Bunková línia A375 – Príručka k výskumu melanómu

A375 je ľudská bunková línia melanómu, ktorá sa široko používa v toxikologickom a imuno-onkologickom výskume. Výskumníci využívajú túto bunkovú líniu na štúdium biológie rakoviny a signálnych dráh, testovanie alebo skríning potenciálnych protinádorových látok a vývoj nových a účinných liečebných metód.

Pôvod a všeobecné charakteristiky buniek A375

Znalosť pôvodu a všeobecných charakteristík buneckej línie vám môže pomôcť pri plánovaní jej využitia vo výskume. Táto časť článku sa venuje pôvodu a vlastnostiam buneckej línie A375. Napríklad, čo je bunecka línia A375? Aké sú charakteristiky buneckej línie A375? Odkiaľ pochádzajú bunky A375? Aká je morfológia buniek melanómu A375? Aká je veľkosť buniek A375?

• Bunková línia rakoviny kože A375 pochádza z explantátovej kultúry solídneho nádoru 54-ročnej ženy s malígnym melanómom [1].
• Bunky A375 majú morfológiu podobnú epitelu.
• Veľkosť buniek A375 je v porovnaní s inými bunkovými líniami relatívne menšia. Ich priemer je približne 12 µm.
• Melanómové bunky A375 sú hypotriploidné. Modálny počet chromozómov pre túto bunkovú líniu je 62. Zvyčajne má každá bunka deväť markerových chromozómov a jednu kópiu normálnych chromozómov N2, N6 a N22.

Bunky A375: Informácie o kultivácii buniek

Kultúry buniek A375 sa ľahko udržiavajú. Nemajú žiadne náročné požiadavky na kultiváciu. Táto časť vám pomôže získať potrebné informácie o kultivácii buniek. Napríklad aká je doba zdvojnásobenia buniek A375. Aké je médium pre bunkovú líniu A375? Aká je hustota výsevu buniek A375? Sú melanómové bunky A375 adhezívne?

Kľúčové body pre kultiváciu buniek A375

Doba zdvojnásobenia populácie:

Doba zdvojnásobenia buniek A375 je 20 hodín.

Adherentné alebo v suspenzii:

A375 je adhezívna ľudská melanómová bunková línia.

Hustota výsevu:

Pre kultúry buniek A375 je ideálna hustota buniek 1 x 10⁴ buniek/cm². Adherentné bunky sa prepláchnu 1 x fosfátovým pufrom (PBS) a inkubujú sa s pasážovým roztokom (Accutase). Následne sa k bunkám pridá kultivačné médium a centrifugujú sa. Zozbierané bunky sa resuspendujú v kultivačnom médiu a rozdelia do nových fliaš na rast.

Rastové médium:

Ako ideálne médium pre A375 sa odporúča DMEM, ak je doplnené 10 % fetálnym bovinným sérom (FBS), 4,5 g/l glukózy, 1,5 g/l NaHCO3, 4 mM L-glutamínu a 1,0 mM pyruvátu sodného. Médium A375 by sa malo obnovovať 2–3 dni v týždni.

Podmienky kultivácie:

Melanómové bunky A375 sa kultivujú vo zvlhčenom inkubátore (37 °C) s prívodom 5 % CO2.

Skladovanie:

Zmrazené bunky A375 by sa mali uchovávať pri teplote nižšej ako -150 °C vo fáze pary tekutého dusíka alebo v elektrickom mrazničke.

Proces zmrazovania a médium:

Na zmrazenie buniek línie A375 sa používajú médiá CM-1 alebo CM-ACF. Na ochranu životaschopnosti buniek sa zvolil proces pomalého zmrazovania, ktorý umožňuje postupný pokles teploty o 1 °C.

Proces rozmrazovania:

Fľaštička so zmrazenými melanómovými bunkami A375 sa rýchlo premieša vo vodnom kúpeli po dobu 40 až 60 sekúnd, kým nezostane len malá hrudka ľadu. K bunkám sa pridá čerstvé médium a odstreďuje sa, aby sa odstránili prvky mraziaceho média. Získaný bunkový pelet sa opäť resuspenduje a naleje do nových fliaš.

Úroveň biologickej bezpečnosti:

S kultúrami A375 sa manipuluje a udržiavajú sa v laboratórnych podmienkach úrovne biologickej bezpečnosti 1.

Výskumné využitie buneckej línie A375

Bunka A375 má široké využitie vo výskume rakoviny. Tu sú niektoré z bežných oblastí, kde sa bunky A375 využívajú.

