Клітини Рамоса - дослідження В-клітинної лімфоми: Важливість клітин Рамоса
КлітиниРамоса - це клітинні лінії В-лімфоцитів, які широко використовуються в біомедичних дослідженнях. Зокрема, вони знаходять основне застосування в імунології та дослідженнях раку. Дослідники використовують ці клітини для оцінки цитотоксичних препаратів і вивчення поверхневих антигенів В-лімфоцитів, мутацій і механізмів апоптозу.
Походження та загальні характеристики клітин Рамоса s
Розуміння походження та основних характеристик клітинної лінії відіграє вирішальну роль у прийнятті рішення про її придатність для ваших досліджень. Тому бажано ретельно оцінити цю інформацію перед початком будь-якої роботи з нею. У цьому розділі ви знайдете відповіді на найпоширеніші запитання: Що таке клітинні лінії раку Рамоса? Що таке клітинна лінія Рамоса CD19? Що таке клітини Рамоса CD20? Яке походження клітин Рамоса? Які маркери на клітинах лінії Рамоса? Який розмір клітин Рамоса? Яка морфологія клітин лінії Рамоса?
- Клітини лінії Рамоса були створені в 1972 році. Ці клітини були отримані з асцитичної рідини 3-річного європеоїдного хлопчика з лімфомою Беркітта американського типу [1].
- Вони експресують ключові маркери В-клітин, включаючи імуноглобулін М (IgM), CD19, CD20 і CD22.
- Клітини Рамоса - це вірус-негативні клітини вірусу Епштейна. Однак вони можуть постійно зміщуватися в бік позитивних до вірусу Епштейна-Барр клітин.
- Ці клітини В-лімфобластів мають круглу морфологію.
Сині клітини Рамоса проти клітин Рамоса В
Сині клітини Рамоса і клітини Рамоса В - це клітини лімфоми Беркітта людини. Обидва є негативними до вірусу Епштейна. Різниця між цими клітинами полягає в тому, що блакитні клітини Рамоса експресують NF-κB/AP-1-індукований репортерний ген під назвою SEAP (секретований ембріональний лужний фосфат), тоді як білі клітини Рамоса цього гена не мають.
Культивування клітин Рамоса
Цей розділ статті присвячений тому, щоб допомогти вам дізнатися необхідну інформацію про культуру клітин Рамоса. Тут ви дізнаєтесь: Який час подвоєння клітинних ліній? Яке рекомендоване середовище? Як культивувати клітини Рамоса?
Ключові моменти для культивування клітин Рамоса
|
Час подвоєння: |
Час подвоєння клітин Рамоса становить приблизно 20,4 ± 1,5 години. Однак він може відхилятися в залежності від умов культивування клітин. |
|
Прикріплені або в суспензії: |
Клітини Рамоса ростуть у суспензії. |
|
Щільність клітин: |
Оптимальна щільність клітин для лінії Рамос становить 3 x105 клітин/мл . Для субкультивування суспендовані клітини збирають шляхом центрифугування. Клітини додають до свіжого середовища і ретельно ресуспендують. Після цього клітини переливають у нову колбу з щільністю від 3 до 9 х105 клітин/мл . |
|
Поживне середовище: |
Для культивування клітин Рамоса використовують середовище RPMI 1640, доповнене 10% ембріональної бичачої сироватки, 2,1 мМ стабільного глутаміну і 2,0 г/л NaHCO3. середовище слід замінювати 2 рази на тиждень. |
|
Умови росту: |
Клітинну лінію лімфоми Беркітта людини (Рамос) зберігають у зволоженому інкубаторі при 5% CO2 і температурі 37°C. |
|
Зберігання: |
Заморожені клітини Рамоса зберігають при температурі нижче -150 градусів Цельсія або в паровій фазі рідкого азоту, щоб зберегти життєздатність клітин на більш тривалий термін. |
|
Процес заморожування і середовище: |
Для клітин Рамоса рекомендується використовувати середовище для заморожування CM-1 або CM-ACF. Використовується повільний процес заморожування, який дозволяє поступово знижувати температуру на 1 градус Цельсія за хвилину. Таке повільне заморожування захищає клітини від будь-якого шоку і підвищує їх життєздатність. |
|
Процес розморожування: |
Для розморожування заморожені клітинитримають на попередньо прогрітій водяній бані при 37°C протягом 40-60 секунд, поки не залишиться невелика крижана грудка. Після цього додають свіже середовище і клітини центрифугують, щоб видалити елементи заморожуючого середовища. Осад знову ресуспендують, і клітини переносять у нову колбу з культуральним середовищем. |
|
Рівень біобезпеки: |
Лабораторія з рівнем біобезпеки 1 необхідна для підтримання культур клітин Рамоса, що не містять вірусу Епштейна-Барр. Однак рівень біобезпеки зміщується до 2, коли клітини Рамоса остаточно перетворюються на клітини, позитивні до вірусу Епштейна-Барр. |
Рамос: Переваги та обмеження
Як і інші клітинні лінії, клітини Рамоса мають певні переваги та обмеження. У цьому розділі ми розглянемо деякі з них, які можуть суттєво вплинути на їх використання в дослідженнях.
