Поживне середовище для культивування клітин
Культивовані клітини потребують ретельного контролю навколишнього середовища для успішного росту та підтримки. Комплексний підхід включає забезпечення стерильності, поживних речовин, стабільності рН і контролю температури.
Стерильні умови та забезпечення поживними речовинами
Щоб запобігти забрудненню і забезпечити життєздатність клітин, стерильне середовище має вирішальне значення. Зазвичай це досягається за допомогою асептичних методів і спеціалізованого обладнання, такого як витяжні шафи з ламінарним потоком. Поживні речовини постачаються через поживні середовища, які містять суміш основних інгредієнтів, зокрема
- Неорганічні солі: Життєво необхідні для підтримання осмотичного балансу та забезпечення необхідних іонів для життєдіяльності клітин.
- Вуглеводи: Слугують джерелом енергії; глюкоза - найпоширеніший цукор.
- Амінокислоти: будівельні блоки білків; деякі з них є незамінними і не можуть синтезуватися клітинами.
- Вітаміни: Діють як кофактори для ферментативних реакцій; вітаміни групи В необхідні для клітинного метаболізму.
- Жирні кислоти та ліпіди: Необхідні компоненти для цілісності та функціонування клітинної мембрани.
- Білки та пептиди: У безсироваткових середовищах замінюють фактори росту та зв'язуючі білки, які зазвичай надходять із сироваткою.
- Сироватка: Часто використовується як джерело факторів росту, хоча безсироваткові альтернативи набувають все більшої популярності для зменшення варіабельності та ризиків забруднення.
- рН і температурна стабільність: Для оптимального росту клітини зазвичай потребують діапазону рН 7,2-7,4. Це регулюється буферними системами, які можуть бути як на основі CO2/бікарбонату, так і хімічними засобами, такими як HEPES. Температура підтримується на рівні 37°C для імітації фізіологічних умов.
Варіанти середовищ та їх оптимізація
Протягом багатьох років були розроблені різні базальні середовища, призначені для певних типів клітин:
- Збалансовані сольові розчини: Складають основу для більш складних поживних середовищ.
- Базальні середовища, такі як мінімальне основне середовище (MEM), використовуються для первинних культур і диплоїдних клітин.
- Складні середовища: Як і RPMI 1640, вони підходять для широкого спектру клітин ссавців.
- Безсироваткові середовища: Розроблені для конкретних застосувань, зменшують ризик забруднення компонентами тваринного походження.
Приготування та контроль якості середовищ
Поживні середовища можна приготувати самостійно з необхідних інгредієнтів або придбати у вигляді готових розчинів. Контроль якості полягає у забезпеченні відсутності домішок і належної концентрації інгредієнтів. Для відновлення порошкоподібних середовищ потрібна вода високої якості, а готові середовища необхідно стерилізувати, як правило, шляхом фільтрації.
Використання сироватки та міркування щодо безпеки
Використання сироватки, особливо фетальної сироватки великої рогатої худоби (FBS), є поширеним через її багатий вміст факторів росту. Однак через занепокоєння щодо таких захворювань, як коров'яча сироватка, для забезпечення безпеки дотримуються суворих протоколів тестування та пошуку джерел.
Регуляторні вказівки та тенденції
Нормативно-правові акти регулюють використання матеріалів тваринного походження в культурах, підкреслюючи важливість їх пошуку та тестування. Тенденція до усунення таких матеріалів, де це можливо, відображається в розробці альтернативних середовищ, що не містять сироватки і тварин.
Таким чином, живильні середовища відіграють фундаментальну роль у вирощуванні та підтримці клітин in vitro. Кожен компонент ретельно відбирається і оптимізується, щоб імітувати середовище in vivo, забезпечуючи клітинам умови для росту, виживання і функціональності.
- це універсальне і широко використовуване базальне середовище, призначене для підтримки росту різноманітних клітин ссавців у біологічних дослідженнях. Це ідеальне середовище для культивування первинних фібробластів, нейронів, гліальних клітин, HUVEC, гладком'язових клітин, а також популярних клітинних ліній, таких як HeLa, 293, Cos-7 і PC-12.
