Células NCI-H1299: Investigação e Implicações Clínicas das Células de Cancro do Pulmão NCI-H1299
A NCI-H1299 é uma linha celular imortalizada de cancro do pulmão humano de células não pequenas, amplamente utilizada na investigação em oncologia imunológica, cancro e descoberta de medicamentos. Além disso, os investigadores utilizaram estas células para investigar a sensibilidade aos medicamentos, as vias de sinalização subjacentes e os mecanismos moleculares relacionados com o cancro do pulmão. Além disso, estas células são utilizadas para estudar infecções virais como o SARS-CoV-2.
Caraterísticas gerais e origem das células NCI-H1299
A primeira coisa a saber sobre uma linha celular é a sua origem e caraterísticas gerais, uma vez que estas ajudam a planear a sua utilização na investigação. Esta secção do artigo irá ajudá-lo a conhecer algumas informações importantes sobre a origem e as caraterísticas das células NCI-H1299. Por exemplo, o que são as células de cancro do pulmão NCI-H1299? Que tipo de célula é a NCI-H1299? Qual é o tamanho das células NCI-H1299? Qual é a diferença entre A549 e NCI-H1299?
- A linha celular NCI-H1299 teve origem numa metástase de um nódulo linfático do pulmão de um doente caucasiano de 43 anos com cancro.
- Estas células possuem uma deleção parcial homozigótica do gene p53; assim, não expressam a proteína p53. A falta de expressão da proteína p53 NCI-H1299 contribui para a tendência proliferativa das células de cancro do pulmão H1299.
- Para além da p53, estas células imortalizadas apresentam a mutação KRAS NCI-H1299, responsável pelas suas propriedades de crescimento, proliferação, migração e invasão.
- O cariótipo das células NCI-H1299 é quase diploide.
- As células NCI-H1299 têm uma morfologia semelhante à das células epiteliais.
- Estas células são achatadas e têm uma espessura inferior a 5 µm.
NCI-H1299 e A549
As células NCI-H1299 e A549 são linhas celulares de cancro do pulmão não pequeno. As células NCI-H1299 são mais agressivas e sensíveis do que as A549. Ambas têm mutações relativamente semelhantes, como a KRAS. No entanto, ao contrário das células NCI-H1299, as células A549 expressam o gene P53.
Informações sobre a cultura
A manutenção de uma cultura de linha celular não é fácil até se conhecerem todas as informações essenciais sobre a mesma, incluindo: Qual é o tempo de duplicação da NCI-H1299? Qual é a densidade de sementeira da NCI-H1299? O que é o meio celular NCI-H1299? Como é que se cultivam as linhas celulares NCI-H1299? Esta secção irá ajudá-lo a obter as respostas a todas estas perguntas sobre a cultura de células NCI-H1299.
Pontos-chave para a cultura de células NCI-H1299
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Tempo de duplicação: |
O tempo de duplicação das células NCI-H1299 varia entre 22-30 horas. |
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Aderente ou em suspensão: |
A NCI-H1299 é uma linha celular aderente. |
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Rácio de Sub-cultivo: |
As células NCI-H1299 são subcultivadas num rácio recomendado de 1:3 a 1:6. Para a sementeira, as células aderentes são lavadas com 1x PBS e incubadas com a solução de passagem Accutase durante 8 a 10 minutos à temperatura ambiente. As células desprendidas são adicionadas com meio de cultura fresco e centrifugadas. O pellet de células é então ressuspendido e as células são vertidas em novos frascos com meio de cultura. |
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Meio de cultura: |
O RPM1 1640 é um meio ideal para células NCI-H1299. É suplementado com 10% de soro fetal bovino, 4500 mg/L de glucose, 2,0 mM de L-glutamina, 1 mM de piruvato de sódio, 1500 mg/L de NaHCO3 e 10 mM de HEPES. Os meios devem ser renovados 2 a 3 vezes por semana. |
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Condições de crescimento: |
As culturas de células de cancro do pulmão NCI-H1299 são mantidas numa incubadora humidificada a 37°C com um fornecimento de 5% de CO2. |
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Armazenamento: |
A linha de células NCI-H1299 pode ser armazenada a longo prazo na fase de vapor do azoto líquido ou em congeladores de temperatura ultra baixa a uma temperatura inferior a -150°C. |
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Processo e meio de congelação: |
CM-1 ou CM-ACF são meios de congelação de células NCI-H1299. As células são congeladas utilizando um processo de congelação lento que permite apenas uma diminuição de 1 grau na temperatura por minuto para proteger a viabilidade celular. |
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Processo de descongelação: |
As células NCI-H1299 congeladas são rapidamente agitadas num banho de água pré-aquecido a 37 graus Celsius durante 40 a 60 segundos até restar um pequeno pedaço de gelo. As células descongeladas são adicionadas com meios frescos e podem ser diretamente cultivadas em novos frascos ou centrifugadas. No primeiro caso, o meio deve ser substituído após 24 horas de incubação. A centrifugação ajuda a remover os elementos de congelação do meio. Posteriormente, as células colhidas são ressuspensas em meio fresco e colocadas num novo frasco para cultura. |
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Nível de Biossegurança: |
É necessário um laboratório de nível de biossegurança 1 para manusear a cultura de células NCI-H1299. |
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Vantagens e desvantagens das células NCI-H1299
Tal como outras linhas celulares de cancro humano, a NCI-H1299 também possui algumas caraterísticas distintas associadas a vantagens e desvantagens específicas. Neste documento, resumimos algumas das mais significativas.
