Uverejnené: 2023 | Posledná aktualizácia: máj 2026

Porozumenie pojmu „počet pasáží“

Pojem „číslo pasáže“ je kľúčový pre bunkovú kultúru a označuje početkrát, koľkokrát bola bunková línia subkultivovaná alebo prenesená do nového rastového média po jej počiatočnom oživení z kryokonzervácie alebo po prijatí z referenčnej bunky banky. Tento ukazovateľ je kľúčový pri sledovaní línie a histórie bunkovej kultúry.

Prehľad procesu

V bežnej praxi kultivácie buniek sa bunky, keď dosiahnu určitú hustotu, prenesú do nového média, aby sa udržal rast a zabránilo sa nadmernému zhlukovaniu. Každý takýto prenos sa zaznamenáva ako pasáž.
Tradične, keď sme napríklad od darcu dostali bunkovú líniu v 60. pasáži, pokračovali sme od tohto čísla pasáže a zvyšovali ho s každou subkultúrou. Táto prax síce zachovávala historickú kontinuitu, ale často viedla k vysokým číslam pasáží už od začiatku. Vzhľadom na rozsiahle a často desaťročia trvajúce používanie určitých bunkových línií, ako je napríklad línia HeLa založená v roku 1951, nie je možné určiť celkový počet pasáží od vzniku bunkovej línie.
S cieľom zvýšiť prehľadnosť a kvalitu našich procesov kultivácie buniek sme tento prístup na začiatku roka 2023 revidovali. Teraz, keď začíname kultiváciu z novej fľaštičky, bez ohľadu na počet pasáží od darcu, vynulujeme počítanie a začíname od pasáže číslo jedna pre každú vyrobenú šaržu.

Odôvodnenie

Pasážovanie je nevyhnutný postup na zabezpečenie zdravia a využiteľnosti bunkových kultúr pre výskum. Keď sa bunky premnožia, dochádza k inhibícii kontaktu, čo znižuje ich rýchlosť proliferácie, čo môže nepriaznivo ovplyvniť výsledky experimentov. Na zmiernenie týchto problémov spoločnosť Cytion zavádza prísne kontroly hustoty buniek, pri ktorých dochádza k subkultivácii, čím udržiava nízky počet pasáží počas výroby svojich bunkových línií. Toto opatrenie pomáha predchádzať nepriaznivým účinkom nadmerného pasážovania, ako sú morfologické anomálie, zmeny rýchlosti rastu a genetický posun, ktoré môžu spôsobiť, že sa bunky výrazne odlišujú od svojho pôvodného stavu. Dlhodobé subkultivovanie môže tiež zvýšiť riziko mikrobiálnej kontaminácie.

Náš sľub

Zabezpečujeme, aby bunky dodávané výskumníkom boli čo najbližšie pôvodnej genetickej výbave a fenotypovým charakteristikám, čím zvyšujeme spoľahlivosť experimentálnych údajov. Okrem toho spoločnosť Cytion dôsledným dokumentovaním každého pasážovania prispieva k vysledovateľnosti a reprodukovateľnosti výskumu, čo je záväzok odrážajúci vysoké štandardy praxe v oblasti bunkových kultúr. Výskumní pracovníci sú povzbudzovaní, aby si viedli presné záznamy o počte pasáží, a to ako na kultivačných nádobách, tak aj v laboratórnych zošitoch, ako referenciu pre zdravie a históriu ich bunkových kultúr.

Tipy a bežné chyby

Dodržiavanie správneho protokolu je nevyhnutné, ale rovnako dôležité je aj pochopenie bežných úskalí. Postupy kultivácie buniek sú citlivé na malé odchýlky v technike, načasovaní a kvalite reagencií. Nasledujúce tipy odrážajú osvedčené postupy odporúčané vedeckým tímom spoločnosti Cytion na základe rozsiahlych skúseností s kultiváciou buniek.

Reagentov pred použitím vždy predhrejte na 37 °C, aby ste minimalizovali teplotný šok pre bunky.
Pracujte rýchlo, ale opatrne – minimalizujte čas, ktorý bunky strávia mimo inkubátora.
Používajte certifikované reagencie testované na mykoplazmu, aby ste predišli kontaminácii, ktorá môže ohroziť výsledky experimentu.
Zaznamenávajte každý krok, vrátane čísla pasáže, dátumu a pozorovaní morfológie buniek.
Pred rozšírením experimentu overte svoj protokol malým pilotným experimentom, aby ste zabránili plytvaniu drahými reagentmi.

Odporúčané reagencie Cytion

Spoločnosť Cytion ponúka rad overených reagencií pre kultiváciu buniek, ktoré sú špeciálne navrhnuté na podporu tohto protokolu. Všetky reagencie sú testované na výkonnosť s bežne používanými bunkovými líniami a sú k dispozícii s kompletnou dokumentáciou. Navštívte stránku cytion.com/Media-Reagents a prehliadnite si kompletné portfólio.