Bunky NCI-H1299: Výskum a klinický význam buniek rakoviny pľúc NCI-H1299

Informácie o kultivácii

Udržovanie kultúry buneckej línie nie je jednoduché, pokiaľ nepoznáte všetky kľúčové informácie o nej, vrátane: Aký je čas zdvojnásobenia buniek NCI-H1299? Aká je hustota výsevu buniek NCI-H1299? Aké je kultivačné médium pre bunky NCI-H1299? Ako sa kultivujú bunkové línie NCI-H1299? Táto časť vám pomôže získať odpovede na všetky tieto otázky týkajúce sa kultivácie buniek NCI-H1299.

Kľúčové body kultivácie buniek NCI-H1299

Doba zdvojnásobenia:

Doba zdvojnásobenia buniek NCI-H1299 sa pohybuje v rozmedzí 22–30 hodín.

Adherentné alebo v suspenzii:

NCI-H1299 je adhezívna bunková línia.

Pomer subkultivácie:

Bunky NCI-H1299 sa subkultivujú v odporúčanom pomere 1:3 až 1:6. Na naočkovanie sa adhezívne bunky premyjú 1x PBS a inkubujú s pasážovacím roztokom Accutase počas 8 až 10 minút pri izbovej teplote. Oddelené bunky sa pridajú do čerstvého kultivačného média a odstreďujú sa. Bunky sa potom resuspendujú a prelejú do nových fliaš obsahujúcich rastové médium.

Rastové médium:

RPM1 1640 je ideálne kultivačné médium pre bunky NCI-H1299. Je doplnené 10 % fetálnym bovinným sérom, 4500 mg/l glukózy, 2,0 mM L-glutamínom, 1 mM pyruvátom sodným, 1500 mg/l NaHCO3 a 10 mM HEPES. Kultivačné médium by sa malo vymieňať 2 až 3-krát týždenne.

Podmienky kultivácie:

Kultúry buniek rakoviny pľúc NCI-H1299 sa udržiavajú vo zvlhčenom inkubátore pri teplote 37 °C s prívodom 5 % CO₂.

Skladovanie:

Bunky línie NCI-H1299 je možné dlhodobo skladovať v parnej fáze tekutého dusíka alebo v mrazničkách s ultra nízkou teplotou pri teplote nižšej ako -150 °C.

Proces zmrazovania a médium:

CM-1 alebo CM-ACF sú médiá na zmrazenie buniek NCI-H1299. Bunky sa zmrazujú pomalým procesom, ktorý umožňuje pokles teploty iba o 1 stupeň za minútu, aby sa zachovala životaschopnosť buniek.

Proces rozmrazovania:

Zmrazené bunky NCI-H1299 sa rýchlo premiešavajú v predhriatom vodnom kúpeli pri teplote 37 stupňov Celzia po dobu 40 až 60 sekúnd, kým nezostane len malý kúsok ľadu. Rozmrazené bunky sa doplnia čerstvým médiom a môžu sa priamo kultivovať v nových fľašiach alebo odstrediť. V prvom prípade by sa médium malo vymeniť po 24 hodinách inkubácie. Odstreďovanie pomáha odstrániť zložky mraziaceho média. Následne sa zozbierané bunky resuspendujú v čerstvom médiu a nanesú do novej fľaše na kultiváciu.

Úroveň biologickej bezpečnosti:

Na prácu s bunkovou kultúrou NCI-H1299 je potrebné laboratórium s úrovňou biologickej bezpečnosti 1.

Kúpa buneckej línie NCI-H1299: Vysoko kvalitné výskumné nástroje na skúmanie biológie rakoviny pľúc

Výhody a nevýhody buniek NCI-H1299

Rovnako ako iné ľudské rakovinové bunkové línie, aj NCI-H1299 má niektoré charakteristické vlastnosti spojené so špecifickými výhodami a nevýhodami. V tomto texte sme zhrnuli niekoľko významných z nich.

Výhody

Hlavné výhody buneckej línie NCI-H1299 pre nemalobunkový karcinóm pľúc sú:

• In vitro model rakoviny pľúc

  Bunky línie NCI-H1299 boli vyvinuté z metastáz v lymfatických uzlinách pri karcinóme pľúc, a preto majú relatívne podobné vlastnosti. Tieto bunky môžu preto slúžiť ako in vitro model na skúmanie biológie rakoviny pľúc, bunkových a molekulárnych mechanizmov, ako aj na skríning a testovanie potenciálnych liečiv.

• Ľahká kultivácia

  Bunky NCI-H1299 sa ľahko kultivujú a udržiavajú vo výskumnom laboratóriu. Neexistujú žiadne náročné požiadavky ani postupy na kultiváciu buniek.

