
Kui kasutatakse ainult osa söötmest, võtke vajalik kogus välja ja soojendage see enne kasutamist toatemperatuurini.
Koostis
Kategooria
Komponendid
Kontsentratsioon (mg/l)
Aminohapped
Glütsiin
18.75
L-alaniin
4.45
L-arginiini HCl
147.50
L-asparagiin H₂O
7.50
L-asparagiinhape
6.65
L-tsüsteiin HCl H₂O
17.56
L-tsüstiin 2 HCl
31.29
L-glutamiinhape
7.35
L-Glutamiin
365.00
L-Histidiin HCl H₂O
31.48
L-isoleutsiin
54.47
L-Leutsiin
59.05
L-Lüsiin HCl
91.25
L-metioniin
17.24
L-Fenüülalaniin
35.48
L-proliin
17.25
L-Seriin
26.25
L-treoniin
53.45
L-trüptofaan
9.02
L-Türosiini dinaatriumsool
48.10
L-valiin
52.85
Vitamiinid
D-Biotiin
0.0035
Koliinkloriid
8.98
D-kaltsium-pantotenaat
2.24
Foolhape
2.66
myo-Inositool
12.60
Nikotiinamiid
2.02
Püridoksiin HCl
0.031
Püridoksaal-HCl
2.00
Riboflaviin
0.219
Tiamiini HCl
2.17
B12-vitamiin
0.68
Anorgaanilised soolad
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Muud komponendid
D-glükoos
3151.00
Hüpoksantiin
2.40
HEPES
3574.50
Linoolhape
0.042
Lipoehape
0.105
Fenoolpunane naatriumsool
8.63
Putressiin 2 HCl
0.081
Naatriumpüruvaat
55.00
Tümidiin
0.365
- 0,02 temperatuuril 20–25 °C. Iga partii on testitud steriilsuse ning mükoplasma ja bakterite puudumise suhtes. Hooldus Hoida külmikus +2 °C kuni +8 °C pimedas kohas. Külmutamine ja soojendamine kuni +37 °C vähendab toote kvaliteeti. Ärge kuumutage keskkonda üle 37 °C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid (nt mikrolaineahjusid). Kui kasutatakse ainult osa keskkonnast, võtke see kogus pudelist välja ja soojendage toatemperatuuril. Kõigi keskkonna, välja arvatud baaskeskkonna, kõlblikkusaeg on 6–8 nädalat alates avamiskuupäevast. Koostis Komponendid mg/L Anorgaanilised sooladKaltsiumkloriid x 2H2O132,0 Magneesiumsulfaat97,67 Kaaliumkloriid400 Naatriumkloriid6460 Dinatriumvesinikfosfaat (veevaba)504,00 Muud komponendidD(+)-glükoos (veevaba)3000 Glutatioon (redutseeritud)0 Lihapepton600 Fenoolpunane naatriumsool11 AminohappedL-alaniin13,36 L-arginiin x HCl42,14 L-asparagiin x H2O45,03 L-asparagiinhape19,97 L-tsüsteiin x HCl x H2O31,75 L-glutamiin (stabiilne)219,15 L-glutamiinhape22,07 Glütsiin7,51 L-histidiin x HCl x H2O20,96 L-hüdroksüproliin19,67 L-isoleutsiin39,36 L-leutsiin39,36 L-lüsiin x HCl36,54 L-metioniin14,92 L-fenüülalaniin16,52 L-proliin17,27 L-seriin26,28 L-treoniin17,87 L-trüptofaan3,06 L-türosiini dinaatriumsool26,10 L-valiin17,57 Vitamiinidp-aminobensoehape1,0 Askorbiinhape0,56 D(+)-biotiin0,20 D-kaltsiumpantotenaat0,2 Koliinkloriid5 Foolhape10 Müo-inositool36 Nikotinaamid0 Nikotiinhape0,5 Püridoksaal HCl0,5 Püridoksiin HCl0,5 Riboflaviin0,2 Tiamiin HCl0,2 Vitamiin B122,0
Medium 199 pakub mitmesuguseid rakendusi valdkonnas. See võib tõhusalt säilitada kumulus
- ja ootsüütide kompleksi (COC) ja toetada ootsüütide in vitro küpsemist. Lisaks kasutatakse seda aspiratsiooniliinide loputamisel Saksa holsteini lehmadelt munarakkude kogumisel. Lisaks sellele on Medium 199 suurepärane keskkond rottidest saadud südame endoteelirakkude kasvatamiseks. Need rakendused näitavad Medium 199 mitmekülgsust ja kohandatavust erinevate katsete jaoks.
