Bunka HT-29
HT-29 je ľudská bunková línia kolorektálneho karcinómu s širokým spektrom uplatnení vo výskume rakoviny a toxikológie. Tieto bunky sú citlivé na štandardné chemoterapeutické liečby kolorektálneho karcinómu. Okrem toho je bunková línia HT-29 dobre charakterizovaným in vitro modelom na skúmanie reakcie črevného epitelu na bakteriálnu infekciu. Bunky HT-29 napodobňujú vlastnosti zrelých črevných buniek, t. j. enterocytov, a sú preto vhodné na štúdium adhézie a mechanistické štúdie.
- Rastové médium
- Pozri stránku produktu
- Doba zdvojnásobenia
- Pozri stránku produktu
- Typ rastu
- Adherentný
- Úroveň biologickej bezpečnosti
- BSL-1
- K dispozícii od
- Cytion — Objednávka HT-29
Bunky HT-29: Pôvod a všeobecné informácie
Pred použitím akejkoľvek buneckej línie by ste mali poznať jej všeobecné charakteristiky a pôvod. Táto sekcia vám pomôže zistiť: Čo sú bunky HT-29? Je HT-29 bunecka línia kolorektálneho karcinómu? Aká je morfológia buniek HT-29?
Čo je bunková línia HT-29? HT-29 je bunková línia kolorektálneho adenokarcinómu, ktorú v roku 1964 založili Trempe a Fogh. Bunky boli pôvodne odobraté z primárneho nádoru u kaukazskej ženy (44 rokov) s kolorektálnym adenokarcinómom [1]. Od svojho vytvorenia sa táto bunková línia používa na štúdium biológie rakoviny.
Morfológia buniek HT-29: Bunky línie HT-29 majú vo všeobecnosti epitelovú morfológiu. Diferencované bunky rastú v monovrstvách, tvoria tesné spojenia medzi bunkami a majú apikálny kefový lem. Ak sa tieto bunky kultivujú v médiu s nedostatkom glukózy alebo sa im podávajú induktory, ako je butyrát alebo kyselina, vykazujú vlastnosti podobné enterocytom.
Veľkosť buniek: Priemer buniek kolorektálnej rakovinovej bunky HT-29 je 11 μm.
Genóm a ploidia: Modálny počet chromozómov pre bunkovú líniu HT-29 je 71. Môže sa pohybovať v rozmedzí 68–72. Navyše, zjednodušený počet chromozómov pre bunky HT-29 je hypertriploidný, pričom 2S zložka sa vyskytuje s frekvenciou 2,4 %.
Čo je HT29 MTX? HT29 MTX je bunková línia rezistentná na metotrexát, izolovaná z pôvodnej ľudskej bunkovej línie HT-29 rakoviny hrubého čreva adaptáciou na 10 µM metotrexátu. Tieto bunky vykazujú charakteristiky zrelých pohárikových buniek vylučujúcich hlien.
Informácie o kultivácii buniek buneckej línie HT-29
Znalosť základných požiadaviek na kultiváciu buniek vám môže uľahčiť prácu s touto bunkovou líniou. Mali by ste vedieť: aká je doba zdvojnásobenia buniek buniek HT-29? Aká je hustota výsevu buniek HT-29? Aké kultivačné médiá sa používajú pre bunky HT-29?
Doba zdvojnásobenia
Priemerná doba zdvojnásobenia pre bunkovú líniu HT-29 je 24 hodín.
Adherentná/suspenzná
HT-29 je adhezívna bunková línia.
Hustota výsevu
Odporúčaná hustota výsevu pre bunky HT-29 je 3 x 104 buniek/cm2. Vypestované bunky sa premyjú 1X PBS a po inkubácii s Accutase po dobu 8–10 minút sa oddelia. Pridá sa čerstvé médium a bunky sa odstreďujú. Peleta buniek sa resuspenduje a bunky sa rozdelia do nových fliaš pri odporúčanej hustote buniek.
Rastové médium
Na optimálne kultivovanie buniek HT-29 sa používa Eagleho minimálne esenciálne médium (EMEM) doplnené o 2,5 mM L-glutamín a 10 % FBS. Médium by sa malo vymieňať 2 až 3 krát týždenne.
Podmienky rastu
Bunky HT-29 vyžadujú na rast vlhký inkubátor s teplotou 37 °C a prívodom 5 % CO2.
Skladovanie
Tieto bunky sa skladujú v parnej fáze tekutého dusíka pri teplote nižšej ako -195 °C.
Mrazivé médium a proces
Mrazivé médium používané pre bunkovú líniu HT-29 je CM-1 alebo CM-ACF. Bunky sa zmrazujú pomalým procesom zmrazovania, ktorý spôsobuje pokles teploty o 1 °C a účinne chráni životaschopnosť buniek.
