Buněčná línia KG-1
Všeobecné charakteristiky a pôvod buneckej línie KG-1
Pôvod a všeobecné charakteristiky buneckej línie pomáhajú výskumníkovi rozhodnúť sa o jej využití vo svojej práci. Tieto informácie si môžete preveriť ešte predtým, ako s ňou začnete pracovať. Táto časť článku sa venuje pôvodu a charakteristikám makrofágov KG-1. Dozviete sa tu: Čo sú bunky KG-1? Čo je bunecka línia KG-1a? Aký je pôvod buneckej línie KG-1? Aká je morfológia KG-1?
- KG-1 je lymfoblastová bunková línia odvodená z aspirátu kostnej drene kaukazského muža (59 rokov) s akútnou myeloidnou leukémiou. Založili ju Koeffler a Golde v roku 1978. Tieto bunky sa nachádzajú prevažne v štádiu zrenia promyelocytov alebo myeloblastov [1].
- Bunky KG-1 majú morfológiu podobnú lymfoblastom.
- Karyotyp buneckej línie KG-1 vykazuje pseudodiploidný modálny počet chromozómov.
KG-1 a KG-1a
KG-1a je sublíniou rodičovských buniek KG-1. Bola vyvinutá po 35 pasážach buneckej línie KG-1. V porovnaní s buneckou líniou KG-1 je menej diferencovaná. Okrem toho je táto sublínia z cytochemického, morfologického aj funkčného hľadiska menej zrelá v porovnaní s rodičovskou bunkovou líniou (KG-1).
Informácie o kultivácii buniek línie KG-1
Táto časť článku obsahuje všetky dôležité informácie o kultivácii buniek KG-1, ktoré vám môžu uľahčiť prácu. Dozviete sa tu: Aký je čas zdvojnásobenia buniek buniek KG-1? Aké sú kultivačné podmienky makrofágov KG-1? Ako sa kultivujú bunky KG-1?
Kľúčové body kultivácie buniek KG-1
Doba zdvojnásobenia:
Doba zdvojnásobenia buniek KG-1 je približne 45 hodín. Môže sa však líšiť v závislosti od podmienok kultivácie.
Adherentné alebo v suspenzii:
Bunky KG-1 rastú v suspenzii.
Hustota buniek:
Optimálna hustota buniek pre bunkovú líniu KG-1 je od 1 do 3 x 105 buniek/ml. Na subkultiváciu sa bunková suspenzia prenesie do sterilnej skúmavky a odstreďuje sa. Získané bunky sa potom doplnia čerstvým médiom a opatrne sa resuspendujú. Následne sa bunky rozdelia do nových fliaš a kultivujú pri optimálnej hustote buniek. Bunky je možné rozdeliť, keď dosiahnu maximálnu hustotu 1 – 2 × 10⁶ buniek/ml.
Rastové médium:
IMDM (Iscoveho modifikované Dulbeccoho médium) obsahujúce 10 % FBS, 4,5 g/l glukózy, 4 mM L-glutamínu, 1,0 mM pyruvátu sodného a 3,0 g/l NaHCO₃. Rôstové médium by sa malo vymeniť po troch dňoch.
Podmienky kultivácie:
Bunky KG1 AML sa kultivujú vo zvlhčenom inkubátore pri teplote 37 °C a s prívodom 5 % CO₂.
Skladovanie:
Zmrazené bunky sa uchovávajú v parnej fáze tekutého dusíka alebo pri teplote nižšej ako –150 °C v elektrickom mrazničke s ultranízkymi teplotami, aby sa zachovala životaschopnosť buniek.
Proces zmrazenia a médium:
Na zmrazenie buniek KG-1 je vhodné médium CM-1 alebo CM-ACF. Bunky sa zmrazujú pomalým procesom, aby sa zabránilo ich poškodeniu. Táto metóda umožňuje postupný pokles teploty o 1 °C za minútu.
