Bunky Hep3B: Výskum a objavy v oblasti hepatocelulárneho karcinómu
HEP3B je imortalizovaná bunková línia karcinómu hepatocytov ľudského pôvodu. Široko sa používa vo výskume hepatotoxicity a metabolizmu liekov. Efektívnosť transfekcie HEP3B je značná, preto sa tieto bunky bežne používajú na štúdium vývoja a progresie rakoviny pečene a terapeutických intervencií. Tento článok obsahuje všetky potrebné informácie o bunkovej línii HEP3B, ktoré vám pomôžu pri práci s ňou. Obsahuje hlavne:
- Rastové médium
- Na kultiváciu buniek HEP3B sa používa médium EMEM obsahujúce 10 % FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-glutamín a Earleho vyvážený soľný roztok (EBSS).
- Doba zdvojnásobenia
- Doba zdvojnásobenia buniek HEP3B je približne 36 hodín.
- Typ rastu
- Táto bunková línia hepatómu je adhezívna.
- Úroveň biologickej bezpečnosti
- BSL-1
- K dispozícii od
- Cytion — Objednajte si HEP3B
- Všeobecné charakteristiky a pôvod buniek HEP3B
- Informácie o kultivácii buniek línie HEP3B
- Bunka HEP3B: Výhody a obmedzenia
- Využitie buniek HEP3B vo výskume
- Publikácie o bunkovej línii HEP3B
- Zdroje pre bunkovú líniu HEP3B: protokoly, videá a ďalšie
Všeobecné charakteristiky a pôvod buniek HEP3B
Základné informácie, ktoré potrebujete o bunkovej línii, sú jej pôvod a všeobecné charakteristiky. Pomôžu vám rozhodnúť sa o jej použití vo vašom výskume a pomôžu vám pri práci s ňou. Táto časť článku obsahuje všetky podstatné informácie o pôvode a charakteristikách HEP3B. Tu sa dozviete: Čo sú bunkové línie Hep 3B? Aký je pôvod buniek Hep3B? Aká je morfológia buniek HEP3B?
- HEP3B, kontinuálna ľudská hepatómová bunková línia, pochádza z pečeňového tkaniva 8-ročného afrického chlapca s hepatocelulárnym karcinómom (HCC). Vytvorili ju Aden a kolegovia v roku 1979 v laboratóriu Barbary B. Knowlesovej vo Wistar Institute vo Philadelphii v USA [1].
- Bunky HEP3B majú v chromozóme integrovaný genóm vírusu hepatitídy B (HBV).
- Tieto hepatocytové karcinómové bunky vykazujú epiteliálnu morfológiu.
- Modálny počet chromozómov buniek HEP3B je 60. Na rozdiel od HepG2 nemajú prerobený chromozóm 1.
Aký je rozdiel medzi HepG2 a Hep3B?
HepG2 a HEP3B sa líšia v počte chromozómov na bunku. HEP3B obsahuje 60 chromozómov, zatiaľ čo bunky HepG2 majú v priemere 55 chromozómov. Navyše, HepG2 je netumorigénny a negatívny na hepatitídu B, zatiaľ čo HEP3B je tumorigénny a pozitívny na HBV.
Informácie o kultivácii buniek línie HEP3B
Znalosť informácií o kultivácii buneckej línie vám môže uľahčiť prácu. Táto časť sa zaoberá všetkými kľúčovými bodmi kultivácie buneckej línie HEP3B HBV, vrátane: Aký je čas zdvojnásobenia buniek Hep3B? Aké sú podmienky kultivácie HEP3B? Ako kultivovať bunky HEP3B HCC?
Kľúčové body kultivácie buniek HEP3B
Doba zdvojnásobenia:
Doba zdvojnásobenia buniek HEP3B je približne 36 hodín.
Adherentné alebo v suspenzii:
Táto bunková línia hepatómu je adhezívna.
Pomer rozdelenia:
Bunky HEP3B sa subkultivujú v pomere 1:2 až 1:4. Adherentné bunky HEP3B sa prepláchnu 1 x PBS a potom inkubujú s disociačným roztokom Accutase. Po 8 až 10 minútach sa pridá čerstvé médium a bunky sa odstreďujú. Zozbierané bunky sa potom opatrne resuspendujú a nalia sú do fliaš obsahujúcich kultivačné médium v odporúčanom pomere rozdelenia.
Rastové médium:
Na kultiváciu buniek HEP3B sa používa médium EMEM obsahujúce 10 % FBS, 2,2 g/l NaHCO3, 2 mM L-glutamín a Earleho vyvážený soľný roztok (EBSS).