Ajalugu
Medium 199 väljatöötamine 1950. aastatel tähistas olulist edasiminekut koekultuurikeskkondades. Enne selle kasutuselevõttu tuginesid paljud kasvukeskkonnad loomsetele toodetele ja koeekstraktidele. Morgan ja kolleegid tegid aga selles valdkonnas revolutsiooni, sõnastades rakukultuuride jaoks täielikult määratletud toiteallika. Oma katsete kaudu, mis hõlmasid erinevaid vitamiinide, aminohapete ja muude tegurite kombinatsioone, avastasid nad Medium 199 erakordsed kasvu soodustavad omadused.
Kvaliteedikontroll
pH = 7,2 +/
- 0,02 temperatuuril 20-25 °C.
Iga partii on testitud steriilsuse ning mükoplasma ja bakterite puudumise suhtes.
Hooldus
Hoida külmikus +2°C kuni +8°C juures pimedas. Külmutamine ja soojendamine kuni +37° C vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37° C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid (nt mikrolaineahjusid).
Kui on vaja kasutada ainult osa söötmest, võtke see kogus pudelist välja ja soojendage seda toatemperatuuril.
Kõikide söötmete, välja arvatud põhisöötme säilivusaeg on 8 nädalat alates tootmiskuupäevast.
Koostis
Koostisosad
mg/l
Anorgaanilised soolad
Kaltsiumkloriid x 2H2O
264,92
Raud(III)nitraat x 9H2O
0,72
Magneesiumsulfaat
97,67
Kaaliumkloriid
400,00
Naatriumatsetaat x 3H2O
82,95
Naatriumkloriid
6,800.00
Naatriumdivesinikfosfaat x H2O
140,00
Muud komponendid
Adeniinsulfaat
10,00
AMP
0,20
ATP
1,00
Kolesterool
0,20
2'-Deoksüriboos
0,50
D(+)-glükoosi veevaba
1,000.00
Glutatioon (punane)
0,05
Guaniin x HCl
0,30
Hüpoksantiin
0,30
Fenool punane
10,00
D-Riboos
0,50
Tümiin
0,30
Tween 80
4,90
Uracil
0,30
Ksantiin
0,30
NaHCO3
2,200.00
Aminohapped
L-alaniin
25,00
L-arginiin x HCl
70,00
L-Asparagiinhape
30,00
L-tsüsteiin x HCl x H2O
0,10
L-tsüsteiin
20,00
L-glutamiin stabiilne
149,00
L-glutamiinhape
67,00
Glütsiin
50,00
L-Histidiin x HCl x H2O
21,88
L-hüdroksüproliin
10,00
L-isoleutsiin
20,00
L-leutsiin
60,00
L-Lüsiin x HCl
70,00
L-metioniin
15,00
L-Fenüülalaniin
25,00
L-proliin
40,00
L-Seriin
25,00
L-treoniin
30,00
L-trüptofaan
10,00
L-Türosiin
40,00
L-valiin
25,00
Vitamiinid
4-Aminobensoehape
0,05
Askorbiinhape
0,05
D(+)-Biotiin
0,01
Kaltsiferool
0,10
D-kaltsium-pantotenaat
0,01
Koliinkloriid
0,50
Foolhape
0,01
müo-Inositool
0,05
Menadioon
0,01
Nikotiinhape
0.025
Nikotiinamiid
0.025
Püridoksaal x HCl
0.025
Püridoksool x HCl
0.025
Riboflaviin
0,01
DL-α-tokoferoolfosfaat-dinaatriumsool
0,01
Tiamiin x HCl
0,01
Vitamiin A atsetaat
0,14
IMDM sobib hästi kiiresti paljunevate, suure tihedusega rakukultuuride, sealhulgas Jurkat-, COS-7
- ja makrofaagirakkude kasvatamiseks. Erinevate rakukultuuride jaoks saadaval olevad IMDMi erinevad modifikatsioonid on leitavad meediumivaliku tööriista abil. Vedelkeskkonnad pakuvad olulisi toitaineid kõigi rakukultuuride jaoks. Iga meie kvaliteetne rakukultuurikeskkond on toodetud vastavalt algselt avaldatud valemile või modifikatsioonidele, mis on vajalikud kultuurikeskkonna järjepideva toimimise ja stabiilsuse tagamiseks.
