Bunky Hep3B: Výskum a objavovanie hepatocelulárneho karcinómu

HEP3B je imortalizovaná bunková línia hepatocytárneho karcinómu odvodená od človeka. Široko sa používa pri výskume hepatotoxicity a metabolizmu liečiv. Účinnosť transfekcie HEP3B je značná, preto sa tieto bunky bežne používajú na štúdium vývoja, progresie a terapeutických zásahov pri rakovine pečene. Tento článok obsahuje všetky potrebné informácie o bunkovej línii HEP3B, ktoré vám pomôžu pri práci s ňou. Obsahuje najmä:

Všeobecnú charakteristiku a pôvod buniek HEP3B
Informácie o kultivácii bunkovej línie HEP3B
Bunkovú líniu HEP3B: Výhody a obmedzenia
Aplikácie buniek HEP3B vo výskume
Publikácie o bunkovej línii HEP3B
Zdroje pre bunkovú líniu HEP3B: Protokoly, videá a ďalšie informácie

1.všeobecné charakteristiky a pôvod buniek HEP3B

Základné informácie, ktoré potrebujete o bunkovej línii, sú jej pôvod a všeobecné charakteristiky. Pomôžu vám pri rozhodovaní o jej použití vo vašom výskume a pomôžu vám pri práci s ňou. Táto časť článku obsahuje všetky podstatné informácie o pôvode a vlastnostiach HEP3B. Dozviete sa tu: Čo je to bunková línia Hep 3B? Aký je pôvod buniek Hep3B? Aká je morfológia buniek HEP3B?

HEP3B, kontinuálna ľudská hepatómová bunková línia, pochádza z tkaniva pečene 8-ročného afrického chlapca s hepatocelulárnym karcinómom (HCC). Vytvorili ju Aden a jeho kolegovia v roku 1979 v laboratóriu Barbary B. Knowlesovej, Wistar Institute, Philadelphia, USA [1].
Bunky HEP3B majú vo svojom chromozóme integrovaný genóm vírusu hepatitídy B (HBV).
Tieto bunky karcinómu hepatocytov vykazujú epitelovú morfológiu.
Bunky HEP3B majú modálne číslo chromozómu 60. Na rozdiel od HepG2 nemajú prestavaný chromozóm 1.

Aký je rozdiel medzi HepG2 a Hep3B?

HepG2 a HEP3B sa líšia počtom chromozómov na bunku. HEP3B obsahuje 60 chromozómov, zatiaľ čo bunky HepG2 majú v priemere 55 chromozómov. Okrem toho je HepG2 nenádorový a hepatitída B negatívna, zatiaľ čo HEP3B je nádorový a HBV pozitívny.

Karcinóm pečene pri veľkom zväčšení pod mikroskopom.

2.informácie o kultivácii bunkovej línie HEP3B

Znalosť informácií o kultivácii bunkovej línie vám môže uľahčiť prácu s ňou. Táto časť obsahuje všetky kľúčové body pre kultiváciu bunkovej línie HEP3B HBV vrátane: Aký je čas zdvojenia buniek HEp3B? Aké sú podmienky kultivácie HEP3B? Ako sa kultivujú bunky HEP3B HCC?

Kľúčové body pre kultiváciu buniek HEP3B

Čas zdvojenia:	Čas zdvojenia buniek HEP3B je približne 36 hodín.
Adherentné alebo v suspenzii:	Táto línia hepatómových buniek je adherentná.
Pomer rozdelenia:	Bunky HEP3B sa delia v pomere 1:2 až 1:4. Adherentné bunky HEP3B sa opláchnu 1 x PBS a potom sa inkubujú s disociačným roztokom Accutase. Po 8 až 10 min sa pridá čerstvé médium a bunky sa odstredia. Zozbierané bunky sa potom opatrne resuspendujú a nalejú do fliaš obsahujúcich kultivačné médium v odporúčanom pomere rozdelenia.
Rastové médium:	Na kultiváciu buniek HEP3B sa používa médium EMEM obsahujúce 10 % FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-Glutamín a Earleov vyvážený soľný roztok (EBSS).
Rastové podmienky:	HEP3B bunky sa kultivujú vo zvlhčenom inkubátore pri 37 °C s nepretržitým prívodom 5 % CO2.
Skladovanie:	Zmrazené bunky HEP3B sa skladujú pri teplote nižšej ako -150 °C v elektrickej mrazničke alebo v parnej fáze tekutého dusíka.
Proces zmrazovania a médium:	Mraziace médium odporúčané pre bunky HEP3B je CM-1 alebo CM-ACF. Bunky sa zmrazujú pomalým zmrazovacím procesom, ktorý umožňuje pokles teploty len o 1 °C za minútu, aby sa ochránila životaschopnosť buniek.
Proces rozmrazovania:	Zmrazené bunky sa rozmrazujú vo vodnom kúpeli nastavenom na 37 °C počas 40 až 60 sekúnd. Neskôr sa tieto bunky pridajú do čerstvého rastového média a odstredia sa, aby sa odstránili prvky zmrazovacieho média. Zozbierané bunky sa resuspendujú a dávkujú do nových baniek na rast.
Úroveň biologickej bezpečnosti:	Na kultiváciu buniek HEP3B sa vyžaduje laboratórium s úrovňou biologickej bezpečnosti 1.

