Bunka BEWO
BeWo je bunková línia odvodená z ľudského choriokarcinómu, ktorá sa široko používa v biomedicínskom výskume. Slúži ako cenný in vitro model na skúmanie zložitého procesu vývoja placenty a syncytiálizácie ľudských trofoblastov. Výskumníci tiež využívajú tieto bunky na štúdium správania trofoblastových buniek, produkcie hormónov a transportu látok cez placentu. Okrem toho sa bunky BeWo využívajú aj v toxikológii, pri štúdiu infekcií a prenosu chorôb.
Tento článok obsahuje základné informácie o bunkách BeWo, ktoré vám môžu pomôcť pri práci s nimi vo vašom výskume. Obsahuje:
- Všeobecné charakteristiky a pôvod buniek BeWo
- Bunka BeWo: Informácie o kultivácii
- Výhody a nevýhody buniek BeWo
- Výskumné využitie buniek BeWo
- Vedecké publikácie o bunkách BeWo
- Zdroje pre bunkovú líniu BeWo: protokoly, videá a ďalšie materiály
Všeobecné charakteristiky a pôvod buniek BeWo
Predchádzajúce znalosti o pôvode a všeobecných charakteristikách buneckej línie sú kľúčové pre jej použitie vo vašom výskume. Táto časť článku sa zaoberá pôvodom buneckej línie BeWo, jej charakteristickými vlastnosťami a mnohým ďalším. Tu sa dozviete: Čo je bunecka línia BeWo choriokarcinómu? Čo je syncytiálizácia BeWo? Odkiaľ pochádzajú bunky BeWo? Aká je morfológia buniek BeWo? Aká je ploidia BeWo?
- Placentárna bunková línia BeWo vznikla v roku 1968 z malígneho gestačného choriokarcinómu placenty mužského plodu [1]. Slúži teda ako neoceniteľný model pre výskum placenty.
- Bunky BeWo vykazujú morfológiu podobnú epitelu.
- Bunky BeWo sú relatívne malé, ich veľkosť sa pohybuje v rozmedzí 20 až 30 µM [2].
- Bunky BeWo vykazujú stabilný karyotyp. Ich počet kmeňových línií je hypotetraploidný. Modálny počet chromozómov buniek BeWo je 86. Môže sa pohybovať v rozmedzí od 71 do 178.
- BeWo bunky produkujú niekoľko hormónov, napr. ľudský choriogonadotropín, ľudský choriogonadotropín (hCG) a steroidné hormóny.
- BeWo bunky exprimujú molekulárne markery, vrátane CK 7, E-kadherínu a VE-kadherínu.
Sublínie B30
B30 je sublíniou buniek BeWo. Používa sa na skúmanie príjmu a transportu živín. To sa pripisuje ich rýchlemu rastu na poréznych membránach.
BeWo a JEG-3
Bunkové línie BeWo a JEG-3 pochádzajú z choriokarcinómov a používajú sa vo výskume placenty. Bunky BeWo produkujú hormóny v nižších hladinách ako JEG-3, napríklad ľudský choriogonadotropín (hCG) a estradiol.
Bunka BeWo: Informácie o kultivácii
Udržovanie bunkovej kultúry môže byť zložité, ak nepoznáte kľúčové detaily. Napríklad: Aká je doba zdvojnásobenia buniek BeWo? Čo je kultivačné médium pre bunky BeWo? Ako sa kultivuje bunková línia BeWo? A ako sa zmrazujú bunky BeWo?
Kľúčové body pri kultivácii buniek BeWo
Doba zdvojnásobenia:
Doba zdvojnásobenia populácie buniek BeWo je približne 30 hodín.
Adherentné alebo v suspenzii:
BeWo je adhezívna bunková línia.
Hustota výsevu buniek:
Odporúčaná hustota výsevu pre bunky BeWo je 1 x 10⁴ buniek/cm². Pred výsevom sa z buniek odstráni staré kultivačné médium a bunky sa prepláchnu 1× PBS. Následne sa pridá Accutase (roztok na pasážovanie) a bunky sa inkubujú 8 až 10 minút pri izbovej teplote. Potom sa uvoľnené bunky pridajú do kultivačného média a odstreďujú sa. Získané bunky sa následne resuspendujú a prelejú do novej fľaše.
