Células P19 - Pesquisa de Carcinoma Embrionário usando Células P19
A P19 é uma linha celular de carcinoma embrionário murino. É amplamente utilizada na investigação biomédica, principalmente para estudar a biologia do desenvolvimento, a biologia das células estaminais, a diferenciação celular e o rastreio de medicamentos. Como as células P19 têm capacidade de diferenciação, podem ser úteis na investigação de processos biológicos complexos, como a formação de tecidos e o desenvolvimento embrionário inicial. Neste artigo, discutiremos os fundamentos das células P19 derivadas do rato.
Caraterísticas gerais e origem das células P19
É essencial conhecer as caraterísticas gerais e a origem de uma linha celular antes de começar a trabalhar com ela. Esta secção abordará o seguinte: O que é a linha celular P19? Qual é o tamanho da célula P19? Qual é a origem das células P19?
- A P19 é um tipo de células de carcinoma embrionário pluripotente originalmente obtido a partir de um teratocarcinoma desenvolvido num ratinho C3H/He. A linha celular foi estabelecida pela primeira vez em 1982 por McBurney e Rogers.
- As células P19 podem crescer continuamente num meio de cultura suplementado com soro. Podem diferenciar-se noutros tipos de células quando expostas a fármacos não tóxicos, como o ácido retinóico e o dimetilsulfóxido (DMSO) [1].
- Estas células de carcinoma de ratinho possuem uma morfologia semelhante à epitelial.
- A linha celular P19 tem um cariótipo masculino euploide (n=40; XY).
Informações sobre a cultura de células P19
A linha celular P19 é amplamente cultivada em laboratórios de investigação devido às suas caraterísticas únicas. A sua cultura é fácil e manejável. Esta secção menciona todas as informações essenciais necessárias para manter e cultivar a cultura de células P19. Ficaremos a saber: Qual é o tempo de duplicação das células P19? Como se faz a cultura da linha celular P19? A P19 é uma linha celular aderente?
Pontos-chave para a cultura de células P19
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Tempo de duplicação: |
O tempo de duplicação registado para a linha de células P19 é de aproximadamente 2 a 3 dias. |
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Aderente ou em suspensão: |
A linha celular de carcinoma embrionário P19 é aderente. |
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Rácio de subcultura: |
As células P19 devem ser subcultivadas a cada 48 horas e deve ser mantido um rácio de divisão de 1:10 para estas células. As células aderentes são lavadas com tampão fosfato salino 1 X e incubadas com Accutase até as células se dissociarem. As células são adicionadas ao meio de cultura e colhidas por centrifugação. As células colhidas são cuidadosamente ressuspendidas e distribuídas em novos frascos. |
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Meio de cultura: |
O meio DMEM/Ham's F12 contendo 5% de soro fetal bovino, 3,1 g/L de glucose, 1,6 mM de L-glutamina, 1,0 mM de piruvato de sódio, 15 mM de HEPES e 1,2 g/L de NaHCO3 é utilizado para a cultura de células P19. |
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Condições de crescimento: |
Uma incubadora humidificada regulada a 37°C com um fornecimento de 5% de CO2 é essencial para o crescimento e cultura da linha celular de carcinoma embrionário P19. |
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Armazenamento: |
Os frascos de células P19 congeladas devem ser armazenados a uma temperatura inferior a -150°C num congelador ou na fase de vapor do azoto líquido para manter a viabilidade das células a longo prazo. |
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Processo de congelação e meio: |
Os meios CM-1 ou CM-ACF podem ser utilizados para congelar células P19 utilizando um método de congelação lenta que protege as células de qualquer choque e preserva a sua viabilidade. |
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Processo de descongelação: |
As células P19 congeladas podem ser descongeladas num banho de água a 37°C, agitando rapidamente um frasco durante 40 a 60 segundos. As células são adicionadas com meio fresco e centrifugadas para remover os elementos do meio de congelação. A palete de células é novamente ressuspensa e as células são vertidas no novo frasco para crescimento. |
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Nível de biossegurança: |
São necessárias configurações laboratoriais de nível de biossegurança 1 para a linha de células P19. |
Linha celular P19: Vantagens e Desvantagens
Nesta secção serão analisadas as vantagens e desvantagens da linha celular P19.
Vantagens
- Potencial de diferenciação: As células P19 podem diferenciar-se em vários tipos de células, incluindo cardiomiócitos, neurónios e células microgliais. Requerem medicamentos não tóxicos para a diferenciação, como o ácido retinóico e o dimetilsulfóxido (DMSO). O ácido retinóico induz o desenvolvimento de neurónios, microglia e astroglia, enquanto o DMSO inicia o desenvolvimento de cardiomiócitos e células musculares lisas. Assim, as células P19 são úteis para estudar a diferenciação celular e os processos de desenvolvimento
- Sistema modelo: A linha celular de carcinoma embrionário pluripotente P19 é um modelo valioso para o estudo do desenvolvimento embrionário inicial. Os investigadores utilizam as células P19 para elucidar as vias de sinalização celular e os mecanismos celulares e moleculares envolvidos nestes processos
Desvantagens
- Origem murina: A P19 é uma linha celular de carcinoma embrionário murino. Por conseguinte, os resultados dos estudos efectuados com estas células podem não ser totalmente aplicáveis à biologia e aos processos humanos
Aplicações de investigação das células P19
As células P19 têm várias aplicações de investigação devido à sua capacidade de diferenciação e à sua relevância para a biologia do desenvolvimento e a investigação sobre células estaminais. Algumas das aplicações de investigação importantes das células de carcinoma embrionário P19 incluem:
- Estudos de diferenciação celular: Como sabemos, as células P19 podem diferenciar-se em neurónios, células microgliais, células musculares lisas e cardiomiócitos, pelo que são amplamente utilizadas para estudar os processos de diferenciação celular. Além disso, ajuda a investigar o desenvolvimento neural e cardíaco e os mecanismos subjacentes. Um estudo realizado em 2018 descobriu que as espécies reativas de oxigénio (ROS) direcionam a diferenciação de células P19 em tipos celulares específicos e impedem a indução de outros [3]. Outro estudo explorou o processo de diferenciação neural mediado pelo ácido retinóico e descobriu o envolvimento da via de sinalização PI3K/Akt/GSK3β [4].
