Bunky NCI-H460 – Výskum rakoviny pľúc s využitím poznatkov o bunke NCI-H460

Informácie o kultivácii buniek NCI-H460

Pre správnu manipuláciu a údržbu buneckej línie NCI-H460 by ste mali poznať nasledujúce kľúčové body. Tieto informácie sa týkajú doby zdvojnásobenia buniek NCI-H460, kultivačného média pre NCI-H460 a základných postupov kultivácie buniek NCI-H460, ktoré sú rakovinové bunky pľúc.

Kľúčové body kultivácie buniek NCI-H460

Doba zdvojnásobenia:

Doba zdvojnásobenia buniek NCI-H460 je približne 33 hodín.

Adherentné alebo v suspenzii:

Bunky rakoviny pľúc NCI-H460 sú adhézne.

Pomer pri subkultivácii:

Odporúčaný pomer pri subkultivácii pre bunkovú líniu NCI-H460 je 1:2 a 1:4. Po odstránení starého média sa adhezívne bunky prepláchnu 1x fosfátovým pufrom. Následne sa bunky inkubujú s pasážovým roztokom Accutase počas 8 až 10 minút pri izbovej teplote. Disociované bunky sa resuspendujú v kultivačnom médiu a odstreďujú. Zozbierané bunky sa opäť resuspendujú a prelejú do novej fľaše na kultiváciu.

Rastové médium:

Ako kultivačné médium pre NCI-H460 sa používa RPMI 1640. Je doplnené 10 % fetálnym bovinným sérom, 2,1 mM stabilným glutamínom a 2,0 g/l NaHCO3. Médium by sa malo vymieňať 2 až 3-krát týždenne.

Podmienky rastu:

Kultúry NCI-H460 sa udržiavajú pri teplote 37 °C vo zvlhčenom inkubátore s nepretržitým prívodom 5 % CO₂.

Skladovanie:

Bunky rakoviny pľúc NCI-H460 je možné dlhodobo skladovať v parnej fáze tekutého dusíka alebo pri teplote nižšej ako -150 °C v elektrickom mrazničke s ultranízkymi teplotami.

Proces zmrazenia a médium:

Na zmrazenie a skladovanie buniek NCI-H460 sa používa médium CM-1 alebo CM-ACF. Na zachovanie maximálnej životaschopnosti buniek sa odporúča metóda pomalého zmrazovania.

Proces rozmrazovania:

Zmrazené bunky NCI-H460 sa rozmrazujú v predhriatom vodnom kúpeli (pri teplote 37 °C) po dobu 40 až 60 sekúnd, kým nezostane len malá zrazenina ľadu. K rozmrazeným bunkám sa pridá čerstvé médium a odstreďujú sa, aby sa odstránili zložky mraziaceho média. Získaný bunkový pelet sa opäť resuspenduje a bunky sa nanesú do nových fliaš obsahujúcich médium na rast. Pripevnenie buniek NCI-H460 k povrchu fľaše môže trvať takmer 24 hodín.

Úroveň biologickej bezpečnosti:

S bunkami rakoviny pľúc NCI-H460 sa manipuluje a kultivujú sa v laboratóriách s úrovňou biologickej bezpečnosti 1.

Uverejnené: 2023 | Posledná revízia: máj 2026

Výhody a nevýhody buniek NCI-H460

NCI-H460 je široko používaná bunková línia vo výskume rakoviny pľúc. V tejto časti sa budeme venovať všeobecným výhodám a nevýhodám súvisiacim s bunkami rakoviny pľúc NCI-H460.

Výhody

Výhody buneckej línie NCI-H460 pre nemalobunkovú rakovinu pľúc sú:

• Pôvod nádoru

  Bunka NCI-H460 bola získaná od pacienta s veľkobunkovým karcinómom pľúc, čím reprezentuje tento konkrétny typ rakoviny pľúc. Používa sa ako model na štúdium biológie rakoviny pľúc a vývoj nových a účinných liečebných metód. Bunky NCI-H460 majú tumorigenický potenciál a môžu sa injikovať imunodeficientným myšiam na vytvorenie in vivo nádorových modelov na štúdium rastu a vývoja nádorov a účinnosti potenciálnych liekov.

