Клітини NIH-3T3: Прогрес у вивченні фібробластів та застосування NIH-3T3
Клітинна лінія NIH-3T3, створена з тканини 17-денного ембріона швейцарської миші-альбіноса в 1962 році Говардом Гріном і Джорджем Тодаро в Школі медицини Нью-Йоркського університету, стала фундаментальним ресурсом у біомедичних дослідженнях. Відомі своєю високою сприйнятливістю до формування вогнищ вірусу лейкемії та саркоми, клітини NIH-3T3 слугують важливим інструментом для безлічі наукових досліджень, включаючи вивчення вірусної онкології, аналіз експресії генів та вивчення динаміки клітинного росту. Номенклатура "3T3" відображає метод культивування клітин, позначаючи інтервал "3-денного перенесення" з початковою щільністю посіву 3 × 10^5 клітин, що підкреслює стандартизовані умови, в яких ці клітини були вперше культивовані і розширені.
Різноманітні морфології та застосування клітин NIH-3T3
Однією з характерних особливостей клітин NIH-3T3 є їхня морфологічна адаптивність, яка суттєво змінюється залежно від щільності культури. При низькій щільності ці фібробласти мають веретеноподібну, поодиноку клітинну структуру, яка еволюціонує в щільні, закручені патерни, коли популяція досягає злиття. Клітини NIH-3T3 із середнім діаметром близько 18 мкм є універсальною моделлю для поглиблених досліджень клітинної біології, починаючи від механізмів репарації тканин і закінчуючи складними шляхами регуляції клітинного циклу.
Інформація про вирощування
Основні відомості про культуру:
Час подвоєння населення: Приблизно 20 годин.
Тип росту: Прилипаючі культури.
Густота посіву: Рекомендована: від 3 до 4 х 10^4 клітин/см^2.
Поживнесередовище: DMEM або Ham's F12, доповнене 5% FBS і 2,5 мМ L-глутаміну.
Умови вирощування: Підтримувати при 37 °C у зволоженому інкубаторі з 5% CO2.
Зберігання: Зберігати при температурі нижче -195 °C у паровій фазі рідкого азоту.
Метод заморожування: Використовуйте середовище CM-1 або CM-ACF; застосовуйте метод повільного заморожування (зниження температури на 1°C).
Протокол розморожування: швидке відігрівання на водяній бані при 37 °C, потім центрифугування для видалення заморожуючого середовища, потім ресуспендування в живильному середовищі.
Рівень біобезпеки: Культивування вимагає дотримання рівня біобезпеки 1.
Швейцарська миша-альбінос у лабораторії.
Переваги та недоліки використання клітин NIH 3T3
Переваги
Ефективність трансфекції: Відомі своїми високими показниками трансфекції, клітини NIH-3T3 чудово підходять як для дослідження транзиторної, так і стабільної експресії генів, пристосовуючись до різноманітних методів трансфекції.
Корисність фідерного шару: Ці клітини часто слугують підтримуючим шаром для ко-культур з такими клітинами, як кератиноцити і стовбурові клітини, завдяки тому, що вони виділяють фактори росту, які сприяють росту ко-культивованих клітин.
Дослідженнястовбурових клітин : Клітини NIH-3T3 є кращим вибором для дослідження стовбурових клітин для індукції плюрипотентності без генетичної модифікації та забезпечення сприятливого середовища для диференціації стовбурових клітин.
Стабільність культури: Клітини NIH-3T3 відомі своєю стабільністю та низькою частотою спонтанної трансформації. Однак, за певних умов або після впливу специфічних онкогенів чи мутагенів, клітини NIH-3T3 можуть піддаватися спонтанній трансформації. Ця трансформація може призвести до набуття ракових властивостей, таких як неконтрольований ріст, втрата контактного гальмування і здатність утворювати пухлини при введенні сприйнятливим хазяїнам.
Недоліки
Непостійний розмір клітин: Подовжена, веретеноподібна морфологія клітин NIH-3T3 може бути різною, що ускладнює аналіз зображень в аналізах.
Сприйнятливість до інфекцій: Ці клітини схильні до бактеріальних і мікоплазмових інфекцій, якщо їх не підтримувати в суворих асептичних умовах, що потенційно може вплинути на цілісність експерименту.
Застосування клітин NIH-3T3 в дослідженнях
Дослідження трансфекції ДНК: Стійкість клітин NIH-3T3 робить їх ідеальними для введення та вивчення функцій різних генів, що було продемонстровано в дослідженнях, присвячених вивченню таких білків, як NAB2-STAT6, та їх ролі в клітинних процесах.
Клітинні аналізи: Їх надійність поширюється на різні аналізи, включаючи життєздатність, апоптоз і фокусоутворення, які дають уявлення про клітинні реакції за різних експериментальних умов.
Дослідження клітинного циклу: Просте маніпулювання клітинним циклом за допомогою сироваткових рівнів робить клітинну лінію потужною моделлю для вивчення регуляції клітинного циклу та його аберацій в контексті захворювань.