- Biologia do desenvolvimento: As células P19 são um modelo inestimável para o estudo do desenvolvimento embrionário inicial. Ajudam os investigadores a compreender processos biológicos complexos, como a formação de tecidos durante o desenvolvimento do embrião. A investigação utilizou células P19 e estudou os factores moleculares que contribuem para a formação do defeito do septo ventricular (DSV). Os resultados revelaram que um ARN longo não codificante SNHG6 contribui para a VSD regulando negativamente o miRNA-101 e activando a via Wnt/β-catenina [5].
- Ensaio de drogas: A linha celular de carcinoma embrionário de ratinho P19 também é utilizada para analisar potenciais candidatos a fármacos. Um estudo utilizou neurónios de células P19 diferenciadas e investigou os efeitos neuroprotectores inibidores da acetilcolinesterase da L-Dopa sintética e do extrato aquoso de sementes de Mucuna pruriens. Os resultados mostraram que o extrato da planta apresentou resultados promissores em comparação com a L-Dopa [6].
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Células P19: Publicações de investigação
Esta secção de artigos aborda algumas publicações de investigação interessantes sobre as células P19.
Este artigo foi publicado na Oncology Reports em 2017. O estudo propôs que as hormonas sexuais hipofisárias conduzem a adesão, proliferação e migração de linhas celulares de teratocarcinoma, incluindo as células P19.
Esta publicação na revista Experimental & Molecular Medicine (2018) utilizou células P19 e estudou a função do RNA longo não codificante uc.4. Os resultados revelaram que o uc.4 afecta a diferenciação celular através da modulação da via de sinalização TGF beta.
Este artigo de investigação foi publicado em 2018 no Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. O estudo descobriu que o extrato natural de tecido cerebral e a cultura de células 3D podem acelerar a diferenciação das células de carcinoma embrionário P19 em células neurais.
Este estudo foi publicado no Journal of Ethnopharmacology em 2020. O estudo propôs que o extrato de folhas de Cichorium intybus L. pode induzir a diferenciação em células de carcinoma embrionário P19 em células β pancreáticas produtoras de insulina.
Esta investigação foi publicada na revista Molecules (2022). Este estudo explorou os efeitos neuroprotectores e inibidores da acetilcolinesterase do extrato de sementes de Mucuna pruriens nos neurónios das células P19.
Recursos para a linha de células P19: Protocolos, vídeos e muito mais
Seguem-se alguns recursos sobre as células P19.
- Protocolo de diferenciação neuronal de células P19: Este artigo contém o protocolo de diferenciação neural das células P19 e outras informações úteis sobre a diferenciação das células P19.
- Transfecção de células P19: Esta ligação ajudá-lo-á a aprender o protocolo de transfecção de células P19.
A ligação seguinte contém o protocolo de cultura de células P19.
- Células P19: Este sítio Web contém todas as informações úteis sobre a linha de células P19, incluindo as condições de cultura, os meios de cultura das células P19, a divisão das células e muito mais.
Explorar a linha celular P19: Perguntas frequentes
Referências
- McBurney, M.W., Células de carcinoma embrionário P19. Int J Dev Biol, 1993. 37(1): p. 135-40.
- Bressler, J., et al., P19 Embryonic Carcinoma Cell Line: Um modelo para estudar as interações gene-ambiente. Cell Culture Techniques, 2011: p. 223-240.
- Pashkovskaia, N., U. Gey e G. Rödel, ROS mitocondrial direcionam a diferenciação de células P19 pluripotentes murinas. Pesquisa de células-tronco, 2018. 30: p. 180-191.
- Fu, F., et al., O ácido all-trans-retinoide induz a diferenciação de células P19 em neurônios envolvidos na via de sinalização PI3K / Akt / GSK3β. Journal of Cellular Biochemistry, 2020. 121(11): p. 4386-4396.
- Jiang, Y., et al., RNA longo não codificante SNHG6 contribui para a formação de defeito do septo ventricular via regulação negativa de miR-101 e ativação da via Wnt / β-catenina. Die Pharmazie-An International Journal of Pharmaceutical Sciences, 2019. 74(1): p. 23-28.
- Kamkaen, N., et al., O extrato aquoso de sementes de Mucuna pruriens melhorou os efeitos neuroprotectores e inibidores da acetilcolinesterase em comparação com a L-dopa sintética. Molecules, 2022. 27(10): p. 3131.