Vero Cells: Priekopnícke cesty vo vírusových štúdiách a inováciách vakcín

Bunková línia Vero, imortalizovaný bunkový model cicavcov odvodený z epitelových buniek obličiek africkej zelenej opice, stojí na čele výskumu vo virológii, mikrobiológii a bunkovej a molekulárnej biológii. Ich široké uplatnenie zahŕňa vývoj vakcín, farmaceutické skríningy a výskum biológie vírusov a parazitov, nádorovej imunológie a imunoterapeutických stratégií.

Pôvod a kľúčové vlastnosti buniek Vero

Pri skúmaní bunkovej línie, akou je Vero, sa vynára niekoľko otázok: Čo presne sú bunky Vero? Ako vznikla bunková línia Vero? Aký príbeh sa skrýva za názvom "Vero"? Cieľom tejto časti je objasniť vznik a základné vlastnosti buniek Vero.

Vznik bunkovej línie Vero sa datuje do roku 1962 a pochádza z epitelových buniek obličiek africkej zelenej opice. Túto líniu kultivovali Y. Kawakita a Yasumura na Chiba University v Japonsku. Termín "Vero" je odvodený od "Verda reno" v esperante, čo v preklade znamená "zelená oblička", hoci "Vero" rezonuje aj s pojmom "pravda"

Bunky Vero zvyčajne tvoria monovrstvy, ale môžu sa prispôsobiť suspenzným kultúram, ktoré vykazujú epitelovú štruktúru. Tieto bunky sa vyznačujú zaobleným až podlhovastým tvarom a priemerným priemerom približne 17 µm. Vero bunky vykazujú hypodiploidný počet chromozómov, pričom modálny počet chromozómov je 58 približne u 66 % bunkovej populácie, hoci variácie s vyšším ploidným počtom chromozómov existujú v malej časti (1,7 %) buniek.

Klony buniek Vero a ich jedinečné vlastnosti

Odlišné klony odvodené z bunkovej línie Vero vykazujú jedinečné vlastnosti, ktoré ich odlišujú od pôvodnej línie. Medzi nimi sú dva pozoruhodné klony buniek Vero:

• Vero E6: Tento klon, známy aj ako Vero C1008, pochádza z buniek Vero 76 a bol izolovaný v roku 1979 P. J. Priceom pomocou techniky riedenia na mikrotitračných platniach. Bunky Vero E6 sú obzvlášť vhodné na kultiváciu vírusov, ktoré sa replikujú pomaly.

• Bunky Vero 76: Tieto bunky pochádzajú z obličiek africkej zelenej opice z roku 1968 a zachovávajú si epitelovú morfológiu charakteristickú pre bunky Vero.

Tieto varianty buniek Vero spolu s materskou líniou naďalej zohrávajú dôležitú úlohu pri napredovaní virologického výskumu a vývoji lekárskych zásahov, čo poukazuje na ich význam vo vedeckej komunite.

Kultivačné informácie

Kultivácia buniek Vero, opičej bunkovej línie, si vyžaduje znalosť špecifických parametrov, ako je čas zdvojnásobenia, hustota výsevu a vhodné rastové médium.

• Čas zdvojenia populácie: Čas zdvojenia buniek Vero je približne 24 hodín.

• Adherencia: Bunky Vero priliehajú k povrchom a pri kultivácii zvyčajne vytvárajú monovrstvy.

• Hustota výsevu: Odporúča sa začať s hustotou výsevu 1 x 10^4 buniek/cm^2. Ak chcete kultivovať priľnavé bunky Vero, premyte ich PBS a ošetrite ich Accutase, aby sa oddelili. Po oddelení bunky odstreďte, resuspendujte ich v čerstvom médiu a preneste ich do nových kultivačných banku.

• Rastové médium: Ham's F12 aj DMEM sú vhodné médiá na kultiváciu Vero buniek. Na podporu optimálneho rastu by sa mali doplniť 2,5 mM L-glutamínom a 5 % fetálnym hovädzím sérom (FBS). Médium by sa malo obnovovať dva až trikrát týždenne.

• Rastové podmienky: Vero bunky prosperujú pri teplote 37 °C vo zvlhčenej atmosfére s 5 % CO2.

• Skladovanie: Na dlhodobé skladovanie by sa bunky Vero mali uchovávať pri teplote nižšej ako -150 °C, buď v mrazničke s veľmi nízkou teplotou, alebo v parnej fáze tekutého dusíka.