• Vysoká rýchlosť proliferácie

  NCI-H460 vykazuje vyššiu rýchlosť rastu ako iné bunkové línie nemalobunkového karcinómu pľúc, napríklad A549. Táto výhoda zvyšuje ich dostupnosť a pomáha výskumníkom vykonávať reprodukovateľné a časovo citlivé experimenty.

Nevýhody

Nevýhody spojené s bunkami rakoviny pľúc NCI-H460 sú:

• Homogenita

  Bunky NCI-H460 sú homogénne, keďže boli získané z nádoru jediného pacienta. Preto im vo všeobecnosti chýba komplexnosť a heterogenita pozorovaná v nádoroch pacientov.

Výskumné využitie buniek NCI-H460

Bunky rakoviny pľúc NCI-H460 sa vo veľkej miere používajú v štúdiách týkajúcich sa karcinómu pľúc. Tu sú niektoré dôležité výskumné aplikácie buniek NCI-H460:

• Výskum rakoviny pľúc: Bunky NCI-H460 predstavujú neoceniteľný model na skúmanie bunkových a molekulárnych mechanizmov podieľajúcich sa na vývoji, raste a metastázovaní nádorov. Okrem toho sa používajú na štúdium kľúčových signálnych dráh, molekulárnych cieľov a rôznych genetických mutácií spojených s progresiou rakoviny pľúc. Na účinné skúmanie týchto faktorov bolo vykonaných niekoľko štúdií na bunkách NCI-H460. Štúdia z roku 2019 navrhla, že nadmerne exprimovaný nukleárny ubikvitný kazeín a substrát kináz závislých od cyklínu (NUCKS) sa podieľajú na raste nádorových buniek prostredníctvom regulácie signálnej dráhy PI3K/AKT [1]. Podobne sa v in vitro a in vivo štúdii použili bunky NCI-H460 na skúmanie úlohy génu eIF4E. Zistenia odhalili, že gén eIF4E sa podieľa na raste karcinómu pľúc a na angiogenéze a môže slúžiť ako cieľ pre vývoj sľubných liekov proti rakovine pľúc [2].
• Objavovanie a vývoj liekov: NCI-H460, ľudská bunková línia rakoviny pľúc, sa široko využíva v štúdiách zameraných na objavovanie a vývoj liekov. Výskumníci používajú tieto bunky na skúmanie toxicity a účinnosti nových kandidátov na lieky, cielených terapií a liečebných postupov zameraných hlavne na mutácie génu KRAS v bunkách NCI-H460. V štúdii, ktorú v roku 2023 vykonali Haoyue Hu a kolegovia, sa bunky NCI-H460 použili na skúmanie protinádorových účinkov lieku anlotinib. Výsledky ukázali, že anlotinib čiastočne ovplyvnil rast buniek rakoviny pľúc s mutáciou KRAS inhibíciou signálnej kaskády MEK/ERK [3]. Podobne bola fenolická zlúčenina, karnosová kyselina, testovaná na antiproliferatívne a proapoptotické účinky s využitím buniek NCI-H460 [4].
• Lieková rezistencia: Bunková línia NCI-H460 je ideálna na štúdium mechanizmu liekovej rezistencie pri karcinóme pľúc. Výskumníci používajú tieto bunky na vývoj modelov liekovej rezistencie s cieľom identifikovať príslušné gény, molekulárne faktory a signálne dráhy. Napríklad v jednej štúdii boli vyvinuté bunky NCI-H460 rezistentné voči pemetrexedu, multitargetovému antifolátovému činidlu, s cieľom preskúmať základné molekulárne mechanizmy rezistencie voči pemetrexedu v bunkách nemalobunkového karcinómu pľúc [5].

Vedecké publikácie zaoberajúce sa bunkami NCI-H460

Tu je niekoľko zaujímavých vedeckých publikácií o bunkovej línii karcinómu pľúc NCI-H460.

Prírodný glukán z čiernej fazule inhibuje proliferáciu rakovinových buniek prostredníctvom signálnych dráh PI3K-Akt a MAPK

Táto štúdia uverejnená v časopise Molecules (2023) navrhla, že prírodný α-1,6-glukán, BBWPW, z čiernej fazule inhibuje proliferáciu buniek NCI-H460 prostredníctvom regulácie signálnej dráhy PI3K/AKT/MAPK.