Що відрізняє DMEM від інших середовищ, так це його унікальний склад. Воно містить вражаюче чотириразове збільшення концентрації амінокислот і вітамінів порівняно з оригінальним мінімальним поживним середовищем Eagle's Minimal Essential Medium. Спочатку розроблене з низьким вмістом глюкози (1 г/л) і пірувату натрію, DMEM часто використовується з більш високим вмістом глюкози, як з піруватом натрію, так і без нього. Слід зазначити, що DMEM не містить білків, ліпідів або факторів росту, які потребують доповнення. Для досягнення оптимального росту зазвичай до DMEM додають 10% фетальної сироватки великої рогатої худоби (FBS). Крім того, DMEM використовує буферну систему бікарбонату натрію, що вимагає 5-10% CO2 середовища для підтримання фізіологічного рН.
Модифіковане середовище Dulbecco's Eagle Medium (DMEM) високо цінується серед визначених середовищ для культивування клітин і тканин, задовольняючи потреби росту різних фенотипів клітин, що прилипають. Воно перевершує оригінальне середовище Eagle's, розроблене в 1950-х роках для культивування курячих клітин, завдяки вдосконаленому додатковому складу, відомому як модифікація Дульбекко. Ця модифікація значно підвищує вміст окремих амінокислот і вітамінів до чотирьох разів порівняно з оригінальним середовищем.
У галузі клітинних культур DMEM відіграє життєво важливу роль як середовище для росту різних типів клітин, включаючи первинні клітини, стовбурові клітини та трансформовані клітини. Дослідники також використовують модифіковану версію DMEM для широкого спектру дослідницьких завдань, таких як розробка ліків, тканинна інженерія та вивчення клітинних сигнальних шляхів.
Контроль якості
Стерильно відфільтрований
Зберігання та термін придатності
Зберігати при температурі від +2°C до +8°C, в захищеному від світла місці.
Після відкриття зберігати при температурі 4°C і використати протягом 6-8 тижнів.
Умови транспортування
Температура навколишнього середовища
Обслуговування
Зберігати в холодильнику при температурі від +2°C до +8°C у темряві. Уникайте заморожування та частого нагрівання до +37°C, оскільки це знижує якість продукту.
Не нагрівайте середовище вище 37°C і не використовуйте неконтрольовані джерела тепла, такі як мікрохвильові печі.
Якщо потрібно використати лише частину засобу, відберіть необхідну кількість і підігрійте його до кімнатної температури перед застосуванням.
Склад
Категорія
Компоненти
Концентрація (мг/л)
Амінокислоти
Гліцин
30.00
L-аргінін HCl
84.00
L-цистин 2 HCl
62.57
L-глютамин
584.00
L-гістидин HCl H2O
42.00
L-ізолейцин
105.00
L-лейцин
105.00
L-лізин HCl
146.00
L-метіонін
30.00
L-фенілаланін
66.00
L-серин
42.00
L-треонін
95.00
L-триптофан
16.00
L-тирозин 2 Na 2H2O
103.79
L-валін
94.00
Вітаміни
Холіну хлорид
4.00
D-Кальцію пантотенат
4.00
Фолієва кислота
4.00
міо-інозитол
7.20
Нікотинамід
4.00
Піридоксаль HCl
4.00
Рибофлавін
0.40
Тіамін HCl
4.00
Неорганічні солі
CaCl2 2 H2O
265.00
Fe(NO3)3 9 H2O
0.10
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
200.10
NaCl
6400.00
NaHCO3
3700.00
NaH2PO4 2H2O
141.73
Інші компоненти
D-глюкоза
4500.00
Феноловий червоний натрієва сіль
15.90
Піруват натрію
110.00
Що входить до складу EMEM?
EMEM
- це модифікована версія мінімально необхідного середовища Eagle, що містить збалансований сольовий розчин Ерла, замінні амінокислоти, L-глутамін, піруват натрію та бікарбонат натрію. Важливо відзначити, що цей рівень бікарбонату натрію призначений для використання в умовах 5% CO2 в повітрі. Щоб зберегти його ефективність, рекомендується зберігати середовище при температурі від 2°C до 8°C у темряві, коли воно не використовується.
