Bunka HT22
HT22 je myšia neurónová bunková línia bežne používaná vo výskume neurovied. Je cenná pre štúdium neurodegeneratívnych porúch a testovanie potenciálnych neuroprotektívnych terapií alebo liečebných postupov. Okrem toho sú bunky HT22 citlivé na glutamát, a preto sa používajú na skúmanie toxicity vyvolanej glutamátom alebo poškodenia neurónov.
- Rastové médium
- Na kultiváciu buniek HT22 sa používa médium DMEM. Pre optimálny rast buniek je doplnené 10 % FBS, 4,5 g/l glukózy, 4 mM L-glutamínu, 1,5 g/l NaHCO3 a 1,0 mM pyruvátu sodného.
- Doba zdvojnásobenia
- Doba zdvojnásobenia buniek HT22 je približne 15 hodín.
- Typ rastu
- Bunky HT22 sú adhezívne.
- Úroveň biologickej bezpečnosti
- BSL-1
- K dispozícii od
- Cytion — Objednajte si HT22
Tento článok poukazuje na kľúčové aspekty buniek HT22, ktoré vám môžu pomôcť vo vašej výskumnej práci. Zaoberá sa hlavne:
- Všeobecných vlastnostiach a pôvode buniek HT22
- Informácie o kultivácii buniek HT22
- Výhody a nevýhody buniek HT22
- Výskumné aplikácie buniek HT22
- Výskumné publikácie venované bunkám HT22
- Zdroje pre bunky HT22: protokoly, videá a ďalšie materiály
Všeobecné vlastnosti a pôvod buniek HT22
Táto časť článku objasní pôvod a všeobecné charakteristiky buniek HT22. Pred začatím práce s bunkovou líniou je potrebné poznať tieto informácie. Tu sa dozviete: Čo sú bunky HT22? Aká je morfológia hipokampálnych buniek HT22? Aká je veľkosť buniek HT22?
HT22 je kontinuálna bunková línia odvodená z oblasti hipokampu myšieho mozgu. Je to subklon rodičovskej bunkovej línie HT-4 vyvinutej imortalizáciou myších neurónových tkanív prostredníctvom teplotne citlivého polyomavírusu simian virus 40 (SV40) T antigénu.
Tieto bunky sa líšia od zrelých buniek hipokampu, pretože nemajú glutamátové a cholinergické receptory, ako zrelé neuróny hipokampálneho pôvodu. Preto nie sú vhodné pre výskumné štúdie súvisiace s pamäťou [1].
Bunky HT22 majú vzhľad podobný epitelovým bunkám.
Informácie o kultivácii buniek línie HT22
Bunky HT22 sa používajú v laboratóriách zaoberajúcich sa neurovedným výskumom. Pred kultiváciou týchto buniek hľadajú výskumníci základné informácie o kultivácii buniek, ktoré im uľahčia a zefektívnia prácu. Táto časť sa venuje všetkým kľúčovým bodom kultivácie buniek HT22. Dozviete sa: Aká je doba zdvojnásobenia buniek HT22? Ako sa kultivujú bunky HT22? Aký je protokol kultivácie buniek HT22? Aké je kultivačné médium pre bunky HT22?
Kľúčové body kultivácie buniek HT22
Doba zdvojnásobenia:
Doba zdvojnásobenia buniek HT22 je približne 15 hodín.
Adherentné alebo v suspenzii:
Bunky HT22 sú adhézne.
Pomer subkultivácie:
Pomer subkultivácie pre hipokampálne bunky HT22 je 1:3 až 1:6. Stručne povedané, médium sa odstráni a adhezívne bunky sa prepláchnu 1 x PBS. Do fľaše sa pridá disociačný roztok Accutase a bunky sa inkubujú 8 až 10 minút pri izbovej teplote. Následne sa pridá čerstvé kultivačné médium a bunky sa zozbierajú do fľaštičky na centrifugáciu. Získaný bunkový pelet sa opatrne resuspenduje a bunky sa nanesú do kultivačnej fľaše na rast.