IMDM vs. DMEM
IMDM sisaldab kaaliumnitraati raudnitraadi asemel ning HEPESi ja naatriumpüruvaati. IMDMi lisakomponendid muudavad selle sobivamaks spetsiaalsete rakutüüpide ja spetsiifiliste rakenduste jaoks kui DMEM.
IMDM vs. RPMI
IMDM ja RPMI on erineva koostisega, mis võib olla oluline PMA/ionomütsiini stimuleerimisel. Üks oluline erinevus on Ca2+ kontsentratsioon. Kui RPMI sisaldab 0,42 mM Ca2+, siis IMDM sisaldab 1,49 mM.
Kvaliteedikontroll
pH = 7,2 +/
- 0,02 temperatuuril 20-25 °C.
Iga partii on testitud steriilsuse ning mükoplasma ja bakterite puudumise suhtes.
Hooldus
Hoida külmikus +2°C kuni +8°C juures pimedas. Külmutamine ja soojendamine kuni +37° C vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37° C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid (nt mikrolaineahjusid).
Kui on vaja kasutada ainult osa söötmest, võtke see kogus pudelist välja ja soojendage seda toatemperatuuril.
Kõikide söötmete, välja arvatud põhisöötme säilivusaeg on 8 nädalat alates tootmiskuupäevast.
Koostis
Koostisosad
mg/l
Anorgaanilised soolad
Kaltsiumkloriid x 2 H2O
219,00
Kaaliumkloriid
330,00
Kaaliumnitraat
0.076
Magneesiumsulfaat veevaba
97,73
Naatriumkloriid
4,505.00
Naatriumdivesinikfosfaat veevaba
109,00
Naatriumseleniit
0,02
Muud komponendid
D(+)-glükoos veevaba
4,500.00
HEPES
5,958.00
Naatriumpüruvaat
110,00
Punane fenool
15,00
Aminohapped
L-alaniin
25,00
L-arginiin x HCl
84,00
L-asparagiin x H2O
25,00
L-asparagiinhape
30,00
L-tsüstiin x 2HCl
91,24
L-Glutamiin
584,00
L-glutamiinhape
75,00
Glütsiin
30,00
L-Histidiin x HCl x H2O
42,00
L-isoleutsiin
104,80
L-leutsiin
104,80
L-Lüsiin x HCl
146,20
L-metioniin
30,00
L-fenüülalaniin
66,00
L-proliin
40,00
L-Seriin
42,00
L-treoniin
95,20
L-trüptofaan
16,00
L-Türosiin x 2Na
104,20
L-Valiin
93,60
Vitamiinid
D(+)-Biootiin
0.013
D-kaltsium-pantotenaat
4,00
Koliinkloriid
4,00
Foolhape
4,00
müo-Inositool
7,20
Rakukultuurikeskkond: Ülevaade
Bioteaduste valdkonnas on üks olulisemaid meetodeid rakukultuur. Rakkude, kudede või elundite eemaldamine loomalt või taimelt ja nende rakkude, kudede või elundite hilisem siirdamine kunstlikku keskkonda, mis on nende ellujäämiseks ja/või kasvuks soodne, on see, mida mõeldakse väljendi "rakukultuur" all Rakkude optimaalse arengu põhilised keskkonnavajadused on kontrollitud temperatuur, substraat rakkude kinnitumiseks, sobiv kasvusubstraat ja inkubaator, mis säilitab optimaalse pH ja osmolaalsuse. Rakkudel peavad olema need tingimused, et nad saaksid kasvada täies ulatuses.
