Células NIH-3T3: Avanço dos estudos sobre fibroblastos e aplicações da NIH-3T3
A linha celular NIH-3T3, criada a partir do tecido de um embrião de ratinho albino suíço com 17 dias de idade em 1962 por Howard Green e George Todaro na Faculdade de Medicina da Universidade de Nova Iorque, tornou-se um recurso fundamental na investigação biomédica. Reconhecidas pela sua elevada recetividade à formação de focos do vírus da leucemia e do vírus do sarcoma, as células NIH-3T3 constituem uma ferramenta essencial para uma série de investigações científicas, incluindo estudos de oncologia viral, análise da expressão genética e exploração da dinâmica do crescimento celular. A nomenclatura "3T3" reflecte o método de cultura de células, denotando um intervalo de "transferência de 3 dias" com uma densidade de sementeira inicial de 3 × 10^5 células, realçando as condições normalizadas em que estas células foram inicialmente cultivadas e expandidas.
Diversas morfologias e aplicações das células NIH-3T3
Uma das caraterísticas marcantes das células NIH-3T3 é a sua adaptabilidade morfológica, que varia significativamente com a confluência da cultura. Em densidades mais baixas, estes fibroblastos apresentam uma estrutura celular fusiforme e solitária, que evolui para padrões densos e rodopiantes à medida que a população atinge a confluência. Com um diâmetro médio de cerca de 18 μm, as células NIH-3T3 oferecem um modelo versátil para estudos aprofundados de biologia celular, que vão desde os mecanismos de reparação de tecidos até às intrincadas vias de regulação do ciclo celular.
Informações sobre a cultura
Detalhes chave da cultura:
Tempo de duplicação da população: Cerca de 20 horas.
Tipo de crescimento: Culturas aderentes.
Densidade de sementeira: Recomendada: 3 a 4 x 10^4 células/cm^2.
Meio de crescimento: DMEM ou Ham's F12, suplementado com 5% de FBS e 2,5 mM de L-glutamina.
Condições de crescimento: Manter a 37 °C numa incubadora humidificada com 5% de CO2.
Armazenamento: Conservar a temperaturas inferiores a -195 °C na fase de vapor do azoto líquido.
Método de congelação: Utilizar o meio CM-1 ou CM-ACF; utilizar um método de congelação lenta (queda de temperatura de 1°C).
Protocolo de descongelação: aquecimento rápido num banho de água a 37 °C, seguido de centrifugação para remover o meio de congelação e, em seguida, ressuspensão em meio de crescimento.
Nível de biossegurança: A cultura requer uma configuração de nível de biossegurança 1.
Rato albino suíço num laboratório.
Prós e contras da utilização de células NIH 3T3
Vantagens
Eficiência de transfecção: Conhecidas pelas suas elevadas taxas de transfecção, as células NIH-3T3 são excelentes para estudos de expressão genética transitória e estável, acomodando uma variedade de técnicas de transfecção.
Utilidade da camada de alimentação: Estas células servem frequentemente como camada de alimentação de suporte para co-culturas com células como queratinócitos e células estaminais, graças à sua libertação de factores de crescimento que promovem o crescimento das células co-cultivadas.
Investigaçãode células estaminais : As células NIH-3T3 são a escolha preferida na investigação de células estaminais por induzirem a pluripotência sem modificação genética e proporcionarem um ambiente propício à diferenciação de células estaminais.
Estabilidade da cultura: As células NIH-3T3 são conhecidas pela sua estabilidade e baixa frequência de transformação espontânea. No entanto, em determinadas condições ou após exposição a oncogenes ou mutagénicos específicos, as células NIH-3T3 podem sofrer uma transformação espontânea. Esta transformação pode levar à aquisição de propriedades cancerígenas, como o crescimento descontrolado, a perda de inibição de contacto e a capacidade de formar tumores quando injectadas em hospedeiros susceptíveis.
Desvantagens
Tamanho inconsistente das células: A morfologia alongada e fusiforme das células NIH-3T3 pode variar, o que complica a análise de imagens em ensaios.
