Bunky DLD-1: Využitie a poznatky o bunkách DLD-1 vo výskume kolorektálneho karcinómu
DLD-1 je ľudská bunková línia kolorektálneho karcinómu, ktorá sa bežne používa vo výskume rakoviny. Je cenným nástrojom na skúmanie rôznych aspektov rakoviny hrubého čreva, vrátane vývoja nádoru, progresie, základných molekulárnych mechanizmov a reakcie na terapeutické látky. DLD-1 je teda vynikajúci prostriedok na pochopenie ochorenia a vývoj potenciálnych liečebných stratégií.
- Rastové médium
- Na kultiváciu buniek DLD-1 sa používa RPMI 1640 s doplnkami kultivačného média, vrátane 10 % fetálneho bovinného séra (FBS), 2,1 mM stabilného glutamínu a 2,0 g/l NaHCO3. Médium by sa malo vymieňať 2–3-krát týždenne.
- Doba zdvojnásobenia
- Doba zdvojnásobenia DLD-1 je približne 15 hodín.
- Typ rastu
- DLD-1 je adhezívna ľudská bunková línia rakoviny hrubého čreva. Bunky rastú do monovrstiev.
- Úroveň biologickej bezpečnosti
- BSL-1
- K dispozícii od
- Cytion — Objednajte si DLD-1
Všeobecné charakteristiky a pôvod buniek DLD-1
Pred začatím práce s bunkovou líniou je prvou úlohou výskumníka zistiť jej pôvod a všeobecné vlastnosti. Táto časť článku obsahuje podrobný úvod do bunkovej línie DLD-1. Zameriava sa na nasledujúce často kladené otázky: Čo sú bunky DLD-1? Čo je rakovinová bunková línia DLD-1? Aké sú mutácie buniek línie DLD-1? Aká je veľkosť bunky DLD-1? Aká je morfológia buniek DLD-1?
- DLD-1, bunková línia rakoviny hrubého čreva, pochádza z hrubého čreva 67-ročného mužského pacienta s kolorektálnym adenokarcinómom. Izolovali ju D.L. Dexter a kolegovia v rokoch 1977–1979. Táto bunková línia má rovnaký pôvod ako bunkové línie HCT-8, HCT-15 a HRT-18.
- Podobne ako kolorektálne karcinómy, aj bunky DLD-1 vykazujú fenotyp mikrosatelitnej nestability [1].
- Mutácie DLD-1 zahŕňajú KRAS, P53, BRAF, BRCA1 a BRCA2. Vzhľadom na status DLD-1 P53, mutácie DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 a DLD-1 KRAS sa tieto bunky považujú za ideálne pre štúdie rakoviny.
- Tieto bunky majú morfológiu podobnú epitelu.
- Veľkosť buniek línie DLD-1 je približne 15 µm.
- Ľudská bunková línia kolorektálneho karcinómu DLD-1 má pseudodiploidný karyotyp. Približne 86 % buniek má modálny počet chromozómov 46. V 17,1 % buniek však môže existovať aj polyploidia.
Informácie o kultivácii buneckej línie DLD-1
Pred kultiváciou akejkoľvek buneckej línie musíte poznať jej základné požiadavky na kultiváciu buniek. V tejto časti sa zameriame na dôležité body, ktoré musíte vedieť pred začatím práce s bunecou líniou DLD-1. Patrí sem: Aký je čas zdvojnásobenia buniek DLD-1? Čo je kultivačné médium DLD-1? Aká je hustota výsevu buniek DLD-1? Ako sa kultivujú bunky DLD-1?
Kľúčové body pre kultiváciu buniek DLD-1
Doba zdvojnásobenia:
Doba zdvojnásobenia DLD-1 je približne 15 hodín.
Adherentné alebo v suspenzii:
DLD-1 je adhezívna ľudská bunková línia rakoviny hrubého čreva. Bunky rastú do monovrstiev.
Hustota výsevu:
Bunky DLD-1 sa vysievajú v hustote 1 až 2 x 104 buniek/cm2. Adherentné bunky sa premyjú 1x fosfátovým pufrom (PBS) a inkubujú sa s pasážovacím roztokom (Accutase) pri izbovej teplote. Po inkubácii trvajúcej 8 až 10 minút sa uvoľnené bunky pridajú do kultivačného média a odstreďujú sa. Bunky sa potom opatrne resuspendujú a prelejú do nových kultivačných nádob obsahujúcich rastové médium.
