Bunky B16-F10 – skúmanie buniek melanómovej línie B16-F10 vo výskume metastáz
Bunky B16-F10 tvoria bunkovú líniu melanómu odvodenú z myši C57BL/6J. Široko sa používajú vo výskume rakoviny kože. Výskumníci používajú tieto bunky na štúdium vývoja a progresie nádorov a terapeutických intervencií. Tento článok sa bude venovať základným aspektom melanómových buniek B16-F10. Konkrétne bude obsahovať:
- Rastové médium
- Bunky B16-F10 sa kultivujú v médiu DMEM. Médium je doplnené 10 % FBS, 4 mM L-glutamínom, 1,5 g/l NaHCO3, 4,5 g/l glukózou a 1,0 mM pyruvátom sodným pre ideálny rast buniek. Médium by sa malo vymieňať 2 až 3 krát týždenne.
- Doba zdvojnásobenia
- Doba zdvojnásobenia buniek B16-F10 je približne 20,1 hodiny. Môže sa pohybovať v rozmedzí od 17 do 21 hodín v závislosti od podmienok kultivácie.
- Typ rastu
- B16-F10 je adhezívna bunková línia. Bunky rastú rýchlo a tvoria monovrstvy.
- Úroveň biologickej bezpečnosti
- BSL-1
- K dispozícii od
- Cytion — Objednajte si B16-F10
- Pôvod a všeobecné charakteristiky bunkovej línie B16-F10
- Informácie o kultivácii buniek B16-F10
- Bunky B16-F10: Výhody a nevýhody
- Výskumné aplikácie buniek B16-F10
- Publikácie o bunkovej línii B16-F10
- Zdroje pre bunkovú líniu B16-F10: protokoly, videá a ďalšie
Pôvod a všeobecné charakteristiky buneckej línie B16-F10
Táto časť vám poskytne informácie o pôvode a charakteristických vlastnostiach nádorových buniek melanómu B16F10. Pomôže vám efektívne využívať túto bunkovú líniu vo vašej výskumnej práci. Dozviete sa hlavne: Čo sú bunky B16-F10? Z čoho pochádza B16F10? Aká je morfológia buniek bunky B16F12? Aká je veľkosť bunky B16F10?
- B16-F10 je subklon nádorovej bunky B16 odvodený z kožného tkaniva myší C57BL/6J. Bunky melanómu B16F10 boli vyvinuté po intravenóznej injekcii línie B16 do imunokompromitovaných alebo syngénnych myší. Tieto bunky boli vybrané pre ich potenciál tvoriť metastázované pľúcne kolónie in vivo a následne boli etablované po desiatich cykloch tvorby pľúcnych kolónií in vitro [1]. Vyvinuli ich Fidler a kolegovia v roku 1976.
- Bunky línie B16-F10 majú epitelový vzhľad a vretenovitý tvar.
- Približná veľkosť buniek B16-F10 je 15,4 ± 1,4 μm [2].
Bunky B16-F1 a B16-F10
Bunky B16-F1 a B16-F10 boli odvodené z materskej bunky B16. Obe pochádzajú z rovnakého zdroja a majú takmer podobné charakteristiky. Hlavným rozdielom je však ich metastatická schopnosť. Bunky B16-F10 majú vysoký, zatiaľ čo B16-F1 majú nízky metastatický potenciál [3].
Informácie o kultivácii buniek B16-F10
Pred manipuláciou a kultiváciou buneckej línie je potrebné poznať jej čas zdvojnásobenia, rastové médiá, podmienky a protokoly kultivácie buniek. V tejto časti sa budeme zaoberať nasledujúcimi otázkami: Aký je čas zdvojnásobenia buniek B16-F10? Ako sa kultivujú bunky B16-F10? Aké sú rastové médiá pre bunky B16-F10? Aké kultivačné podmienky sa odporúčajú pre bunky B16-F10?
Kľúčové body kultivácie buniek B16-F10
Doba zdvojnásobenia:
Doba zdvojnásobenia buniek B16-F10 je približne 20,1 hodiny. Môže sa pohybovať v rozmedzí od 17 do 21 hodín, v závislosti od podmienok kultivácie.
Adherentné alebo v suspenzii:
B16-F10 je adhezívna bunková línia. Bunky rastú rýchlo a vytvárajú monovrstvy.
