Bunková línia A375 - sprievodca výskumom melanómu

A375 je ľudská melanómová bunková línia široko používaná v toxikologickom a imunoonkologickom výskume. Výskumníci využívajú túto bunkovú líniu na štúdium biológie rakoviny a signálnych dráh, testovanie alebo skríning potenciálnych protinádorových látok a vývoj nových a účinných terapeutík.

Pôvod a všeobecné charakteristiky buniek A375

Znalosť pôvodu a všeobecných charakteristík bunkovej línie vám môže pomôcť pri plánovaní jej použitia vo výskume. Táto časť článku sa zaoberá pôvodom a vlastnosťami bunkovej línie A375. Napríklad, čo je bunková línia A375? Aké sú vlastnosti bunkovej línie A375? Odkiaľ pochádzajú bunky A375? Aká je morfológia melanómových buniek A375? Aká je veľkosť buniek A375?

Bunková línia rakoviny kože A375 pochádza z explantátovej kultúry solídneho nádoru 54-ročnej ženy s malígnym melanómom [1].
Bunky A375 majú morfológiu podobnú epitelu.
Veľkosť buniek A375 je v porovnaní s inými bunkovými líniami relatívne menšia. Ich priemer je približne 12 µm.
Bunky melanómu A375 sú hypotriploidné. Modálne číslo chromozómov tejto bunkovej línie je 62. Zvyčajne má každá bunka deväť markerových chromozómov a jednu kópiu normálnych chromozómov N2, N6 a N22.

Lekár vyšetrí výrastky na koži dospelého človeka na rakovinu kože.

Bunky A375: Informácie o bunkovej kultúre

Bunkové kultúry A375 sa ľahko udržiavajú. Nemajú žiadne náročné požiadavky na bunkové kultúry. Táto časť vám pomôže dozvedieť sa potrebné informácie o bunkových kultúrach. Napríklad aký je čas zdvojnásobenia A375. Aké sú médiá bunkovej línie A375? Aká je hustota výsevu A375? Sú melanómové bunky A375 adherentné?

Kľúčové body pre kultiváciu buniek A375

Čas zdvojenia populácie:	Čas zdvojenia populácie A375 je 20 hodín.
Adherentné alebo v suspenzii:	A375 je adherentná línia ľudských melanómových buniek.
Hustota výsevu:	hustota^buniek: 1 x¹⁰⁴ buniek/cm2 je ideálna pre bunkové kultúry A375. Adherentné bunky sa opláchnu 1 x fosfátovým tlmivým roztokom (PBS) a inkubujú sa s pasážovacím roztokom (Accutase). Potom sa k bunkám pridali kultivačné médiá a odstredili sa. Zozbierané bunky sa resuspendovali v kultivačnom médiu a dávkovali sa do nových fliaš na rast.
Rastové médium:	DMEM sa odporúča ako ideálne médium pre A375, ak je doplnené 10 % fetálneho hovädzieho séra (FBS), 4,5 g/l glukózy, 1,5 g/l NaHCO3, 4 mM L-glutamínu a 1,0 mM pyruvátu sodného. Médium A375 by sa malo obnovovať 2 - 3 dni v týždni.
Rastové podmienky:	A375 melanómové bunky sa pestujú vo zvlhčenom inkubátore (37 °C) s prívodom 5 % CO2.
Skladovanie:	Zmrazené bunky A375 by sa mali uchovávať pri teplote nižšej ako -150 °C v parnej fáze tekutého dusíka alebo v elektrickej mrazničke.
Postup zmrazovania a médium:	Na zmrazenie bunkovej línie A375 sa používajú médiá CM-1 alebo CM-ACF. Na ochranu životaschopnosti buniek sa zvolil pomalý proces zmrazovania, ktorý umožňuje postupné znižovanie teploty o 1 °C.
Proces rozmrazovania:	Zmrazená injekčná liekovka s melanómovými bunkami A375 sa rýchlo mieša vo vodnom kúpeli 40 až 60 sekúnd, kým nezostane len malá hrudka ľadu. Bunky sa doplnia čerstvým médiom a odstredia sa, aby sa odstránili prvky zmrazovacieho média. Získaná peleta buniek sa opäť resuspenduje a preleje do nových fliaš.
Úroveň biologickej bezpečnosti:	S kultúrami A375 sa manipuluje a udržiava v laboratórnych podmienkach úrovne biologickej bezpečnosti 1.