Для чого використовується EMEM?
Мінімально необхідне середовище Eagle (EMEM)
- це середовище для культивування клітин, яке може підтримувати клітини в культурі тканин. Середовище містить вищі концентрації амінокислот, що дозволяє більш точно відтворити білковий склад культивованих клітин ссавців. EMEM можна використовувати для культивування різних клітин, включаючи фібробласти, клітини клітинної лінії раку печінки людини (HepG2) та астроцитарні клітини-попередники ембріонального мозку людини (PDA). Зазвичай його використовують у присутності фетальної сироватки великої рогатої худоби (FBS), телячої або кінської сироватки.
Чим EMEM відрізняється від інших середовищ для культивування клітин?
Хоча EMEM і модифіковане середовище Дульбекко (DMEM) мають деякі спільні риси, вони також відрізняються. Обидва середовища не містять білка і містять амінокислоти, солі, глюкозу та вітаміни, необхідні для забезпечення клітини енергією та підтримання її в культурі тканин. Однак склад DMEM модифікований і містить до чотирьох разів більше вітамінів та амінокислот і в два-чотири рази більше глюкози, ніж EMEM. Варто зазначити, що EMEM також відрізняється від оригінальної формули MEM.
Контроль якості
Стерильно відфільтрований
Зберігання та термін придатності
Зберігати при температурі від +2°C до +8°C, в захищеному від світла місці.
Після відкриття зберігати при температурі 4°C і використати протягом 6-8 тижнів.
Умови транспортування
Температура навколишнього середовища
Обслуговування
Зберігати в холодильнику при температурі від +2°C до +8°C у темряві. Уникайте заморожування та частого нагрівання до +37°C, оскільки це знижує якість продукту.
Не нагрівайте середовище вище 37°C і не використовуйте неконтрольовані джерела тепла, такі як мікрохвильові печі.
Якщо потрібно використати лише частину засобу, відберіть необхідну кількість і підігрійте його до кімнатної температури перед застосуванням.
Склад
Категорія
Компоненти
Концентрація (мг/л)
Амінокислоти
L-аргінін HCl
126.00
L-цистин 2 HCl
31.30
L-глютамин
292.00
L-гістидин HCl H2O
42.00
L-ізолейцин
52.00
L-лейцин
52.00
L-лізин HCl
72.50
L-метіонін
15.00
L-фенілаланін
32.00
L-треонін
48.00
L-триптофан
10.00
L-тирозин 2 Na 2 H2O
51.90
L-валін
46.00
Вітаміни
Холіну хлорид
1.00
Вітаміни
D-Кальцію пантотенат
1.00
Фолієва кислота
1.00
міо-інозитол
2.00
Нікотинамід
1.00
Піридоксаль HCl
1.00
Рибофлавін
0.10
Тіамін HCl
1.00
Неорганічні солі
CaCl2 2 H2O
265.00
Неорганічні солі
KCl
400.00
MgSO4
97.67
NaCl
6800.00
NaHCO3
2200.00
NaH2PO4
122.00
Інші компоненти
D-глюкоза
1000.00
Інші компоненти
Феноловий червоний натрієва сіль
11.00
Однією з його помітних переваг є здатність підтримувати ріст клітин без необхідності додавання сироватки. Це усуває потенційну інтерференцію, спричинену компонентами сироватки, забезпечуючи узгодженість і надійність експериментальних результатів. Забезпечуючи безсироваткове середовище для культивування, середовище Ham's F-12 пропонує дослідникам більший контроль над своїми дослідженнями.
Ще однією ключовою особливістю середовища Ham's F-12 є його придатність для перещеплення одноклітинних культур. Це робить його чудовим вибором для різних клітинних ліній, включаючи клітини CHO, клітини легень та L-клітини миші. Оптимізований склад поживних речовин сприяє ефективному прикріпленню та росту окремих клітин, що дозволяє створювати однорідні культури клітин з покращеною відтворюваністю.