• Výskum rakoviny: Bunky A375 majú široké uplatnenie vo výskume melanómu. Výskumníci použili tieto bunky na skúmanie biológie rakoviny kože, jej procesov a základných mechanizmov bunkovej signalizácie, vrátane bunkovej proliferácie, migrácie a invázie. To môže výskumníkom pomôcť aj pri identifikácii nových molekulárnych terapeutických cieľov. Štúdia, ktorú v roku 2019 vykonali Lin Zhu a kolegovia, použila vysoko agresívne melanómové bunky A375 a zistila úlohu mikroRNA-3662 pri raste a invázii melanómových buniek A375. Zistenia štúdie uvádzajú, že mikroRNA-3662 sa zameriava na gén ZEB1 a reguluje rast melanómových buniek in vitro a in vivo v nádorovom modeli A375 [2]. Podobne výskum vykonaný v roku 2018 zistil, že signálne dráhy PI3K/AKT a MAPK/ERK sa podieľajú na proliferácii a metastázovaní buniek línie A375 [3].
• Objavovanie a testovanie liekov: Bunka A375 je užitočným in vitro nádorovým modelom na testovanie a skríning potenciálnych protinádorových látok. Výskumníci pomocou týchto melanómových buniek A375 hodnotia toxicitu a účinnosť nových chemoterapeutických liekov, zlúčenín a iných terapií. Napríklad jedna štúdia skúmala protinádorové vlastnosti mikro- a nanovesikúl pochádzajúcich z grapefruitu na ľudských melanómových rakovinových bunkách A375. Výsledky ukázali, že mikro- a nanovesikuly indukujú zastavenie bunkového cyklu a apoptózu a bránia génovej expresii pri proliferácii, migrácii a invázii buniek [4].

Bunky A375: Publikácie

Tu sú uvedené niektoré významné vedecké publikácie, ktoré sa zaoberajú bunkami A375.

Vitamín D a jeho analógy s nízkym vplyvom na hladinu vápnika modulujú protinádorové vlastnosti cisplatiny a dakarbazínu v ľudskej bunke melanómu A375

Táto štúdia bola uverejnená v časopise Journal of Oncology v roku 2019. Štúdia navrhla, že súbežná liečba vitamínom D a analógmi zlepšuje protinádorovú aktivitu cisplatiny a dakarbazínu v melanómových bunkách A375.

In vitro hodnotenie protimelanómových účinkov (bunky A375) gélu a extraktov z celých listov vybraných druhov aloe

Tento výskum bol uverejnený v časopise Journal of Herbal Medicine v roku 2022. Táto štúdia skúmala protimelanómové účinky gélu z aloe vera na bunky melanómu A375.

Člen rodiny fermitínov 2 podporuje progresiu melanómu tým, že zvyšuje väzbu p-α-Pix na Rac1, čím aktivuje MAPK dráhu

Táto štúdia v časopise Oncogene (2021) navrhla, že člen rodiny fermitínov 2 (FERMT2 alebo kindlin-2) podporuje progresiu melanómu prostredníctvom aktivácie MAPK viazaním sa na p-α-Pix a Rac1.

FARP1 uľahčuje proliferáciu buniek prostredníctvom modulácie signálnej dráhy MAPK pri kožnom melanóme

Táto štúdia uverejnená v časopise The American Journal of Dermatopathology (2019) navrhla, že FARP1 môže uľahčovať vývoj a progresiu kožného melanómu. Môže teda byť užitočným terapeutickým cieľom.

Cytotoxický a apoptotický potenciál extraktov z Phyllodium elegans na ľudských rakovinových bunkových líniách

Tento výskumný článok bol uverejnený v časopise Bioengineered (2019). Táto štúdia skúmala cytotoxickú a apoptotickú aktivitu rastlinného extraktu z Phyllodium elegans na ľudských karcinómových bunkových líniách, vrátane A375.

Zdroje pre bunkovú líniu A375: protokoly, videá a ďalšie

Nižšie uvádzame niekoľko online zdrojov týkajúcich sa buniek A375.

• Transfekcia buniek A375: Tento videonávod vám pomôže krok za krokom sa naučiť transfekciu buniek A375.
• Kultivácia buniek: Toto video obsahuje veľmi užitočné informácie týkajúce sa kultivácie bunkových línií.

Protokoly kultivácie buniek A375 sú uvedené tu.

• Bunka A375: Tento odkaz obsahuje užitočné informácie o kultivácii a udržiavaní buniek A375, vrátane médií A375 a manipulácie so zmrazenými a proliferujúcimi kultúrami A375.

Referencie

1. Avram, S., et al., Standardizácia modelov ľudského melanómu A375 na chorioallantoickej membráne kuriatok a nahých myšiach Balb/c. Oncol Rep, 2017. 38(1): s. 89-99.
2. Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 sa zameriava na ZEB1 a oslabuje inváziu vysoko agresívnej bunky melanómu A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: s. 5845-5856.
3. Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C inhibuje proliferáciu a metastázovanie buniek melanómu A375 prostredníctvom potlačenia dráh PI3K/Akt a MAPK/ERK. Life sciences, 2018. 206: s. 35-44.
4. Stanly, C., et al., Mikro- a nanovesikuly pochádzajúce z grapefruitu vykazujú odlišné metabolomické profily a protinádorové účinky v ľudskej bunke melanómu A375. Cells, 2020. 9(12): s. 2722.