Adherentná semikonfluentná vrstva buniek Hep3B pri zväčšení 10× a 20×.

3.bunkovú líniu HEP3B: Výhody a obmedzenia

HEP3B je široko používaná línia buniek hepatocelulárneho karcinómu. Táto časť sa zameriava na niektoré kľúčové výhody a obmedzenia týchto hepatómových buniek.

Výhody

Hlavné výhody buniek HEP3B sú:

Jednoduchá kultivácia	Bunky HEP3B nemajú žiadne náročné požiadavky na kultiváciu buniek, takže sa s nimi ľahko manipuluje a udržiavajú sa vo výskumnom laboratóriu. To zjednodušuje experimentálne postupy.
Vysoká účinnosť transfekcie	Bunky HEP3B vykazujú pozoruhodnú účinnosť transfekcie, vďaka čomu sa široko používajú pri genetických manipuláciách a štúdiách súvisiacich s expresiou génov.
Nádorová aktivita	HEP3B je tumorigénna línia buniek hepatocelulárneho karcinómu, ktorá je schopná vytvárať nádory po injekcii do imunokompromitovanej myši. To pomáha pri štúdiu progresie a vývoja rakoviny pomocou xenotransplantačných modelov HEP3B.
Stav HEP3B P53	Bunky HEP3B majú mutáciu génu P53 podobnú hepatocelulárnemu karcinómu (HCC) a iným druhom rakoviny, vďaka čomu sú vhodné na štúdium účinkov mutácie P53 na rast, vývoj a progresiu rakoviny.

Obmedzenia

Obmedzenie spojené s bunkovou líniou HEP3B je:

Bunkový model in vitro

Bunková línia HEP3B slúži ako in vitro model buniek hepatocelulárneho karcinómu (HCC). Nemusí však plne reprezentovať komplexnosť HCC, ako sa vyskytuje v živých organizmoch. V dôsledku toho sa výsledky experimentov in vitro môžu líšiť od výsledkov pozorovaných in vivo.

4.použitie buniek HEP3B vo výskume

Bunková línia HEP3B ponúka niekoľko výskumných aplikácií v biomedicínskom výskume. Medzi kľúčové výskumné aplikácie buniek HEP3B patria:

Biológia rakoviny : HEP3B je bunková línia ľudského hepatocelulárneho karcinómu. Je to neoceniteľný bunkový model na skúmanie bunkových a molekulárnych mechanizmov, ktoré sú základom vývoja a progresie HCC. Výskumníci používajú tieto bunky na štúdium genetických mutácií, bunkových procesov a bunkových signálnych dráh súvisiacich s rakovinou pečene. Napríklad v štúdii sa využili bunky HEP3B a zistilo sa, že mikroRNA-223-3p reguluje zložky inflammasómu NLRP3, inhibuje proliferáciu a zvyšuje apoptózu buniek hepatokarcinómu HEP3B [2].
Skríning a vývoj liekov: Bunková línia HEP3B sa používa aj na testovanie, skríning a vývoj nových liečiv proti karcinómu pečene. Okrem toho sa používa na hodnotenie toxicity a účinnosti rôznych protinádorových liekov a liečby. Výskumníci tiež použili tieto hepatómové bunky na štúdium metabolizmu liečiv. Výskumníci použili HEP3B bunky a hodnotili cytotoxický potenciál extraktu z rastliny Cotinus coggygria na HEP3B bunkách karcinómu hepatocytov [3].
Vírusové infekcie: HEP3B je bunková línia pozitívna na vírus hepatitídy B, preto sa využíva na štúdium vírusových infekcií, ktoré môžu viesť k vzniku rakoviny pečene, t. j. HBV a HCV. To môže pomôcť lepšie pochopiť vírusové infekcie a vyvinúť potenciálnu antivírusovú liečbu. V štúdii sa napríklad použili rakovinové bunky hepatocytov HEP3B a skúmal sa význam ubikvitinácie pre šírenie vírusu hepatitídy c. Výsledky naznačili, že ubikvitín špecifická proteáza 15 (USP15) sa podieľa na šírení HCV prostredníctvom regulácie funkcií špecifických pre hepatocyty vrátane tvorby lipidových kvapôčok a translácie HCV RNA [4].

