Bunky P19 – Výskum embryonálneho karcinómu s využitím buniek P19
P19 je bunková línia embryonálneho karcinómu myši. Široko sa využíva v biomedicínskom výskume, hlavne na štúdium vývojovej biológie, biológie kmeňových buniek, bunkovej diferenciácie a skríningu liekov. Keďže bunky P19 majú schopnosť diferenciácie, môžu byť užitočné pri skúmaní zložitých biologických procesov, ako je tvorba tkanív a raný embryonálny vývoj. V tomto článku sa budeme venovať základným informáciám o bunkách P19 pochádzajúcich z myší.
- Rastové médium
- Rastové médium DMEM/Ham's F12 obsahujúce 5 % fetálneho bovinného séra, 3,1 g/l glukózy, 1,6 mM L-glutamínu, 1,0 mM pyruvátu sodného, 15 mM HEPES a 1,2 g/l NaHCO₃.
- Doba zdvojnásobenia
- Doba zdvojnásobenia uvádzaná pre bunkovú líniu P19 je približne 2 až 3 dni.
- Typ rastu
- Embryonálna karcinómová bunková línia P19 je adhezívna.
- Úroveň biologickej bezpečnosti
- BSL-1
- K dispozícii od
- Cytion — Objednajte si P19
- Všeobecné charakteristiky a pôvod buniek P19
- Informácie o kultivácii buniek P19
- Bunka P19: Výhody a nevýhody
- Výskumné využitie buniek P19
- Kúpte si bunkovú líniu P19 ešte dnes
- Bunky P19: Vedecké publikácie
- Zdroje pre bunkovú líniu P19: protokoly, videá a ďalšie materiály
- Objavovanie buneckej línie P19: Často kladené otázky
- Referencie
- Často kladené otázky
Všeobecné charakteristiky a pôvod buniek P19
Predtým, ako začnete s bunkovou líniou pracovať, je nevyhnutné poznať jej všeobecné charakteristiky a pôvod. V tejto časti sa budeme venovať nasledujúcim otázkam: Čo je bunková línia P19? Aká je veľkosť bunky P19? Aký je pôvod buniek P19?
- P19 je typ pluripotentných embryonálnych karcinómových buniek, ktoré boli pôvodne získané z teratokarcinómu vyvinutého u myši C3H/He. Bunkovú líniu prvýkrát založili v roku 1982 McBurney a Rogers.
- Bunky P19 môžu nepretržite rásť v kultivačnom médiu doplnenom o sérum. Pri vystavení netoxickým liekom, ako je kyselina retinová a dimetylsulfoxid (DMSO), sa môžu diferencovať na iné typy buniek [1].
- Tieto myšie karcinómové bunky majú morfológiu podobnú epitelu.
- Bunka P19 má euploidný samčí karyotyp (n = 40; XY).
Informácie o kultivácii buniek P19
Bunka P19 sa vďaka svojim jedinečným vlastnostiam široko kultivuje vo výskumných laboratóriách. Jej kultivácia je jednoduchá a zvládnuteľná. V tejto časti sú uvedené všetky kľúčové informácie, ktoré potrebujete na udržiavanie a rozmnožovanie buniek P19. Dozvieme sa: Aký je čas zdvojnásobenia buniek P19? Ako sa kultivuje bunková línia P19? Je P19 adhezívna bunková línia?
Kľúčové body kultivácie buniek P19
Doba zdvojnásobenia:
Doba zdvojnásobenia uvádzaná pre bunkovú líniu P19 je približne 2 až 3 dni.
Adherentná alebo v suspenzii:
Embryonálna karcinómová bunková línia P19 je adhezívna.
Pomer subkultivácie:
Bunky P19 by sa mali subkultivovať každých 48 hodín a mal by sa udržiavať pomer rozdelenia 1:10. Adherentné bunky sa premyjú 1 X fosfátovým pufrom a inkubujú sa s Accutase, kým sa bunky nedisociujú. Do buniek sa pridá kultivačné médium a zozbierajú sa centrifugáciou. Zozbierané bunky sa opatrne resuspendujú a rozdelia do nových fliaš.
Rastové médium:
Kultivačné médium DMEM/Ham's F12 obsahujúce 5 % fetálneho bovinného séra, 3,1 g/l glukózy, 1,6 mM L-glutamínu, 1,0 mM pyruvátu sodného, 15 mM HEPES a 1,2 g/l NaHCO₃ sa používa na kultiváciu buniek P19.
