Клітини P19 - дослідження ембріональної карциноми з використанням клітин P19
P19 - це клітинна лінія ембріональної карциноми миші. Вона широко використовується в біомедичних дослідженнях, в основному для вивчення біології розвитку, біології стовбурових клітин, клітинної диференціації та скринінгу лікарських засобів. Оскільки клітини P19 мають здатність до диференціювання, вони можуть бути корисними в дослідженні складних біологічних процесів, таких як формування тканин і ранній ембріональний розвиток. У цій статті ми обговоримо основи роботи з клітинами P19, отриманими від мишей.
Загальні характеристики та походження клітин P19
Знання про загальні характеристики та походження клітинної лінії є важливим перед початком роботи з нею. У цьому розділі ми розглянемо наступне: Що таке клітинні лінії P19? Який розмір клітини P19? Яке походження клітин P19?
- P19 - це тип плюрипотентних клітин ембріональної карциноми, отриманих з тератокарциноми, що розвинулася у миші C3H/He. Клітинна лінія була вперше створена в 1982 році Макберні та Роджерсом.
- Клітини P19 можуть безперервно рости в культуральному середовищі з додаванням сироватки крові. Вони можуть диференціюватися в інші типи клітин під впливом нетоксичних препаратів, таких як ретиноєва кислота та диметилсульфоксид (ДМСО) [1].
- Ці клітини карциноми миші мають епітеліоподібну морфологію.
- Клітинна лінія P19 має евплоїдний чоловічий каріотип (n=40; XY).
Інформація про культивування клітин P19
Клітинна лінія P19 широко культивується в дослідницьких лабораторіях завдяки своїм унікальним характеристикам. Її культивування є простим і керованим. У цьому розділі наведено всю ключову інформацію, необхідну для утримання та вирощування культури клітин P19. Будемо знати: Який час подвоєння клітин P19? Як культивувати клітинну лінію P19? Чи є P19 адитивною клітинною лінією?
Ключові моменти для культивування клітин P19
|
Час подвоєння: |
Час подвоєння для клітинної лінії P19 становить приблизно 2-3 дні. |
|
Прилипання або в суспензії: |
Клітинна лінія ембріональної карциноми P19 є адгезивною. |
|
Співвідношення субкультивування: |
Клітини P19 слід субкультивувати кожні 48 годин, при цьому слід дотримуватися співвідношення 1:10 для цих клітин. Адгезовані клітини промивають 1 X фосфатним буферним розчином і інкубують з аккутазою до тих пір, поки клітини не роз'єднаються. До клітин додають культуральне середовище і збирають за допомогою центрифугування. Зібрані клітини ретельно ресуспендують і розподіляють у нові колби. |
|
Поживне середовище: |
Для культивування клітин P19 використовують середовище DMEM/Ham's F12, що містить 5% фетальної сироватки великої рогатої худоби, 3,1 г/л глюкози, 1,6 мМ L-глутаміну, 1,0 мМ пірувату натрію, 15 мМ HEPES і 1,2 г/л NaHCO3. |
|
Умови вирощування: |
Для вирощування та культивування клітинної лінії ембріональної карциноми P19 необхідний зволожений інкубатор при 37°C з 5% подачею CO2. |
|
Зберігання: |
Заморожені флакони з клітинами P19 слід зберігати при температурі нижче -150°C в морозильній камері або в паровій фазі рідкого азоту, щоб зберегти життєздатність клітин на більш тривалий термін. |
|
Процес заморожування та середовище: |
Для заморожування клітин P19 можна використовувати середовища CM-1 або CM-ACF з використанням методу повільного заморожування, який захищає клітини від будь-якого шоку і зберігає їх життєздатність. |
|
Процес розморожування: |
Заморожені клітини P19 можна розморозити на водяній бані при 37°C шляхом швидкого перемішування пробірки протягом 40-60 секунд. До клітин додають свіже середовище і центрифугують, щоб видалити елементи середовища, що замерзають. Піддон з клітинами знову ресуспендують, і клітини переливають у нову колбу для росту. |
|
Рівень біобезпеки: |
Для клітинної лінії P19 необхідні лабораторні умови рівня біобезпеки 1. |
Клітинна лінія P19: Переваги та недоліки
У цьому розділі ми обговоримо переваги та недоліки клітинної лінії P19.
Переваги
- Потенціал диференціювання: Клітини P19 можуть диференціюватися в різні типи клітин, включаючи кардіоміоцити, нейрони та мікрогліальні клітини. Для диференціювання їм потрібні нетоксичні препарати, такі як ретиноєва кислота та диметилсульфоксид (ДМСО). Ретиноєва кислота індукує розвиток нейронів, мікроглії та астроглії, тоді як ДМСО ініціює розвиток кардіоміоцитів, що б'ються, та гладком'язових клітин. Таким чином, клітини P19 є корисними для вивчення процесів клітинної диференціації та розвитку
- Модельна система: Клітинна лінія плюрипотентної ембріональної карциноми P19 є цінною моделлю для вивчення раннього ембріонального розвитку. Дослідники використовують клітини P19 для з'ясування клітинних сигнальних шляхів, а також клітинних і молекулярних механізмів, що беруть участь у цих процесах
Недоліки
- Мишаче походження: P19 - це клітинна лінія ембріональної карциноми миші. Отже, результати досліджень з використанням цих клітин не можуть бути повністю перенесені на біологію та процеси в організмі людини
Дослідницькі застосування клітин P19
Клітини P19 мають кілька дослідницьких застосувань завдяки своїй здатності до диференціювання та актуальності для біології розвитку і дослідження стовбурових клітин. Деякі з важливих дослідницьких застосувань клітин ембріональної карциноми P19 включають
- Дослідження диференціювання клітин: Як відомо, клітини P19 можуть диференціюватися в нейрони, мікроглії, гладком'язові клітини і кардіоміоцити; таким чином, вони широко використовуються для вивчення процесів клітинної диференціації. Крім того, вони допомагають дослідникам вивчати розвиток нейронів і серця та механізми, що лежать в його основі. Дослідження, проведене у 2018 році, показало, що активні форми кисню (АФК) спрямовують диференціацію клітин P19 у певні типи клітин і запобігають індукції інших [3]. В іншому дослідженні вивчався процес нейрональної диференціації, опосередкований ретиноєвою кислотою, і було виявлено залучення сигнального шляху PI3K/Akt/GSK3β [4].