In vitro kasvatamiseks sobiva kasvusubstraadi valik on rakukultuuri kõige kriitilisem ja olulisem etapp. Kasvukeskkond, mida nimetatakse ka kasvukeskkonnaks, on vedelik või geel, mis on koostatud organismide arengu soodustamiseks mikroskoopilisel, rakulisel või taimede tasandil. Rakkude kasvatamiseks kasutatav kasvusöötme sisaldab sageli piisavat energiavarustust ja aineid, mis kontrollivad rakutsüklit. Kultuurkeskkonna peamised komponendid on aminohapped, vitamiinid, anorgaanilised soolad, glükoos ja seerum. Seerum lisatakse söötmesse, sest see toimib kasvufaktorite, hormoonide ja kinnistumisfaktori allikana. Lisaks toitainete pakkumisele aitab söötme keskkond säilitada ka pH ja osmolaalsuse taset.
Rakukultuuris kasutatavad söötme tüübid
Nii inimese kui ka loomade rakke on võimalik kasvatada kas kunstlikus või sünteetilises söötmes või täielikult looduslikus söötmes, mida on täiendatud looduslike elementidega. Järgnevalt anname ülevaate erinevatest praegu kättesaadavatest söötme tüüpidest.
Looduslikud söötmed
Looduslikes keskkondades võib leida ainult bioloogilisi vedelikke, mis eksisteerivad loomulikus olekus. Looduslikud meediumid on väga kasulikud ja lihtsad paljude erinevate loomsete rakutüüpide kasvatamiseks. Puudulik arusaam sellest, millistest komponentidest täpselt looduslikud meediumid koosnevad, on peamine tegur, mis aitab kaasa looduslikke meediume kasutades saadud tulemuste vähesele korratavusele.
Kunstlikud söötmed
Kunstlike või sünteetiliste keskkondade valmistamine hõlmab toitainete (nii orgaaniliste kui ka anorgaaniliste), seerumivalkude, süsivesikute, kofaktorite, vitamiinide ja soolade, samuti O2- ja CO2-gaasifaaside lisamist [1].
On välja töötatud mitmesuguseid kunstlikke keskkondi, et täita ühte või mitut järgmistest funktsioonidest: 1) kohene ellujäämine (tasakaalustatud soolalahus, millel on täpne pH ja osmootiline rõhk). 2) Pikaajaline ellujäämine (tasakaalustatud soolalahus, mida on täiendatud orgaaniliste kemikaalide ja/või seerumi erinevate preparaatidega). 3) Piiramatu areng. 4) Spetsialiseeritud funktsioonid.
Kunstlike keskkondade puhul on neli erinevat klassifikatsiooni:
Seerumit sisaldav keskkond
Kõige sagedamini leidub loomarakkude kasvatamiseks kasutatavas söötmes lisandeid, milleks on veise loote seerum (fetal bovine serum). Seda lisatakse kasvukeskkonda odava lisana, et saavutada parimad võimalikud kasvutingimused. Lisaks sellele, et seerum toimib ebastabiilsete või vees mittelahustuvate toitainete, hormoonide ja kasvufaktorite, proteaasi inhibiitorite ja muude ainete transporterina või kelaatorina, seob seerum ka kahjulikke molekule ja neutraliseerib neid.
Seerumivaba keskkond
Seerumi sisaldusel keskkondades on mitmeid puudusi ja see võib põhjustada suuri tõlgendusvigu immunoloogilistes uuringutes [2, 3]. On loodud mitmesuguseid erinevaid seerumivabu keskkondi [4, 5]. Need meediumid on tavaliselt spetsiaalselt koostatud ühe rakutüübi kasvatamise toetamiseks, näiteks Thermo Fisher Scientific'i Knockout Serum Replacement ja Knockout DMEM ning Stem Cell Technologies'i mTESR meedium [6] tüvirakkude jaoks [7].
Lisaks sisaldavad need söötmed kindlaksmääratud kogustes puhastatud kasvufaktoreid, lipoproteiine ja muid valke, mida muidu tavaliselt annab seerum [8]. Neid keskkondi nimetatakse sageli "määratletud kultuurikeskkonnaks", kuna nende komponentide koostis on hästi teada.
Keemiliselt määratletud keskkond
Need söötmed sisaldavad ülipuhtaid anorgaanilisi ja orgaanilisi komponente, mis ei ole saastunud mingi saasteainega. Need võivad sisaldada ka puhtaid valgulisandeid, näiteks kasvufaktoreid.
bakterite või pärmi geneetiline muundamine koos teatavate rasvhapete, vitamiinide, kolesterooli ja aminohapete lisamisega annab tulemuseks nende komponentide tootmise [9].