Podmienky rastu:
Na rast a kultiváciu embryonálnej karcinómovej buneckej línie P19 je nevyhnutný zvlhčený inkubátor nastavený na 37 °C s prívodom 5 % CO₂.
Skladovanie:
Zmrazené skúmavky s bunkami P19 by sa mali skladovať pri teplote nižšej ako –150 °C v mrazničke alebo v parnej fáze tekutého dusíka, aby sa zachovala životaschopnosť buniek v dlhodobom horizonte.
Proces zmrazenia a médium:
Na zmrazenie buniek P19 pomocou metódy pomalého zmrazenia, ktorá chráni bunky pred akýmkoľvek šokom a zachováva ich životaschopnosť, možno použiť kultivačné médiá CM-1 alebo CM-ACF.
Proces rozmrazovania:
Zmrazené bunky P19 je možné rozmraziť vo vodnom kúpeli pri teplote 37 °C rýchlym pretrepaním fľaštičky po dobu 40 až 60 sekúnd. Do buniek sa pridá čerstvé médium a odstreďujú sa, aby sa odstránili zložky mraziaceho média. Bunky sa opäť resuspendujú a prelejú do novej fľaše na kultiváciu.
Úroveň biologickej bezpečnosti:
Pre bunkovú líniu P19 sú potrebné laboratórne podmienky úrovne biologickej bezpečnosti 1.
Bunka P19: Výhody a nevýhody
V tejto časti sa budeme venovať výhodám a nevýhodám bunkovej línie P19.
Výhody
- Diferenciačný potenciál: Bunky P19 sa môžu diferencovať na rôzne typy buniek, vrátane kardiomyocytov, neurónov a mikrogliálnych buniek. Na diferenciáciu vyžadujú netoxické látky, ako je kyselina retinová a dimetylsulfoxid (DMSO). Kyselina retinová indukuje vývoj neurónov, mikrogliových buniek a astrogliových buniek, zatiaľ čo DMSO iniciuje vývoj pulzujúcich kardiomyocytov a buniek hladkého svalstva. Bunky P19 sú preto užitočné pri štúdiu bunkovej diferenciácie a vývojových procesov.
- Modelový systém: Pluripotentná embryonálna karcinómová bunková línia P19 je cenným modelom na štúdium raného embryonálneho vývoja. Výskumníci využívajú bunky P19 na objasnenie bunkových signálnych dráh a bunkových a molekulárnych mechanizmov zapojených do týchto procesov.
Nevýhody
- Myší pôvod: P19 je myšia embryonálna karcinómová bunková línia. Z toho vyplýva, že zistenia zo štúdií využívajúcich tieto bunky sa nemusia v plnej miere preniesť na ľudskú biológiu a procesy.
Výskumné využitie buniek P19
Bunky P19 majú viacero výskumných aplikácií vďaka svojej schopnosti diferenciácie a relevancii pre vývojovú biológiu a výskum kmeňových buniek. Medzi dôležité výskumné aplikácie embryonálnych karcinómových buniek P19 patria:
- Štúdie diferenciácie buniek: Ako vieme, bunky P19 sa môžu diferencovať na neuróny, mikrogliové bunky, bunky hladkého svalstva a kardiomyocyty; preto sa široko využívajú na štúdium procesov diferenciácie buniek. Okrem toho pomáhajú pri výskume vývoja nervovej a srdcovej sústavy a súvisiacich mechanizmov. Štúdia vykonaná v roku 2018 zistila, že reaktívne formy kyslíka (ROS) riadia diferenciáciu buniek P19 na špecifické typy buniek a zabraňujú indukcii iných [3]. Ďalšia štúdia skúmala proces neurálnej diferenciácie sprostredkovaný kyselinou retinovou a zistila účasť signálnej dráhy PI3K/Akt/GSK3β [4].
- Vývojová biológia: Bunky P19 predstavujú neoceniteľný model na štúdium raného embryonálneho vývoja. Pomáhajú výskumníkom pochopiť zložité biologické procesy, ako je napríklad tvorba tkanív počas vývoja embrya. V rámci výskumu sa použili bunky P19 a skúmali sa molekulárne faktory prispievajúce k vzniku defektu komorového septa (VSD). Zistenia odhalili, že dlhá nekódujúca RNA SNHG6 prispieva k VSD negatívnou reguláciou miRNA-101 a aktiváciou dráhy Wnt/β-katenín [5].