Pomer delenia:
Bunky B16-F10 sa subkultivujú v pomere delenia 1:2 až 1:4. Bunky sa premyjú fosfátovým pufrom (1x) a potom sa inkubujú s pasážovým roztokom Accutase počas 8 až 10 minút pri izbovej teplote. Do buniek sa pridá čerstvé médium a centrifugujú sa. Získaný pelet buniek sa opäť resuspenduje a bunky sa rozdelia do novej fľaše obsahujúcej čerstvé kultivačné médium podľa pomeru delenia.
Rastové médium:
Bunky B16-F10 sa kultivujú v médiu DMEM. Médium je doplnené 10 % FBS, 4 mM L-glutamínom, 1,5 g/l NaHCO3, 4,5 g/l glukózou a 1,0 mM pyruvátom sodným pre ideálny rast buniek. Médium by sa malo vymieňať 2 až 3 krát týždenne.
Podmienky rastu:
Bunky B16-F10 sa kultivujú vo zvlhčenom inkubátore pri teplote 37 °C s prívodom 5 % CO2.
Skladovanie:
Mrazené bunky sa skladujú pri teplote nižšej ako -150 °C v elektrickom mrazničke s veľmi nízkou teplotou alebo v parnej fáze tekutého dusíka, aby sa zachovala životaschopnosť buniek.
Proces zmrazovania a médium:
Bunky B16-F10 sa na skladovanie zmrazujú v médiách CM-1 alebo CM-ACF. Na tento účel sa odporúča pomalý proces zmrazovania, ktorý umožňuje pokles teploty iba o 1 °C za minútu, aby sa predišlo akémukoľvek šoku buniek.
Proces rozmrazovania:
Zmrazené bunky B16-F10 sa rozmrazujú v prednastavenom vodnom kúpeli pri teplote 37 °C po dobu 40 až 60 sekúnd. Následne sa bunky pridajú do čerstvého média a odstreďujú sa, aby sa odstránili zložky mraziaceho média. Zozbierané bunky sa resuspendujú v rastovom médiu a nalia sú do fliaš na kultiváciu.
Úroveň biologickej bezpečnosti:
Na manipuláciu a udržiavanie buneckej línie B16-F10 je potrebné laboratórium s úrovňou biologickej bezpečnosti 1.
Bunky B16-F10: Výhody a nevýhody
Rovnako ako iné bunkové línie, aj B16-F10 má svoje výhody a nevýhody. V tejto časti sa venujeme niektorým významným kladom a zápory tejto bunkovej línie kožného melanómu.
Výhody
Bunka B16-F10 sa široko používa vo výskume rakoviny. Výhody buniek B16-F10 sú:
Metastatický potenciál
Bunky kožného melanómu B16F10 vykazujú vysoký metastatický potenciál, čo ich robí cennými pre štúdium metastázovania rakoviny a základných mechanizmov.
In vitro model nádoru
Bunky B16-F10 slúžia ako in vitro model na štúdium progresie a rastu rakoviny, čím pomáhajú výskumníkom pochopiť bunkové a molekulárne mechanizmy, ktoré rakovinu poháňajú.
Nevýhody
Nevýhody spojené s bunkovou líniou B16-F10 sú:
Bunka odvodená z myši
B16-F10 je bunková línia odvodená z myší, čo obmedzuje jej použiteľnosť v štúdiách špecifických pre človeka. Výsledky výskumu týchto buniek nemusia vždy skutočne zodpovedať ľudskej biológii.
Výskumné využitie buniek B16-F10
Bunka B16-F10 sa vo veľkej miere používa vo výskume rakoviny. Tu sa rozoberá niekoľko sľubných aplikácií tejto bunky.
- Výskum rakoviny: Bunková línia B16-F10 je cenným modelom na štúdium procesov v rakovinových bunkách, vrátane proliferácie, invázie, migrácie a bunkovej smrti alebo apoptózy. Okrem toho pomáha výskumníkom získať poznatky o molekulárnych mechanizmoch a dráhach, ktoré riadia tieto bunkové procesy. Štúdia vykonaná v roku 2018 skúmala úlohu CCR5 (C-C chemokínový receptor typu 5) v prechode epitelových buniek melanómu na mezenchýmové bunky a v metastázovaní. Zistenia odhalili, že deficit CCR5 obmedzuje rast nádoru a metastázovanie, zatiaľ čo vysoká expresia vedie k zvýšenému rastu a metastázovaniu buniek B16-F10. Ďalší výskum uvádza, že CCR5 reguluje expresiu TGFβ1, ktorý reguluje signálnu dráhu PI3K/AKT/GSK3β s cieľom podporiť prechod epitelových buniek na mezenchýmové a migráciu buniek [4].