Переваги
- Модель клітин лімфоми Беркітта: Клітини Рамоса були отримані від пацієнта з лімфомою Беркітта, що робить їх релевантною клітинною моделлю для вивчення лімфоїдних злоякісних новоутворень
- Легке культивування: Клітини Рамоса легко культивувати і підтримувати в лабораторії. Вони мають прості вимоги та умови культивування
Обмеження
- Модель in vitro: Клітини Рамоса можуть не повністю відображати генетичну складність пухлин пацієнтів, що обмежує їх застосування. Крім того, результати експериментів з використанням клітинної лінії Рамоса можуть не повністю відображати умови in vivo, що потенційно може призвести до проблем трансляції
застосування клітин Рамоса в дослідженнях
Клітини Рамос мають багатообіцяючі можливості застосування в біомедичній галузі. Деякі з обов'язкових напрямків використання клітин Рамоса в дослідженнях включають
- Біологія лімфоми: Клітини Рамоса широко використовуються для вивчення біології лімфоми. Вони використовуються для дослідження генетичних і молекулярних факторів, що лежать в основі лімфоїдних злоякісних новоутворень. Крім того, за допомогою цих клітин лімфоми Беркітта дослідники отримують уявлення про ініціацію, прогресування та гетерогенність захворювання. Також досліджуються генетичні мутації та сигнальні шляхи, що потенційно може призвести до розробки більш точних діагностичних та терапевтичних підходів. Дослідження, проведене в 2019 році, показало, що інгібування гістон-ацетилтрансферази GCN5 (General control non-depressible 5) знижує пухлинну активність клітин лімфоми Беркітта (Рамоса) людини через порушення сигналізації BCR. Тому GCN5 пропонується як можлива мішень для розробки лікарської терапії лімфом [2].
- Скринінг та тестування ліків: Клітинна лінія Рамоса широко використовується для скринінгу та тестування ліків. Дослідники оцінюють ефективність потенційних терапевтичних сполук у пригніченні проліферації і росту клітин та індукції клітинної смерті в клітинах лімфоми. Це допомагає виявити перспективних кандидатів у ліки, що сприяє розробці цілеспрямованих методів лікування хворих на лімфому. Наприклад, дослідження показало, що метанольний екстракт шкірки, м'якоті та насіння плодів аннони має помірний, а хлороформний екстракт - сильний вплив на проліферацію клітин Рамоса. Таким чином, дослідження показало, що плоди аннони можуть виявитися ефективними у профілактиці та лікуванні лімфом [3].
Клітини Рамоса для ваших досліджень
Публікації за участю клітин лінії Рамоса
У цьому розділі статті наведено кілька цікавих наукових публікацій за участю клітин лінії Рамоса:
Безперервна сигналізація CD 79b і CD 19 необхідна для придатності клітин В-лімфоми Беркітта
Це дослідження було опубліковане в журналі The EMBO у 2018 році. Дослідження показало, що клітини Рамоса В потребують експресії маркерів клітин Рамоса CD19 і CD79b (сигнальний компонент BCR Igβ) для своєї придатності та конкурентного росту.
У цьому дослідженні, опублікованому в Neoplasia (2021), використовували клітини Рамоса і припустили, що домен кінази змішаної лінії (MLKL) епігенетично регулюється в клітинах лімфоми Беркітта (Рамоса). Таким чином, це багатообіцяючий прогностичний маркер успіху терапії, пов'язаної з некроптозом.
Фосфорилювання PBK/TOPK Tyr74 за допомогою JAK2 сприяє росту пухлини лімфоми Беркітта
Ця наукова стаття в Cancer Letters (2022) припускає, що сигнальна вісь JAK2/TOPK/гістон H3 відіграє вирішальну роль у проліферації клітинних ліній В-лімфоми in vitro.
Ця стаття була опублікована в 2020 році в журналі Toxins. Дослідження показало, що лікування веротоксином-1 індукує стрес ендоплазматичного ретикулуму (ЕР) в клітинах Рамоса В. Це призводить до ініціації апоптичної сигналізації або сигналізації виживання в клітинних лініях лімфоми.
Силімарин інгібує експресію гена Toll-подібного рецептора 8 та апоптоз у клітинній лінії раку Рамоса
У цьому дослідженні, опублікованому в журналі Avicenna Journal of Phytomedicine (2020), повідомляється, що природна сполука силімарин пригнічує експресію та апоптоз TLR8 (Toll-подібний рецептор 8) у клітинній лінії Рамоса.
Ресурси для клітинної лінії Рамоса: Протоколи, відео та інше
Нижче наведено кілька онлайн-ресурсів про клітини Рамоса:
- Трансфекція клітин Рамоса: Цей документ допоможе вам вивчити протокол трансфекції клітин лінії Рамоса.
Наступне посилання містить протокол культури клітин Рамоса:
- Клітини Рамоса: Цей веб-сайт містить основну інформацію про клітинну лінію Рамоса. Він також містить протокол субкультивування клітин Рамоса та поводження з проліферуючими і кріоконсервованими культурами. Крім того, доступна інформація про живильні середовища для клітин Рамоса, час подвоєння та щільність клітин.
Ключова інформація про клітини Рамоса: Найпоширеніші запитання
Список використаних джерел
- Кернтке, К.Г., Аналіз організації та сигнальної здатності мембранного IgE під час його взаємодії з CD19 та CD23 у В-лімфоцитах. 2021, Георг-Август-Університет Геттінгена.
- Фаррія, А.Т. та ін., Інгібування GCN5 HAT знижує виживання клітин лімфоми Беркітта людини через зниження експресії гена-мішені MYC та пригнічення сигнальних шляхів BCR. Oncotarget, 2019. 10(56): p. 5847.
- Аль-Шая, Х.М. та ін., Фітохімічний профіль та антиоксидантна активність плодів аннони та її вплив на проліферацію клітин лімфоми. Food Science & Nutrition, 2020. 8(1): p. 58-68.