Proces rozmrazovania
Zmrazené bunky HT-29 sa rozmrazujú vo vodnom kúpeli nastavenom na teplotu 37 °C. Tieto bunky je možné resuspendovať a priamo naniesť do fľaše s čerstvým rastovým médiom. Naopak, rozmrazené bunky je možné odstrediť, aby sa odstránili zložky mraziaceho média, resuspendovať v čerstvom médiu a kultivovať v fľašiach.
Úroveň biologickej bezpečnosti
Na manipuláciu a udržiavanie buneckej línie HT-29 sa používa úroveň biologickej bezpečnosti 1.
Bunky HT-29: Výhody a obmedzenia
Každá bunková línia má svoje jedinečné klady a zápory, ktoré ju odlišujú od ostatných bunkových línií. V tejto časti sa budeme venovať hlavným výhodám a obmedzeniam spojeným s bunkami HT-29.
Výhody
Hlavné výhody buniek HT-29 sú:
-
Ľahká kultivácia
S bunkovou líniou HT-29 sa ľahko manipuluje a udržiava, pričom na jej kultiváciu nie sú kladené žiadne zložité požiadavky. Široko sa kultivuje vo výskumných laboratóriách.
-
In vitro model črevných buniek
Bunky HT-29 sa za špecifických kultivačných podmienok môžu diferencovať na zrelé črevné bunky (enterocyty a bunky produkujúce hlien). Používajú sa ako bunkový model na štúdium trávenia potravy a biologickej dostupnosti.
-
Vysoká účinnosť transfekcie
Bunky rakoviny hrubého čreva HT-29 ponúkajú vysokú účinnosť transfekcie, vďaka čomu sú vhodné na štúdium génovej expresie a regulácie. Pomocou rôznych metód je možné vykonávať experimenty s prechodnou aj stabilnou transfekciou.
-
Citlivosť na lieky
Bunky HT-29 sú citlivé na chemoterapeutické lieky, ako je fluorouracil a oxaliplatina, bežne používané pri liečbe rakoviny hrubého čreva. Používajú sa na štúdium rezistencie voči liekom a na skríning potenciálnych terapeutických liekov na kolorektálny karcinóm.
Obmedzenia
-
Heterogenita
Bunky HT-29, podobne ako iné rakovinové bunky, vykazujú heterogenitu a nemusia tvoriť jednotnú bunkovú populáciu. To môže ovplyvniť reprodukovateľnosť výsledkov v určitých testoch a viesť k menším odchýlkam v experimentálnych výsledkoch.
-
Obmedzená diferenciácia
Bunky HT-29 majú obmedzený diferenciačný potenciál. Nediferencujú sa úplne na črevné alebo hrubokčové bunky, ale vykazujú len niekoľko charakteristických znakov. Toto obmedzenie môže obmedziť ich použitie pri štúdiu zložitejších biologických procesov.
Bunky HT-29: Aplikácie
Bunky HT-29 sa vo veľkej miere kultivujú vo výskumných laboratóriách vďaka ich širokému spektru aplikácií. Táto časť sa bude venovať len niekoľkým významným aplikáciám buniek HT-29.
Výskum rakoviny: HT-29 je bunková línia kolorektálneho adenokarcinómu, preto sa používa na štúdium progresie rakoviny, jej vývoja a základných molekulárnych mechanizmov. Štúdia vykonaná v roku 2018 použila bunkovú líniu HT-29 na skúmanie bunkových molekúl zodpovedných za metastázy. Táto štúdia zistila, že gény vimentínu a CXCR4 regulujú metastázovanie buniek. Kým transfekcia mimika mikroRNA-193a-5p môže znížiť hladiny mRNA týchto génov a úspešne znížiť metastázovanie rakovinových buniek [2].
Toxikologický výskum: Bunková línia HT-29 sa vo veľkej miere používa v toxikologickom výskume. Tieto bunky kolorektálneho karcinómu sa používajú na posudzovanie toxicity rôznych kandidátov na lieky pomocou rôznych testov. Napríklad jedna štúdia skúmala toxický potenciál etanolového extraktu z rastliny Syzygium cumini na bunkovej línii HT-29. Výsledky ukázali významné potlačenie rastu buniek HT-29, čo naznačuje sľubné protinádorové vlastnosti extraktu [3].
Mikrobiológia: HT-29 sa môže použiť ako systém hostiteľských buniek na skúmanie patogenézy potenciálnych mikróbov, t. j. baktérií a vírusov. Výskumníci môžu infikovať bunky HT-29 mikroorganizmami, aby skúmali ich virulenciu a reakciu hostiteľa. V jednej takejto štúdii sa bunky HT-29 použili na skúmanie probiotických vlastností mliečnokyselinových baktérií [4]. V inej štúdii sa bunky HT-29 použili na hodnotenie účinnosti a bezpečnosti liečby bakteriofágmi [5].