Крім того, середовище Ham's F-12 отримало визнання як найкраще середовище для аналізу клональної токсичності (CTA). Цей аналіз відіграє важливу роль в оцінці цитотоксичного впливу речовин на клітини. Використовуючи середовище Ham's F-12 в CTA, дослідники можуть точно оцінити вплив різних сполук або методів лікування на окремі клітини, надаючи цінну інформацію про токсикологічні профілі.
Контроль якості
pH = 7,2 +/
- 0,02 при 20-25°C.
Кожна партія була перевірена на стерильність і відсутність мікоплазми та бактерій.
Зберігання
Зберігати в холодильнику при температурі від +2°C до +8°C у темряві. Заморожування та нагрівання до +37°С мінімізує якість продукту.
Не нагрівайте середовище до температури понад 37°С і не використовуйте неконтрольовані джерела тепла (наприклад, мікрохвильові печі).
Якщо потрібно використати лише частину засобу, витягніть цю кількість з пляшки і підігрійте її при кімнатній температурі.
Термін придатності будь-якого середовища, окрім основного, становить 8 тижнів з дати виготовлення.
Склад
Компоненти
мг/л
Неорганічні солі
Хлорид кальцію x 2H2O
44,00
Купрум(ІІ) сульфат x 5H2O
0,00
Заліза (II) сульфат x 7H2O
0,83
Магнію хлорид x 6H2O
122,00
Калій хлористий
223,65
Натрій хлористий
7599,00
натрій гідрофосфат двонатрієвийбезводний
142,04
Цинк сульфат x 7H2O
0,86
Інші компоненти
D(+)-глюкоза безводна
1801,60
Гіпоксантин
4,08
Лінолева кислота
0,08
DL-α-ліпоєва кислота
0,21
Феноловий червоний
1,20
Путресцин x 2HCl
0,16
Піруват натрію
110,00
Тимідин
0,73
NaHCO3
1176,00
Амінокислоти
L-аланін
8,91
L-аргінін x HCl
210,70
L-аспарагін x H2O
15,01
L-аспарагінова кислота
13,31
L-цистеїн x HCl x H2O
35,12
L-аланіл-L-глутамін
217,30
L-глутамінова кислота
14,71
Гліцин
7,51
L-гістидин x HCl x H2O
20,96
L-ізолейцин
3,94
L-лейцин
13,12
L-лізин x HCl
36,54
L-метіонін
4,48
L-фенілаланін
4,96
L-пролін
34,53
L-серин
10,51
L-треонін
11,91
L-триптофан
2,04
L-тирозин
5,44
L-валін
11,71
Вітаміни
D(+)-біотин
0,01
D-Кальцію пантотенат
0,24
Холіну хлорид
13,96
Фолієва кислота
1,32
міо-інозитол
18,02
Нікотинамід
0,04
Піридоксин x HCl
0,06
Рибофлавін
0,04
Тіамін x HCl
0,34
Вітамін В12
1,36
Ця унікальна рецептура поєднує в собі модифіковане орлине середовище Dulbecco (DMEM) та поживну суміш Ham's F-12 (Ham's Nutrient Mixture F-12) у точному співвідношенні 1:1. Додавання L-глутаміну ще більше покращує його склад.
DMEM, отриманий з Eagle's Minimal Essential Medium (EMEM), пропонує підвищену концентрацію амінокислот і вітамінів у порівнянні зі своїм попередником. На відміну від нього, Ham's F-12 базується на середовищі Ham's F-10, забезпечуючи додатковий набір необхідних компонентів.
Для підтримки оптимального росту клітин зазвичай до DMEM:Ham's F12 додають FBS у типовій концентрації 5-10%. Це додавання необхідне, оскільки в середовищі не вистачає гормонів росту, ліпідів та білків, які мають вирішальне значення для клітинного розвитку.
DMEM:Ham's F12 містить буферну систему рН і часто доповнюється феноловим червоним, індикатором рН. Культивовані клітини в DMEM:Ham's F12 або будь-якому середовищі, що використовує бікарбонатну буферну систему, потребують контрольованого середовища з вмістом CO2 5-10% для підтримання відповідного рівня pH.