Konfluentná vrstva adherovaných buniek A375 pri 20-násobnom zväčšení.

Výhody a obmedzenia bunkovej línie A375

Podobne ako iné bunkové línie, aj melanómová bunková línia A375 je spojená s jedinečnou kombináciou výhod a obmedzení, ktoré z nej robia cenný nástroj pre výskum rakoviny melanómu. V tejto časti je uvedených len niekoľko významných výhod a nevýhod bunkovej línie A375.

Výhody

Významné výhody buniek A375 sú uvedené nižšie:

Model melanómového nádoru: Bunková línia A375 bola odvodená z malígneho melanómového nádoru, a preto slúži ako neoceniteľný nádorový model na skúmanie biológie melanómu a terapeutických zásahov. Tieto bunky vykazujú vlastnosti podobné melanómu, ako je vysoká miera proliferácie a invazívnosť.
Nádorová aktivita: Bunky A375 sú vysoko tumorigénne, čo znamená, že môžu vytvárať nádory. Uvádza sa, že bunky A375 vytvárajú agresívne amelanotické melanómy u myší NIH Swiss, ktorým sa podáva antitymocytové sérum (imunosupresívna látka).
Dobre charakterizované: A375 je geneticky dobre charakterizovaná bunková línia. Má špecifické genetické mutácie ako melanóm. Mutácie A375 zahŕňajú zmenu génu A375 BRAF, vďaka čomu je citlivá na inhibítory špecifické pre BRAF. Vďaka tomuto genetickému profilu sú teda bunky A375 skvelým nástrojom výskumu rakoviny na štúdium základných molekulárnych dráh a cielených terapií.

Obmedzenia

Obmedzenia spojené s bunkami A375 sú:

Obmedzenia in vitro: A375 je in vitro model nádoru. Hoci napodobňuje vlastnosti melanómu, nemôže plne reprezentovať komplexnosť melanómových nádorov. Preto je potrebné postupovať opatrne, keď sa zistenia in vitro zovšeobecňujú na klinické štúdie.

Zakúpte si svoje bunky A375 teraz

430,00 €*

Obsah: 1.5 milliliter

Ceny bez daní plus náklady na dopravu

cryovial

Číslo výrobku: 300110

Výskumné aplikácie bunkovej línie A375

Bunková línia A375 má rozsiahle výskumné využitie vo výskume rakoviny. Tu sú niektoré z bežných oblastí, v ktorých sa bunky A375 využívajú.

Výskum rakoviny: Bunky A375 majú široké uplatnenie vo výskume melanómu. Výskumníci používajú tieto bunky na skúmanie biológie rakoviny kože, procesov a základných mechanizmov bunkovej signalizácie vrátane bunkovej proliferácie, migrácie a invázie. To môže výskumníkom pomôcť aj pri identifikácii nových molekulárnych terapeutických cieľov. Štúdia, ktorú v roku 2019 uskutočnil Lin Zhu s kolegami, použila vysoko agresívne melanómové bunky A375 a zistila úlohu mikroRNA-3662 na rast a inváziu melanómových buniek A375. Vo výsledkoch štúdie sa uvádza, že mikroRNA-3662 sa zameriava na gén ZEB1 a reguluje rast melanómových buniek in vitro a in vivo v modeli nádoru A375 [2]. Podobne výskum uskutočnený v roku 2018 zistil, že dráhy PI3K/AKT a MAPK/ERK sa podieľajú na proliferácii a metastázovaní bunkovej línie A375 [3].
Objavovanie a testovanie liekov: Bunková línia A375 je užitočný in vitro model nádoru na testovanie a skríning potenciálnych protinádorových látok. Výskumníci hodnotia toxicitu a účinnosť nových chemoterapeutických liekov, zlúčenín a iných terapií pomocou týchto melanómových buniek A375. V štúdii sa napríklad skúmali protinádorové vlastnosti mikro- a nanovesikúl získaných z grapefruitu na bunkách ľudského melanómu A375. Výsledky odhalili, že mikro- a nanovesikuly indukujú zastavenie bunkového cyklu a apoptózu a brzdia expresiu génov pri proliferácii, migrácii a invázii buniek [4].

