Células de Ramos - Investigação do Linfoma de Células B: A Importância das Células de Ramos
As célulasRamos são uma linha de células de linfócitos B amplamente utilizada na investigação biomédica. Em particular, encontram aplicações primárias em estudos de imunologia e cancro. Os investigadores utilizam estas células para avaliar fármacos citotóxicos e estudar os antigénios de superfície das células B, as mutações e os mecanismos apoptóticos.
Origem e caraterísticas gerais das células Ramos s
A compreensão da origem e dos atributos essenciais de uma linha celular desempenha um papel crucial na decisão da sua adequação à sua investigação. Por conseguinte, é aconselhável avaliar cuidadosamente esta informação antes de iniciar qualquer trabalho com ela. Esta secção abrange as seguintes perguntas frequentes: O que é a linha celular de cancro Ramos? O que é a linha celular Ramos CD19? O que é a linha celular Ramos CD20? Qual é a origem das células Ramos? Quais são os marcadores da linha de células Ramos? Qual é o tamanho das células Ramos? Qual é a morfologia da linha celular Ramos?
- A linha celular Ramos foi criada em 1972. Estas células foram derivadas do líquido ascítico de um rapaz caucasiano de 3 anos com linfoma de Burkitt de tipo americano [1].
- Expressam os principais marcadores de células B, incluindo imunoglobulina M (IgM), CD19, CD20 e CD22.
- As células de Ramos são células negativas para o vírus da barra de Epstein. No entanto, podem ser permanentemente transformadas em células positivas para o vírus Epstein-Barr.
- Estes linfoblastos B possuem uma morfologia arredondada.
Células azuis de Ramos vs. células B de Ramos
As células azuis de Ramos e as células B de Ramos são ambas células do linfoma de Burkitt humano. Ambas são negativas para o vírus da barra de Epstein. A diferença entre estas células é que as células azuis de Ramos expressam um gene repórter induzido por NF-κB/AP-1 denominado SEAP (fosfato alcalino embrionário segregado), enquanto as células brancas de Ramos não o fazem.
Cultura de células Ramos
Esta secção do artigo é dedicada a ajudá-lo a aprender informações imperativas sobre a cultura de células Ramos. Aqui, ficará a saber: Qual é o tempo de duplicação das linhas celulares? Qual é o meio recomendado? Como se faz a cultura de células Ramos?
Pontos-chave para a cultura de células Ramos
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Tempo de duplicação: |
O tempo de duplicação das células Ramos é de cerca de 20,4 ± 1,5 horas. No entanto, pode variar consoante as condições de cultura de células fornecidas. |
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Aderentes ou em suspensão: |
As células Ramos crescem em suspensão. |
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Densidade celular: |
A densidade celular óptima para a linha de células Ramos é de 3 x105 células/ml . Para a subcultura, as células em suspensão são recolhidas por centrifugação. As células são adicionadas com meios frescos e ressuspendidas cuidadosamente. Em seguida, as células foram vertidas para um novo frasco a uma densidade de 3 a 9 x105 células/ml . |
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Meio de crescimento: |
RPMI 1640 suplementado com 10% de soro fetal bovino, 2,1 mM de glutamina estável e 2,0 g/L NaHCO3 é utilizado para a cultura de células Ramos. O meio deve ser substituído 2 vezes por semana. |
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Condições de crescimento: |
A linha celular de linfoma de Burkitt humano (Ramos) é mantida numa incubadora humidificada a 5% de CO2 e 37°C de temperatura. |
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Armazenamento: |
As células congeladas de Ramos são mantidas a uma temperatura inferior a -150 graus Celsius ou na fase de vapor do azoto líquido para proteger a viabilidade das células durante mais tempo. |
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Processo e meio de congelação: |
O meio de congelação CM-1 ou CM-ACF é recomendado para as células Ramos. É utilizado um processo de congelação lenta que permite uma diminuição gradual da temperatura de 1 grau Celsius por minuto. Esta congelação lenta protege as células de qualquer choque e aumenta a sua viabilidade. |
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Processo de descongelação: |
Para a descongelação, as célulascongeladas são mantidas num banho de água pré-aquecido a 37°C durante 40 a 60 segundos até que reste um pequeno aglomerado de gelo. Depois disso, adiciona-se meio fresco e as células são centrifugadas para remover os elementos do meio de congelação. O pellet é novamente ressuspenso e as células são dispensadas num novo frasco contendo meio de cultura. |
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Nível de Biossegurança: |
O laboratório de nível de biossegurança 1 é essencial para a manutenção de culturas de células Ramos negativas para o vírus Epstein-Barr. No entanto, o nível de biossegurança é alterado para 2 quando as células Ramos são permanentemente transformadas em células positivas para o vírus Epstein-Barr. |
Ramos: Vantagens e limitações
Tal como outras linhas celulares, as células Ramos também têm vantagens e limitações distintas. Esta secção irá explorar algumas das mais notáveis que podem influenciar significativamente a sua utilização na investigação.