Контроль якості
Стерильна фільтрація
Зберігання та термін придатності
Зберігати при температурі від +2°C до +8°C, в захищеному від світла місці.
Після відкриття зберігати при температурі 4°C і використати протягом 6-8 тижнів.
Умови транспортування
Температура навколишнього середовища
Обслуговування
Зберігати в холодильнику при температурі від +2°C до +8°C у темряві. Уникайте заморожування та частого нагрівання до +37°C, оскільки це знижує якість продукту.
Не нагрівайте середовище вище 37°C і не використовуйте неконтрольовані джерела тепла, такі як мікрохвильові печі.
Якщо потрібно використати лише частину засобу, відберіть необхідну кількість і підігрійте його до кімнатної температури перед застосуванням.
Склад
Категорія
Компоненти
Концентрація (мг/л)
Амінокислоти
Гліцин
18.75
L-аланін
4.45
L-аргінін HCl
147.50
L-аспарагін H₂O
7.50
L-аспарагінова кислота
6.65
L-цистеїн HCl H₂O
17.56
L-цистин 2 HCl
31.29
L-глутамінова кислота
7.35
L-глутамін
365.00
L-гістидин HCl H₂O
31.48
L-ізолейцин
54.47
L-лейцин
59.05
L-лізин HCl
91.25
L-метіонін
17.24
L-фенілаланін
35.48
L-пролін
17.25
L-серин
26.25
L-треонін
53.45
L-триптофан
9.02
L-тирозину динатрієва сіль
48.10
L-валін
52.85
Вітаміни
D-біотин
0.0035
Холіну хлорид
8.98
D-Кальцію пантотенат
2.24
Фолієва кислота
2.66
міо-інозитол
12.60
Нікотинамід
2.02
Піридоксин HCl
0.031
Піридоксаль HCl
2.00
Рибофлавін
0.219
Тіамін HCl
2.17
Вітамін В12
0.68
Неорганічні солі
CaCl₂ 2 H₂O
154.50
CuSO₄ 5 H₂O
0.0013
Fe(NO₃)₃ 9 H₂O
0.05
FeSO₄ 7 H₂O
0.417
KCl
311.80
MgCl₂ 6 H₂O
61.20
MgSO₄
48.84
NaCl
6996.00
NaHCO₃
1200.00
Na₂HPO₄
71.02
NaH₂PO₄
54.30
ZnSO₄ 7 H₂O
0.432
Інші компоненти
D-глюкоза
3151.00
Гіпоксантин
2.40
HEPES
3574.50
Лінолева кислота
0.042
Ліпоєва кислота
0.105
Фенол червоний натрієва сіль
8.63
Путресцин 2 HCl
0.081
Піруват натрію
55.00
Тимідин
0.365
Середовище Ham's F-12K (Kaighn's) ретельно розроблене для оптимізації умов культивування клітин. Воно має збагачений склад, що забезпечує підвищений рівень основних компонентів, таких як амінокислоти та піруват натрію, а також додаткові елементи, включаючи путресцин, тимідин, гіпоксантин та цинк. Ці добавки дозволяють дослідникам доповнювати середовище мінімальною кількістю сироватки або визначеними компонентами для конкретних типів клітин, що сприяє створенню точних експериментальних умов.
Зокрема, середовище Ham's F-12K (Kaighn's) не містить білків або факторів росту. Отже, часто необхідним є додавання факторів росту та фетальної сироватки великої рогатої худоби (FBS), що дозволяє дослідникам адаптувати середовище до вимог конкретних клітинних ліній. Для досягнення оптимальної продуктивності концентрація FBS повинна бути ретельно оптимізована для кожної клітинної лінії, забезпечуючи оптимальний ріст і функціональність.
Для підтримання фізіологічного рівня рН у середовищі Ham's F-12K (Kaighn's) використовується буферна система бікарбонату натрію (2,5 г/л), що вимагає контрольованого 5-10% CO2 середовища під час культивування. Це гарантує, що рН середовища залишається в ідеальному діапазоні для росту та життєздатності клітин
Контроль якості
pH = 7,2 +/
- 0,02 при 20-25°C.
