Accutase rakkude eralduslahus EDTA ja fenoolpunasega – 100 ml

Accutase on kasutusvalmis, steriilselt filtreeritud rakkude eralduslahus, mis on loodud kui õrn alternatiiv trüpsiinile/EDTA-le imetajate adhesiivsete rakkude eraldamiseks standardsetest kudekultuuri plastnõudest ja adhesiivkattega pindadelt. See ühendab proteolüütilise ja kollageenolüütilise ensüümi aktiivsuse tasakaalustatud soolalahuses, et tagada efektiivne, kuid kontrollitud eraldamine, säilitades rakupinna valgud ning toetades kõrget eluvõimet pärast passaaži ja kiiret uuesti kinnitumist.

Accutase koostis põhineb Dulbecco fosfaadipuhverdatud soolalahusel (DPBS), millele on lisatud EDTA ja fenoolpunane visuaalse pH indikaatorina. Ensüümid on mitte-imetajate ja mitte-bakteriaalset päritolu, mistõttu Accutase sobib eriti hästi tüvirakkude uurimiseks, vaktsiinide tootmiseks ja mis tahes rakendusteks, kus tuleb minimeerida loomsetest või mikroobidest pärinevaid saasteaineid. Lahus inhibeerib ennast automaatselt 37 °C juures, seega ei ole pärast eraldamist vaja neutraliseerivat reagenti ega seerumit sisaldavat keskkonda – rakud saab viia otse värskesse keskkonda.

Peamised omadused

Kasutusvalmis 1x steriilselt filtreeritud vedelik – lahjendamist ega taastamist ei ole vaja
Kombineeritud proteolüütiline ja kollageenolüütiline ensüümiaktiivsus õrnaks dissotsiatsiooniks
Iga partii on standardiseeritud kindlaksmääratud dissotsiatsioonitegevusele, et tagada partiidevaheline ühtlus
Enüümid ei pärine imetajatelt ega bakteritelt
Inhibeerib ennast 37 °C juures – neutraliseerivat lahust ei ole vaja
Valmistatud Dulbecco PBS-is koos EDTA-ga
Fenoolpunane on lisatud visuaalseks pH-indikaatoriks
pH 6,8–7,8


Tüüpilised rakendused
Accutase lahustab õrnalt mitmesuguseid adhesiivseid ja tundlikke rakutüüpe, sealhulgas inimese embrüonaalseid tüvirakke (hESCs), inimese indutseeritud pluripotentseid tüvirakke (iPSCs), närvi tüvirakke, primaarseid neuroneid ja tavapäraselt kultiveeritavaid adhesiivseid rakuliine, nagu HeLa, HEK 293, CHO, MDCK, Vero, NIH/3T3, BHK-21 ja A549. Tüüpilised kasutusjuhtumid hõlmavad:

Imetajate adhesiivsete rakkude rutiinne subkultiveerimine ja passaažimine
hESCs, iPSCs ja muude tundlike liinide õrn üherakuline dissotsiatsioon
Proovide ettevalmistamine voolutsütomeetria ja FACS-analüüsi jaoks
Rakupinna markerite analüüs, kus epitoobi terviklikkus on oluline
Rakkude rändamise, proliferatsiooni ja apoptoosi analüüsid
Puhkeoleku testid seerumi näljutamise ja onkogeeni transfektsiooni uuringute abil
Tuumorrakkude ja neuraalkreestrakkude rändetestid
Tootmise mastaabis laiendamine bioreaktori töövoogudes

Rutiinseks tööks kandke umbes 10 ml Accutase'i 75 cm2 kultuuripinnale ja inkubeerige 5–10 minutit toatemperatuuril. Optimaalne inkubatsiooniaeg tuleks määrata iga rakuliini jaoks eraldi ja see ei tohiks ületada ühte tundi. Enne lisamist loputage rakukihiga Ca2+/Mg2+-vaba soolalahusega, näiteks kaltsiumi ja magneesiumita DPBS-ga, et eemaldada jääkserum ja kahevalentsed katioonid.

Käsitsemine ja säilitamine
Hoidke avamata pudelit külmutatuna temperatuuril -15 °C või madalamal. Sulatage toatemperatuuril või öösel temperatuuril +2 °C kuni +8 °C. Ärge sulatage Accutase'i 37 °C veevannis, kuna kõrgem temperatuur vähendab ensüümi aktiivsust. Pärast sulatamist võib lahust hoida kuni 2 kuud temperatuuril +2 °C kuni +8 °C; ärge hoidke toatemperatuuril. Ärge soojendage reagenti enne kasutamist 37 °C-ni – lisage see otse pestud rakkudele toatemperatuuril. Pika säilivusaja tagamiseks soovitatakse kasutada ühekordseks kasutamiseks mõeldud alikvoote, et vältida korduvaid sulatamistsükleid. Töötage alati aseptilistes tingimustes.