5. Vedecké publikácie o bunkách HT-29
Táto časť predstaví niektoré významné publikácie o bunkách HT-29, ktoré vám pomôžu pri príprave vášho výskumného štúdia.
Táto štúdia navrhla etanolový extrakt z Syzygium cumini ako potenciálne protinádorové činidlo proti kolorektálnej nádorovej bunke HT-29. Extrakt významne potlačil rast rakovinových buniek.
Táto publikácia v časopise Bioscience Reports testovala protinádorovú aktivitu zlúčeniny tetrandrínu na bunkách HT-29. Výsledky ukázali, že tetrandrín inhibuje proliferáciu a rast rakovinových buniek prostredníctvom regulácie bunkových signálnych dráh.
Táto štúdia navrhla, že miRNA-193a-5p môže potenciálne regulovať metastázy buniek HT-29 prostredníctvom regulácie génov súvisiacich s metastázami.
Tento článok bol uverejnený v časopise Nature Scientific Reports v roku 2018. Táto štúdia využila tumorigenickú bunkovú líniu HT-29 ako črevný bunkový model na vyhodnotenie účinnosti navrhovanej liečby bakteriofágmi.
V tejto štúdii výskumníci použili bunky HT-29 na skúmanie probiotických aktivít mliečnych baktérií. Zaujímavé je, že štúdia ukázala, že laktobacily zabraňujú adhézii patogénnych baktérií na bunky hrubého čreva.
Bunky HT-29 Zdroje: Protokoly, videá a ďalšie
Táto sekcia sa bude venovať niektorým online zdrojom dostupným o bunkách HT-29, ktoré pomôžu pri štúdiu protokolov ich udržiavania, kultivácie a transfekcie.
Protokoly kultivácie buniek
Nasledujúce zdroje vás prevedú subkultiváciou buniek HT-29.
- Kultivácia buniek HT-29: Tento odkaz poskytuje základné informácie o rastovom médiu, rozmrazovaní a subkultivácii buniek HT-29.
- Udržovanie kultúr HT-29: Tento článok obsahuje všetky užitočné informácie o kultivácii a udržovaní buniek HT-29.
Protokoly transfekcie
Bunka HT-29 má vysokú účinnosť transfekcie a často sa používa v štúdiách génovej expresie. Nasledujúce zdroje opisujú možné protokoly transfekcie pre tieto bunky.
- Transfekcia HT-29: Tento odkaz na webovú stránku obsahuje podrobný protokol transfekcie buniek HT-29.
- Transfekcia buniek HT-29: Tento dokument popisuje protokol transfekcie buniek HT-29 pomocou plazmidovej DNA.
Videá súvisiace s bunkovou líniou HT-29
Tu je niekoľko videí o kultivácii a udržiavaní tejto tumorigennej buneckej línie.
- Pasážovanie buniek: Toto video ukazuje protokol pasážovania buniek pre adhezívne bunkové línie.
- Transfekcia buniek HT-29: Toto video vás prevedie metódou transfekcie používanou pre bunky HT-29.
Veríme, že informácie v tomto článku sú pre vás užitočné a postačujúce na manipuláciu a udržiavanie buniek línie HT-29. Ak plánujete použiť bunky HT-29 vo vašom výskume, objednajte si ich u nás.
Referencie
- Martínez-Maqueda, D., B. Miralles a I. Recio, bunková línia HT29. Vplyv bioaktívnych látok v potravinách na zdravie: in vitro a ex vivo modely, 2015: s. 113-124.
- Shirafkan, N. a kol., mikroRNA-193a-5p inhibuje migráciu ľudských buniek rakoviny hrubého čreva HT-29 prostredníctvom potlačenia metastázovej dráhy. Journal of cellular biochemistry, 2019. 120(5): s. 8775-8783.
- Khodavirdipour, A., R. Zarean a R. Safaralizadeh, Hodnotenie protinádorového účinku etanolového extraktu Syzygium cumini na kolorektálnu bunkovú líniu HT-29. Journal of gastrointestinal cancer, 2021. 52: s. 575–581.
- Fonseca, H.C. a kol., Probiotické vlastnosti laktobacilov a ich schopnosť inhibovať adhéziu enteropatogénnych baktérií na bunky Caco-2 a HT-29. Probiotics and antimicrobial proteins, 2021. 13: s. 102–112.
- Shan, J., et al., Bakteriofágy sú virulentnejšie voči baktériám s ľudskými bunkami ako v bakteriálnej kultúre; poznatky z buniek HT-29. Vedecké správy, 2018. 8(1): s. 5091.