430,00 €*

Obsah: 1.5 milliliter

Ceny bez daní plus náklady na dopravu

cryovial

Číslo výrobku: 305141

5.publikácie o bunkovej línii HEP3B

Táto časť článku sa bude zaoberať niekoľkými zaujímavými výskumnými publikáciami o bunkách HEP3B.

Regulácia apoptózy a autofágie luteolínom v bunkách ľudského hepatocelulárneho karcinómu Hep3B

V tejto publikácii v Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) sa navrhuje, že endoplazmatický retikulárny stres vyvolaný zlúčeninou luteolínu môže mať protinádorové účinky v P53-nulových bunkách HEP3B spôsobom nezávislým od P53.

Potenciálne cielené pôsobenie lupeolu izolovaného z Avicennia marina na bunky rakoviny pečene Hep3B

Táto štúdia v Archiv der Pharmazie (2021) navrhla pentacyklický triterpenoid, lupeol, ako potenciálnu protinádorovú látku proti bunkám HEP3B.

Etanolový extrakt z Cnidium monnieri (L.) Cusson indukuje zastavenie bunkového cyklu a apoptózu prostredníctvom regulácie dráhy nezávislej od p53 v bunkách hepatocelulárneho karcinómu HepG2 a Hep3B

Tento článok je uverejnený v časopise Molecular Medicine Reports (2017). Výsledky štúdie uvádzajú, že etanolový extrakt z Cnidium monnieri (L.) Cusson indukuje bunkovú smrť (apoptózu) a zastavenie bunkového cyklu v bunkách hepatokarcinómu HepG2 a HEP3B prostredníctvom regulácie signálnej dráhy p53 a Akt/GSK-3β.

Auranofin zvyšuje apoptózu sprostredkovanú sulforafánom v bunkách hepatocelulárneho karcinómu Hep3B prostredníctvom inaktivácie signálnej dráhy PI3K/Akt

Tento výskum uverejnený v časopise Biomolecules and Therapeutics (2020) navrhol, že auranofin vykazuje synergickú aktivitu a podporuje sulforafánom sprostredkovanú apoptózu buniek HEP3B prostredníctvom aktivácie dráhy PI3K/AKT.

Cirkulárna RNA-0072309 má protinádorové vplyvy v bunkovej línii Hep3B prostredníctvom cielenia na mikroRNA-665

Tento výskumný článok v časopise BioFactors (2023) navrhol, že cirkulárna RNA-0072309 má protinádorové účinky v bunkách hepatocelulárneho karcinómu HEP3B prostredníctvom cielenia na miRNA-665.

6.zdroje pre bunkovú líniu HEP3B: Zdrojové materiály pre HEP3B: protokoly, videá a ďalšie materiály

Nasleduje niekoľko dostupných zdrojov o bunkách HEP3B:

HEP3B transfekcia: Toto video vysvetľuje protokol transfekcie buniek HEP3B.
Účinnosť transfekcie HEP3B: Tento odkaz vám pomôže zistiť zloženie média HEP3B DMEM, pasážovanie buniek a protokol transfekcie pre bunky HEP3B. Okrem toho poskytuje informácie na optimalizáciu činidla HEP3B lipofectamine 3000 vo vašom transfekčnom protokole.

Nasledujúci odkaz obsahuje protokol kultivácie buniek HEP3B:

HEP3B kultivačné podmienky: Tento odkaz vám pomôže naučiť sa protokol na manipuláciu a udržiavanie kultúr Huh7 a HEP3B.
Bunky HEP3B: Táto webová stránka obsahuje množstvo informácií o bunkách HEP3B vrátane médií HEP3B, protokolu delenia buniek, rozmrazovania a manipulácie s proliferačnými a kryokonzervovanými kultúrami.

Odkazy

Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Origin and prop-erties of hepatocellular carcinoma cell lines (Pôvod a vlastnosti bunkových línií hepatocelulárneho karcinómu ). Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): p. 1040.
Wan, L., et al., miRNA-223-3p reguluje NLRP3 s cieľom podporiť apoptózu a inhibovať proliferáciu buniek hep3B. Experimentálna a terapeutická medicína, 2018. 15(3): p. 2429-2435.
Danjolli-Hashani, D. and S. Selen-Isbilir, Cytotoxic effect of Cotinus coggygria extract on Hep3B cancer cell line (Cytotoxický účinok extraktu z Cotinus coggygria na rakovinovú bunkovú líniu Hep3B ). Natural Product Research, 2022: s. 1-4.
Kusakabe, S., et al, USP15 sa podieľa na šírení vírusu hepatitídy C prostredníctvom regulácie translácie vírusovej RNA a tvorby lipidových kvapiek. Journal of Virology, 2019. 93(6): s. 10.1128/jvi. 01708-18.