Кожна партія була перевірена на стерильність і відсутність мікоплазми та бактерій.
Зберігання
Зберігати в холодильнику при температурі від +2°C до +8°C у темряві. Заморожування, а також нагрівання до +37°C мінімізує якість продукту.
Не нагрівайте середовище до температури понад 37°C і не використовуйте неконтрольовані джерела тепла (наприклад, мікрохвильові печі).
Якщо потрібно використати лише частину засобу, витягніть цю кількість з пляшки і підігрійте її при кімнатній температурі.
Термін придатності будь-якого середовища, окрім основного, становить 8 тижнів з дати виготовлення.
Склад
Компоненти
мг/л
Неорганічні солі
Хлорид кальцію x 2H2O
135,24
Купрум(ІІ) сульфат x 5H2O
0,00
Заліза (II) сульфат x 7H2O
0,83
Магнію хлорид x 6H2O
105,72
Магній сульфат x 7H2O
394,49
Калій хлористий
283,29
Калій дигідрофосфат
58,52
Натрій хлористий
7597,20
натрію дигідрофосфатбезводний
115,02
Цинк сульфат x 7H2O
0,14
Інші компоненти
D(+)-глюкоза безводна
1260,00
Гіпоксантин
4,08
DL-α-ліпоєва кислота
0,21
Феноловий червоний
3,00
Путресцин x 2HCl
0,32
Піруват натрію
220,00
NaHCO3
2500,00
Тимідин
0,73
Амінокислоти
L-аланін
17,82
L-аргінін x HCl
421,40
L-аспарагін x H2O
30,02
L-аспарагінова кислота
26,62
L-цистеїн x HCl x H2O
70,24
L-глютамин
292,20
L-глутамінова кислота
29,42
Гліцин
15,01
L-гістидин x HCl x H2O
41,92
L-ізолейцин
7,87
L-лейцин
26,24
L-лізин x HCl
73,04
L-метіонін
8,95
L-фенілаланін
9,91
L-пролін
69,06
L-серин
21,02
L-треонін
23,82
L-триптофан
4,08
L-тирозин
10,87
L-валін
23,42
Вітаміни
D(+)-біотин
0,07
D-Кальцію пантотенат
0,48
Холіну хлорид
13,96
Фолієва кислота
1,32
міо-інозитол
18,02
Нікотинамід
0,04
Піридоксин x HCl
0,06
Рибофлавін
0,04
Тіамін x HCl
0,34
Вітамін В12
1,36
- 0,02 при 20-25 °C. Кожна партія була перевірена на стерильність та відсутність мікоплазм і бактерій. Зберігання Зберігати в холодильнику при температурі від +2 °C до +8 °C в темному місці. Заморожування та нагрівання до +37 °C погіршують якість продукту. Не нагрівайте середовище до температури вище 37°C і не використовуйте неконтрольовані джерела тепла (наприклад, мікрохвильові печі). Якщо потрібно використовувати лише частину середовища, вилийте цю кількість з пляшки і нагрійте її до кімнатної температури. Термін придатності будь-якого середовища, крім базового, становить 6–8 тижнів з дати відкриття. Склад Компоненти мг/л Неорганічні соліХлорид кальцію x 2H2O132,00 Сульфат магнію97,67 Хлорид калію400 Хлорид натрію6 460 Донатрій гідрофосфат (безводний)504,00 Інші компонентиD(+)-Глюкоза (безводна)3 000 Глутатіон (відновлений)0 М'ясний пептон600 Фенол червоний натрієва сіль11 АмінокислотиL-аланін13 L-аргінін x HCl42,14 L-аспарагін x H2O45,03 L-аспарагінова кислота19,97 L-цистеїн x HCl x H2O31,75 L-глутамін (стабільний)219,15 L-глутамінова кислота22 Гліцин7,5 L-гістидин x HCl x H2O20,96 L-гідроксипролін19,67 L-ізолейцин39,3 L-лейцин39,36 L-лізин x HCl36,54 L-метіонін14,92 L-фенілаланін16,52 L-пролін17,27 L-серин26,28 L-треонін17,87 L-триптофан3,06 L-тирозин динатрієва сіль26,10 L-валін17,57 Вітамінип-Амінобензойна кислота1,0 Аскорбінова кислота0,56 D(+)-Біотин0 D-кальцій пантотенат0,20 Холоїдний хлорид5 Фолієва кислота10 Міо-інозитол36 Нікотинамід0 Нікотинова кислота0 Піридоксаль HCl0,5 Піридоксин HCl0,5 Рибофлавін0 Тіамін HCl0 Вітамін B122,0
- це складне і збагачене живильне середовище для культури клітин. IMDM є модифікацією DMEM, що містить селен і має додаткові амінокислоти, вітаміни та неорганічні солі порівняно з DMEM. У ньому не вистачає заліза, тому його потрібно доповнювати фетальною сироваткою великої рогатої худоби (FBS). IMDM використовує буферну систему бікарбонату натрію і потребує 5-10% CO2 для підтримання фізіологічного рівня pH.