Rastové médium:
Na kultiváciu buniek BeWo sa používa médium Ham's F12K obsahujúce 10 % FBS, 2,0 mM L-glutamínu, 2,0 mM pyruvátu sodného a 2,5 g/l NaHCO₃. Kultivačné médium pre bunky BeWo by sa malo vymieňať 2 až 3-krát týždenne.
Podmienky kultivácie:
Bunky BeWo sa kultivujú vo zvlhčenom inkubátore nastavenom na teplotu 37 stupňov Celzia a s prívodom 5 % CO₂.
Skladovanie:
Zmrazené bunky BeWo sa skladujú pri teplote nižšej ako -150 °C v elektrickom mrazničke s ultra nízkou teplotou alebo v parnej fáze tekutého dusíka.
Proces zmrazenia a médium:
Odporúča sa zmraziť bunky BeWo v zmrazovacom médiu CM-1 alebo CM-ACF. Bunky sa zmrazujú metódou pomalého zmrazovania. Táto metóda umožňuje pokles teploty iba o 1 stupeň za minútu, čím sa zabráni akémukoľvek šoku buniek a ochráni sa ich životaschopnosť.
Proces rozmrazovania:
Zmrazené bunky sa rozmrazujú ponorením do vopred nastaveného vodného kúpeľa s teplotou 37 °C na 40 až 60 sekúnd, kým nezostane len malá zrazenina ľadu. Potom sa pridá čerstvé kultivačné médium a bunky sa odstreďujú, aby sa odstránili zložky mraziaceho média. Získaný bunkový pelet sa resuspenduje a nanesie do kultivačnej fľaše na rast.
Úroveň biologickej bezpečnosti:
Na manipuláciu s bunkovými kultúrami BeWo a ich udržiavanie je potrebné laboratórium úrovne biologickej bezpečnosti 1.
Dátum uverejnenia: 2023 | Posledná aktualizácia: máj 2026
Výhody a nevýhody buniek BeWo
Bunky BeWo vykazujú jedinečné vlastnosti a majú špecifické výhody aj nevýhody. V tejto časti sa zameriame na niektoré z tých najdôležitejších.
Výhody
Hlavné výhody bunkovej línie choriokarcinómu BeWo sú:
-
In vitro model placentárnych buniek
Bunky BeWo poskytujú in vitro model na štúdium správania trofoblastových buniek a syncytiálnej diferenciácie placenty, čím replikujú procesy, ktoré je ťažké pozorovať in vivo.
-
Produkcia hormónov
Bunky BeWo vylučujú hormóny, ako je hCG a placentárny laktogén, čo ich robí cennými pre štúdie hormonálnej regulácie a výskum v oblasti reprodukčnej biológie.
Nevýhody
Nevýhody trofoblastových buniek BeWo sú:
-
Rakovinová bunková línia
BeWo bunky boli odvodené z choriokarcinómu, čo je placentárny nádor. Tento pôvod nemusí plne reprezentovať normálnu funkciu placentárnych buniek.
Výskumné využitie buniek BeWo
Bunky BeWo sa vo veľkej miere používajú vo výskume placenty. Tu uvádzame niekoľko konkrétnych aplikácií tejto bunky:
- Výskum placenty a tehotenstva: BeWo bunky sú kľúčové vo výskume placenty a tehotenstva. Výskumníci využívajú tieto bunky na štúdium transportu látok, vrátane liekov, živín a toxínov, cez placentárnu bariéru. Okrem toho skúmajú aj produkciu a reguláciu hormónov, vrátane ľudského choriogonadotropínu (hCG), placentárneho laktogénu a steroidných hormónov. To je dôležité pre pochopenie hormonálnych zmien počas tehotenstva. Výskum vykonaný v roku 2018 skúmal vplyv brómovaných retardérov horenia (BFR) na aktivitu sulfotransferázy v ľudskej trofoblastovej buneckej línii (BeWo). Tento enzým sa podieľa na regulácii intracelulárnych hladín hormónu štítnej žľazy [3].