Podmienky rastu:
Bunky HEP3B sa kultivujú v zvlhčenom inkubátore pri teplote 37 °C s nepretržitým prívodom 5 % CO2.
Skladovanie:
Zmrazené bunky HEP3B sa skladujú pri teplote nižšej ako -150 °C v elektrickom mrazničke alebo v parnej fáze tekutého dusíka.
Proces zmrazovania a médium:
Odporúčaným mraziacim médiom pre bunky HEP3B je CM-1 alebo CM-ACF. Bunky sa zmrazujú pomalým procesom, ktorý umožňuje pokles teploty iba o 1 °C za minútu, aby sa zachovala životaschopnosť buniek.
Proces rozmrazovania:
Zmrazené bunky sa rozmrazujú vo vodnom kúpeli nastavenom na 37 °C po dobu 40 až 60 sekúnd. Následne sa tieto bunky pridajú do čerstvého rastového média a odstreďujú sa, aby sa odstránili zložky mraziaceho média. Zozbierané bunky sa resuspendujú a rozdelia do nových fliaš na rast.
Úroveň biologickej bezpečnosti:
Na kultiváciu buniek HEP3B je potrebné laboratórium s úrovňou biologickej bezpečnosti 1.
Bunka HEP3B: Výhody a obmedzenia
HEP3B je široko používaná bunková línia hepatocelulárneho karcinómu. Táto časť sa zameriava na niektoré kľúčové výhody a obmedzenia týchto hepatómových buniek.
Výhody
Hlavné výhody buniek HEP3B sú:
Ľahká kultivácia
Bunky HEP3B nemajú náročné požiadavky na kultiváciu, vďaka čomu sa s nimi ľahko manipuluje a udržiava v výskumnom laboratóriu. To zjednodušuje experimentálne postupy.
Vysoká účinnosť transfekcie
Bunky HEP3B vykazujú pozoruhodnú účinnosť transfekcie, vďaka čomu sa široko používajú v genetických manipuláciách a štúdiách súvisiacich s génovou expresiou.
Tumorigenicita
HEP3B je tumorigenická bunková línia hepatocelulárneho karcinómu, ktorá je schopná vytvárať nádory po injekcii do myši s oslabeným imunitným systémom. To pomáha pri štúdiu progresie a vývoja rakoviny pomocou xenotransplantačných modelov HEP3B.
Stav P53 v HEP3B
Bunky HEP3B majú mutáciu génu P53 podobnú hepatocelulárnemu karcinómu (HCC) a iným typom rakoviny, čo ich predurčuje na štúdium vplyvu mutácie P53 na rast, vývoj a progresiu rakoviny.
Obmedzenia
Obmedzenie spojené s bunkovou líniou HEP3B je:
In vitro bunkový model
Bunka HEP3B slúži ako in vitro model buniek hepatocelulárneho karcinómu (HCC). Nemusí však plne reprezentovať komplexnosť HCC, ako sa vyskytuje v živých organizmoch. V dôsledku toho sa experimentálne výsledky in vitro môžu líšiť od tých, ktoré sa pozorujú in vivo.
Využitie buniek HEP3B vo výskume
Bunka HEP3B ponúka niekoľko výskumných aplikácií v biomedicínskom výskume. Niektoré z kľúčových výskumných aplikácií buniek HEP3B zahŕňajú:
- Biológia rakoviny: HEP3B je ľudská bunková línia hepatocelulárneho karcinómu. Je to neoceniteľný bunkový model na skúmanie bunkových a molekulárnych mechanizmov, ktoré sú základom vývoja a progresie HCC. Výskumníci používajú tieto bunky na štúdium genetických mutácií, bunkových procesov a bunkových signálnych dráh spojených s rakovinou pečene. Napríklad v jednej štúdii sa použili bunky HEP3B a zistilo sa, že mikroRNA-223-3p reguluje komponenty inflamatózneho komplexu NLRP3, inhibuje proliferáciu a zvyšuje apoptózu buniek hepatokarcinómu HEP3B [2].
- Skríning a vývoj liekov: Bunková línia HEP3B sa tiež používa na testovanie, skríning a vývoj nových liekov proti karcinómu pečene. Okrem toho sa používa na hodnotenie toxicity a účinnosti rôznych protinádorových liekov a liečebných postupov. Výskumníci tiež použili tieto hepatómové bunky na štúdium metabolizmu liekov. Výskumníci použili bunky HEP3B a hodnotili cytotoxický potenciál rastlinného extraktu Cotinus coggygria na bunkách hepatocytového karcinómu HEP3B [3].
