Células SiHa - luz sobre a investigação do cancro do colo do útero

As célulasSiHa são células de cancro do colo do útero amplamente utilizadas na investigação biomédica. São óptimos hospedeiros de transfecção e, por isso, adequados para estudos de expressão genética. Devido à sua origem humana e relevância para o cancro do colo do útero, estas células são principalmente utilizadas em estudos de biologia do cancro, virologia e desenvolvimento de medicamentos.

Caraterísticas gerais e origem das células SiHa

Compreender a origem e os atributos gerais de uma linha celular é crucial, uma vez que influencia a sua utilização na investigação. Nesta secção do artigo, ficará a conhecer a origem da linha celular SiHa, as suas caraterísticas distintivas e muito mais: O que é a linha celular de cancro SiHa? O que são células SiHa HPV? Qual é a origem da linha celular SiHa? Qual é a morfologia da SiHa?

SiHa, a linha celular de carcinoma cervical, foi derivada de fragmentos de uma biópsia uterina primária de uma mulher asiática (55 anos) com cancro de células escamosas [1].
A linha celular SiHa apresenta um cariótipo hipertriplóide. A maioria das células tem um número médio de cromossomas entre 69 e 72. No entanto, cerca de 24% das células possuem um número cromossómico modal de 71.
As células SiHa são positivas para o vírus do papiloma humano 16. Apresentam uma integração de cerca de 1 a 2 cópias do genoma do HPV por célula [2].
Estas células cancerosas do colo do útero apresentam uma morfologia epitelial.

Divisão de células de cancro do colo do útero HeLa ao microscópio.

Linha celular SiHa: Informações sobre a cultura

A manutenção de uma cultura de linha celular não é fácil enquanto não se conhecerem todos os pontos-chave da cultura. Deve saber: Qual é o tempo de duplicação da SiHa? O que é o meio celular SiHa? Como se faz a cultura da linha celular SiHa?

Pontos-chave para a cultura de células SiHa

Tempo de duplicação:	O tempo de duplicação das células SiHa é de aproximadamente 17 horas.
Aderente ou em suspensão:	A SiHa é uma linha celular aderente.
Rácio de subcultura:	O rácio de subcultura para as células SiHa é de 1:2 a 1:4. Para a passagem, as células aderentes são lavadas com 1x PBS. É adicionada uma solução de acutase e as células são incubadas durante 8 a 10 minutos à temperatura ambiente. Em seguida, adiciona-se o meio de cultura e as células são centrifugadas. O pellet de células é ressuspendido e as células são colocadas num novo frasco para cultura.
Meio de cultura:	O meio essencial mínimo de Eagle (EMEM) contendo 10% de FBS, 2 mM de L-Glutamina, 2,2 g/L de NaHCO3 e Solução Salina Equilibrada de Earle (EBSS) é utilizado para o crescimento ideal das células SiHa. O meio é substituído 2 a 3 vezes por semana.
Condições de crescimento:	As células SiHa são mantidas numa incubadora humidificada a 37°C com um fornecimento de 5% de CO2.
Armazenamento:	Os frascos congelados da linha de células de cancro do colo do útero SiHa são armazenados a uma temperatura inferior a -150°C num congelador elétrico ou na fase de vapor do azoto líquido durante um período mais longo.
Processo e meio de congelação:	O meio de congelação CM-1 ou CM-ACF é utilizado para o congelamento de células SiHa. As células são congeladas utilizando um método de congelação lenta que permite apenas uma diminuição de 1 °C por minuto para proteger a viabilidade das células.
Processo de descongelação:	As células congeladas são mantidas durante 40 a 60 segundos num banho de água a 37°C até restar um pequeno aglomerado de gelo. Em seguida, adiciona-se meio de crescimento fresco e as células são centrifugadas para remover os componentes do meio de congelação. O pellet de células é ressuspenso e as células são distribuídas num frasco de cultura para crescimento.
Nível de biossegurança:	É necessário um laboratório de nível de biossegurança 1 para manusear e manter as culturas de células SiHa.