- Výskum infekcií a chorôb: BeWo bunky sa tiež používajú na skúmanie interakcie medzi patogénmi a placentárnymi bunkami. Tento výskum je cenný pre pochopenie chorôb, ktoré sa môžu prenášať z matky na plod, a pre vývoj stratégií na ochranu zdravia plodu. Okrem toho táto bunková línia pomáha výskumníkom skúmať komplikácie, ktoré vznikajú počas tehotenstva, ako je preeklampsia. Napríklad štúdia, ktorú v roku 2023 uskutočnila Michalina Bralewska, využila model trofoblastových buniek BeWo a zistila, že ako chromogranín A (CgA), aj peptid z neho odvodený, katestatin (CST), môžu hrať úlohu v zložitom procese patogenézy preeklampsie (PE) [4]. Ďalšia štúdia sa zamerala na skúmanie protinádorového potenciálu trichosantínu s využitím buneckej línie choriokarcinómu BeWo. Výskum sa tiež zameral na objavovanie biomarkérov prostredníctvom porovnávacej proteomickej analýzy pred a po experimente [5].
5. Vedecké publikácie zaoberajúce sa bunkami BeWo
Tu je niekoľko významných vedeckých publikácií venovaných trofoblastovým bunkám BeWo.
Táto štúdia uverejnená v časopise Frontiers in Bioscience-Landmark (2022) navrhla, že AMPK signál aktivuje mitofágiu v trofoblastových bunkách BeWo prostredníctvom mitofágnych dráh sprostredkovaných proteínmi FUNDC1 a PRKN. V dôsledku toho mitofágia pomáha udržiavať produkciu ATP a mitochondriálny membránový potenciál.
Tento článok bol uverejnený v časopise Animal Cells and Systems (2020). Štúdia navrhla, že etylparabén sprostredkováva apoptózu buniek BeWo prostredníctvom regulácie dráhy kaspázy 3.
Táto štúdia uverejnená v časopise Drug Metabolism and Disposition (2023) využívala placentárne bunkové línie, vrátane BeWo, JAR, JEG-3 a HTR-8/SVneo, na skúmanie ukladania xenobiotík a steroidov v bunkách.
Tento výskumný článok v časopise International Journal of Molecular Medicine (2020) navrhuje, že apelin, ligand receptora APJ, podporuje proliferáciu buniek BeWo prostredníctvom signálnych dráh APJ a ERK1/2, stat3 a AMPK. Mohol by teda byť kľúčovým adipokínom regulujúcim vývoj placenty.
Lieky proti záchvatom a fetálne živiny: vplyv na transportéry cholínu v ľudskej placentárnej bunke
Táto štúdia uverejnená v časopise Epilepsia (2021) skúmala vplyv fetálnych živín a liekov proti záchvatom na transportéry cholínu v ľudskej trofoblastovej bunke BeWo.
Zdroje pre bunkovú líniu BeWo: protokoly, videá a ďalšie informácie
Tu je niekoľko online zdrojov týkajúcich sa buniek BeWo:
- Transfekcia in vitro: Toto video vám pomôže naučiť sa protokol transfekcie plazmidovej DNA in vitro pre adhezívne bunky.
Nasledujúci odkaz obsahuje informácie o kultivácii buniek BeWo:
- Bunky BeWo: Táto webová stránka obsahuje základné informácie o kultivácii buniek týkajúce sa buniek BeWo. Zahŕňa informácie o bunkových médiách a podmienkach kultivácie. Obsahuje tiež protokoly pre subkultiváciu a manipuláciu s kryokonzervovanými a proliferatívnymi kultúrami.
Referencie
- Weber, M., et al., Cytogenomika šiestich ľudských trofoblastových bunkových línií. Placenta, 2021. 103: s. 72-75.
- Kolokol'tsova, T., et al., Charakteristiky trofoblastov v dlhodobej kultúre. Bulletin of Experimental Biology and Medicine, 2017. 164: s. 259-265.
- Leonetti, C.P., C.M. Butt a H.M. Stapleton, Narušenie aktivity sulfotransferázy štítnej žľazy brómovanými chemikáliami spomaľujúcimi horenie v ľudskej bunkovej línii placenty choriokarcinómu, BeWo. Chemosphere, 2018. 197: s. 81–88.
- Bralewska, M., T. Pietrucha a A. Sakowicz, Zníženie hladiny proteínu CST odvodeného od CgA v trofoblastických bunkových líniách HTR-8/SVneo a BeWo spôsobené preeklampickým prostredím. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(8): s. 7124.
- Hu, Y. a kol., Komparatívna proteomická analýza pridania lieku trichosantínu do buneckej línie BeWo. Molecules, 2022. 27(5): s. 1603.