Rastové médium:
Na kultiváciu buniek DLD-1 sa používa RPMI 1640 s doplnkami kultivačného média, vrátane 10 % fetálneho bovinného séra (FBS), 2,1 mM stabilného glutamínu a 2,0 g/l NaHCO3. Médium by sa malo vymieňať 2–3-krát týždenne.
Podmienky rastu:
Kultúry DLD-1 sa udržiavajú v zvlhčenom inkubátore pri teplote 37 °C s prívodom 5 % CO2.
Skladovanie:
Bunky DLD-1 sa skladujú v parnej fáze tekutého dusíka alebo v elektrickom mrazničke s veľmi nízkou teplotou (pri teplote nižšej ako -150 °C).
Proces zmrazovania a médium:
Na zmrazenie buniek DLD-1 možno použiť zmrazovacie médiá CM-1 alebo CM-ACF. Vždy sa odporúča pomalý proces zmrazovania, ktorý umožňuje postupný pokles teploty o 1 °C, čím sa zabráni šoku buniek a ochráni ich životaschopnosť.
Proces rozmrazovania:
Zmrazené bunky sa rozmrazujú vo vodnom kúpeli nastavenom na teplotu 37 °C po dobu 40 až 60 sekúnd, kým nezostane len malá hrudka ľadu. Potom sa bunky pridajú do čerstvého média a odstreďujú sa. Tento krok je potrebný na odstránenie zložiek mraziaceho média z buniek. Získané bunky sa resuspendujú v rastovom médiu a nanesú do fľaše na rast.
Úroveň biologickej bezpečnosti:
Bunka DLD-1 sa udržiava v laboratóriách s úrovňou biologickej bezpečnosti 1.
Bunková línia DLD-1: Výhody a obmedzenia
V tejto časti článku sa zameriame na výhody a obmedzenia buneckej línie DLD-1 pre rakovinu hrubého čreva.
Výhody
Hlavné výhody buneckej línie DLD-1 sú:
Model kolorektálneho karcinómu
Bunky DLD-1 vykazujú mutácie, ktoré sa bežne vyskytujú u pacientov s kolorektálnym karcinómom, ako sú mutácie DLD-1 KRAS, DLD-1 BRCA a DLD-1 BRCA2. Vďaka tejto relevantnosti sú klinicky vhodným bunkovým modelom na štúdium tejto choroby.
Tumorigénna bunková línia
Bunky DLD-1 sú tumorigenické. Pri injekčnom podaní do nahých myší môžu spôsobiť vznik nádorov. Preto výskumníci využívajú tieto bunky na vývoj modelov xenotransplantátov, ktoré pomáhajú skúmať vznik, vývoj a progresiu nádorov in vivo.
Obmedzenia
Obmedzenia spojené s bunkami DLD-1 sú:
Heterogenita
Populácie buniek rakoviny hrubého čreva DLD-1 vykazujú genetickú a fenotypovú heterogenitu. To môže ovplyvniť všeobecnú platnosť výsledkov výskumu.
Výskumné aplikácie buneckej línie DLD-1
Bunka DLD-1 ponúka široké spektrum aplikácií vo výskume rakoviny. Niektoré významné aplikácie sú popísané v tejto sekcii.
- Výskum rakoviny: Bunky DLD-1 slúžia ako cenný in vitro model na pochopenie molekulárnych mechanizmov, ktoré sú základom rastu, vývoja a progresie kolorektálneho karcinómu. Okrem toho sa používajú na štúdium génovej expresie, signálnych dráh a vplyvu špecifických genetických mutácií na správanie rakovinových buniek. Výskum vykonaný v roku 2022 zistil, že signálna kaskáda PI3K/Akt/YAP reguluje migráciu a inváziu buniek kolorektálneho karcinómu z buneckej línie DLD-1 [2].