- Testovanie a vývoj liekov: Tumorové bunky melanómu B16F10 sú vysoko agresívne, a preto sú vhodné na testovanie potenciálnych protinádorových liekov a liečebných postupov. Výskumníci využívajú tieto bunky a hodnotia vplyv rôznych zlúčenín na rast buniek, proliferáciu a metastázovanie, čím pomáhajú pri vývoji liekov. Štúdia, ktorú v roku 2018 vykonala Valentina Nanni a jej kolegovia, skúmala terapeutické účinky hydroalkoholického extraktu z kvetov Spartium junceum. Štúdia navrhla, že kvetinový extrakt bol účinný pri indukcii senescencie v bunkách B16-F10, čo vedie k potlačeniu rastu buniek a melanogenézy, a teda môže vykazovať potenciálne protinádorové účinky [5].
5. Publikácie zaoberajúce sa bunkovou líniou B16-F10
Tu je niekoľko významných vedeckých publikácií, ktoré sa zaoberajú bunkovou líniou melanómu B16-F10:
Táto štúdia bola uverejnená v časopise Nutrients (2020). Navrhla, že etanolový extrakt z Sorghum bicolor má anti-melanogénny účinok v bunkách kožného melanómu B16F10.
Kalcitriol inhibuje proliferáciu a potenciálne indukuje apoptózu v bunkách B16–F10
Výskum uverejnený v časopise Medical Science Monitor Basic Research (2022) navrhuje, že liek kalcitriol má protinádorové účinky v melanómových bunkách B16-F10 tým, že inhibuje proliferáciu a indukuje apoptózu.
Tento článok bol uverejnený v časopise Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). Zistenia odhalili, že kardoly, resorcinolové lipidy, vykazujú intenzívnu cytotoxicitu na bunkovú líniu B16-F10.
Štúdia uverejnená v časopise Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018) skúmala antimetastatický potenciál extraktu z exokarpu Ginkgo biloba s použitím buniek B16-F10.
Tento výskum v časopise World Neurosurgery (2018) navrhol, že tymochinón môže byť účinnou terapiou proti intracerebrálnym metastatickým léziám, pretože potláča rast buniek B16-F10 a indukuje apoptózu.
Zdroje pre bunkovú líniu B16-F10: protokoly, videá a ďalšie informácie
Endoteliálne bunky B16F10 sa široko používajú vo výskume rakoviny kože. Tu je niekoľko online zdrojov, ktoré vysvetľujú protokoly ich kultivácie a transfekcie:
- Transfekcia melanómových buniek B16F10: Tento videonávod vám pomôže zoznámiť sa s protokolom transfekcie buniek B16-F10.
- Transfekcia B16-F10: Tento dokument vysvetľuje protokol in vitro transfekcie DNA pre bunky kožného melanómu B16F10.
Nasledujúci odkaz obsahuje protokol kultivácie buniek B16-F10:
- Subkultivácia B16-F10: Táto webová stránka obsahuje užitočné informácie o nádorových bunkách melanómu B16F10. Zahŕňa rastové médiá, čas zdvojnásobenia, podmienky kultivácie a protokol pre subkultiváciu buniek, ako aj manipuláciu s kryokonzervovanými a proliferatívnymi kultúrami.
Referencie
- Poste, G., et al., Porovnanie metastatických vlastností klonov melanómu B16 izolovaných z kultivovaných bunkových línií, subkutánnych nádorov a jednotlivých pľúcnych metastáz. Cancer Research, 1982. 42(7): s. 2770-2778.
- Nakamura, M., D. Ono a S. Sugita, Mechanofenotypizácia variantov buniek melanómu B16 na posúdenie účinnosti liečby (-)-epigallokatechín gallátom pomocou zúženého mikrofluidického zariadenia. Micromachines, 2019. 10(3): s. 207.
- Danciu, C. a kol., Správanie štyroch rôznych sublínií myších melanómových buniek B16: koža C57BL/6J. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): s. 73–80.
- Liu, J., et al., Vysoká expresia CCR5 v melanóme zvyšuje epiteliálno-mezenchymálnu transformáciu a metastázovanie prostredníctvom TGFβ1. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): s. 481-493.
- Nanni, V., et al., Hydroalkoholický extrakt z kvetov Spartium junceum L. inhibuje rast a melanogenézu v bunkách B16-F10 indukovaním senescencie. Phytomedicine, 2018. 46: s. 1-10.