• Mutácie génov p53 a KRAS v bunkách NCI-H1299

  Bunky NCI-H1299 nemajú expresiu génu p53, čo im umožňuje intenzívne sa množiť. Navyše majú mutáciu KRAS, ktorá prispieva k rastu, proliferácii, invázii a migrácii buniek. Vzhľadom na to vedci používajú bunky H1299 na skúmanie molekulárnych mechanizmov súvisiacich s mutáciami KRAS a P53.

Nevýhody

Nevýhody buniek NCI-H1299 sú:

• Tkanivová špecifickosť

  Bunky NCI-H1299 pochádzajú z pľúcneho tkaniva. Ich použiteľnosť je preto väčšinou obmedzená na výskum karcinómu pľúc. Nemusia plne reprezentovať heterogenitu a všeobecné charakteristiky iných typov rakoviny.

Výskumné využitie buniek NCI-H1299

Bunka NCI-H1299 sa vo veľkej miere využíva vo výskume rakoviny pľúc. Tu uvádzame niekoľko sľubných aplikácií tejto bunky.

• Biológia rakoviny: Bunky NCI-H1299 slúžia ako vynikajúci výskumný nástroj na skúmanie vývoja a progresie rakoviny, ako aj súvisiacich bunkových a molekulárnych mechanizmov. Tieto bunky nesú určité mutácie, čo umožňuje výskumníkom skúmať súvisiace správanie rakovinových buniek, signálne dráhy a profily génovej expresie. V niekoľkých štúdiách bola použitá bunková línia NCI-H1299 nemalobunkového karcinómu pľúc na štúdium biológie rakoviny pľúc. Napríklad štúdia vykonaná v roku 2018 skúmala signálnu dráhu podieľajúcu sa na apoptóze buniek rakoviny pľúc s využitím buniek NCI-H1299. Výskumníci zistili, že dráha PI3K/AKT prispieva k proliferácii buniek a jej inhibícia môže spôsobiť smrť rakovinových buniek [1]. Podobne sa iný výskum zaoberal mechanizmami zapojenými do epiteliálno-mezenchýmovej transformácie (EMT) buniek NCI-H1299. Táto štúdia navrhla, že extracelulárny proteín SPARC (sekreovaný proteín s kyslou povahou a bohatý na cysteín) prispieva k EMT a migrácii buniek NCI-H1299, čím podporuje tumorigenézu v bunkách – proteín SPARC pôsobí ako mediátor TGF-β1 signálnej dráhy [2]. 

• Objavovanie a skríning liekov: NCI-H1299, ľudská bunková línia pľúcneho karcinómu, sa vo veľkej miere využíva na hodnotenie toxicity a účinnosti potenciálnych liekov. Okrem toho ju výskumníci používajú na skúmanie mechanizmu účinku protinádorových liekov. V štúdiách sa tieto bunky využívali aj na identifikáciu možných cieľov liekov a mechanizmov rezistencie. Napríklad výskum, ktorý vykonali Xiao-Yun Shen a kolegovia, skúmal protinádorový potenciál prírodnej zlúčeniny bruceínu D (BD). Zistenia ukázali, že BD významne brzdí proliferáciu, inváziu a migráciu buniek NCI-H1299. Preto ju možno považovať za potenciálnu adjuvantnú terapiu pri liečbe nemalobunkového karcinómu pľúc [3]. Podobne sa v jednej štúdii hodnotili cytotoxické účinky xanthohumolu samostatne a v kombinácii s chemoterapeutikom cisplatinou na bunky rakoviny pľúc NCI-H1299 [4].

Často kladené otázky o bunkovej línii NCI-H1299

Referencie

1. Gu, J., et al., Štúdia apoptózy vyvolanej EGCG v bunkách rakoviny pľúc prostredníctvom inhibície signálnej dráhy PI3K/Akt. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): s. 4557–4563.
2. Sun, W., et al., SPARC pôsobí ako mediátor TGF-β1 pri podpore epiteliálno-mezenchymálnej transformácie v bunkách rakoviny pľúc A549 a H1299. Biofactors, 2018. 44(5): s. 453–464.
3. Shen, X.-Y. a kol., Štúdia mechanizmu pôsobenia bruceínu D pri liečbe buniek H1299 nemalobunkového karcinómu pľúc. World Journal of Traditional Chinese Medicine, 2020. 6(4): s. 500.
4. Long, B., a kol., Cytotoxické účinky xanthohumolu a jeho kombinácie s cisplatinou na ľudské metastatické bunky rakoviny pľúc H1299. Journal of Advances in Medicine and Medical Research, 2019. 30(9): s. 1–15.