- Vírusové infekcie: HEP3B je bunková línia pozitívna na vírus hepatitídy B; preto sa používa na štúdium vírusových infekcií, ktoré môžu viesť k rozvoju rakoviny pečene, t. j. HBV a HCV. To môže pomôcť lepšie pochopiť vírusové infekcie a vyvinúť potenciálne antivírusové liečby. Napríklad v jednej štúdii sa použili rakovinové bunky hepatocytov HEP3B a skúmal sa význam ubikvitinácie pre šírenie vírusu hepatitídy C. Zistenia naznačujú, že proteáza 15 špecifická pre ubikvitín (USP15) sa podieľa na šírení HCV prostredníctvom regulácie funkcií špecifických pre hepatocyty, vrátane tvorby lipidových kvapôčok a translácie HCV RNA [4].
5. Publikácie o bunkovej línii HEP3B
Táto časť článku sa bude venovať niekoľkým zaujímavým vedeckým publikáciám o bunkách HEP3B.
Regulácia apoptózy a autofágie luteolínom v ľudských hepatocelulárnych rakovinových bunkách Hep3B
Táto publikácia v časopise Biochemical and Biophysical Research Communications (2019) navrhuje, že stres endoplazmatického retikula vyvolaný zlúčeninou luteolínu môže vykazovať protinádorové účinky v bunkách HEP3B bez P53 spôsobom nezávislým od P53.
Potenciálne cielenie na bunky rakoviny pečene Hep3B pomocou lupeolu izolovaného z Avicennia marina
Táto štúdia v časopise Archiv der Pharmazie (2021) navrhla pentacyklický triterpenoid, lupeol, ako potenciálne protinádorové činidlo proti bunkám HEP3B.
Tento článok bol uverejnený v časopise Molecular Medicine Reports (2017). Zistenia štúdie uvádzajú, že etanolový extrakt z Cnidium monnieri (L.) Cusson indukuje bunkovú smrť (apoptózu) a zastavenie bunkového cyklu v bunkách hepatokarcinómu HepG2 a HEP3B prostredníctvom regulácie signálnej dráhy p53 a Akt/GSK-3β.
Tento výskum uverejnený v časopise Biomolecules and Therapeutics (2020) navrhol, že auranofin vykazuje synergickú aktivitu a podporuje apoptózu buniek HEP3B sprostredkovanú sulforafanom prostredníctvom aktivácie signálnej dráhy PI3K/AKT.
Tento výskumný článok v časopise BioFactors (2023) navrhuje, že cirkulárna RNA-0072309 má protinádorové účinky v bunkách hepatocelulárneho karcinómu HEP3B prostredníctvom cielenia na miRNA-665.
Zdroje pre bunkovú líniu HEP3B: protokoly, videá a ďalšie
Nižšie uvádzame niekoľko zdrojov týkajúcich sa buniek HEP3B:
- Transfekcia HEP3B: Toto video vysvetľuje protokol transfekcie pre bunky HEP3B.
- Účinnosť transfekcie HEP3B: Tento odkaz vám pomôže zoznámiť sa so zložením média HEP3B DMEM, pasážovaním buniek a protokolom transfekcie pre bunky HEP3B. Okrem toho poskytuje informácie o optimalizácii reagentu HEP3B lipofectamine 3000 vo vašom transfekčnom protokole.
Nasledujúci odkaz obsahuje protokol kultivácie buniek HEP3B:
- Podmienky kultivácie HEP3B: Tento odkaz vám pomôže zoznámiť sa s protokolom pre manipuláciu a udržiavanie kultúr Huh7 a HEP3B.
- Bunky HEP3B: Táto webová stránka obsahuje množstvo informácií o bunkách HEP3B, vrátane médií HEP3B, protokolu pre delenie buniek, rozmrazovanie a manipuláciu s proliferatívnymi a kryokonzervovanými kultúrami.
Referencie
- Puttahanumantharayappa, L.D., et al., Pôvod a vlastnosti bunkových línií hepatocelulárneho karcinómu. Japanese J Gastroenterol Res, 2021. 1(8): s. 1040.
- Wan, L., et al., miRNA-223-3p reguluje NLRP3 s cieľom podporiť apoptózu a inhibovať proliferáciu buniek Hep3B. Experimental and therapeutic medicine, 2018. 15(3): s. 2429-2435.
- Danjolli-Hashani, D. a S. Selen-Isbilir, Cytotoxický účinok extraktu z Cotinus coggygria na rakovinovú bunkovú líniu Hep3B. Natural Product Research, 2022: s. 1-4.
- Kusakabe, S., et al., USP15 sa podieľa na šírení vírusu hepatitídy C prostredníctvom regulácie translácie vírusovej RNA a tvorby lipidových kvapôčok. Journal of Virology, 2019. 93(6): s. 10.1128/jvi. 01708-18.