Bunky AGS – Využitie buniek AGS (adenokarcinómu žalúdka) v onkologickom výskume
Bunky AGS tvoria bunkovú líniu ľudského adenokarcinómu žalúdka, ktorá sa široko využíva v biomedicínskom výskume. Používa sa najmä na štúdium biológie rakoviny žalúdka, vrátane rastu, vývoja a progresie nádoru, ako aj terapeutických intervencií. Okrem toho sa využíva na skúmanie interakcií medzi hostiteľom a patogénom.
- Rastové médium
- Na kultiváciu buniek AGS sa používa médium DMEM obsahujúce 10 % FBS, 4 mM L-glutamín, 4,5 g/l glukózy, 1,5 g/l NaHCO3 a 1,0 mM pyruvát sodný. Médium by sa malo vymieňať 2 až 3 krát týždenne.
- Doba zdvojnásobenia
- Doba zdvojnásobenia buniek AGS sa pohybuje v rozmedzí 24 až 48 hodín.
- Typ rastu
- Bunky AGS sú adhezívne. Rastú do monovrstiev.
- Úroveň biologickej bezpečnosti
- BSL-2
- K dispozícii od
- Cytion — Objednajte si AGS
Všeobecné charakteristiky a pôvod buniek AGS
Predtým, ako začnete s bunkovou líniou pracovať, je potrebné poznať jej pôvod a všeobecné charakteristiky. Táto časť sa bude venovať nasledujúcim témam: Čo sú bunky AGS? Aký je pôvod buniek AGS? Aká je morfológia rakovinovej bunky AGS?
- Bunka AGS bola izolovaná z tkaniva žalúdka 54-ročnej kaukazskej ženy s adenokarcinómom žalúdka. Bola izolovaná v roku 1979 [1].
- Bunky AGS majú morfológiu podobnú epitelu.
- Žalúdočné epitelové bunky AGS sú hyperdiploidné. Modálny počet chromozómov pre bunky AGS je 49, čo sa vyskytuje takmer v 60 % buniek. Polyploidia sa vyskytuje približne v 3,6 % buniek.
Informácie o kultivácii buniek línie AGS
Pre správnu manipuláciu a správu buneckej línie musíte poznať jej základné kultivačné pojmy. Konkrétne by ste sa mali naučiť: Aká je doba zdvojnásobenia buniek AGS? Aké je kultivačné médium pre bunky AGS? Ako sa vykonáva subkultivácia buniek AGS? Ktoré mraziace médiá sa používajú pre žalúdočné epitelové bunky AGS?
Kľúčové body kultivácie buniek AGS
Doba zdvojnásobenia:
Doba zdvojnásobenia buniek AGS sa pohybuje v rozmedzí 24 až 48 hodín.
Adherentné alebo v suspenzii:
Bunky AGS sú adhézne. Rastú do monovrstiev.
Hustota výsevu:
Bunky AGS sa vysievajú pri hustote 1 x 104 buniek/cm2. Pri tejto hustote vytvoria bunky konfluentnú monovrstvu za 3 až 5 dní. Po odstránení starého média sa bunky prepláchnu 1 x PBS a inkubujú s disociačným roztokom Accutase. Uvoľnené bunky sa resuspendovali v kultivačnom médiu a odstreďovali. Peleta buniek sa opäť resuspendovala a po spočítaní buniek AGS sa naniesli do novej fľaše na rast.
Rastové médium:
Na kultiváciu buniek AGS sa používa médium DMEM obsahujúce 10 % FBS, 4 mM L-glutamín, 4,5 g/l glukózy, 1,5 g/l NaHCO3 a 1,0 mM pyruvát sodný. Médium by sa malo vymieňať 2 až 3-krát týždenne.
Podmienky rastu:
Bunky AGS sa uchovávajú v zvlhčenom inkubátore (pri teplote 37 °C) s prívodom 5 % CO2.
Skladovanie:
Zmrazené bunky AGS sa uchovávajú v elektrických mrazničkách pri teplote pod -150 °C alebo na dlhšiu dobu v parnej fáze tekutého dusíka.
Proces zmrazenia a médium:
Na zmrazenie buniek AGS sa používa médium CM-1 alebo CM-ACF. Zmrazenie buniek prebieha pomalým procesom, ktorý umožňuje pokles teploty iba o 1 °C za minútu a chráni životaschopnosť buniek.