• Proces zmrazovania a médium: Na kryokonzerváciu použite ako zmrazovacie médium CM-1 alebo CM-ACF, alebo rastové médium s FBS a DMSO. Použite techniku pomalého zmrazovania, pričom teplotu postupne znižujte o 1 °C za minútu.

• Postup rozmrazovania: Rozmrazujte bunky Vero ponorením nádoby do vodného kúpeľa s teplotou 37 °C a jemne ju miešajte 40 - 60 sekúnd. Potom bunky zrieďte v čerstvom médiu, odstreďte, aby ste odstránili kryoprotektant, znovu ich rozpusťte v čerstvom rastovom médiu a umiestnite ich do novej banky, aby sa obnovili a rástli.

• Úroveň biologickej bezpečnosti: S bunkami Vero by sa malo manipulovať v laboratóriu, ktoré spĺňa požiadavky na úroveň biologickej bezpečnosti 1.

Použitie bunkovej línie Vero vo výskume

Bunková línia Vero má množstvo výskumných aplikácií v oblasti bunkovej biológie a virológie. Tu sme sa venovali niektorým konkrétnym.

Bunky Vero vo výskume vírusov a výrobe vakcín

Bunky Vero, odvodené z buniek afrických zelených opičích obličiek, sa stali základom pri bioprocese vývoja vakcín proti rôznym vírusom vrátane poliovírusu a vírusu japonskej encefalitídy. Ich prispôsobivosť v adherentných aj suspenzných kultúrach a ich široká schopnosť podporovať vírusy vrátane patogénov, ako je vírus des petits ruminants, zdôrazňujú ich význam pri izolácii vírusov a vývoji vakcín.

Vero bunky sa v mnohých štúdiách využívajú na výrobu vakcín pre ľudí. Napríklad významná štúdia uverejnená v roku 2019 preukázala použitie buniek Vero pri vývoji inaktivovanej vakcíny proti vírusu žltej zimnice [2].

Bunky Vero sa bežne používajú v štúdiách vírusových infekcií, ako napríklad v štúdii uskutočnenej v roku 2020, v ktorej boli bunky Vero infikované rôznymi izolátmi vírusu SARS-CoV-2 na štúdium rastových vlastností vírusu [4]. Podobne sa v inej štúdii skúmala reakcia buniek na infekciu vírusom SARS-CoV-2 s použitím bunkovej kultúry Vero [5].

Úloha buniek Vero v tkanivovom inžinierstve a pri vývoji bioprocesov

Okrem výroby vakcín prispievajú bunky Vero k tkanivovému inžinierstvu a širšej oblasti vývoja bioprocesov, čo zdôrazňuje potrebu pokračujúceho výskumu ich vlastností a aplikácií. Výber vhodných sublínií buniek Vero je kľúčom k maximalizácii ich potenciálu v biotechnologickom a farmaceutickom priemysle.

Použitie buniek Vero pri testovaní účinnosti a bezpečnosti liekov

Bunky Vero sa často používajú pri testovaní liekov na hodnotenie účinnosti a bezpečnosti farmaceutických zlúčenín. Tieto bunky sa často považujú za štandardný model normálnych obličkových buniek v štúdiách skúmajúcich cytotoxické účinky rôznych liečiv a terapeutických látok. Napríklad pri výskume porovnávajúcom vplyv výťažkov z koreňa rastliny Terminalia avicennioides na HepG2, bunkovú líniu rakoviny pečene, a na bunky Vero odvodené z epitelu opičej obličky sa zistilo, že výťažky boli škodlivejšie pre rakovinové bunky ako pre normálne bunky.

Obmedzenia buniek Vero

Hoci sa bunky Vero používajú vo veľkej miere, majú svoje obmedzenia, ako napríklad produkciu vero toxínu a genomické zmeny, ktoré môžu mať vplyv na určité aplikácie. Pochopenie špecifických sublínií a genomických vlastností Vero buniek vrátane Vero línie F6 je nevyhnutné na optimalizáciu ich použitia v rôznych bioprocesoch.

Preskúmajte naše bunky a deriváty Vero pre prevratné výskumné aplikácie

Výskumné publikácie

Nižšie sú uvedené niektoré nedávne a najčastejšie citované výskumné publikácie, v ktorých sú použité bunky Vero.