Uma camada aderente de células SiHa com ampliação de 10× e 20×.

Vantagens e desvantagens da linha celular SiHa

Tal como outras linhas celulares de carcinoma humano, a SiHa também possui algumas caraterísticas distintas associadas a determinadas vantagens e desvantagens. De seguida, discutimos algumas das mais significativas.

Vantagens da linha celular de cancro do colo do útero SiHa

Modelo de cancro do colo do útero
- Derivado do carcinoma de células escamosas do colo do útero.
- Utilizada para estudar os mecanismos, o crescimento e o desenvolvimento do cancro do colo do útero.
- Expressa os genes p53+ e pRB+, que estão relacionados com a reparação do ADN, a regulação do ciclo celular e a supressão de tumores.
Potencial tumorigénico
- As células SiHa são tumorigénicas e podem induzir tumores epidermóides de grau III pouco diferenciados em ratinhos nus.
- Utilizadas para a investigação in vivo do cancro e para testar tratamentos anti-cancro.

Desvantagens das células SiHa

Taxa de proliferação
- As células SiHa proliferam rapidamente, levando a um crescimento excessivo.
- Requerem passagens frequentes, aumentando o risco de instabilidade genética, o que pode afetar o comportamento das células ao longo do tempo.

Aplicações de investigação das células SiHa

A linha celular SiHa é amplamente utilizada na investigação do cancro do colo do útero. Apresentam-se de seguida algumas aplicações específicas desta linha celular.

Estudos relacionados com o papilomavírus humano (HPV): As células SiHa são HPV 16 positivas, pelo que são entidades valiosas para estudar a infeção pelo papilomavírus humano, os seus mecanismos moleculares e o seu papel no desenvolvimento e progressão do cancro do colo do útero. Os investigadores também utilizam estas células para investigar a replicação viral, a integração e o seu impacto nos processos das células hospedeiras. Um estudo realizado em 2020 utilizou a linha celular SiHa para examinar o papel das oncoproteínas E6/E7 do HPV no desenvolvimento do cancro do colo do útero, visando-as com a tecnologia CRISPR. Os resultados revelaram que o knockdown dos genes E6/E7 provocou a inibição do crescimento e a apoptose das células SiHa. Por conseguinte, estes genes virais podem servir como alvos de medicamentos cruciais para o desenvolvimento de terapias contra o cancro do colo do útero associado ao HPV [3].
Biologia do cancro: As células SiHa constituem um modelo inestimável para o estudo da biologia do cancro do colo do útero, incluindo o desenvolvimento, a progressão, as metástases e a invasão do cancro. Os investigadores utilizam estas células para explorar as mutações genéticas e as vias moleculares subjacentes que contribuem para o desenvolvimento e o crescimento do cancro do colo do útero, por exemplo, um estudo que utilizou células SiHa e descobriu que a SEC61G (SEC61 translocon subunit gamma) regulada em alta estimula a proliferação das células do cancro do colo do útero através da ativação da cascata MAPK [4].
Rastreio e ensaio de medicamentos: A SiHa é uma linha de cancro do colo do útero amplamente utilizada para avaliar a eficácia de potenciais medicamentos anticancerígenos específicos para o cancro do colo do útero associado ao HPV. Os investigadores exploram o potencial antiproliferativo, apoptótico e anti-metastático dos medicamentos utilizando estas células. Tal como um estudo realizado em 2019 que investigou o potencial citotóxico dos extractos de frutos de Vatica diospyroides Symington Type SS na linha celular de cancro do colo do útero SiHa [5].

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Publicações de investigação com células SiHa

Algumas publicações de investigação significativas e frequentemente citadas apresentam a linha celular de carcinoma escamoso do colo do útero SiHa.