Bunky A375: Publikácie

Tu sú uvedené niektoré významné výskumné publikácie, v ktorých sa objavujú bunky A375.

Vitamín D a jeho nízkokalciové analógy modulujú protinádorové vlastnosti cisplatiny a dakarbazínu v bunkovej línii ľudského melanómu A375

Táto štúdia bola uverejnená v časopise Journal of Oncology v roku 2019. Štúdia navrhla, že súčasná liečba vitamínom D a jeho analógmi zlepšuje protinádorovú aktivitu cisplatiny a dakarbazínu v bunkách melanómu A375.

In vitro hodnotenie antimelanómových účinkov (bunková línia A375) gélu a celých extraktov z listov vybraných druhov aloe

Tento výskum bol uverejnený v časopise Journal of Herbal Medicine v roku 2022. V tejto štúdii sa skúmali antimelanómové účinky gélu z aloe vera v bunkách melanómu A375.

Člen rodiny fermitínu 2 podporuje progresiu melanómu tým, že zvyšuje väzbu p-α-Pix na Rac1 s cieľom aktivovať dráhu MAPK

Táto štúdia v časopise Oncogene (2021) navrhuje, že člen rodiny fermitínu 2 (FERMT2 alebo kindlin-2) podporuje progresiu melanómu prostredníctvom aktivácie MAPK prostredníctvom väzby s p-α-Pix a Rac1.

FARP1 uľahčuje proliferáciu buniek prostredníctvom modulácie signálnej dráhy MAPK v kožnom melanóme

Táto štúdia v časopise The American Journal of Dermatopathology (2019) navrhla, že FARP1 môže uľahčovať vývoj a progresiu kožného melanómu. Môže tak byť užitočným terapeutickým cieľom.

Cytotoxický a apoptotický potenciál extraktov z Phyllodium elegans na ľudské rakovinové bunkové línie

Tento výskumný článok bol uverejnený v časopise Bioengineered (2019). V tejto štúdii sa skúmala cytotoxická a apoptotická aktivita extraktu z rastliny Phyllodium elegans na ľudských karcinómových bunkových líniách vrátane A375.

Zdroje pre bunkovú líniu A375: Riešenia: protokoly, videá a ďalšie materiály

Nižšie je uvedených niekoľko online zdrojov, ktoré obsahujú bunky A375.

Transfekcia buniek A375: Tento videonávod vám pomôže naučiť sa transfekciu buniek A375 krok za krokom.
Kultivácia buniek: Toto video obsahuje veľmi užitočné informácie o kultivácii bunkových línií.

Protokoly bunkovej kultivácie pre bunky A375 sú uvedené tu.

Bunková línia A375: Tento odkaz obsahuje užitočné informácie o kultivácii a údržbe bunkovej línie A375 vrátane médií A375 a manipulácie so zmrazenými a proliferujúcimi kultúrami A375.

Často kladené otázky (FAQ) pre bunky A375

Odkazy

Avram, S., et al., Štandardizácia modelov ľudského melanómu A375 na kuracej embryonálnej chorioalantoickej membráne a nahých myšiach Balb/c. Oncol Rep, 2017. 38(1): p. 89-99.
Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 sa zameriava na ZEB1 a oslabuje inváziu vysoko agresívnej melanómovej bunkovej línie A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: p. 5845-5856.
Peng, X., et al., Oxyfadichalcon C inhibuje proliferáciu a metastázovanie melanómových buniek A375 prostredníctvom potlačenia dráh PI3K/Akt a MAPK/ERK. Life sciences, 2018. 206: p. 35-44.
Stanly, C., et al, Grapefruit-derived micro and nanovesicles show distinct metabolome profiles and anticancer activities in the A375 human melanoma cell line (Grapefruitové mikro a nanovesicle vykazujú odlišné profily metabolómu a protinádorové aktivity v ľudskej melanómovej bunkovej línii A375). Cells, 2020. 9(12): p. 2722.