Valguvabad söötmed
Valguvabad söötmed on need, mis ei sisalda üldse valke, vaid ainult mittevalgulisi elemente. Võrreldes lisatud seerumit sisaldavate keskkondadega soodustab valgu lisamata keskkondade kasutamine rakkude suuremat paljunemist ja valkude ekspressiooni ning lihtsustab järgneva protsessi käigus tekkivate toodete puhastamist [10-12]. Valgu ei sisaldu sellistes preparaatides nagu MEM ja RPMI-1640. Vajaduse korral võib siiski manustada valgu lisandit.
Kultuurikeskkond ja selle põhikomponendid
Kommertskultuurikeskkonda võib osta pulbri või vedelikuna ja see sisaldab sageli mitmesuguseid toitaineid, nagu aminohappeid, glükoosi, soolasid, vitamiine ja muid toidulisandeid.
Vajadused nende komponentide järele on iga rakuliini puhul erinevad ja need erinevused põhjustavad meediumide suure hulga erinevate koostiste olemasolu. Iga komponent vastutab teatud funktsiooni eest, mida kirjeldatakse järgmistes lõigetes:
Puhvrisüsteemid
Optimaalsete kasvutingimuste säilitamiseks tuleb pH-d reguleerida, mida sageli tehakse ühega kahest puhversüsteemist:
Looduslik puhverdussüsteem
CO2/H2CO3 suhe atmosfääris on võrdne keskkonna suhtega, mis loob loomuliku puhvrimehhanismi. Loomuliku puhvrimehhanismi säilitamiseks tuleb kultuure hoida 5-10% CO2 sisaldavas õhukeskkonnas, mis saavutatakse sageli CO2-inkubaatori abil. Üks parimaid asju loodusliku puhvri kasutamise juures on see, kui odav ja ohutu see on.
HEPES
Keemiline puhverdamine tvitteriooni HEPES abil on suurema puhverdamisvõimega pH-vahemikus 7,2-7,4 ja ei vaja reguleeritud gaasilist keskkonda. Teatud rakutüüpide puhul võib suurem HEPESi annus olla kahjulik. Samuti on HEPESi sisaldav keskkond palju tundlikum fluorestseeriva valguse fototoksilise mõju suhtes [13].
Fenoolpunane
Kaubanduslikult saadaolevas kultuurkeskkonnas kasutatakse sageli pH-indikaatorit fenoolpunast, mis võimaldab pH pidevat jälgimist. Rakkude laienedes põhjustavad nende rakkude poolt toodetud metaboliidid pH muutuse ja seega ka keskkonna värvuse muutuse. Fenoolpunasel on kahekordne mõju söötme värvusele, muutes selle happelise pH korral kollaseks ja aluselise pH korral lillaks. pH 7,4, mis on rakukultuuride jaoks optimaalne väärtus, põhjustab söötme fluorestseeruva punase värvuse.
Kuid fenoolpunasel on mõned puudused: Esiteks suudab fenoolpunane simuleerida mitmete steroidhormoonide, eelkõige östrogeeni toimimist [14]. Seetõttu soovitatakse östrogeenitundlike rakkude, näiteks rinnakoe uurimisel kasutada fenoolpunast vaba söötme. Naatrium-kaaliumi tasakaalu häirib fenoolpunase olemasolu mitmetes seerumivabades preparaatides. Seerumi või veiste hüpofüüsihormooni lisamine söötmesse võib sellele mõjule vastu töötada [15]. Kolmandaks takistab fenoolpunase olemasolu tuvastamist voolutsütomeetrilistes katsetes.
Anorgaanilised soolad
Anorgaanilisi soolasid, nagu naatrium-, kaalium- ja kaltsiumiioonid, sisaldav keskkond aitab säilitada osmootilist tasakaalu ja reguleerida membraanipotentsiaali.