O efeito antitumoral da aloe-emodina nas células do cancro do colo do útero foi associado ao papilomavírus humano E6/E7 e ao metabolismo da glicose

Esta publicação em OncoTargets and Therapy (2019) propôs que um composto natural aloe-emodin exerce efeitos apoptóticos associados ao HPV E6 / E7 e ao metabolismo da glicose em células de câncer cervical SiHa.

Avaliação do potencial anticancerígeno do extrato de folhas de Excoecaria agallocha (L.) na linha celular de cancro do colo do útero humano (SiHa) e avaliação do mecanismo de ação subjacente

Este artigo foi publicado no Future Journal of Pharmaceutical Sciences em 2022. Este estudo investigou as actividades antitumorais do extrato de folhas da planta Excoecaria agallocha (L.) na linha celular de cancro cervical SiHa.

Efeito antiproliferativo da 1, 10-fenantrolina acoplada a nanopartículas de ZnO sulfatadas na linha celular de cancro do colo do útero SiHa

Este estudo, publicado no Journal of Sol-Gel Science and Technology (2022), propôs que a molécula de 1, 10-fenantrolina, após acoplamento com nanopartículas de sulfato de zinco, exerce efeitos antiproliferativos significativos nas células SiHa.

O astragalósido IV inibe a invasão e a metástase das células de cancro cervical SiHa através das vias PI3K e MAPK mediadas por TGF-β1

Esta pesquisa foi publicada no Oncology Reports em 2019. O estudo revelou que o Astragaloside IV, um produto natural, suprime a migração e invasão das células SiHa através da modulação das vias de sinalização PI3K e MAPK mediadas pelo TGF-β1.

IFI16 promove a progressão do cancro do colo do útero através da regulação positiva de PD-L1 no imunomicroambiente através da via STING-TBK1-NF-kB

Este estudo na revista Biomedicine & Pharmacotherapy (2020) revelou que o IFI16 (interferon-gamma inducible protein 16) regula o gene PD-L1 através da ativação da via STING-TBK1-NF-kB para incentivar o crescimento das células do cancro do colo do útero SiHa.

Recursos para a linha celular SiHa: Protocolos, vídeos e muito mais

Aqui estão alguns recursos online que apresentam as células SiHa.

Transfecção de células SiHa: Este artigo de investigação contém um protocolo para a manutenção de células de cancro do colo do útero SiHa e para a transfecção de células SiHa.

A seguinte ligação contém informações sobre a cultura de células SiHa.

Linha celular SiHa: Este sítio Web contém muitos dados valiosos sobre a linha celular SiHa. Inclui informações sobre meios de crescimento, condições de cultura, protocolos para subcultura de células SiHa e manuseamento das suas culturas proliferativas e criopreservadas.

Perguntas frequentes sobre as células de carcinoma do colo do útero SiHa

Referências

Melzer, C., J. von der Ohe e R. Hass, Revisão concisa: o crosstalk do estroma mesenquimal / células semelhantes a tronco com células cancerígenas oferece potencial terapêutico. Células estaminais, 2018. 36(7): p. 951-968.
Ostrowska, K.M., et al., Investigação da influência do papilomavírus humano de alto risco na composição bioquímica das células do cancro do colo do útero utilizando espetroscopia vibracional. Analyst, 2010. 135(12): p. 3087-3093.
Chen, Y., et al., Inibição do crescimento in vitro e in vivo de células de cancro do colo do útero humano através da clivagem dos mRNAs do papilomavírus humano E6/E7 pelo sistema CRISPR/Cas13a. Antiviral Research, 2020. 178: p. 104794.
Fan, Y., et al., SEC61G promove a proliferação do cancro do colo do útero através da ativação da via de sinalização MAPK. Disease Markers, 2022. 2022.
Chothiphirat, A., et al., Potencial anticancerígeno de extratos de frutas de Vatica diospyroides symington tipo SS e seu efeito na morte celular programada de linhas celulares de câncer cervical. O Jornal Científico Mundial, 2019. 2019.