Rastové médium:
Na kultiváciu buniek HT22 sa používa médium DMEM. Pre optimálny rast buniek je doplnené 10 % FBS, 4,5 g/l glukózy, 4 mM L-glutamínu, 1,5 g/l NaHCO3 a 1,0 mM pyruvátu sodného.
Podmienky rastu:
Kultúry buniek HT22 sa uchovávajú v zvlhčenom inkubátore (teplota 37 °C) s prívodom 5 % CO2.
Skladovanie:
Zmrazené bunky HT22 možno dlhodobo skladovať pri teplote nižšej ako -150 °C buď v parnej fáze tekutého dusíka, alebo v elektrickom mrazničke s ultra nízkou teplotou.
Proces zmrazovania a médium:
Bunky HT22 je možné zmraziť v médiách CM-1 alebo CM-ACF pomocou metódy pomalého zmrazovania. Tento proces umožňuje pokles teploty vzorky iba o 1 °C za minútu, chráni bunky pred šokom a pomáha zachovať ich životaschopnosť.
Proces rozmrazovania:
Bunky sa rozmrazujú vo vodnom kúpeli pri teplote 37 °C po dobu 40 až 60 sekúnd, kým nezostane len malá hrudka ľadu. Následne sa do buniek pridá kultivačné médium a bunky sa odstreďujú, aby sa odstránili zložky mraziaceho média. Peleta buniek sa resuspenduje a bunky sa nalia do novej fľaše obsahujúcej kultivačné médium. Následne sa bunky inkubujú pri teplote 37 °C v inkubátore najmenej 24 hodín.
Úroveň biologickej bezpečnosti:
Na kultiváciu buniek HT22 sú povinné laboratórne podmienky úrovne biologickej bezpečnosti 1.
Výhody a nevýhody buneckej línie HT22
Hipokampálne bunky HT22 majú niektoré klady a zápory, ktoré ich odlišujú od iných neurónových bunkových línií. Niektoré významné výhody a nevýhody tejto bunkovej línie sú uvedené nižšie.
Výhody
Výhody myšej neurónovej bunky HT22 sú:
-
Rýchla rýchlosť rastu
Bunky HT22 majú dobu zdvojnásobenia 15 hodín, čo umožňuje rýchle a efektívne experimentovanie a prispieva k včasným výsledkom výskumu.
-
Imortalizácia
HT22 je imortalizovaná bunková línia, ktorá zabezpečuje nepretržitý rast po dlhú dobu. To zaručuje stálu dostupnosť buniek, znižuje časovú a finančnú náročnosť a uľahčuje dlhodobé experimenty s konzistentnými výsledkami.
Nevýhody
Nevýhody buniek HT22 sú:
-
Myší pôvod
Bunka HT22 bola odvodená z tkaniva hipokampu myšieho mozgu, čo nemusí plne reprezentovať komplexnosť fyziológie a správania ľudských neurónových buniek, čo obmedzuje ich translačnú relevantnosť.
4. Výskumné aplikácie buneckej línie HT22
Bunky HT22 sa vo veľkej miere používajú vo výskume neurobiológie. V tejto časti článku sa rozoberá niekoľko sľubných aplikácií tejto bunky:
- Neurovedecký výskum: Bunky HT22 sa široko využívajú vo výskume neurodegeneratívnych ochorení, t. j. Alzheimerovej a Parkinsonovej choroby. Sú považované za cenný výskumný nástroj na štúdium mechanizmov neurotoxicity a oxidačného stresu súvisiacich s týmito ochoreniami. Výskum vykonaný v roku 2020 zistil, že dráha PI3K/AKT/CREB sa podieľa na neurálnej toxicite vyvolanej hyperglykémiou v bunkách HT22 [2]. Podobne nedávna štúdia navrhla, že dráha Nrf2/HO-1 a signálna os NF-κB hrajú významnú úlohu v toxicite amyloidu beta v HT22 [3].