Aminohapped
Kuna aminohapped on valkude põhikomponendid, on nad iga kunagi loodud rakukasvatussubstraadi oluline koostisosa. Kuna rakud ei suuda teatud aminohappeid ise toota, on oluline, et kasvukeskkond sisaldaks asendamatuid aminohappeid. Need on vajalikud rakkude paljunemiseks ja nende sisaldus määrab maksimaalse rakutiheduse, mida on võimalik saavutada. Eriti oluline on L-glutamiin, mis on asendamatu aminohape.
L-glutamiin toimib ainevahetuse sekundaarse energiaallikana ja aitab kaasa lämmastiku tootmisele NAD, NADPH ja nukleotiidide tootmiseks. Kuna L-glutamiin on ebastabiilne aminohape, mis aja jooksul muutub selliseks, mida rakud ei suuda kasutada, tuleb seda anda keskkonda.
Lisaks võib söötmesse anda mitteolulisi aminohappeid, et täiendada neid, mis on kasvuprotsessi jooksul ära kasutatud. Rakkude kasv hoogustub ja nende elujõulisus suureneb, kui kasvukeskkonda lisatakse mitteolemuslikke aminohappeid.
Süsivesikud
Süsivesikud suhkrute kujul on peamine energiaallikas. Paljud kasvukeskkonnad sisaldavad lisaks tavalisematele suhkrutele glükoosile ja galaktoosile ka maltoosi ja fruktoosi.
Valgud ja peptiidid
Albumiin, transferriin ja fibronektiin on kõige sagedamini kasutatavad valgud ja peptiidid. Need on eriti olulised keskkondades, mis ei sisalda seerumit. Albumiin, transferriin, aprotiniin, fetuiin ja fibronektiin on mõned valgud, mida võib leida seerumis, mis on valgurikas varu.
Albumiin on peamine veres leiduv valk, mille ülesanne on siduda ja transportida erinevaid aineid, sealhulgas vett, soolasid, vabu rasvhappeid, hormoone ja vitamiine erinevate organite ja rakkude vahel. Albumiini võime seonduda kemikaalidega muudab selle tõhusaks kandidaadiks kahjulike ühendite eemaldamiseks keskkonnas, milles rakke kasvatatakse.
Aprotiniin on kaitsevahend rakukultuurisüsteemides, kuna see on stabiilne neutraalses ja happelises pH-s, samuti vastupidav kõrgetele temperatuuridele ja proteolüütiliste ensüümide poolt põhjustatud hävitamisele. See on võimeline inhibeerima mitmeid seriinproteaase, sealhulgas muu hulgas trüpsiini.
Fetuiin on glükoproteiin, mida võib loote- ja vastsündinute seerumis tuvastada suuremates kogustes kui täiskasvanud loomade seerumis. Lisaks sellele toimib see seriinproteaasi inhibiitorina. Fibronektiin on oluline komponent rakkude adhesiivsuse protsessis. Transferriin on valk, mis transpordib rauda ja vastutab raua toimetamise eest rakumembraanidele.
Rasvhapped ja lipiidid
Neil on oluline roll seerumivabas keskkonnas, kui seerum puudub.
Vitamiinid
Arvukad vitamiinid on vajalikud rakkude arenguks ja paljunemiseks. Vitamiine ei saa rakud ise piisavas koguses toota ja seetõttu on need koekultuuris olulised toidulisanditena.
Rakukultuuris on esmane vitamiinide allikas seerum; siiski töödeldakse söötmeid ka erinevate vitamiinidega, et muuta need konkreetsele rakutüübile sobivaks. Kõige tüüpilisemalt kasutatakse B-rühma vitamiine kasvu stimuleerimiseks.
Mikroelemendid
Keemilisi elemente, nagu vask, tsink, seleen ja trikarboksüülhappe vaheühendid, nimetatakse mikroelementideks. Mikroelemente lisatakse sageli keskkonda, mis ei sisalda seerumit, et asendada neid elemente, mis tavaliselt on seerumis olemas. Need elemendid on olulised keemilised komponendid, mis on vajalikud rakkude tervislikuks arenguks. Paljud biokeemilised reaktsioonid sõltuvad teatud mikrotoitainetest, näiteks ensüümide aktiivsus.
Keskkonnaallikate lisandid
Teatavate rakuliinide jaoks soovitatud täielik kasvukeskkond vajab lisakomponente, mis puuduvad baaskeskkonnas ja seerumis. Need toidulisandid toetavad rakkude kasvu ja asjakohast ainevahetuse toimimist.