Kvaliteet
Valmistatud rangete kvaliteedistandardite kohaselt. Iga Accutase'i partii on steriilselt filtreeritud ja testitud steriilsuse, pH, välimuse ja dissotsiatsioonitegevuse suhtes, et tagada partii-partii ühtlane ja korratav tulemus.

Toote spetsifikatsioonid



Spetsifikatsioon
Detail



TootetüüpRakkude eraldamise / dissotsiatsiooni reagent
VormSteriilselt filtreeritud vedelik, kasutusvalmis
Maht100 ml
Töökontsentratsioon1x (kasutusvalmis)
Enüümi aktiivsusKombineeritud proteolüütiline ja kollageenolüütiline
Enüümi päritoluMitte-imetaja ja mitte-bakteriaalne
PuhversüsteemDulbecco PBS koos EDTA-ga
pH indikaatorFenoolpunane
pH vahemik6,8 – 7,8
VälimusLäbipaistev, heleroosa kuni oranž lahus
Säilitustemperatuur-15 °C või madalam
Stabiilsus pärast sulatamistKuni 2 kuud temperatuuril +2 °C kuni +8 °C
Soovitatav kasutamiskogus~10 ml 75 cm2 kultuuripinna kohta
Tüüpiline inkubatsiooniaeg5–10 minutit toatemperatuuril
TransporditingimusedKülmutatud kuivjääs
KasutuseesmärkAinult teadusuuringuteks ja edasiseks tootmiseks



Koostis (koostis ühe liitri kohta)



Komponent
Kontsentratsioon (mg/l)




Anorgaanilised soolad

Naatriumkloriid (NaCl)8000,00
Dinatriumvesinikfosfaat (Na2HPO4)1150,00
Kaaliumkloriid (KCl)200,00
Kaaliumdivesinikfosfaat (KH2PO4)200,00

Muud koostisosad

EDTA · 4Na (tetranatrium-EDTA)220,00
Fenoolpunane3,00
Patenteeritud ensüümisegu (proteolüütiline ja kollageenolüütiline toime)1x



Accutase on Innovative Cell Technologies, Inc. registreeritud kaubamärk.

Fosfaadiga puhverdatud soolalahus (PBS) Lahus
Fosfaadiga puhverdatud soolalahus (PBS) on bioloogilistes ja keemilistes uuringutes laialdaselt kasutatav puhverlahus. See mängib olulist rolli pH-tasakaalu ja osmolaarsuse säilitamisel erinevate katsete, sealhulgas kudede töötlemise ja rakukultuuride käigus. Meie PBS-lahus on hoolikalt formuleeritud kõrge puhtusastmega koostisosadest, et tagada stabiilsus ja usaldusväärsus igas eksperimendis. Meie PBS-i osmolaarsus ja ioonide kontsentratsioonid jäljendavad täpselt inimkeha omast, mistõttu on see isotooniline ja enamikule rakkudele mittetoksiline.

Meie PBS-lahuse koostis
Meie PBS-lahus on ülipuhaste fosfaatpuhvrite ja soolalahuste pH-ga kohandatud segu. 1X töökontsentratsioonis sisaldab see järgmist:

8000 mg/l naatriumkloriidi (NaCl)
200 mg/l kaaliumkloriidi (KCl)
1150 mg/L naatriumfosfaat kahealuseline veevaba (Na2HPO4)
200 mg/L Kaaliumfosfaat monobaasiline veevaba (KH2PO4)

See koostis tagab optimaalse pH ja ioonitasakaalu, mis sobib mitmesuguste bioloogiliste rakenduste jaoks.

Meie PBS-lahuse rakendused
Meie PBS-lahus sobib ideaalselt mitmesugusteks rakendusteks bioloogilistes uuringutes. Selle isotoonilised ja mittetoksilised omadused muudavad selle sobivaks ainete lahjendamiseks ja rakukonteinerite loputamiseks. EDTA-d sisaldavad PBS-lahused on tõhusad kinnitunud ja klompunud rakkude eraldamiseks. PBS-i ei tohiks siiski lisada kahevalentseid metalle, nagu tsink, kuna see võib põhjustada sadestumist. Sellistel juhtudel soovitatakse kasutada Good's puhvreid. Lisaks on meie PBS-lahus vastuvõetav alternatiiv viiruste transpordikeskkonnale RNA-viiruste, sealhulgas SARS-CoV-2 transportimiseks ja säilitamiseks.