IMDM добре підходить для культур клітин високої щільності, що швидко проліферують, включаючи Jurkat, COS-7 і клітини макрофагів. Різні модифікації IMDM, доступні для різних застосувань клітинних культур, можна знайти за допомогою інструменту вибору середовища. Рідкі середовища забезпечують необхідні поживні речовини для всіх видів клітинних культур. Кожне з наших високоякісних середовищ для культивування клітин виготовляється відповідно до початково опублікованої формули або модифікацій, необхідних для забезпечення стабільних характеристик і стабільності середовища.
IMDM проти DMEM
IMDM містить нітрат калію замість нітрату заліза, а також HEPES і піруват натрію. Додаткові компоненти в IMDM роблять його більш придатним для спеціалізованих типів клітин і конкретних застосувань, ніж DMEM.
IMDM проти RPMI
IMDM і RPMI мають різні склади, які можуть бути важливими для стимуляції ПМА/іономіцином. Однією з суттєвих відмінностей є концентрація Ca2+. У той час як RPMI містить 0,42 мМ Ca2+, IMDM містить 1,49 мМ.
Контроль якості
pH = 7,2 +/
- 0,02 при 20-25°C.
Кожна партія була перевірена на стерильність і відсутність мікоплазми та бактерій.
Зберігання
Зберігати в холодильнику при температурі від +2°C до +8°C у темряві. Заморожування та нагрівання до +37°С мінімізує якість продукту.
Не нагрівайте середовище до температури понад 37°С і не використовуйте неконтрольовані джерела тепла (наприклад, мікрохвильові печі).
Якщо потрібно використати лише частину засобу, витягніть цю кількість з пляшки і підігрійте її при кімнатній температурі.
Термін придатності будь-якого середовища, окрім основного, становить 8 тижнів з дати виготовлення.
Склад
Компоненти
мг/л
Неорганічні солі
Хлорид кальцію x 2 H2O
219,00
Калій хлористий
330,00
Нітрат калію
0.076
Магній сульфат безводний
97,73
Натрій хлористий
4,505.00
Натрій дигідрофосфат безводний
109,00
Натрій селеніт
0,02
Інші компоненти
D(+)-глюкоза безводна
4,500.00
HEPES
5,958.00
Піруват натрію
110,00
Феноловий червоний
15,00
Амінокислоти
L-аланін
25,00
L-аргінін x HCl
84,00
L-аспарагін x H2O
25,00
L-аспарагінова кислота
30,00
L-цистин x 2HCl
91,24
L-глютамин
584,00
L-глутамінова кислота
75,00
Гліцин
30,00
L-гістидин x HCl x H2O
42,00
L-ізолейцин
104,80
L-лейцин
104,80
L-лізин x HCl
146,20
L-метіонін
30,00
L-фенілаланін
66,00
L-пролін
40,00
L-серин
42,00
L-треонін
95,20
L-триптофан
16,00
L-тирозин x 2Na
104,20
L-валін
93,60
Вітаміни
D(+)-біотин
0.013
D-Кальцію пантотенат
4,00
Холіну хлорид
4,00
Фолієва кислота
4,00
міо-інозитол
7,20
- це універсальне середовище для культивування клітин, яке широко використовується в біологічних дослідженнях для культивування різних клітин ссавців. Розроблене Джорджем Е. Муром, Робертом Е. Гернером та Х. Еддісоном Франкліном у 1966 році у відомому онкологічному центрі Розуелл-Парк, це середовище отримало свою назву завдяки тому, що його було створено в Меморіальному інституті Розуелл-Парк (RPMI).