Vantagens
- Modelo de células de linfoma de Burkitt: As células Ramos foram desenvolvidas a partir de um doente com linfoma de Burkitt, o que as torna um modelo celular relevante para o estudo de doenças malignas linfóides
- Cultura fácil: As células Ramos são fáceis de cultivar e manter no laboratório. Têm requisitos e condições de cultura de células simples
Limitações
- Modelo in vitro: As células Ramos podem não representar completamente a complexidade genética dos tumores dos doentes, limitando assim a sua aplicabilidade. Além disso, os resultados das experiências que utilizam a linha de células Ramos podem não refletir inteiramente as condições in vivo, o que pode levar a desafios de tradução
aplicações das células Ramos na investigação
As células Ramos oferecem aplicações promissoras no domínio biomédico. Algumas das utilizações imperativas das células Ramos na investigação incluem:
- Biologia do linfoma: As células Ramos são amplamente utilizadas para estudar a biologia do linfoma. São utilizadas para explorar os factores genéticos e moleculares subjacentes aos tumores malignos linfóides. Além disso, os investigadores obtêm informações sobre o início, a progressão e a heterogeneidade da doença utilizando estas células do linfoma de Burkitt. As mutações genéticas e as vias de sinalização são também investigadas, conduzindo potencialmente ao desenvolvimento de abordagens diagnósticas e terapêuticas mais precisas. Um estudo realizado em 2019 concluiu que a inibição da histona acetiltransferase GCN5 (General control non-depressible 5) diminui a tumorigenicidade das células do linfoma de Burkitt humano (Ramos) através da interrupção da sinalização BCR. Por conseguinte, o GCN5 é sugerido como um alvo viável para o desenvolvimento de uma terapia medicamentosa para o linfoma [2].
- Rastreio e ensaio de medicamentos: A linha celular Ramos é amplamente utilizada para efeitos de rastreio e ensaio de medicamentos. Os investigadores avaliam a eficácia de potenciais compostos terapêuticos na inibição da proliferação e crescimento celulares e na indução da morte celular em células de linfoma. Isto ajuda a identificar candidatos a fármacos promissores, facilitando assim o desenvolvimento de tratamentos específicos para os doentes com linfoma. Tal como a investigação mostrou que o extrato metanólico da pele, polpa e sementes do fruto de Annona exerceu efeitos moderados, enquanto o extrato de clorofórmio exibiu efeitos robustos na proliferação de células Ramos. Assim, o estudo propôs que os frutos de Annona podem revelar-se eficazes na prevenção e tratamento do linfoma [3].
Células Ramos para a sua investigação
Publicações com células Ramos
Esta secção do artigo enumera algumas publicações de investigação interessantes sobre a linha de células Ramos:
Esta investigação foi publicada na revista The EMBO em 2018. O estudo descobriu que as células Ramos B requerem a expressão dos marcadores CD19 e CD79b (componente de sinalização BCR Igβ) das células Ramos para sua aptidão e crescimento competitivo.
Este estudo publicado na Neoplasia (2021) utilizou células Ramos e propôs que o domínio da quinase de linhagem mista (MLKL) é regulado epigeneticamente em células de linfoma de Burkitt (Ramos). Assim, é um marcador de prognóstico promissor para o sucesso do tratamento de terapias relacionadas com a necroptose.
A fosforilação de PBK/TOPK Tyr74 por JAK2 promove o crescimento do tumor de linfoma de Burkitt
Este artigo de investigação na Cancer Letters (2022) sugeriu que o eixo de sinalização JAK2/TOPK/histona H3 desempenha um papel crucial na proliferação de linhas celulares de linfoma B in vitro.
Este artigo foi publicado em 2020 na revista Toxins. O estudo propôs que o tratamento com verotoxina-1 induz stress do retículo endoplasmático (ER) em células Ramos B. Isto leva ao início de vias apoptóticas ou de sobrevivência em células Ramos B. Isto leva ao início da sinalização apoptótica ou de sobrevivência em linhas celulares de linfoma.
Este estudo publicado no Avicenna Journal of Phytomedicine (2020) indica que um composto natural, a silimarina, suprime a expressão do TLR8 (Toll-like recetor 8) e a apoptose na linha celular Ramos.
Recursos para a linha de células Ramos: Protocolos, vídeos e muito mais
Seguem-se alguns recursos online sobre as células Ramos:
- Transfecção de células Ramos: Este documento ajudá-lo-á a aprender o protocolo de transfecção da linha de células Ramos.
A seguinte ligação contém o protocolo de cultura de células Ramos:
- Células Ramos: Este sítio Web contém informações básicas sobre a linha de células Ramos. Contém também um protocolo para a subcultura de células Ramos e para o manuseamento de culturas em proliferação e criopreservadas. Além disso, também estão disponíveis informações sobre os meios de cultura das células Ramos, o tempo de duplicação e a densidade celular.
Informações importantes sobre as células de Ramos: Perguntas mais frequentes
Referências
- Kerntke, C.G., Analysis of the organization and signaling capacity of the membrane IgE during its interaction with CD19 and CD23 in B lymphocytes. 2021, Georg-August-Universität Göttingen.
- Farria, AT, et al., A inibição do GCN5 HAT reduz a sobrevivência das células do linfoma de Burkitt humano através da redução da expressão do gene alvo MYC e impedindo as vias de sinalização BCR. Oncotarget, 2019. 10(56): p. 5847.
- Al-Shaya, H.M., et al., Perfil fitoquímico e atividade antioxidante da fruta annona e seu efeito na proliferação de células de linfoma. Ciência dos Alimentos e Nutrição, 2020. 8(1): p. 58-68.