Células Vero: Caminhos pioneiros em estudos virais e inovação de vacinas
A linha de células Vero, um modelo celular de mamífero imortalizado derivado das células epiteliais do rim do macaco verde africano, está na vanguarda da investigação em virologia, microbiologia e biologia celular e molecular. A sua aplicação generalizada abrange o desenvolvimento de vacinas, rastreios farmacêuticos e a exploração da biologia de vírus e parasitas, imunologia de tumores e estratégias imunoterapêuticas.
Origem e principais caraterísticas das células Vero
O estudo de uma linha celular como a Vero suscita várias questões: O que são exatamente as células Vero? Como foi criada a linha celular Vero? Qual é a história por detrás do nome "Vero"? Este segmento pretende elucidar a génese e os principais atributos das células Vero.
O início da linha celular Vero remonta a 1962, com origem nas células epiteliais renais do macaco verde africano. Esta linha foi cultivada por Y. Kawakita e Yasumura na Universidade de Chiba, no Japão. O termo "Vero" deriva de "Verda reno" em Esperanto, traduzindo para "rim verde", embora "Vero" também ressoe com a noção de "verdade"
As células Vero formam tipicamente monocamadas, mas podem adaptar-se a culturas em suspensão, apresentando uma estrutura de tipo epitelial. Estas células são caracterizadas pela sua forma arredondada a alongada e um diâmetro médio de cerca de 17 µm. As células Vero apresentam uma contagem de cromossomas hipodiplóide, sendo o número modal de cromossomas 58 em cerca de 66% da população celular, embora existam variações com ploidias mais elevadas numa pequena fração (1,7%) das células.
Clones de células Vero e as suas propriedades únicas
Os clones distintos derivados da linhagem de células Vero apresentam caraterísticas únicas que os distinguem da linhagem original. Entre estes, dois clones de células Vero notáveis são:
Linha celular Vero E6: Também conhecida como Vero C1008, este clone deriva de células Vero 76 e foi isolado em 1979 por P.J. Price utilizando uma técnica de diluição em placas de microtitulação. As células Vero E6 são particularmente adequadas para o cultivo de vírus que se replicam lentamente.
Células Vero 76: Provenientes do rim de um macaco verde africano em 1968, estas células mantêm a morfologia epitelial caraterística das células Vero.
Estas variantes das células Vero, juntamente com a linha-mãe, continuam a ser fundamentais para o avanço da investigação virológica e para o desenvolvimento de intervenções médicas, marcando a sua importância na comunidade científica.
Informações sobre a cultura
A cultura de células Vero, uma linha de células de macaco, requer familiaridade com parâmetros específicos como o tempo de duplicação, a densidade de sementeira e o meio de crescimento adequado.
Tempo de duplicação da população: O tempo de duplicação das células Vero é de cerca de 24 horas.
Aderência: As células Vero aderem às superfícies e normalmente formam monocamadas quando cultivadas.
Densidade de sementeira: É aconselhável começar com uma densidade de sementeira de 1 x 10^4 células/cm^2. Para cultivar células Vero aderentes, lave-as com PBS e trate-as com Accutase para as destacar. Após o descolamento, centrifugar as células, ressuspendê-las em meio fresco e transferi-las para novos frascos de cultura.
Meio de crescimento: Tanto o Ham's F12 como o DMEM são meios adequados para cultivar células Vero. Estes meios devem ser suplementados com 2,5 mM de L-glutamina e 5% de soro fetal bovino (FBS) para suportar um crescimento ótimo. O meio deve ser atualizado duas a três vezes por semana.
Condições de crescimento: As células Vero desenvolvem-se a uma temperatura de 37°C numa atmosfera humidificada com 5% de CO2.
Armazenamento: Para armazenamento a longo prazo, as células Vero devem ser mantidas a temperaturas inferiores a -150°C, quer num congelador de temperatura ultrabaixa, quer na fase de vapor do azoto líquido.
Processo e meio de congelação: Para a criopreservação, utilizar CM-1 ou CM-ACF, ou o meio de crescimento com FBS e DMSO, como meio de congelação. Utilizar uma técnica de congelação lenta, diminuindo gradualmente a temperatura em 1°C por minuto.
Processo de descongelação: Descongelar as células Vero mergulhando o recipiente num banho de água a 37°C e agitando-o suavemente durante 40-60 segundos. Em seguida, diluir as células em meio fresco, centrifugar para remover o crioprotector, ressuspender em meio de crescimento fresco e colocá-las num novo frasco para recuperar e crescer.
Nível de biossegurança: As células Vero devem ser manuseadas num laboratório que cumpra os requisitos do nível de biossegurança 1.
Aplicações da linha celular Vero na investigação
A linha celular Vero tem inúmeras aplicações de investigação nos domínios da biologia celular e da virologia. Aqui, discutimos algumas aplicações específicas.
Células Vero na investigação viral e na produção de vacinas
As células Vero, derivadas de células de rim de macaco verde africano, tornaram-se um elemento básico no desenvolvimento de bioprocessos de vacinas para vários vírus, incluindo o poliovírus e o vírus da encefalite japonesa. A sua adaptabilidade tanto em culturas aderentes como em suspensão e a sua ampla capacidade de suporte de vírus, incluindo para agentes patogénicos como o vírus dos pequenos ruminantes, realçam a sua importância no isolamento de vírus e no desenvolvimento de vacinas.
