Buněčná línia Neuro-2a
Neuro-2a je myšia neurálna bunková línia, ktorá sa široko využíva vo výskume neurovied. Tieto bunky sa používajú hlavne na štúdium neurálneho vývoja, diferenciácie, neurotoxicity, bunkových signálnych dráh a rastu axónov. Okrem toho sa využívajú na vývoj liekov a na účely skríningu.
Tento článok sa zameriava na dôležité aspekty neuroblastómových buniek Neuro-2a, ktoré by vám mohli pomôcť pred začatím práce s nimi. Bude sa zaoberať hlavne:
- Všeobecné vlastnosti a pôvod buniek Neuro-2a
- Informácie o kultivácii buneckej línie Neuro-2a
- Výhody a nevýhody buneckej línie Neuro-2a
- Výskumné využitie buniek Neuro-2a
- Vedecké publikácie venované bunkám Neuro-2a
- Zdroje pre bunky Neuro-2a: protokoly, videá a ďalšie materiály
Všeobecné vlastnosti a pôvod buniek Neuro-2a
Táto časť článku sa venuje pozadiu a základným charakteristikám bunkovej línie Neuro-2a, ktoré je nevyhnutné poznať pred začatím práce s ňou. Tu sa dozviete: Čo je bunková línia Neuro-2a? Aký je pôvod bunkovej línie Neuro-2a? Čo je diferenciácia buniek Neuro-2a? Aká je veľkosť bunky Neuro-2a? Aká je morfológia buniek Neuro-2a?
- Bunky Neuro-2a pochádzajú zo spontánneho nádoru (neuroblastómu) u myši albína (kmeň A). Bunkovú líniu založili R.J. Klebe a F.H. Ruddle.
- Neuroblastómové bunky Neuro-2a vykazujú morfológiu neurónových a améboidných kmeňových buniek.
- Veľkosť buniek Neuro-2a je 12 mikrometrov na výšku [1].
- Počet chromozómov buniek Neuro-2a sa môže pohybovať v rozmedzí od 59 do 193, pričom modálny počet je 95. Karyotyp týchto neuroblastómových buniek je nestabilný v rozmedzí od 94 do 98 chromozómov.
Informácie o kultivácii buniek línie Neuro-2a
Bunky Neuro-2a sa široko používajú v výskumných laboratóriách v oblasti neurovied. Pred začatím práce s týmito bunkami by ste sa mali oboznámiť s nižšie uvedenými nevyhnutnými informáciami o kultivácii buniek. To vám môže pomôcť uľahčiť si prácu. Dozviete sa: Čo je to Neuro-2a kultivačné médium? Ako sa kultivujú bunky Neuro-2a? Aký je čas zdvojnásobenia buniek Neuro-2a? Aká je hustota výsevu buniek Neuro-2a ? Aký je protokol kultivácie buniek Neuro-2a? Aké sú kultivačné médiá pre bunky Neuro-2a?
Kľúčové body kultivácie buniek Neuro-2a
Doba zdvojnásobenia:
Doba zdvojnásobenia buniek Neuro-2a je približne 70 hodín.
Adherentné alebo v suspenzii:
Neuro-2a je adhezívna bunková línia.
Hustota výsevu:
Optimalizovaná hustota výsevu pre bunkovú líniu Neuro-2a je 1 x 10⁴ buniek/cm². Pred výsevom sa bunky premyjú fosfátovým pufrom bez obsahu horčíka a vápnika (1x). Následne sa pridá pasážovací roztok (Accutase) a bunky sa inkubujú 8 až 10 minút pri izbovej teplote. Po disociácii buniek sa pridá čerstvé médium a bunky sa odstreďujú. Získaný pelet buniek sa opatrne resuspenduje a bunky sa prelejú do kultivačnej nádoby na rast.
Rastové médium:
Na kultiváciu buniek Neuro-2a sa používa EMEM. Obsahuje 10 % FBS, 2 mM L-glutamín, 1,5 g/l NaHCO3, EBSS, 1 mM pyruvát sodný a NEAA pre ideálny rast buniek. Kultivačné médium by sa malo vymieňať 1 až 2-krát týždenne.
Podmienky rastu:
Kultúry Neuro-2a sa udržiavajú v zvlhčenom inkubátore pri teplote 37 °C, pripojenom k zdroju 5 % CO₂.
