Linha celular Jurkat E6.1

A Jurkat E6.1 é um clone da linha celular Jurkat, uma linha celular de linfócitos T humanos imortalizados derivada do sangue periférico. Estabelecida pela primeira vez em 1977, é utilizada em investigação relacionada com a sinalização do recetor de células T, terapias de adoção de células T e outros linfócitos contra o cancro, investigação de proto-oncogenes relacionados com o sangue, sobrevivência e diferenciação celular.

Neste artigo, incluiremos todas as informações e pré-requisitos que precisa de compreender antes de iniciar o seu trabalho com as linhas celulares clonadas Jurkat E6.1, que incluem:

1. Origem, história e informações gerais
2. Caraterísticas da cultura celular
3. Aplicações das linhas celulares Jurkat E6.1
4. Publicações de investigação
5. Vantagens e limitações
6. Recursos: Protocolos, vídeos e mais

1. origem, história e informações gerais

Aqui estão todas as informações necessárias relacionadas com a história, origem e caraterísticas gerais da linha de células Jurkat E6.1 e o seu manuseamento em cultura celular.

• A Jurkat E6.1 é uma linha celular de linfócitos T humanos imortalizados. Esta linha celular clonada é um derivado da linha celular Jurkat obtida a partir do sangue periférico de um rapaz de 14 anos que sofria de leucemia linfoblástica aguda em 1976. Após o isolamento do sangue, esta linha celular foi inicialmente denominada JM, uma vez que JM e Jurkat indicam que estas linhas celulares foram isoladas do mesmo doente. A linha celular Jurkat E6.1 foi clonada a partir de derivados celulares conhecidos como Jurkat-FHCRC.
• As linhas celulares E6.1 são derivadas de leucemia; estas linhas celulares são utilizadas para aumentar a expressão de IL-2 através da simulação com anticorpos monoclonais ou lectina. Expressam receptores de antigénio de células T; por conseguinte, estas linhas celulares podem ser utilizadas no estudo de doenças do sistema imunitário e na investigação imuno-oncológica.
• Morfologia celular das células Jurkat E6.1: As células Jurkat E6.1 foram isoladas de um doente com leucemia e têm uma morfologia alterada em comparação com os linfócitos T, o que as torna linhas celulares imortais. A célula linfoblástica forma-se quando os linfócitos naïves são activados pela apresentação de antigénios por células apresentadoras de antigénios. Isto resulta num aumento do crescimento do núcleo, do citoplasma, do ARNm e das proteínas.
• Tamanho da célula: As linhas de células Jurkat E6.1 são clonadas e imortalizadas, com um diâmetro que varia normalmente entre 10-16 μm (o diâmetro pode variar consoante o tipo de suspensão). Estas linhas celulares têm uma forma celular altamente esférica.
• Número do genoma e dos cromossomas: Estas linhas celulares são linhas celulares pseudodiplóides de linfócitos T humanos, com o seu cromossoma modelo, o cromossoma 46. Estes também mostram que o cromossoma modal está presente em cerca de 74% e apresenta uma taxa de poliploidia de cerca de 5,3%. Os estudos de cariótipo revelaram um cariótipo com 46, X, Y, -2, -18, del (2) (p21p23), del (18) (p11.2). Os cromossomas X e Y têm normalmente uma cópia regular na maioria das linhas celulares.
• Linhas de células Jurkat vs linhas de células Jurkat E6.1: As linhas celulares Jurkat são as linhas celulares parentais primárias isoladas pela primeira vez a partir de um doente com leucemia linfoblástica aguda. No entanto, as linhas celulares Jurkat E6.1 são derivadas clonadas das linhas celulares Jurkat-FHCRC.

3. aplicações das linhas celulares Jurkat E6.1

A linha de células Jurkat E6.1 é utilizada de forma mais proeminente na investigação e no estudo de perturbações ligadas ao sistema imunitário e aos cancros a ele associados. Além disso, tem sido adequada para o estudo de algumas complexidades relacionadas com a infeção pelo VIH, uma vez que o recetor de células T CD4 é necessário para a entrada retroviral.

Algumas áreas-chave em que estas linhas celulares são utilizadas são discutidas a seguir:

Sistema modelo para a sinalização das células T e as vias apoptóticas: Esta linha celular derivada da leucemia de células T é utilizada extensivamente na investigação que envolve a cascata de sinalização TCR. A Jurkat E6.1 liberta mais IL-2 e IL-8, que contribuem subsequentemente para a ativação das células T e desencadeiam as vias inflamatórias. Esta linha celular também é conhecida pela sua Pyk2 hiperfosforilada e pela produção aumentada de Vav1, que influencia de forma crucial a reorganização do citoesqueleto de actina nas células T. A segregação do TCR na linha celular Jurkat E6-1 também pode ser melhorada através da expressão forçada de LFA-1 que, consequentemente, aumenta a sinalização do TCR e a expressão de IL-2. Os estudos da proliferação celular e do ciclo celular também são efectuados em linhas celulares Jurkat E6.1. Estas têm sido preferidas para estudar as vias apoptóticas e a indução de danos no ADN por compostos derivados de fontes marinhas e vegetais. Um estudo realizado em 2013 avaliou o impacto do meio condicionado epigonal de tubarão nas células humanas, utilizando estas linhas celulares. Do mesmo modo, o impacto repressivo da hirsutina derivada de plantas na proliferação celular foi estudado em linhas celulares Jurkat E6.1. Muitas vezes, os estudos anticancerígenos utilizam também Jurkat E6.1 para avaliar os alvos selecionados. A influência de neurotoxinas marinhas, como as Brevetoxinas (PbTx), também foi estudada nestas linhas celulares.