Спочатку розроблене для підтримки росту лейкемічних клітин людини як у суспензійних, так і в моношарових культурах, середовище RPMI 1640 еволюціонувало завдяки модифікаціям дослідників і комерційних постачальників і стало придатним для широкого спектру клітин ссавців. Воно винятково сумісне з такими клітинними лініями, як HeLa, Jurkat, MCF-7, PC12, PBMC, астроцитами та карциномами.
Середовище RPMI 1640 відрізняється від інших середовищ для культивування клітин завдяки своєму унікальному складу. Воно містить значну кількість фосфатів, амінокислот та вітамінів. Зокрема, до його складу входять біотин, вітамін В12 і ПАБК, які відсутні в мінімально необхідному середовищі Eagle або модифікованому середовищі Dulbecco. Крім того, середовище RPMI 1640 містить значно підвищену концентрацію вітамінів інозитолу та холіну. Однак воно не містить білків, ліпідів або факторів росту. Тому для забезпечення оптимальних умов для росту клітин зазвичай необхідне додавання 10% фетальної сироватки великої рогатої худоби (FBS).
Буферна система середовища RPMI 1640 заснована на бікарбонаті натрію і потребує 5-10% CO2 для підтримання фізіологічного рівня рН. Включення відновника глутатіону ще більше відрізняє це середовище від інших.
Контроль якості
Стерильно відфільтроване
Зберігання та термін придатності
Зберігати при температурі від +2°C до +8°C, в захищеному від світла місці.
Після відкриття зберігати при 4°C і використати протягом 6-8 тижнів.
Умови транспортування
Температура навколишнього середовища
Обслуговування
Зберігати в холодильнику при температурі від +2°C до +8°C у темряві. Уникайте заморожування та частого нагрівання до +37°C, оскільки це знижує якість продукту.
Не нагрівайте середовище вище 37°C і не використовуйте неконтрольовані джерела тепла, такі як мікрохвильові печі.
Якщо потрібно використати лише частину засобу, відберіть необхідну кількість і підігрійте його до кімнатної температури перед застосуванням.
Склад
Категорія
Компоненти
Концентрація (мг/л)
Амінокислоти
Гліцин
10.00
L-аланіл-L-глутамін
434.40
L-аргінін
200.00
L-аспарагін H2O
56.82
L-аспарагінова кислота
20.00
L-цистин 2HCl
65.20
L-глутамінова кислота
20.00
L-гістидин HCl H2O
20.27
L-гідрокси-L-пролін
20.00
L-ізолейцин
50.00
L-лейцин
50.00
L-лізин HCl
40.00
L-метіонін
15.00
L-фенілаланін
15.00
L-пролін
20.00
L-серин
30.00
L-треонін
20.00
L-триптофан
5.00
L-тирозин 2Na 2H2O
28.83
L-валін
20.00
Вітаміни
p-Амінобензойна кислота
1.00
D-біотин
0.20
Холіну хлорид
3.00
D-Кальцію пантотенат
0.25
Фолієва кислота
1.00
міо-інозитол
35.00
Нікотинамід
1.00
Піридоксин HCl
1.00
Рибофлавін
0.20
Тіамін HCl
1.00
Вітамін B12
0.005
Неорганічні солі
Ca(NO3)2 4H2O
100.00
KCl
400.00
MgSO4 7H2O
100.00
NaCl
6000.00
NaHCO3
2000.00
Na2HPO4
800.00
Інші компоненти
D-глюкоза
2000.00
L-глутатіон відновлений
1.00
Фенол червоний натрієва сіль
5.30