Suscetibilidade à infeção: Estas células são propensas a infecções bacterianas e por micoplasma se não forem mantidas em condições assépticas rigorosas, o que pode afetar a integridade experimental.
Aplicações de investigação das células NIH-3T3
Estudos de Transfecção de ADN: A robustez das células NIH-3T3 torna-as ideais para introduzir e estudar a função de vários genes, demonstrada na investigação que examina proteínas como a NAB2-STAT6 e o seu papel nos processos celulares.
Ensaios baseados em células: A sua fiabilidade estende-se a vários ensaios, incluindo ensaios de viabilidade, apoptose e formação de focos, oferecendo uma visão das respostas celulares em diferentes condições experimentais.
Investigação do ciclo celular: A manipulação direta do ciclo celular da linha celular através dos níveis séricos torna-a um modelo potente para estudar a regulação do ciclo celular e as suas aberrações em contextos de doença.
Melhore a sua investigação com células NIH-3T3
Destacar estudos importantes que envolvem a linha celular de fibroblastos NIH 3T3
A linha celular NIH-3T3 tem sido fundamental em numerosos projectos de investigação, abrangendo várias facetas da biologia celular. De seguida, apresentam-se alguns estudos significativos que utilizam estas células:
- Explorando a Proteína de Fusão NAB2-STAT6: Publicado na Biochemical and Biophysical Research Communications, este estudo investiga o impacto da proteína de fusão NAB2-STAT6 nas células NIH-3T3, especificamente o seu papel no aumento do crescimento e migração celular através da regulação do EGR-1
- Investigando APOBEC3 e o vírus da leucemia murina: Esta investigação na revista Virology examina a hipermutação do vírus da leucemia murina AKV em células NIH-3T3 que expressam o gene APOBEC3 do rato
- Avaliação do potencial antimetastático de fármacos epigenéticos: Em Oncotargets and Therapy, este estudo avalia os efeitos antimetastáticos da hidralazina e do ácido valpróico em células NIH-3T3 transformadas em RAS
- Impacto da Baicaleína na Proliferação de NIH-3T3 e na Síntese de Colagénio: Esta investigação utiliza células NIH-3T3 para explorar o modo como o Baicalein influencia a proliferação celular e a produção de colagénio através da modulação do eixo miR-9/fator de crescimento semelhante à insulina-1
- Estudar a depleção de riboflavina e a tumorigénese: Este estudo apresenta resultados sobre a forma como a deficiência de riboflavina nas células NIH-3T3 contribui para a tumorigénese, promovendo a proliferação celular e desregulando os genes do ciclo celular
Recursos essenciais para a investigação com células NIH-3T3
Para os investigadores interessados em trabalhar com células NIH-3T3, está disponível uma variedade de recursos para orientar os protocolos de cultura e experimentais:
- Formação de esferóides em células NIH-3T3: Este vídeo fornece um passo-a-passo detalhado sobre a formação de esferóides, uma técnica de cultura de células 3D que agrega células NIH-3T3 em aglomerados, oferecendo um modelo fisiologicamente mais relevante para estudos
- Monitorização do crescimento de células NIH-3T3: Através do sistema de imagem de células vivas JuLI Br, este vídeo capta a dinâmica de crescimento das células NIH-3T3 durante 65 horas, mostrando a proliferação celular em tempo real
Estes recursos destinam-se a apoiar os seus esforços de investigação com células NIH-3T3, fornecendo uma base para experiências e descobertas bem sucedidas.
Perguntas frequentes sobre as células NIH-3T3
Referências
- Rahimi, A.M., M. Cai, e S. Hoyer-Fender, Heterogeneity of the NIH3T3 Fibroblast Cell Line (Heterogeneidade da linha celular de fibroblastos NIH3T3). Cells, 2022. 11(17): p. 2677.
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- Mattsson, M., Expressão da Sloppymerase ™ em células NIH / 3T3: Explorando a versatilidade de uma polimerase de fusão propensa a erros. 2021.
- Sahinturk, V., et al., A acrilamida exerce sua citotoxicidade em células de fibroblastos NIH / 3T3 por apoptose. Toxicologia e Saúde Industrial, 2018. 34(7): p. 481-489.
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