Proces rozmrazovania:
Zmrazené žalúdočné epitelové bunky sa rýchlo premiešavajú vo vodnom kúpeli s teplotou 37 °C po dobu 40 až 60 sekúnd. Rozmrazené bunky sa resuspendujú v čerstvom kultivačnom médiu a nalia sa do nových fliaš na rast. Po 24-hodinovej inkubácii sa médium obnoví, aby sa odstránili zložky mraziaceho média. Na rozdiel od toho sa rozmrazené bunky odstreďujú a zložky mraziaceho média sa odstraňujú. Potom sa zozbierané bunky opäť resuspendujú a nanesú do fľaše obsahujúcej kultivačné médium.
Úroveň biologickej bezpečnosti:
Pre kultiváciu buniek AGS sú nevyhnutné laboratórne podmienky úrovne biologickej bezpečnosti 2.
Bunka AGS: Výhody a obmedzenia
Táto časť článku objasní niektoré kľúčové výhody a obmedzenia spojené s bunkami AGS.
Výhody
Hlavné výhody žalúdočných epitelových buniek AGS sú:
Ľahká kultivácia
Bunky žalúdočného karcinómu AGS sa dajú ľahko udržiavať v laboratóriách na kultiváciu buniek. Nemajú žiadne zložité a náročné požiadavky na kultiváciu. Navyše vykazujú dobré rastové vlastnosti, čo z nich robí ideálnu voľbu na štúdium biológie rakoviny žalúdka.
Relevancia pre rakovinu žalúdka
Bunky AGS boli odvodené z ľudského adenokarcinómu žalúdka, vďaka čomu sa široko používajú na štúdium biológie karcinómu žalúdka a terapeutických intervencií.
Obmedzenia
Obmedzenie spojené s bunkovou líniou AGS je:
In vitro bunkový model
Bunky AGS sa kultivujú v laboratóriách biomedicínskeho výskumu za umelých podmienok. Preto nemusia úplne replikovať mikroprostredie rakoviny žalúdka in vivo a iné bunkové a molekulárne interakcie.
Aplikácie buniek AGS
Bunky AGS sa špecificky používajú na štúdium biológie rakoviny žalúdka. Majú mnoho ďalších sľubných aplikácií v biomedicínskej oblasti. Niektoré zaujímavé výskumné aplikácie buniek AGS sú:
- Štúdium rakoviny žalúdka: Bunky AGS sú vynikajúcim výskumným nástrojom na skúmanie bunkových a molekulárnych mechanizmov, ktoré sú základom rastu, metastázovania a invázie rakoviny žalúdka. Výskumníci tiež využívajú žalúdočné epitelové bunky AGS na štúdium rôznych bunkových procesov, genetických mutácií a signálnych dráh pri vývoji rakoviny žalúdka. Štúdia uverejnená v časopise Oncology Reports (2019) zistila, že mikroRNA-183-5p.1 podporuje proliferáciu, migráciu a inváziu nádorových buniek tým, že inhibuje signálnu kaskádu Bcl 2/P53. Okrem toho tiež downreguluje gén TPM1, aby vyvolal tieto účinky. Preto sa mikroRNA aj TPM1 navrhujú ako účinné molekulárne ciele pre vývoj cielených terapií proti rakovine žalúdka [2].
- Skríning liekov: Bunky AGS sa bežne používajú na skríning nových a účinných liekov proti rakovine žalúdka. Výskumníci hodnotia cytotoxicitu a účinnosť potenciálnych liekov pomocou buneckej línie AGS. Boli tiež vykonané štúdie zamerané na identifikáciu nových molekulárnych cieľov a vývoj nových cielených terapií na boj proti karcinómom žalúdka. Výskum vykonaný v roku 2021 využíval bunky rakoviny žalúdka AGS a skúmal terapeutický účinok lieku paklitaxel. Zistenia odhalili, že paklitaxel indukuje mitotickú katastrofu, integrálny mechanizmus apoptózy alebo bunkovej smrti v bunkách AGS. Okrem toho tiež podporoval autofágiu v bunkách rakoviny žalúdka [3].