- Skríning liekov: Bunky HT22 sa široko používajú na testovanie a skríning liekov. Pomáhajú výskumníkom identifikovať potenciálne terapeutické látky vykazujúce neuroprotektívne účinky na boj proti neurodegeneratívnym ochoreniam. Štúdia vykonaná v roku 2019 skúmala neuroprotektívny potenciál zlúčeniny tetrahydrokurkumínu v hipokampálnych bunkách HT22 ošetrených glutamátom. V tomto prípade glutamát indukuje oxidačný stres v bunkách HT22 a spôsobuje bunkovú smrť aktiváciou mitogénom aktivovaných proteínkináz [4].
5. Vedecké publikácie zaoberajúce sa bunkami HT22
Tu je niekoľko zaujímavých vedeckých článkov venovaných bunkovej línii HT22:
Táto štúdia uverejnená v časopise International Journal of Molecular Medicine (2019) navrhla neuroprotektívny potenciál krokinu, zlúčeniny izolovanej z Crocus sativus L., v bunkách HT22 poškodených L-glutamátom.
Táto publikácia v časopise Neuropharmacology (2018) uvádza, že deriváty oxindolu chránia pred smrťou buniek HT22 vyvolanou oxidačným stresom.
Táto vedecká štúdia bola uverejnená v časopise Journal of Ginseng Research v roku 2019. Táto štúdia skúmala neuroprotektívne účinky prírodného produktu, ginsenosidu Rb2, s využitím buneckej línie HT22. Štúdia zistila, že ginsenosid Rb2 účinne znižoval glutamátom indukovaný oxidačný stres a bunkovú smrť v myších hipokampálnych bunkách HT22.
Táto štúdia uverejnená v časopise Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) hodnotila cytotoxický potenciál nanočastíc striebra v bunkovej línii HT22.
Ferrostatin-1 chráni bunky HT-22 pred oxidačnou toxicitou
Tento výskumný článok bol publikovaný v roku 2020 v časopise Neural regeneration research. Navrhuje, že ferrostatin-1, inhibítor ferroptózy, zabraňuje oxidačnej toxicite v hipokampálnych bunkách HT22.
Zdroje pre bunky HT22: protokoly, videá a ďalšie
Niektoré online zdroje o bunkách HT22 vysvetľujú ich transfekciu, diferenciáciu a protokoly bunkovej kultúry:
- Transfekcia HT22: Tento dokument obsahuje optimalizovaný protokol pre transfekciu HT22 v 24- a 96-jamkových platniach na kultiváciu buniek.
- Diferenciácia buniek HT22: Tento článok vám poskytne komplexného sprievodcu protokolom diferenciácie buniek HT22.
Nasledujúci odkaz obsahuje protokol kultivácie buniek HT22:
- Subkultivácia buniek HT22: Tento odkaz vám pomôže zoznámiť sa s protokolom subkultivácie buniek HT22. Okrem toho vám pomôže zoznámiť sa s protokolom na indukciu neurotoxicity v bunkách.
- Hipokampálne bunky HT22: Táto webová stránka obsahuje množstvo užitočných informácií o dobe zdvojnásobenia buniek HT22, médiách a protokoloch kultivácie buniek.
Referencie
- He, M., et al., Diferenciácia spôsobuje náchylnosť na excitotoxicitu v neurónoch HT22. Neural Regen Res, 2013. 8(14): s. 1297-306.
- Zhang, S., et al., Fisetín zabraňuje neurotoxicite buniek HT22 vyvolanej vysokou hladinou glukózy prostredníctvom signálnej dráhy PI3K/Akt/CREB. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: s. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Ochranné účinky berberínu proti neurotoxicite vyvolanej β-amyloidom v bunkách HT22 prostredníctvom dráhy Nrf2/HO‐1. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: s. 106-210.
- Park, C.-H., et al., Neuroprotektívne účinky tetrahydrokurkumínu proti oxidačnému stresu vyvolanému glutamátom v hipokampálnych bunkách HT22. Molecules, 2019. 25(1): s. 144.