- Біологія розвитку: Клітини P19 є безцінною моделлю для вивчення раннього ембріонального розвитку. Вони допомагають дослідникам зрозуміти складні біологічні процеси, такі як формування тканин під час розвитку ембріона. У дослідженні використовували клітини P19 і вивчали молекулярні фактори, що сприяють утворенню дефекту міжшлуночкової перегородки (ДМШП). Результати показали, що довга некодуюча РНК SNHG6 сприяє розвитку ВВС шляхом негативної регуляції miRNA-101 та активації шляху Wnt/β-катеніну [5].
- Медикаментозне тестування: Клітинна лінія ембріональної карциноми миші P19 також використовується для скринінгу потенційних кандидатів на лікарські засоби. У дослідженні використовували диференційовані нейрони клітин P19 і вивчали нейропротекторну ацетилхолінестеразу, інгібуючи синтетичну L-Допу та водний екстракт насіння Mucuna pruriens. Результати показали, що рослинний екстракт показав багатообіцяючі результати порівняно з L-Допою [6].
Придбайте свою клітинну лінію P19 сьогодні
Клітини P19: Дослідницькі публікації
У цьому розділі ми розповімо про декілька цікавих наукових публікацій, присвячених клітинам P19.
Ця стаття була опублікована в журналі Oncology Reports у 2017 році. У дослідженні припускається, що статеві гормони гіпофіза стимулюють адгезію, проліферацію та міграцію клітинних ліній тератокарциноми, включаючи клітини P19.
Довга некодуюча РНК uc. 4 впливає на диференціацію клітин через сигнальний шлях TGF-бета
У цій публікації в журналі Experimental & Molecular Medicine (2018) на клітинах P19 досліджували функцію довгої некодуючої РНК uc.4. Результати показали, що uc.4 впливає на диференціацію клітин шляхом модуляції сигнального шляху TGF-бета.
Ця наукова стаття була опублікована в 2018 році в Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. Дослідження показало, що натуральний екстракт тканини головного мозку та 3D-культура клітин можуть прискорити диференціювання клітин ембріональної карциноми P19 у нейронні клітини.
Це дослідження було опубліковане в Journal of Ethnopharmacology у 2020 році. У дослідженні припускається, що екстракт листя Cichorium intybus L. може індукувати диференціацію клітин ембріональної карциноми P19 в інсулін-продукуючі β-клітини підшлункової залози.
Це дослідження було опубліковано в журналі Molecules (2022). У цьому дослідженні вивчали нейропротекторні та ацетилхолінестеразні інгібуючі ефекти екстракту насіння Mucuna pruriens на нейрони клітин P19.
Ресурси для клітинної лінії P19: Протоколи, відео та інше
Нижче наведено кілька ресурсів про клітини P19.
- Протокол диференціювання нейронів клітин P19: Ця стаття містить протокол нейрональної диференціації P19 клітин та іншу корисну інформацію про диференціацію P19 клітин.
- Трансфекція клітин P19: Це посилання допоможе вам дізнатися про протокол трансфекції P19 клітин.
Наступне посилання містить протокол культивування клітин P19.
- Клітини P19: Цей сайт містить всю корисну інформацію про клітинну лінію P19, включаючи умови її культивування, середовище для клітин P19, розщеплення клітин та багато іншого.
Дослідження клітинної лінії P19: Поширені запитання
Список використаних джерел
- McBurney, M.W., Клітини ембріональної карциноми P19. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J. та ін., Клітинна лінія ембріональної карциноми P19: Модель для вивчення взаємодії ген-середовище. Методи клітинної культури, 2011: с. 223-240.
- Пашковська Н., Гей У., Рьодель Г., Мітохондріальні АФК спрямовують диференціацію плюрипотентних клітин P19 миші. Дослідження стовбурових клітин, 2018. 30: p. 180-191.
- Фу Ф. та ін., Все-транс-ретиноєва кислота індукує диференціювання клітин P19 в нейрони, залучені до сигнального шляху PI3K/Akt/GSK3β. Журнал клітинної біохімії, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y. та ін., Довга некодуюча РНК SNHG6 сприяє формуванню дефекту міжшлуночкової перегородки через негативну регуляцію miR-101 та активацію шляху Wnt/β-катеніну. Die Pharmazie - Міжнародний журнал фармацевтичних наук, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N. та ін., Водний екстракт насіння Mucuna pruriens покращує нейропротекторні та ацетилхолінестеразні інгібуючі ефекти порівняно з синтетичною L-допою. Молекули, 2022. 27(10): p. 3131.