Proces rozmrazovania:
Bunky sa rozmrazujú v predhriatom vodnom kúpeli pri teplote 37 °C, až kým nezostane len malá hrudka ľadu. K rozmrazeným bunkám sa pridá čerstvé médium a odstreďujú sa, aby sa odstránili zložky mraziaceho média. Peleta buniek sa opatrne resuspenduje a naliate do nových fliaš obsahujúcich rastové médium.
Úroveň biologickej bezpečnosti:
Na udržiavanie bunkových kultúr KG-1 je nevyhnutné laboratórium s úrovňou biologickej bezpečnosti 1.
Uverejnené: 2023 | Posledná revízia: máj 2026
Bunka KG-1: Výhody a obmedzenia
Rovnako ako iné bunkové línie, aj myeloidná leukemická bunková línia KG-1 má mnoho výhod a obmedzení. V tejto časti sa dozviete o niektorých významných z nich, ktoré môžu byť kľúčové pri rozhodovaní o jej použití vo vašom výskume.
Výhody
Hlavné výhody buniek KG-1 sú:
-
Jednoduchosť kultivácie
Bunky KG-1 sa dajú ľahko kultivovať vo výskumných laboratóriách, pričom majú nenáročné požiadavky na kultiváciu. Ich jednoduchá údržba a podmienky rastu ich sprístupňujú širokému spektru výskumníkov, ktorí disponujú základným vybavením na kultiváciu buniek.
-
Model akútnej myeloidnej leukémie (AML)
Bunky KG-1, získané od mužského pacienta s akútnou myeloidnou leukémiou (AML), slúžia ako cenný nástroj na skúmanie biológie AML a výskum potenciálnych liečebných postupov, pričom poskytujú pohľad na základné mechanizmy tejto choroby a stratégie liečby.
Obmedzenia
Obmedzenia spojené s bunkovou líniou KG1 sú:
-
In vitro model
Bunky KG-1 sú cenným in vitro modelom pre výskum AML; je však dôležité poznamenať, že nemusia plne odzrkadľovať komplexnosť ochorenia in vivo, pričom slúžia ako zjednodušený bunkový model, ktorý nemusí zahŕňať všetky aspekty biológie AML.
Využitie buniek KG-1 vo výskume
KG-1 ponúka niekoľko sľubných možností využitia v biomedicínskom výskume. Medzi dôležité oblasti výskumu, v ktorých sa makrofágy KG1 využívajú, patria:
- Výskum rakoviny: Bunky KG-1 boli získané od pacienta s akútnou myeloidnou leukémiou, a preto sa považujú za cenný výskumný nástroj na skúmanie biológie AML. Výskumníci využívajú tieto bunky na štúdium bunkových a molekulárnych mechanizmov, ktoré riadia vývoj, rast a rezistenciu voči liekom pri AML. Súčasťou toho je aj identifikácia a objavovanie nových biomarkérov, genetických mutácií a signálnych dráh spojených s AML. Napríklad štúdia vykonaná v roku 2019 zistila, že dlhá nekódujúca RNA linc00239 podporuje rezistenciu voči doxorubicínu a malígne správanie v bunkách akútnej myeloidnej leukémie KG-1. Ďalšie štúdie odhalili, že lncRNA aktivuje signálnu dráhu PI3K/Akt/mTOR, čím vyvoláva tieto účinky v bunkách AML [2].
- Toxikológia: Bunková línia KG1 sa široko využíva v toxikologickom výskume. Výskumníci testujú toxicitu a účinnosť potenciálnych terapeutických látok, vrátane chemoterapeutík a cielených terapií, na bunkách myeloidnej leukémie KG1 s cieľom identifikovať sľubné kandidátske lieky pre budúce predklinické a klinické hodnotenia. Výskum uskutočnený v roku 2018 analyzoval toxicitu nano-niosómov obsahujúcich doxorubicín na bunkovej línii KG1 AML. Štúdia navrhla, že nano-niosóm je vhodným nosičom na podávanie liekov, keďže zvyšuje účinnosť liečby [3]. V inom výskume vedci skúmali terapeutické účinky čaju z žihľavy pripraveného z listov rastliny Urtica dioica. Štúdia odhalila, že tento vodný extrakt z listov rastliny má protinádorové účinky na bunky akútnej myeloidnej leukémie KG-1 a U937 [4].