- Testovanie liekov: Embryonálna karcinómová bunková línia P19 myši sa používa aj na skríning potenciálnych kandidátov na lieky. V jednej štúdii sa použili diferencované neuróny z buniek P19 a skúmali sa neuroprotektívne účinky syntetického L-Dopa a vodného extraktu zo semien Mucuna pruriens na inhibíciu acetylcholínesterázy. Výsledky ukázali, že rastlinný extrakt vykazoval sľubné výsledky v porovnaní s L-Dopa [6].
Kúpte si bunkovú líniu P19 ešte dnes
Bunky P19: Vedecké publikácie
Táto časť článku sa bude venovať niekoľkým zaujímavým vedeckým publikáciám, ktoré sa zaoberajú bunkami P19.
Tento článok bol uverejnený v časopise Oncology Reports v roku 2017. Štúdia navrhla, že pohlavné hormóny hypofýzy riadia adhéziu, proliferáciu a migráciu bunkových línií teratokarcinómu, vrátane buniek P19.
Dlhá nekódujúca RNA uc.4 ovplyvňuje diferenciáciu buniek prostredníctvom signálnej dráhy TGF-beta
Táto publikácia v časopise Experimental & Molecular Medicine (2018) využívala bunky P19 a skúmala funkciu dlhej nekódujúcej RNA uc.4. Zistenia odhalili, že uc.4 ovplyvňuje diferenciáciu buniek prostredníctvom modulácie signálnej dráhy TGF-beta.
Tento výskumný článok bol uverejnený v roku 2018 v časopise Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. Štúdia zistila, že prírodný extrakt z mozgového tkaniva a trojrozmerná bunková kultúra môžu urýchliť diferenciáciu embryonálnych karcinómových buniek P19 na neurónové bunky.
Táto štúdia bola uverejnená v časopise Journal of Ethnopharmacology v roku 2020. Štúdia navrhla, že extrakt z listov Cichorium intybus L. môže indukovať diferenciáciu buniek embryonálneho karcinómu P19 na pankreatické β-bunky produkujúce inzulín.
Tento výskum bol uverejnený v časopise Molecules (2022). Štúdia skúmala neuroprotektívne účinky a účinky inhibície acetylcholínesterázy extraktu zo semien Mucuna pruriens na neuróny buniek P19.
Zdroje týkajúce sa buneckej línie P19: protokoly, videá a ďalšie informácie
Nižšie uvádzame niekoľko zdrojov týkajúcich sa buniek P19.
- Protokol diferenciácie neurónov z buniek P19: Tento článok obsahuje protokol diferenciácie neurónov z buniek P19 a ďalšie užitočné informácie o diferenciácii buniek P19.
- Transfekcia buniek P19: Tento odkaz vám pomôže zoznámiť sa s protokolom transfekcie buniek P19.
Nasledujúci odkaz obsahuje protokol kultivácie buniek P19.
- Bunky P19: Táto webová stránka obsahuje všetky užitočné informácie o bunkovej línii P19, vrátane podmienok kultivácie, kultivačných médií pre bunky P19, delenia buniek a mnoho ďalších informácií.
Skúmanie bunkovej línie P19: Často kladené otázky
Literatúra
- McBurney, M.W., Embryonálne karcinómové bunky P19. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): s. 135–40.
- Bressler, J., et al., Embryonálna karcinómová bunková línia P19: model na štúdium interakcií medzi génmi a prostredím. Cell Culture Techniques, 2011: s. 223–240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey a G. Rödel, Mitochondriálne ROS riadia diferenciáciu pluripotentných myších buniek P19. Stem Cell Research, 2018. 30: s. 180–191.
- Fu, F. a kol., Kyselina all-trans-retinoidová indukuje diferenciáciu buniek P19 na neuróny zapojené do signálnej dráhy PI3K/Akt/GSK3β. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): s. 4386–4396.
- Jiang, Y., a kol., Dlhá nekódujúca RNA SNHG6 prispieva k tvorbe defektu komorového septa prostredníctvom negatívnej regulácie miR-101 a aktivácie dráhy Wnt/β-katenín. Die Pharmazie – An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): s. 23–28.
- Kamkaen, N., et al., Vodný extrakt zo semien Mucuna pruriens vykazoval v porovnaní so syntetickou L-dopou zlepšené neuroprotektívne účinky a inhibičné účinky na acetylcholínesterázu. Molecules, 2022. 27(10): s. 3131.