Prispôsobenie buniek Vero na rast v suspenzii na produkciu vírusu besnoty v rôznych médiách bez séra

Táto štúdia uverejnená v časopise Vaccine Journal (2019) prispôsobila bunky Vero na rast v suspenzných kultúrach na produkciu vírusu besnoty vo vysokom titri s použitím rôznych médií bez séra.

Citlivosť Toxoplasma gondii na etanolový extrakt z Tinospora crispa v bunkách Vero

Tento článok bol uverejnený v časopise Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine v roku 2019. V štúdii sa navrhuje, že etanolový extrakt z rastliny Tinospora crispa pôsobí škodlivo na parazita Toxoplasma gondii. Pre hostiteľské bunky (bunkovú líniu Vero) je však bezpečný.

Účinky extraktu z listov Colchicum baytopiorum na cytotoxicitu a dráhy bunkovej smrti v bunkových líniách C-4 I a Vero

Tento článok bol uverejnený v časopise Journal of the Balkan Union of Oncology v roku 2021. V tejto stati Ozlem Dagdeviren Ozsoylemez a Gul Ozcan skúmali cytotoxický účinok extraktu z listov Colchicum baytopiorum na bunkové línie C-4I a Vero.

Resveratrol inhibuje replikáciu koronavírusu 2 ťažkého akútneho respiračného syndrómu (SARS-CoV-2) v kultivovaných bunkách Vero

V tejto štúdii v časopise Phytotherapy Research (2021) sa na skúmanie terapeutického účinku resveratrolu na replikáciu vírusu použili bunky Vero infikované vírusom SARS-CoV-2.

Lipofilné statíny inhibujú produkciu vírusu Zika v bunkách Vero

Tento článok v časopise Nature Scientific Reports (2019) navrhuje, že lipofilné statíny, t. j. cerivastatín, lovastatín, fuvastatín, simvastatín a mevastatín, môžu brániť produkcii vírusu Zika v bunkách Vero.

Zdroje pre bunky Vero: Protokoly, videá a ďalšie zdroje

• Transfekcia buniek Vero: Tento odkaz vás prevedie protokolom transfekcie buniek Vero.
• Transfekcia bunkovej línie Vero: Toto video vysvetľuje protokol transfekcie bunkovej línie Vero.
• Subkultúra buniek Vero: Toto video opisuje všeobecné odporúčania pre subkultiváciu adherentných bunkových línií.

Protokoly bunkových kultúr

• Kultivácia buniek Vero: Táto webová stránka obsahuje dobre vysvetlený protokol kultivácie buniek Vero.
• Kultivácia buniek Vero: Tento dokument vám môže pomôcť naučiť sa protokol na rozmnožovanie, udržiavanie a zmrazovanie buniek Vero.

Odkazy

1. Ammerman, N.C., M. Beier-Sexton a A.F. Azad, Growth and maintenance of Vero cell lines. Current protocols in microbiology, 2008. 11(1): p. A. 4E. 1-A. 4E. 7.
2. Pato, T.P., et al., Purification of yellow fever virus produced in Vero cells for inactivated vaccine manufacture (Purifikácia vírusu žltej zimnice produkovaného v bunkách Vero na výrobu inaktivovanej vakcíny ). Vaccine, 2019. 37(24): p. 3214-3220.
3. Aliyu-Amoo, H., et al., Antiproliferative effect of extracts and fractions of the root of Terminalia avicennioides (Combretaceae) Guill and Perr. on HepG2 and Vero cell lines (Antiproliferatívny účinok extraktov a frakcií koreňa Terminalia avicennioides (Combretaceae) Guill and Perr. na bunkové línie HepG2 a Vero ). Clinical Phytoscience, 2021, 7(1): s. 1-7.
4. Yao, P., et al. izolácia a rastové charakteristiky SARS-CoV-2 v bunkách Vero. Virologica Sinica, 2020. 35(3): p. 348-350.
5. Park, B.K., et al., Differential signaling and virus production in Calu-3 cells and Vero cells upon SARS-CoV-2 infection (Rozdielna signalizácia a produkcia vírusu v bunkách Calu-3 a bunkách Vero pri infekcii vírusom SARS-CoV-2 ). Biomolecules & Therapeutics, 2021. 29(3): p. 273.