- Interakcie medzi hostiteľom a patogénom: Raková bunková línia AGS sa zaoberá aj štúdiom interakcií medzi hostiteľom a patogénom. To pomáha výskumníkom pochopiť bunkové mechanizmy a reakcie zapojené do infekcie. Napríklad štúdia vykonaná v roku 2020 zistila, že malé nekódujúce RNA prítomné vo vezikulách vonkajšej membrány Helicobacter pylori znižujú sekréciu interleukínu 8 v ľudských AGS bunkách [4].
5. Vedecké publikácie o bunkovej línii AGS
Táto časť článku sa bude venovať niekoľkým zaujímavým a najčastejšie citovaným vedeckým publikáciám, ktoré sa zaoberajú bunkami AGS.
Táto štúdia uverejnená v časopise Biomedicine & Pharmacotherapy (2020) navrhla, že salidrosid, prírodná zlúčenina, indukuje ochrannú autofágiu a bunkovú smrť v epitelových bunkách žalúdka AGS prostredníctvom modulácie signálnej dráhy PI3K/AKT/mTOR.
Táto štúdia bola uverejnená v časopise Biomedicine & Pharmacotherapy (2018). Skúmala synergické protinádorové účinky polysacharidu astragalu a lieku apatinib v bunkách AGS. Výsledky štúdie odhalili, že astragalus zvyšuje protinádorové účinky apatinibu prostredníctvom potlačenia signálnej dráhy AKT.
Tento výskum uverejnený v časopise Journal of Ethnopharmacology (2018) naznačil, že kurkuzedoalid, prírodná zlúčenina z rastliny Curcuma zedoaria Roscoe, prispieva k jej cytotoxickému potenciálu voči bunkám AGS.
Nadmerná expresia FOXA1 inhibuje proliferáciu buniek a EMT buniek AGS ľudského žalúdočného karcinómu
Táto publikácia v časopise Gene (2018) navrhla, že zvýšená regulácia FOXA1 potláča proliferáciu buniek adenokarcinómu žalúdka AGS, epiteliálno-mezenchýmovú transformáciu (EMT) a inváziu.
Tento výskumný článok bol uverejnený v časopise International Journal of Medical Microbiology v roku 2020. V tejto štúdii boli bunky AGS použité na štúdium interakcií medzi hostiteľom a patogénom. Zistenia odhalili, že Helicobacter pylori obsahuje vo svojich vezikulách vonkajšej membrány určitú nekódujúcu RNA, ktorá ovplyvňuje hladiny IL-8 v bunkách AGS.
Zdroje pre bunkovú líniu AGS: protokoly, videá a ďalšie
Nižšie uvádzame niekoľko zdrojov týkajúcich sa buniek AGS.
- Protokol transfekcie buniek AGS: Toto video je podrobným návodom na naučenie sa protokolu transfekcie žalúdočných epitelových buniek AGS.
Nasledujúci odkaz obsahuje protokol kultivácie buniek AGS.
- Protokol kultivácie buniek AGS: Táto webová stránka obsahuje užitočné informácie o médiách pre bunky AGS a protokoloch kultivácie buniek. Stručne povedané, poskytuje protokol pre subkultiváciu žalúdočných epitelových buniek AGS a manipuláciu s proliferujúcimi a kryokonzervovanými kultúrami AGS.
- Subkultivácia buniek AGS: Táto stránka podrobne vysvetľuje postup subkultivácie buniek AGS.
Referencie
- Phuc, B.H., et al., Komparatívna genomika dvoch vietnamských kmeňov Helicobacter pylori, CHC155 od pacienta s rakovinou žalúdka mimo kardie a VN1291 od pacienta s vredom dvanástnika. Scientific Reports, 2023. 13(1): s. 8869.
- Lin, J., et al., miRNA‑183‑5p. 1 podporuje migráciu a inváziu buniek AGS rakoviny žalúdka tým, že sa zameriava na TPM1. Oprava v /10.3892/or. 2020.7902. Oncology reports, 2019. 42(6): s. 2371–2381.
- Khing, T.M., et al., Vplyv paklitaxelu na apoptózu, autofágiu a mitotickú katastrofu v bunkách AGS. Scientific Reports, 2021. 11(1): s. 23490.
- Zhang, H., et al., sncRNA zabalené vo vezikulách vonkajšej membrány Helicobacter pylori oslabujú sekréciu IL-8 v ľudských bunkách. International Journal of Medical Microbiology, 2020. 310(1): s. 151356.