- Vývoj liekov: Výskumníci využívajú bunkovú líniu DLD-1 na testovanie účinnosti protinádorových liekov a hodnotenie ich potenciálu pri liečbe rakoviny hrubého čreva. To pomáha pri vývoji liekov a efektívnom boji proti ochoreniu. Štúdia vykonaná v roku 2022 použila rakovinovú bunkovú líniu DLD-1 a skúmala protinádorovú aktivitu silikónových ftalocyanínov, chemicky syntetizovaných zlúčenín. Výsledky štúdie naznačili, že tieto zlúčeniny sú účinnými protinádorovými látkami [3]. Zaujímavé je, že iný výskum zistil protinádorový potenciál proteínu P8 odvodeného z probiotík s použitím buniek DLD-1 [4].
5. Vedecké publikácie o bunkách DLD-1
V tejto časti predstavíme niekoľko zaujímavých a často citovaných publikácií, ktoré sa zaoberajú bunkovou líniou karcinómu hrubého čreva DLD-1.
Táto publikácia bola uverejnená v časopise Journal of Biologically Active Products from Nature (2022). Štúdia zistila, že flavonoid diosmin indukoval bunkovú smrť v bunkách DLD-1 a spôsobil aj zastavenie bunkového cyklu; môže teda byť potenciálnym protinádorovým činidlom.
Bromelain účinne potláča kolorektálny karcinóm s mutáciou Kras stimuláciou ferroptózy
Táto štúdia uverejnená v časopise Animal Cells and Systems (2018) navrhla, že enzým bromelain potláča mutáciu DLD-1 KRAS a má silné cytotoxické účinky.
Tento výskumný článok bol uverejnený v roku 2019 v časopise „Environmental Toxicology“. Štúdia skúmala protinádorové účinky prírodnej zlúčeniny bergaptenu s využitím kolorektálnej buneckej línie DLD-1.
Táto štúdia uverejnená v časopise „Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials“ (2023) zistila, že nanokompozity kurkumínu a oxidu železa sú vysoko účinné proti kolorektálnym rakovinovým bunkám DLD-1.
Tento výskumný článok bol uverejnený v roku 2020 v časopise Turkish Journal of Biology. Štúdia navrhla, že prírodný produkt, epibrassinolidom sprostredkovaná aktivácia AKT v bunkách DLD-1, stimuluje autofágiu súvisiacu s polyamínmi.
Zdroje pre bunkovú líniu DLD-1: protokoly, videá a ďalšie
Nižšie uvádzame niekoľko zdrojov týkajúcich sa buniek DLD-1:
- Transfekcia DLD-1: Tento videonávod je komplexným sprievodcom protokolom in vitro transfekcie DLD-1.
- Bunky DLD-1: Tento výskumný článok stručne opisuje požiadavky na kultiváciu buniek DLD-1, vrátane médií a kultivačných podmienok. Okrem toho vám môže pomôcť zoznámiť sa s protokolom transfekcie používaným pre bunky DLD-1.
Nasledujúce odkazy obsahujú protokol na kultiváciu DLD-1, buniek rakoviny hrubého čreva pochádzajúcich z ľudského organizmu.
- Bunka DLD-1: Táto webová stránka poskytuje základné informácie o bunke DLD-1. Pomôže vám zoznámiť sa s rôznymi protokolmi kultivácie buniek DLD-1, vrátane subkultivácie a manipulácie s kryokonzervovanými a proliferujúcimi kultúrami.
Referencie
- Gavrilas, L.I., et al., Proapoptotické gény ako nové ciele pre samostatnú a kombinovanú liečbu resveratrolom a kurkumínom pri kolorektálnom karcinóme. Food & function, 2019. 10(6): s. 3717-3726.
- Takeda, T., et al., Signálna dráha PI3K/Akt/YAP podporuje migráciu a inváziu buniek kolorektálneho karcinómu DLD-1. Oncology Letters, 2022. 23(4): s. 1-9.
- Farajzadeh, N., et al., Protinádorová aktivita nových silikónových ftalocyanínov proti bunke kolorektálneho adenokarcinómu (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): s. 19863-19873.
- An, B.C., et al., Protinádorové účinky proteínu P8 pochádzajúceho z probiotík v bunkovej línii kolorektálneho karcinómu DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): s. 9857.