Покращуйте свої дослідження за допомогою клітин NIH-3T3
Ключові дослідження за участю клітинної лінії фібробластів NIH 3T3
Клітинна лінія NIH-3T3 відіграє ключову роль у численних дослідницьких проектах, що охоплюють різні аспекти клітинної біології. Нижче наведено кілька важливих досліджень з використанням цих клітин:
- Дослідження злиття білків NAB2-STAT6: Опубліковане в журналі Biochemical and Biophysical Research Communications, це дослідження заглиблюється в те, як білок злиття NAB2-STAT6 впливає на клітини NIH-3T3, зокрема, його роль у посиленні клітинного росту та міграції через регуляцію EGR-1
- Дослідження APOBEC3 та вірусу лейкемії мишей: Це дослідження в журналі Virology вивчає гіпермутацію вірусу лейкемії мишей AKV в клітинах NIH-3T3, що експресують мишачий ген APOBEC3
- Оцінка антиметастатичного потенціалу епігенетичних препаратів: У статті "Онкомішені та терапія" оцінюється антиметастатичний ефект гідралазину та вальпроєвої кислоти на RAS-трансформовані клітини NIH-3T3
- Вплив байкалеїну на проліферацію та синтез колагену NIH-3T3: У цьому дослідженні використовуються клітини NIH-3T3 для вивчення впливу байкалеїну на проліферацію клітин та синтез колагену через модуляцію осі miR-9/інсуліноподібний фактор росту-1
- Вивчення виснаження рибофлавіну та пухлиноутворення: У цьому дослідженні представлені дані про те, як дефіцит рибофлавіну в клітинах NIH-3T3 сприяє пухлиноутворенню, стимулюючи проліферацію клітин і порушуючи регуляцію генів клітинного циклу
Основні ресурси для дослідження клітин NIH-3T3
Для дослідників, зацікавлених у роботі з клітинами NIH-3T3, доступні різноманітні ресурси, які допоможуть керувати протоколами культивування та експериментів:
- Утворення сфероїдів у клітинах NIH-3T3: Це відео містить детальний опис формування сфероїдів, 3D-технології культури клітин, яка об'єднує клітини NIH-3T3 у кластери, пропонуючи більш фізіологічно релевантну модель для досліджень
- Моніторинг росту клітин NIH-3T3: За допомогою системи візуалізації живих клітин JuLI Br це відео фіксує динаміку росту клітин NIH-3T3 протягом 65 годин, демонструючи проліферацію клітин у реальному часі
Ці ресурси спрямовані на підтримку ваших досліджень з клітинами NIH-3T3, забезпечуючи основу для успішних експериментів і відкриттів.
Поширені запитання про клітини NIH-3T3
Список літератури
- Рахімі А.М., М. Кай та С. Хойєр-Фендер, Гетерогенність клітинної лінії фібробластів NIH3T3. Клітини, 2022. 11(17): p. 2677.
- Лейбігер К. та ін., Перша молекулярно-цитогенетична характеристика клітинної лінії NIH 3T3 з високою роздільною здатністю за допомогою мишачого багатобарвного смугування. Журнал гістохімії та цитохімії, 2013. 61(4): p. 306-312.
- Ван, Х.-Х. та ін., Порівняльний аналіз різних шарів живильника з фібробластами 3Т3 для культивування стовбурових клітин кінцівок кроликів. Міжнародний офтальмологічний журнал, 2017. 10(7): p. 1021.
- Ван, З. та ін., Диференціація нейрональних клітин з фібробластів NIH/3T3 за певних умов. Розвиток, ріст і диференціація, 2011. 53(3): p. 357-365.
- Парк Ю.-С. та ін., Злитий білок NAB2-STAT6 опосередковує клітинну проліферацію та онкогенну прогресію через регуляцію EGR-1. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2020. 526(2): p. 287-292.
- Маттссон, М., Експресія Sloppymerase™ в клітинах NIH/3T3: Дослідження універсальності схильної до помилок полімерази злиття. 2021.
- Сахінтурк, В. та ін., Акриламід проявляє свою цитотоксичність у клітинах фібробластів NIH/3T3 шляхом апоптозу. Токсикологія та промисловість, 2018. 34(7): p. 481-489.
- Лусі Е.А. та Ф. Каіччі, Відкриття першого людського ретро-гігантського вірусу: Опис його морфології, ретровірусної кінази та здатності викликати пухлини у мишей. bioRxiv, 2019: с. 851063.
- Ендо М. та ін.СигналізаціяE2F1-Ror2опосередковує скоординовану транскрипційну регуляцію для сприяння фазовому переходу G1/S уфібробластах NIH/3T3,стимульованихbFGF. Журнал FASEB, 2020. 34(2): p. 3413-3428.
- Лонг, Л. та ін. Виснаження рибофлавіну сприяє пухлиноутворенню в клітинах HEK293T та NIH3T3 шляхом підтримання клітинної проліферації та регулювання транскрипції генів, пов'язаних з клітинним циклом. Журнал харчування, 2018. 148(6): p. 834-843.