Skladovanie:
Bunky by sa mali dlhodobo skladovať pri teplote nižšej ako -150 °C v elektrickom mrazničke s ultra nízkou teplotou alebo v parnej fáze tekutého dusíka.
Proces zmrazovania a médium:
Na zmrazenie buniek Neuro-2a sa používajú médiá CM-1 alebo CM-ACF. Bunky sa zmrazujú pomalým procesom, ktorý umožňuje pokles teploty iba o 1 °C za minútu. Tým sa bunky chránia pred teplotným šokom a zachováva sa ich životaschopnosť.
Proces rozmrazovania:
Na rozmrazenie zmrazených kultúr sa injekčná liekovka umiestni do vodného kúpeľa s teplotou 37 °C na 40 až 60 sekúnd, kým nezostane len malá hrudka ľadu. Následne sa pridá kultivačné médium a bunky sa odstreďujú. Tento krok pomáha odstrániť zložky mraziaceho média. Peleta buniek sa potom resuspenduje a bunky sa prenesú do novej fľaše naplnené kultivačným médiom. Následne sa bunky umiestnia do inkubátora pri teplote 37 °C na minimálne 24 hodín.
Úroveň biologickej bezpečnosti:
Na manipuláciu s kultúrami Neuro-2a a ich udržiavanie sú povinné laboratórne podmienky na úrovni biologickej bezpečnosti 1.
- Výhody a nevýhody bunkovej línie Neuro-2a
- Výskumné využitie bunkovej línie Neuro-2a
- Informácie o kultivácii buniek línie Neuro-2a
- Všeobecné vlastnosti a pôvod buniek Neuro-2a
- 5. Vedecké publikácie o bunkách Neuro-2a
- Zdroje týkajúce sa buniek Neuro-2a: protokoly, videá a ďalšie materiály
- Často kladené otázky
Výhody a nevýhody buneckej línie Neuro-2a
Bunky Neuro-2a majú niektoré výhody a nevýhody, ktoré ich odlišujú od iných neurónových bunkových línií. Niektoré významné klady a zápory týchto buniek sú uvedené nižšie.
Výhody
Výhody myšieho neuroblastómového bunkového radu Neuro-2a sú:
-
Ľahká údržba:
Bunková línia Neuro-2a nevyžaduje zložité ani komplikované postupy kultivácie buniek. Ich kultivácia a udržiavanie vo výskumných laboratóriách je jednoduché.
-
In vitro model neurónových buniek:
Neuro-2a je praktický model neurónových buniek, ktorý výskumníci široko využívajú v štúdiách vývoja a diferenciácie neurónov.
Nevýhody
Nevýhody buniek Neuro-2a sú:
-
Myší pôvod:
Neuro-2a má myší pôvod a výskumníci by mali postupovať opatrne pri extrapolácii výsledkov štúdií na myšiach na ľudské zdravie a ochorenia, keďže biológia myší a ľudí sa môže výrazne líšiť.
Výskumné využitie buneckej línie Neuro-2a
Bunky Neuro-2a ponúkajú mnoho možností využitia v oblasti neurovedného výskumu. Tu sa budeme venovať niekoľkým sľubným spôsobom využitia tejto buneckej línie:
- Neurálny vývoj: Neuro-2a je in vitro model neurónových buniek, ktorý sa široko používa na štúdium neurónového vývoja a súvisiacich procesov, ako sú diferenciácia, rast axónov a tvorba synáps. V štúdii z roku 2020 sa bunky Neuro-2a využili na preskúmanie úlohy mikroRNA-124 pri diferenciácii neurónových buniek indukovanej kyselinou retinovou [2]. Ďalšia štúdia skúmala expresiu receptora gama pre retinoovú kyselinu (RARG) a miRNA-124 v bunkovej línii neuroblastómu (N2A). Táto štúdia navrhla, že RARG je cieľom miR-124 a potláča rast neuritov [3].
- Neurotoxicita: Bunky Neuro-2a sa tiež používajú na hodnotenie toxických účinkov liekov, chemikálií alebo faktorov životného prostredia na neurónové bunky. Napríklad štúdia, ktorú vykonali Zhihong Yin a spolupracovníci, skúmala neurotoxicitu bisfenolu A (BPA), environmentálnej chemikálie, s využitím buniek Neuro-2a. Zistili, že BPA potláča diferenciáciu a proliferáciu neurónových buniek narušením ich bunkovej a synaptickej integrity [4].