Vantagens
As principais vantagens da linha celular de cancro do pulmão de células não pequenas NCI-H1299 são
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Modelo in vitro de cancro do pulmão
As linhas celulares NCI-H1299 foram desenvolvidas a partir de metástases de gânglios linfáticos de carcinoma do pulmão e, por conseguinte, possuem propriedades relativamente semelhantes. Por conseguinte, estas células podem servir de modelo in vitro para investigar a biologia do cancro do pulmão e os mecanismos celulares e moleculares, bem como para analisar e testar potenciais terapêuticas.
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Fácil de cultivar
As células NCI-H1299 são fáceis de cultivar e manter num laboratório de investigação. Não existem requisitos e procedimentos exigentes para a cultura de células.
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NCI-H1299 P53 e NCI-H1299 mutação KRAS
As células NCI-H1299 não têm expressão do gene p53, o que permite que as células proliferem vigorosamente. Além disso, possuem a mutação KRAS que contribui para o crescimento, a proliferação, a invasão e a migração das células. Tendo em conta estes factores, os investigadores utilizam as células H1299 para investigar os mecanismos moleculares relevantes para as mutações KRAS e P53.
Desvantagens
As desvantagens das células NCI-H1299 são as seguintes
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Especificidade tecidular
As células NCI-H1299 são originárias de tecido pulmonar. Por conseguinte, a sua aplicabilidade limita-se principalmente à investigação do carcinoma do pulmão. Pode não representar totalmente a heterogeneidade e as caraterísticas gerais de outros tipos de cancro.
Aplicações de investigação das células NCI-H1299
A linha celular NCI-H1299 é amplamente utilizada na investigação do cancro do pulmão. São aqui mencionadas algumas aplicações prometedoras desta linha celular.
- Biologia do cancro: As células NCI-H1299 são uma excelente ferramenta de investigação para estudar o desenvolvimento e a progressão do cancro e os mecanismos celulares e moleculares relacionados. Estas células estão equipadas com determinadas mutações, o que permite aos investigadores explorar os comportamentos das células cancerosas, as vias de sinalização e os perfis de expressão dos genes. Vários estudos utilizaram a linha celular de carcinoma do pulmão de células não pequenas NCI-H1299 para estudar a biologia do cancro do pulmão. Por exemplo, um estudo realizado em 2018 investigou a via de sinalização envolvida na apoptose das células do cancro do pulmão utilizando células NCI-H1299. Os investigadores descobriram que a via PI3K/AKT contribui para a proliferação celular, e a sua inibição pode causar a morte das células cancerígenas [1]. Do mesmo modo, outro estudo investigou os mecanismos envolvidos na transição epitelial para mesenquimal (EMT) das células NCI-H1299. Este estudo propôs que uma proteína extracelular SPARC (proteína secretada ácida e rica em cisteína) contribui para a EMT e migração de NCI-H1299, promovendo assim a tumorigénese nas células - a proteína SPARC actua como mediador da sinalização TGF-β1 [2].