Dioscín-6′-O-acetát inhibuje proliferáciu buniek rakoviny pľúc prostredníctvom indukcie zastavenia bunkového cyklu a kaspázovo-závislej apoptózy

Tento článok v časopise Phytomedicine (2019) skúmal, že dioscin-6′-O-acetát, nová prírodná zlúčenina, má antiproliferatívny účinok na bunky rakoviny pľúc NCI-H460.

miRNA-425-5p podporuje rast rakoviny pľúc prostredníctvom signálnej osi PTEN/PI3K/AKT

Výskum uverejnený v časopise BMC Pulmonary Medicine (2020) uvádza, že mikroRNA-425-5p podporuje tumorigenézu karcinómu pľúc prostredníctvom signálnej dráhy PTEN/PI3K/AKT.

Quinalizarín má protinádorový účinok na bunky rakoviny pľúc A549 prostredníctvom modulácie signálnych dráh Akt, MAPK, STAT3 a p53

Tento článok v časopise Molecular Medicine Reports (2017) poukazuje na protinádorový potenciál a základné mechanizmy pôsobenia zlúčeniny quinalizarínu v bunkách NCI-H460 a iných bunkách rakoviny pľúc.

Odvar z Eucalyptus globulus Labill. inhibuje rast buniek NCI-H460 zvýšením hladín p53 a zmenou profilu bunkového cyklu

Tento výskum uverejnený v časopise Food and Function (2019) poukazuje na potenciálny protinádorový účinok extraktu z Eucalyptus globulus Labill. na bunkách NCI-H460. Zistenia ukázali, že rastlinný extrakt vykazoval tieto účinky zvýšením expresie p53 v bunkách NCI-H460 a moduláciou profilu bunkového cyklu.

Zdroje týkajúce sa bunkovej línie NCI-H460: protokoly, videá a ďalšie materiály

Tu nájdete niekoľko online zdrojov venovaných bunkám rakoviny pľúc NCI-H460.

• Transfekcia buniek NCI-H460: Tento videonávod je podrobným sprievodcom transfekcie buniek NCI-H460 plazmidovou DNA.

Nasledujúce odkazy obsahujú dôležité informácie o kultivácii buniek H460. 

• Bunky NCI-H460: Táto webová stránka poskytuje dôležité informácie o kultivačných médiách pre bunky NCI-H460, postupoch subkultivácie, zmrazovania a rozmrazovania.
• Pasážovanie buniek NCI-H460: Tento dokument vás prevedie procesom pasážovania a subkultivácie buniek línie NCI-H460. Okrem toho vám pomôže zoznámiť sa s protokolom transfekcie buniek NCI-H460.

Referencie

1. Hu, C., et al., NUCKS podporuje proliferáciu, migráciu a inváziu buniek rakoviny pľúc prostredníctvom signálnej dráhy Pi3k/Akt. Clinical and Investigative Medicine, 2021. 44(2): s. E55-61.
2. Qi, X., et al., EGPI-1, nový inhibítor interakcie eIF4E/eIF4G, inhibuje rast buniek rakoviny pľúc a angiogenézu prostredníctvom signálnej dráhy Ras/MNK/ERK/eIF4E. Chemico-Biological Interactions, 2022. 352: s. 109773.
3. Hu, H., et al., Anlotinib vykazuje protinádorové účinky na bunky rakoviny pľúc s mutáciou KRAS prostredníctvom potlačenia signálnej dráhy MEK/ERK. Cancer Management and Research, 2020: s. 3579–3587.
4. Corveloni, A.C., a kol., Kyselina karnozová vykazuje antiproliferatívne a proapoptotické účinky v nádorových bunkách NCI-H460 a nenádorových bunkách IMR-90 pľúc. Journal of Toxicology and Environmental Health, časť A, 2020. 83(10): s. 412–421.
5. Xu, Y.-L. a kol., Vytvorenie a charakterizácia buniek NCI-H460/PMT rezistentných voči pemetrexedu. Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry (predtým Current Medicinal Chemistry-Anti-Cancer Agents), 2019. 19(6): s. 731–739.