Kuigi hormoonid, kasvufaktorid ja signaalimolekulid on teatud rakuliinide asjakohase paljunemise jaoks olulised, tuleb alati järgida järgmisi ettevaatusabinõusid: Kuna toidulisandite lisamine võib muuta täieliku kasvusöötme osmolaalsust, mis võib pärssida rakkude arengut, on alati soovitatav kontrollida osmolaalsust pärast toidulisandite lisamist. Enamiku rakuliinide puhul jääb optimaalne osmolaalsus vahemikku 260-320 mOSM/kg.
Antibiootikumid
Antibiootikume kasutatakse sageli bakteriaalsete ja seenhaiguste arengu pärssimiseks [16], kuigi need ei ole rakkude kasvuks hädavajalikud. Kuna antibiootikumid võivad varjata saastumist mükoplasma ja resistentsete bakteritega, ei soovitata nende rutiinset kasutamist rakukultuuride puhul [17, 18].
Lisaks võivad antibiootikumid häirida ülitundlike rakkude ainevahetust. Sageli kasutatakse MilliporeSigma ja Life Technologies'i toodetud penitsilliini ja streptomütsiini kombinatsioone. Plasmotsiini on kasutatud glioomi rakuliinide TS603, TS516 ja BT260 kasvatamisel [19] ning see on osutunud tõhusaks mükoplasmakontaminatsiooni eemaldamisel (20).
Seerum
Seerumis leidub albumiini, kasvufaktoreid ja kasvu inhibiitoreid. Seerum on rakukultuurisöötme üks olulisemaid komponente, sest see sisaldab aminohappeid, valke, vitamiine (eriti rasvlahustuvaid vitamiine nagu A, D, E ja K), süsivesikuid, lipiide, hormoone, kasvufaktoreid, mineraalaineid ja mikroelemente.
Kultiveeritud rakkude arengu soodustamiseks kasutatakse sageli loote- ja vasikaveise seerumit. Loote seerum sisaldab rohkesti kasvufaktoreid ja sobib rakkude kloonimiseks ja tundlike rakkude arendamiseks. Vähenenud kasvu soodustavate omaduste tõttu kasutatakse vasikaseerumit kontaktide inhibeerimise katsetes. Tavalised kasvukeskkonnad sisaldavad sageli 2% kuni 10% seerumit. Seerumi lisamine kasvukeskkonda teenib järgmisi eesmärke [21]:
-
Seerum annab rakkudele vajalikke toitaineid (nii lahusena kui ka valkudega seotud).
-
Seerumis sisalduvad mitmed kasvufaktorid ja hormoonid, mis on seotud kasvu edendamise ja rakkude spetsialiseeritud aktiivsusega.
-
See pakub palju seonduvaid valke, nagu albumiin ja transferriin, mis transpordivad teisi kemikaale rakku. Näiteks albumiin toimetab rakkudesse rasvu, vitamiine, hormoone jne.
-
Samuti pakub see valke, nagu fibronektiin, mis suurendavad rakkude adhesiivsust substraadi külge. Lisaks sellele toodab see levituselemendid, mis aitavad kaasa raku laienemisele enne jagunemist.
-
See annab proteaasi inhibiitoreid, mis takistavad rakkude proteolüüsi.
-
See sisaldab ka mineraalaineid, nagu Na+, K+, Zn2+ ja Fe2+.
-
See suurendab söötme viskoossust, kaitstes seega rakke mehaaniliste vigastuste eest suspensioonikultuuri liigutamise ajal.
-
See on ka puhver.