Publikácie o bunkách KG-1
V tejto časti článku uvádzame niekoľko zaujímavých vedeckých publikácií o bunkách KG-1.
Tento článok bol uverejnený v časopise Journal of Cellular Physiology (2019). Štúdia navrhla, že zlúčenina kvercetínu zvyšuje citlivosť buniek KG1 AML na ligand indukujúci apoptózu súvisiaci s TNF (TRAIL) a môže zvýšiť účinok cytotoxicity vyvolanej TRAIL v bunkách.
Tento článok v časopise Tropical Journal of Pharmaceutical Research (2022) navrhuje, že zníženie expresie transkripčného faktora 8 typu Krüppel potláča proliferáciu buniek AML a glykolýzu, čím podporuje apoptózu prostredníctvom regulácie signálnej dráhy AKT/mTOR.
Účinky sorafenibu a oxidu arzenitého na bunkové línie U937 a KG-1: apoptóza alebo autofágia?
Táto štúdia uverejnená v časopise Cell Journal (Yakhteh) (2020) skúmala potenciálne účinky oxidu arzenitého a sorafenibu na bunky U937 a KG-1.
Táto štúdia uverejnená v časopise Medical Oncology (2020) hodnotila OXPHOS a glykolýzu ako terapeutické ciele v bunkovej línii AML, KG-1.
Táto publikácia z časopisu Drug Design, Development, and Therapy z roku 2020 navrhla, že kurkumín a talidomid synergicky vyvolávajú apoptotické účinky v bunkách KG-1 prostredníctvom zníženia expresie STAT3 a Bcl-xL.
6. Zdroje týkajúce sa buneckej línie KG-1: protokoly, videá a ďalšie materiály
Nižšie uvádzame niekoľko online zdrojov týkajúcich sa buniek KG-1.
- Subkultivácia suspenzných buniek: Toto video popisuje protokol subkultivácie suspenzných bunkových kultúr, ako je KG-1.
Nasledujúci odkaz obsahuje protokol kultivácie buniek KG-1:
- Bunka KG-1: Táto webová stránka obsahuje množstvo základných informácií o kultivácii buniek KG-1. Zahŕňa informácie o kultivačných médiách pre túto bunkovú líniu a protokoly na subkultiváciu a manipuláciu s kryokonzervovanými a proliferatívnymi kultúrami.
Referencie
- Pelliccia, F., V. Ubertini a N. Bosco, Dôležitosť molekulárno-cytogenetickej analýzy pred použitím bunkových línií vo výskume: Prípad leukemickej bunkovej línie KG-1a. Oncol Lett, 2012. 4(2): s. 237–240.
- Yang, Y., a kol., Dlhá nekódujúca RNA linc00239 podporuje malígne správanie a chemorezistenciu voči doxorubicínu čiastočne prostredníctvom aktivácie signálnej dráhy PI3K/Akt/mTOR v bunkách akútnej myeloidnej leukémie. Oncology Reports, 2019. 41(4): s. 2311–2320.
- Bahrami-Banan, F., et al., Príprava a štúdia nano-niosómov obsahujúcich doxorubicín a hodnotenie ich toxicity na bunkovej línii KG-1 akútnej myeloblastovej leukémie. Payavard Salamat, 2018. 12(4): s. 309–323.
- Hodroj, M.H., a kol., Čaj z žihľavy inhibuje rast buniek akútnej myeloidnej leukémie in vitro tým, že podporuje apoptózu. Nutrients, 2020. 12(9): s. 2629.