- Descoberta e rastreio de medicamentos: A NCI-H1299, uma linha celular de cancro do pulmão humano, é amplamente utilizada para avaliar a toxicidade e a eficácia de potenciais medicamentos. Além disso, é utilizada pelos investigadores para investigar o mecanismo de ação dos medicamentos antitumorais. Os estudos também utilizaram estas células para identificar possíveis alvos de medicamentos e mecanismos de resistência. Por exemplo, uma investigação conduzida por Xiao-Yun Shen e colegas investigou o potencial anticancerígeno do composto natural bruceína D (BD). Os resultados revelaram que a BD impede significativamente a proliferação, a invasão e a migração das células NCI-H1299. Por conseguinte, pode ser considerada uma potencial terapia adjuvante para o tratamento do carcinoma do pulmão de células não pequenas [3]. Do mesmo modo, um estudo avaliou os efeitos citotóxicos do xantohumol isolado e em combinação com o fármaco quimioterapêutico cisplatina nas células de cancro do pulmão NCI-H1299 [4].
Publicações de investigação com células NCI-H1299
Algumas publicações de investigação significativas e mais citadas sobre a linha celular de carcinoma do pulmão NCI-H1299 estão aqui.
Este artigo foi publicado na revista Human and Experimental Toxicology (2021). O estudo propôs que o indol-3-carbinol induz a apoptose nas células H1299 através da elevação dos níveis de espécies reactivas de oxigénio (ROS).
Esta investigação foi publicada em 2018 na revista Cellular Physiology and Biochemistry. Os resultados da investigação revelaram que a combinação de ácido cafeico e paclitaxel exerce um efeito anticancerígeno sinérgico na linha celular de cancro do pulmão de células não pequenas, NCI-H1299.
Este artigo de investigação foi publicado na Molecular Medicine Reports (2018). O estudo avaliou o efeito antitumoral da tubeimosida-1, uma saponina triterpenóide, e os mecanismos subjacentes na linha celular NCI-H1299.
Este artigo publicado no Journal of Cancer (2020) propôs que a Pristimerin, um composto natural, suprime a proliferação e a migração das células NCI-H1299.
Mecanismo do gene VIPR1 que regula as células H1299 do adenocarcinoma do pulmão humano
Este estudo em Medical Oncology (2019) explorou os efeitos potenciais da sobreexpressão do gene VIPR1 na linha celular de adenocarcinoma NCI-H1299.
Recursos para a linha de células NCI-H1299: Protocolos, vídeos e muito mais
Aqui estão alguns recursos online que apresentam as células NCI-H1299.
- Transfecção de NCI-H1299: Este vídeo explica o protocolo para o protocolo de transfecção transiente para as linhas celulares NCI-H1299.
- Subcultura de uma linha de células aderentes: Este vídeo ajudá-lo-á a aprender um procedimento geral de subcultura para uma linha de células aderentes.
A seguinte ligação contém informações sobre cultura de células para células NCI-H1299.
- Linha de células NCI-H1299: Esta ligação pode ajudá-lo a conhecer o protocolo de transfecção e passagem de células NCI-H1299.
Perguntas frequentes sobre a linha celular NCI-H1299
Referências
- Gu, J., et al., Estudo da apoptose induzida pelo EGCG em células de cancro do pulmão através da inibição da via de sinalização PI3K/Akt. Eur. Rev. Med. Pharmacol. Sci, 2018. 22(14): p. 4557-4563.
- Sun, W., et al., SPARC atua como um mediador de TGF-β1 na promoção da transição epitelial para mesenquimal em células de câncer de pulmão A549 e H1299. Biofactors, 2018. 44(5): p. 453-464.
- Shen, X.-Y., et al., Um estudo sobre o mecanismo da bruceína D no tratamento de células H1299 de cancro do pulmão de células não pequenas. Jornal Mundial de Medicina Tradicional Chinesa, 2020. 6(4): p. 500.
- Long, B., et al., Cytotoxic Effects of Xanthohumol and Its Combination with Cisplatin on Human Metastatic Lung Cancer H1299 Cells [Efeitos citotóxicos do xantohumol e da sua combinação com a cisplatina nas células H1299 do cancro do pulmão metastático humano]. Jornal de Avanços em Medicina e Pesquisa Médica, 2019. 30(9): p. 1-15.