Celice P19 - Raziskave embrionalnega karcinoma z uporabo celic P19
P19 je celična linija mišjega embrionalnega karcinoma. Široko se uporablja v biomedicinskih raziskavah, predvsem za preučevanje razvojne biologije, biologije matičnih celic, diferenciacije celic in presejanja zdravil. Ker imajo celice P19 sposobnost diferenciacije, so lahko uporabne pri raziskovanju zapletenih bioloških procesov, kot sta nastajanje tkiv in zgodnji embrionalni razvoj. V tem članku bomo razpravljali o osnovah celic P19, pridobljenih z mišjo.
Splošne značilnosti in izvor celic P19
Poznavanje splošnih značilnosti in izvora celične linije je bistveno, preden začnete delati z njo. V tem poglavju bomo obravnavali naslednje: Kaj je celična linija P19? Kakšna je velikost celic P19? Kakšen je izvor celic P19?
- P19 je vrsta pluripotentnih celic embrionalnega karcinoma, ki so bile prvotno pridobljene iz teratokarcinoma, razvitega pri miših C3H/He. Celično linijo sta leta 1982 prvič vzpostavila McBurney in Rogers.
- Celice P19 lahko neprekinjeno rastejo v gojišču, ki je dopolnjeno s serumom. Lahko se diferencirajo v druge celične tipe, če so izpostavljene nestrupenim zdravilom, kot sta retinojska kislina in dimetilsulfoksid (DMSO) [1].
- Te mišje karcinomske celice imajo epitelijam podobno morfologijo.
- Celična linija P19 ima euploidni moški kariotip (n=40; XY).
Informacije o gojenju celic P19
Celična linija P19 se zaradi svojih edinstvenih lastnosti pogosto goji v raziskovalnih laboratorijih. Njeno gojenje je enostavno in obvladljivo. V tem razdelku so navedene vse ključne informacije, ki jih potrebujete za vzdrževanje in gojenje kulture celic P19. Spoznali bomo: Kakšen je čas podvojitve celic P19? Kako gojite celično linijo P19? Ali je celična linija P19 adherentna?
Ključne točke za gojenje celic P19
|
Čas podvojitve: |
Podvojitveni čas, ki ga navaja celična linija P19, je približno 2 do 3 dni. |
|
Adherentne ali v suspenziji: |
Celična linija embrionalnega karcinoma P19 je adherentna. |
|
Razmerje subkultivacije: |
Pri celicah P19 je treba celice subkultivirati vsakih 48 ur, razmerje delitve pa mora biti 1:10. Adherentne celice se sperejo s fiziološko raztopino 1 X fosfatnega pufra in inkubirajo z akutazo, dokler se celice ne disociirajo. Celicam dodamo gojišče in jih poberemo s centrifugiranjem. Zbrane celice previdno resuspendiramo in jih razporedimo v nove bučke. |
|
Rastno gojišče: |
Za gojenje celic P19 se uporablja gojišče DMEM/Ham's F12, ki vsebuje 5 % fetalnega govejega seruma, 3,1 g/L glukoze, 1,6 mM L-glutamina, 1,0 mM natrijevega piruvata, 15 mM HEPES in 1,2 g/L NaHCO3. |
|
Pogoji rasti: |
Za gojenje in kultiviranje celične linije embrionalnega karcinoma P19 je bistvenega pomena vlažen inkubator, ki je nastavljen na 37 °C s 5-odstotnim dovajanjem CO2. |
|
Shranjevanje: |
Zamrznjene stekleničke s celicami P19 je treba hraniti pri temperaturi pod -150 °C v zamrzovalniku ali v parni fazi tekočega dušika, da se dolgoročno ohrani vitalnost celic. |
|
Postopek zamrzovanja in medij: |
Za zamrznitev celic P19 lahko uporabimo medij CM-1 ali CM-ACF s počasnim postopkom zamrzovanja, ki ščiti celice pred šokom in ohranja njihovo sposobnost preživetja. |
|
Postopek odtaljevanja: |
Zamrznjene celice P19 lahko odmrznete v vodni kopeli pri 37 °C s hitrim mešanjem viale 40 do 60 sekund. Celicam dodamo sveže gojišče in jih centrifugiramo, da odstranimo elemente zamrzovalnega gojišča. Celična paleta se ponovno suspendira in celice se prelijejo v novo erlenmajerico za rast. |
|
Raven biološke varnosti: |
Za celično linijo P19 je potrebno laboratorijsko okolje na ravni biološke varnosti 1. |
Celična linija P19: Prednosti in slabosti
V tem razdelku so obravnavane prednosti in slabosti celične linije P19.