Viited
[1] Morgan J, Morton H, Parker R. Nutrition of animal cells in tissue culture; initial studies on a synthetic medium. Proc Soc Exp Biol Med. 1950;73:1-8
[2] Kerbel R, Blakeslee D. Loote vasikaseerumi komponendi kiire adsorptsioon imetajarakkude kultuuris. Võimalik artefaktide allikas rakuspetsiifiliste antigeenide antiseerumite uuringutes. Immunology. 1976;31:881-91
[3] Sula K, Draber P, Nouza K. Seerumi lisamine rakususpensioonide valmistamiseks kasutatavale söötmele kui võimalik artefaktide allikas rakuvahendatud reaktsioonides, mida uuritakse popliteaalsete lümfisõlmede testiga. J Immunogenet. 1980;7:483-9
[4] Mariani E, Mariani A, Monaco M, Lalli E, Vitale M, Facchini A. Kaubanduslikud seerumivabad söötmed: hübriidoomide kasv ja monoklonaalsete antikehade tootmine. J Immunol Methods. 1991;145:175-83
[5] Barnes D, Sato G. Kultuuritud rakkude kasvatamise meetodid seerumivabas keskkonnas. Anal Biochem. 1980;102:255-70
[6] Yu H, Lu S, Gasior K, Singh D, Vazquez Sanchez S, Tapia O,et al. HSP70 chaperoneerib RNA-vaba TDP-43 anisotroopsetesse intranukleaarsetesse vedeliku sfäärilistesse kestadesse. Science. 2021;371:
[7] Meharena H, Marco A, Dileep V, Lockshin E, Akatsu G, Mullahoo J,et al. Down-sündroomi põhjustatud vananemine häirib neuronaalsete progenitoride tuumaarhitektuuri. Cell Stem Cell. 2022;29:116-130.e7
[8] Iscove N, Melchers F. Seerumi täielik asendamine albumiini, transferriini ja sojalipidiga lipopolüsahhariidiga reageerivate B-lümfotsüütide kultuurides. J Exp Med. 1978;147:923-33
[9] Stoll T, Muhlethaler K, von Stockar U, Marison I. Hübriidoomide kasvu ja monoklonaalsete antikehade tootmise keemiliselt määratletud valguvaba söötme süstemaatiline täiustamine. J Biotechnol. 1996;45:111-23
[10] Darfler F. Valguvaba keskkond hübriidoomade ja teiste immuunsüsteemi rakkude kasvatamiseks. In Vitro Cell Dev Biol. 1990;26:769-78
[11] Barnes D, Sato G. Seerumivaba rakukultuur: ühendav lähenemisviis. Cell. 1980;22:649-55
[12] Hamilton W, Ham R. Hiina hamsteri rakuliinide klooniline kasv valguvabas keskkonnas. In Vitro. 1977;13:537-47
[13] Zigler J, Lepe Zuniga J, Vistica B, Gery I. Valgusega eksponeeritud HEPES-i sisaldava kasvukeskkonna tsütotoksilise toime analüüs. In Vitro Cell Dev Biol. 1985;21:282-7
[14] Berthois Y, Katzenellenbogen J, Katzenellenbogen B. Fenoolpunane koekultuurikeskkonnas on nõrk östrogeen: mõju östrogeenile reageerivate rakkude uurimisele kultuuris. Proc Natl Acad Sci U S A. 1986;83:2496-500
[15] Karmiol S. Seerumivaba keskkonna arendamine. In: Master JRW, editor. Animal Cell culture, 3rd ed. Oxford: Oxford University Press; 2000.
[16] Perlman D. Antibiootikumide kasutamine rakukultuurikeskkondades. Methods Enzymol. 1979;58:110-6
[17] McGarrity G. Mükoplasmainfektsiooni levik ja kontroll rakukultuurides. In Vitro. 1976;12:643-8
[18] Masters J, Stacey G. Keskkonna muutmine ja rakuliinide passageerimine. Nat Protoc. 2007;2:2276-84
[19] Chakraborty A, Laukka T, Myllykoski M, Ringel A, Booker M, Tolstorukov M,et al. Histoondemetülaas KDM6A tajub otseselt hapnikku, et kontrollida kromatiini ja raku saatust. Science. 2019;363:1217-1222
[20] Molla Kazemiha V, Azari S, Amanzadeh A, Bonakdar S, Shojaei Moghadam M, Habibi Anbouhi M,et al. Plasmocin™ tõhusus erinevatel mollikute poolt nakatunud imetajate rakuliinidel võrreldes tavaliselt kasutatavate antibiootikumidega rakukultuuris: kohalik kogemus. Cytotechnology. 2011;63:609-20
[21] Kragh Hansen U. Seerumi albumiiniga seonduvate ligandide molekulaarsed aspektid. Pharmacol Rev. 1981;33:17-53