- Skríning liekov: Bunky Neuro-2a sa tiež využívajú na hodnotenie terapeutických účinkov viacerých liekov, zlúčenín a prírodných produktov. Napríklad v jednej štúdii sa pomocou buniek Neuro-2a skúmal antioxidačný potenciál rastlinného extraktu z Ginkgo biloba. Výskum navyše naznačil, že tento extrakt spôsobuje zníženie agregácie Aβ a môže predstavovať potenciálnu liečbu Alzheimerovej choroby [5].
5. Vedecké publikácie zaoberajúce sa bunkami Neuro-2a
Tu je niekoľko zaujímavých vedeckých článkov venovaných bunkovej línii Neuro-2a.
Táto štúdia uverejnená v časopise Journal of Natural Medicines v roku 2018 skúmala terapeutické účinky alkamidov izolovaných z bieleho korenia (P. nigrum) na neurónové bunky Neuro-2a.
Tento výskum uverejnený v časopise Acta Biochimica et Biophysica Sinica v roku 2020 navrhol, že gén Nkx2.1 zohráva dôležitú úlohu vo vývoji mozgu myší prostredníctvom regulácie signálnej kaskády Shh.
Tento článok bol uverejnený v časopise Toxicology and Industrial Health (2023) a navrhuje, že environmentálna chemická látka bisfenol A vyvoláva neurotoxicitu v bunkách neuro-2a a narúša ich synaptickú a cytoskeletálnu funkciu.
Tento článok v časopise Pharmaceuticals (2021) navrhuje, že liek hexarelín moduluje kaskády PI3K/AKT a MAPK v bunkách neuroblastómu (Neuro-2a) a inhibuje apoptózu buniek Neuro-2a vyvolanú peroxidom vodíka.
Tento výskumný článok uverejnený v časopise „Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine“ (2021) navrhuje, že ovocný extrakt z rastliny Emblica officinalis potláča neurozápal v bunkách Neuro-2a, a preto môže byť prospešný pri neurozápalových ochoreniach.
Zdroje informácií o bunkách Neuro-2a: protokoly, videá a ďalšie materiály
Nižšie sú uvedené online zdroje týkajúce sa buniek Neuro-2a. Zahŕňajú protokol kultivácie a transfekcie buniek Neuro-2a.
- Protokol transfekcie buniek Neuro-2a: Neuro-2a je vhodným hostiteľom pre transfekciu. Tento odkaz vás prevedie protokolom transfekcie tejto buneckej línie. Účinnosť transfekcie buniek Neuro-2a sa líši v závislosti od použitého reagenta.
Nasledujúci odkaz obsahuje protokol kultivácie buniek Neuro-2a.
- Protokol kultivácie buniek Neuro-2a: Tento odkaz vám pomôže zoznámiť sa s protokolom subkultivácie buniek Neuro-2a.
- Bunky Neuro-2a: Webová stránka obsahuje komplexné informácie o kultivačných médiách pre bunky Neuro-2a, hustote výsevu a protokoloch subkultivácie a manipulácie s kryokonzervovanými a proliferatívnymi kultúrami.
Referencie
- Lulevich, V., et al., Mechanika jednotlivých buniek poskytuje citlivý a kvantitatívny prostriedok na skúmanie interakcií peptidu amyloid-beta a neurónových buniek. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(31): s. 13872-7.
- You, Q., et al., Úloha miR-124 v regulácii diferenciácie buniek Neuro-2A indukovanej kyselinou retinovou. Neural Regen Res, 2020. 15(6): s. 1133–1139.
- Su, X., a kol., Receptor kyseliny retinovej gama je cieľom mikroRNA-124 a inhibuje rast neuritov. Neuropharmacology, 2020. 163: s. 107657.
- Yin, Z., et al., Expozícia bisfenolu A indukovala neurotoxicitu a súvisela so synapsami a cytoskeletom v bunkách Neuro-2a. Toxicology in Vitro, 2020. 67: s. 104911.
- Chen, L., et al., Extrakt z Ginkgo biloba (EGb) inhibuje oxidačný stres v bunkách Neuro-2A s nadmernou expresiou APPsw. BioMed Research International, 2019. 2019.