Prednosti
- Diferenciacijski potencial: Celice P19 se lahko diferencirajo v različne vrste celic, vključno s kardiomiociti, nevroni in mikroglijskimi celicami. Za diferenciacijo potrebujejo netoksična zdravila, kot sta retinojska kislina in dimetilsulfoksid (DMSO). Retinojska kislina povzroči razvoj nevronov, mikroglije in astroglije, medtem ko DMSO sproži razvoj bitnih kardiomiocitov in gladkih mišičnih celic. Tako so celice P19 uporabne za preučevanje diferenciacije celic in razvojnih procesov
- Modelni sistem: P19 je dragocen model za preučevanje zgodnjega embrionalnega razvoja. Raziskovalci uporabljajo celice P19 za razjasnitev celičnih signalnih poti ter celičnih in molekularnih mehanizmov, vključenih v te procese
Slabosti
- Murino poreklo: P19 je celična linija mišjega embrionalnega karcinoma. Zato ugotovitve študij, ki temeljijo na teh celicah, morda ne bodo v celoti prenesene na človeško biologijo in procese
Raziskovalna uporaba celic P19
Celice P19 se zaradi svoje sposobnosti diferenciacije in pomena za razvojno biologijo in raziskave matičnih celic uporabljajo v številnih raziskavah. Nekatere pomembne raziskovalne aplikacije celic embrionalnega karcinoma P19 vključujejo:
- Študije diferenciacije celic: Kot vemo, se lahko celice P19 diferencirajo v nevrone, mikroglije, gladke mišične celice in kardiomiocite; zato se pogosto uporabljajo za preučevanje procesov diferenciacije celic. Poleg tega pomaga pri raziskavah nevronskega in srčnega razvoja ter osnovnih mehanizmov. Študija, izvedena leta 2018, je pokazala, da reaktivne kisikove vrste (ROS) usmerjajo diferenciacijo celic P19 v določene tipe celic in preprečujejo indukcijo drugih [3]. V drugi študiji so raziskovali proces diferenciacije živčevja, ki ga posreduje retinojska kislina, in ugotovili vpletenost signalne poti PI3K/Akt/GSK3β [4].
- Razvojna biologija: Celice P19 so neprecenljiv model za preučevanje zgodnjega embrionalnega razvoja. Raziskovalcem pomagajo razumeti zapletene biološke procese, kot je nastajanje tkiv med razvojem zarodka. V raziskavi so bile uporabljene celice P19 in preučeni molekularni dejavniki, ki prispevajo k nastanku ventrikularnega septalnega defekta (VSD). Ugotovitve so pokazale, da dolga nekodirajoča RNK SNHG6 prispeva k nastanku VSD z negativnim uravnavanjem miRNA-101 in aktiviranjem poti Wnt/β-katenin [5].
- Testiranje zdravil: Za preverjanje potencialnih kandidatov za zdravila se uporablja tudi celična linija mišjega embrionalnega karcinoma P19. V študiji so uporabili diferencirane celične nevrone P19 in preučevali nevroprotektivne zaviralne učinke acetilholinesteraze sintetične L-Dope in vodnega izvlečka semen Mucuna pruriens. Rezultati so pokazali, da je rastlinski izvleček pokazal obetavne rezultate v primerjavi z L-Dopo [6].
Kupite svojo celično linijo P19 še danes
Celice P19: Raziskovalne objave
V tem razdelku člankov bo predstavljenih nekaj zanimivih raziskovalnih publikacij o celicah P19.
Ta članek je bil objavljen v reviji Oncology Reports leta 2017. V študiji je bilo predlagano, da spolni hormoni hipofize spodbujajo adhezijo, proliferacijo in migracijo teratokarcinomskih celičnih linij, vključno s celicami P19.
Dolga nekodirajoča RNK uc. 4 vpliva na diferenciacijo celic prek signalne poti TGF-beta
V tej objavi v reviji Experimental & Molecular Medicine (2018) so uporabili celice P19 in preučevali delovanje dolge nekodirajoče RNK uc.4. Ugotovitve so razkrile, da uc.4 vpliva na diferenciacijo celic prek modulacije signalne poti TGF beta.
Ta raziskovalni članek je bil objavljen leta 2018 v reviji Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. Študija je pokazala, da lahko naravni izvleček možganskega tkiva in tridimenzionalna celična kultura pospešita diferenciacijo celic embrionalnega karcinoma P19 v nevronske celice.
Ta študija je bila objavljena v reviji Journal of Ethnopharmacology leta 2020. Študija je predlagala, da lahko izvleček listov Cichorium intybus L. povzroči diferenciacijo celic embrionalnega karcinoma P19 v celice β trebušne slinavke, ki proizvajajo inzulin.
Ta raziskava je bila objavljena v reviji Molecules (2022). Ta študija je preučevala nevroprotektivne in acetilholinesteraze zaviralne učinke izvlečka semen Mucuna pruriens na celične nevrone P19.
Viri za celično linijo P19: P19: protokoli, videoposnetki in drugo
V nadaljevanju je navedenih nekaj virov o celicah P19.
- Protokol diferenciacije nevronov celic P19: Ta članek vsebuje protokol nevronske diferenciacije celic P19 in druge koristne informacije o diferenciaciji celic P19.
- Transfekcija celic P19: Ta povezava vam bo pomagala spoznati protokol transfekcije celic P19.
Naslednja povezava vsebuje protokol gojenja celic P19.
- Celice P19: Ta spletna stran vsebuje vse uporabne informacije o celični liniji P19, vključno s pogoji gojenja, mediji za celice P19, delitvijo celic in še veliko več.
Raziskovanje celične linije P19: Pogosto zastavljena vprašanja
Reference
- McBurney, M.W., celice embrionalnega karcinoma P19. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J. in drugi, celična linija embrionalnega karcinoma P19: A Model to Study Gene-Environment Interactions (Model za preučevanje interakcij med geni in okoljem). Cell Culture Techniques, 2011: str. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey in G. Rödel, Mitochondrial ROS direct the differentiation of murine pluripotent P19 cells. Stem Cell Research, 2018. 30: p. 180-191.
- Fu, F. in drugi, All-trans-retinoidna kislina povzroča diferenciacijo celic P19 v nevrone, vključene v signalno pot PI3K/Akt/GSK3β. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al. dolga nekodirajoča RNK SNHG6 prispeva k nastanku ventrikularnega septalnega defekta prek negativne regulacije miR-101 in aktivacije poti Wnt/β-katenina. Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N., et al., Mucuna pruriens seed aqueous extract improved neuroprotective and acetylcholinesterase inhibitory effects compared with synthetic L-dopa. Molekule, 2022. 27(10): p. 3131.