Numerosos estudos utilizaram células Vero para a produção de vacinas humanas. Por exemplo, um estudo notável publicado em 2019 demonstrou a utilização de células Vero no desenvolvimento de uma vacina inactivada contra o vírus da febre amarela [2].
As células Vero são habitualmente utilizadas em estudos de infeção viral, como um estudo realizado em 2020 que infectou células Vero com diferentes isolados do vírus SARS-CoV-2 para estudar as propriedades de crescimento do vírus [4]. Do mesmo modo, outro estudo investigou as respostas celulares à infeção por SARS-CoV-2 utilizando cultura de células Vero [5].
O papel das células Vero na engenharia de tecidos e no desenvolvimento de bioprocessos a montante
Para além da produção de vacinas, as células Vero contribuem para a engenharia de tecidos e para o domínio mais vasto do desenvolvimento de bioprocessos, sublinhando a necessidade de investigação contínua sobre as suas propriedades e aplicações. A seleção de sub-linhagens adequadas de células Vero é fundamental para maximizar o seu potencial nas indústrias biotecnológica e farmacêutica.
Aplicação de células Vero em ensaios de eficácia e segurança de medicamentos
As células Vero são frequentemente utilizadas em ensaios de medicamentos para avaliar a eficácia e a segurança de compostos farmacêuticos. Estas células são frequentemente consideradas um modelo padrão para células renais normais em estudos que investigam os efeitos citotóxicos de vários medicamentos e agentes terapêuticos. Por exemplo, uma investigação que comparou o impacto dos extractos da raiz da planta Terminalia avicennioides na HepG2, uma linha celular de cancro do fígado, e nas células Vero, derivadas do epitélio renal do macaco, concluiu que os extractos eram mais prejudiciais para as células cancerosas do que para as células normais.
Limitações das células Vero
Embora as células Vero sejam amplamente utilizadas, têm as suas limitações, como a produção de toxina Vero e alterações genómicas que podem ter impacto em determinadas aplicações. A compreensão das sub-linhas específicas e das caraterísticas genómicas das células Vero, incluindo a linhagem Vero F6, é essencial para otimizar a sua utilização em vários bioprocessos.
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Publicações de investigação
Seguem-se algumas das publicações de investigação recentes e mais citadas sobre células Vero.
Este estudo publicado no Vaccine Journal (2019) adaptou as células Vero para crescer em culturas em suspensão para produzir o vírus da raiva em títulos elevados utilizando vários meios sem soro.
Suscetibilidade do Toxoplasma gondii ao extrato etanólico de Tinospora crispa em células Vero
Este artigo foi publicado na revista Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine em 2019. O estudo propôs que o extrato etanólico da planta Tinospora crispa exerce um efeito prejudicial sobre o parasita Toxoplasma gondii. No entanto, é seguro para as células hospedeiras (a linha celular Vero).
Este artigo foi publicado pelo Journal of the Balkan Union of Oncology em 2021. Neste estudo, Ozlem Dagdeviren Ozsoylemez e Gul Ozcan exploraram o efeito citotóxico do extrato de folhas de Colchicum baytopiorum nas linhas celulares C-4I e Vero.
Este estudo na Phytotherapy Research (2021) utilizou células Vero infectadas com SARS-CoV-2 para investigar o efeito terapêutico do resveratrol na replicação do vírus.
As estatinas lipofílicas inibem a produção do vírus Zika em células Vero
Este artigo na Nature Scientific Reports (2019) propõe que as estatinas lipofílicas, ou seja, a cerivastatina, a lovastatina, a fuvastatina, a sinvastatina e a mevastatina, podem impedir a produção do vírus Zika em células Vero.
Recursos para células Vero: Protocolos, vídeos e mais
- Transfecção de células Vero: Esta ligação irá guiá-lo através de um protocolo de transfecção para células Vero.
- Transfecção da linha de células Vero: Este vídeo explica um protocolo de transfecção para a linha de células Vero.
- Subcultura de células Vero: Este vídeo descreve as recomendações gerais de subcultura para linhas celulares aderentes.
Protocolos de cultura de células
- Cultura de células Vero: Este sítio Web contém um protocolo bem explicado para a cultura de células Vero.
- Cultura de células Vero: Este documento pode ajudá-lo a aprender o protocolo para propagar, manter e congelar células Vero.
Perguntas frequentes sobre as células Vero
Referências
- Ammerman, N.C., M. Beier-Sexton, e A.F. Azad, Growth and maintenance of Vero cell lines. Protocolos actuais em microbiologia, 2008. 11(1): p. A. 4E. 1-A. 4E. 7.
- Pato, T.P., et al., Purificação do vírus da febre amarela produzido em células Vero para o fabrico de vacinas inactivadas. Vaccine, 2019. 37(24): p. 3214-3220.
- Aliyu-Amoo, H., et al., Efeito antiproliferativo de extratos e frações da raiz de Terminalia avicennioides (Combretaceae) Guill e Perr. nas linhas celulares HepG2 e Vero. Clinical Phytoscience, 2021, 7(1): p. 1-7.
- Yao, P., et al., Caraterísticas de isolamento e crescimento de SARS-CoV-2 em células Vero. Virologica Sinica, 2020. 35(3): p. 348-350.
- Park, B.K., et al., Sinalização diferencial e produção de vírus em células Calu-3 e células Vero após infeção por SARS-CoV-2. Biomolecules & Therapeutics, 2021. 29(3): p. 273.