Kvaliteedikontroll

Steriilselt filtreeritud


Säilitamine ja säilivusaeg

Säilitada +2°C kuni +25°C juures, valguse eest kaitstult.
Pärast avamist säilitada temperatuuril 2°C kuni 25°C ja kasutada 24 kuu jooksul.


Veotingimused

Keskkonnatemperatuur


Hooldus

Hoida külmkapis +2°C kuni +8°C juures pimedas. Vältida külmutamist ja sagedast soojendamist kuni +37°C, kuna see vähendab toote kvaliteeti.
Ärge kuumutage keskkonda üle 37°C ega kasutage kontrollimatuid soojusallikaid, näiteks mikrolaineahjusid.
Kui kasutatakse ainult osa söötmest, võtke vajalik kogus välja ja soojendage see enne kasutamist toatemperatuurini.

Koostis



Kategooria
Komponendid
Kontsentratsioon (mg/l)


Soolad
Kaaliumkloriid
200



Kaaliumfosfaat monobaasiline veevaba
200



Naatriumkloriid
8000



Naatriumfosfaat kahealuseline veevaba
1150

Mükoplasmad on väikesed prokarüootilised organismid, mis on liiga väikesed, et neid mikroskoopiliselt näha, ja mida ei saa tavaliste antibiootiliste reagentidega kõrvaldada. Mükoplasmad võivad mõjutada rakkude kasvu, paljunemist ja rakuliinide morfoloogiat, mis võib viia ebausaldusväärsete katsetulemusteni. umbes 15-35% laboratoorsetest rakukultuuridest on saastunud mükoplasmaga. Seetõttu on soovitatav sagedane kontroll, et tagada mükoplasmavaba keskkond.
Analüüsimeetod
CLS pakub mükoplasma tuvastamiseks nii lühi
- kui ka pikaajalisi teste. Esimese puhul testitakse proove kohe pärast nende saabumist, samas kui teise puhul alustatakse rakukultuuri ja rakke testitakse pärast 14 päeva kestnud antibiootikumivaba kasvatust. Mükoplasma testimine toimub kahepunktilise tuvastamissüsteemi abil, kasutades nii PlasmoTest™
- Mycoplasma Detection Kit (Invivogen) kui ka Certus QC
- mycoADVANCED detection kit (Certus).
Proovid

Pikatesti jaoks palume esitada vähemalt 50 µl rakususpensiooni, mis sisaldab 50 000 rakku. Rakususpensiooni võib saata ümbritseval temperatuuril.
Premium-testi jaoks palume esitada vähemalt 1 miljon rakku sobivas külmutussöötmes, et tagada tugev ja terve kultuur rakkude kasvatamiseks ja hilisemaks testimiseks. Proovid palume saata kuivjääl.

Palun täitke mükoplasma testimise proovi vorm ja lisage see oma proovisaadetisele.

Kolorimeetriline reporteranalüüs
See test on rakupõhine kolorimeetriline test. Mükoplasma juuresolekul indutseerib reporterrakkude rida signaalkaskaadi, mis kutsub esile keskmise värvuse muutumise punasest siniseks. Analüüs viiakse läbi 96-kujulises mitmekambrilises plaadis. Signaalid tuvastatakse mikroplaadi spektrofotomeetriga 620-655 nm juures. Avastatakse kõik mükoplasma
- ja akooleplasmaliigid, aga ka muud rakukultuuris olevad saasteained, näiteks bakterid.
Isotermiline amplifikatsioon
Isotermiline amplifikatsioon on kiire ja usaldusväärne test, mis põhineb mükoplasmaspetsiifilise DNA isotermilisel amplifikatsioonil koos reaalajas tuvastamisega, kasutades DNA-interkalatsioonivärvi. Testiga on võimalik tuvastada kuus kõige levinumat liiki, mis moodustavad >95% saastumistest: M.orale, M.hyorhinis, M.arginini, M.fermentans, M.hominis ja A.laidlawii. Järjestuse homoloogia tõttu tuvastatakse ka teisi mükoplasmaliike (M.pneumoniae, M.gallisepticum ja M.synoviae). Selleks, et teha kindlaks, kas proov on mükoplasmapositiivne või negatiivne, uuritakse sulamistemperatuuri (Tm).