Estudos sobre o VIH: Uma das aplicações mais significativas das linhas celulares Jurkat E6.1 é a sua capacidade de servir de modelo adequado para estudos sobre o VIH, devido à sua propriedade de escolher diferentes eventos de sinalização que induzem o TCA. As linhas celulares Jurkat E6.1 têm sido utilizadas não só para compreender a ativação do VIH, mas também para dissecar os mecanismos subjacentes à latência do VIH. A replicação e a infeção pelo VIH têm sido amplamente estudadas nestas linhas celulares, que podem ser sujeitas a edição e eliminação de genes, como foi feito num estudo realizado em 2021. O impacto da administração de fármacos na infeção pelo VIH, como as nanopartículas híbridas polímero-lípido (PLN) co-carregadas com efavirenz (Efa)-enfuvirtida (Enf) de ação prolongada, na entrada viral utilizou linhas celulares Jurkat E6.1. A Jurkat E6.1 com engenharia CRISPR/Cas9 foi utilizada várias vezes para estudar os mecanismos envolvidos na entrada, replicação e infeção pelo VIH.

4. publicações de investigação

Eis alguns exemplos notáveis da grande coleção de investigação, incluindo as linhas celulares Jurkat E6.1.

O metabolito de selénio metilselenol regula a expressão de ligandos que desencadeiam a ativação imunitária através do recetor de linfócitos NKG2D

Utilizando Jurkat E6.1, incubadas em diferentes compostos de selénio para estudar a expressão de ligandos e a expressão de superfície de MICA/B.

O ácido caracasina, um ent-3,4-seco-kaureno, promove a apoptose e a diferenciação celular através da inibição da via de sinalização NFkB em células de leucemia.

Compreender a citotoxicidade induzida pelo ácido caracasina em linhas de células T humanas, tais como Jurkat E6.1 e HL-60.

Evidência do desenvolvimento in vitro de resistência a fármacos à azidotimidina em linhas celulares de leucemia linfocítica T (Jurkat E6-1/AZT-100) e em doentes pediátricos com infeção por VIH-1

Utilizou Jurkat E6.1 incubadas a longo prazo com o medicamento AZT para estudar a resistência à azidotimidina (AZT) em doentes infectados com VIH-1.

Estudos da linha celular Jurkat E6.1 sobre os efeitos de alguns bio-índolos na fluidez da membrana

Esta investigação utilizou um sistema de análise de fluorescência polarizada para compreender o impacto de bio-indóis, incluindo serotonina, triptofano e melatonina, na fluidez da membrana celular em linhas celulares Jurkat E6.1.

Mecanismo molecular de indução de apoptose em células Jurkat E6-1 pelo extrato de alcalóides de Tribulus terrestris

O extrato de alcalóidesderivados do Tribulus terrestris induziu a apoptose nas células Jurkat E6.1 para compreender o mecanismo de ação subjacente.

O aumento da expressão de LFA-1 melhora a arquitetura das sinapses imunitárias e a sinalização dos receptores de células T nas células Jurkat E6.1

A sinalização do recetor de células T nas células Jurkat E6.1 foi reforçada pelo aumento da expressão de LFA-1.

5. vantagens e limitações

Tal como outras linhas celulares, a Jurkat E6.1 tem as suas vantagens e limitações.

Vantagens

Existem muitas razões pelas quais é preferida nestas aplicações:

• Modo de crescimento

  A Jurkat E6.1 é uma linha celular em suspensão e não aderente, o que significa que cresce em suspensão e não adere à superfície da cultura.

• Expressão de genes

  A linha celular Jurkat E6.1 expressa genes que codificam a interleucina-2 (IL-2) e CD3. Após estimulação com anticorpos monoclonais, lectinas ou ésteres de forbol contra o complexo antigénico T3, foi demonstrado que estas células produzem IL-2 amplificada.

• Expressão de antigénios

  A linha celular Jurkat E6.1 expressa o antigénio CD3, associado à ativação e sinalização das células T.

• Marcadores de expressão

  A linha celular expressa os marcadores do recetor do antigénio das células T (TCR), que são cruciais no reconhecimento das células T e na resposta imunitária.

• Aplicabilidade para transfecção

  A linha celular Jurkat clone E6.1 é adequada para experiências de transfecção do hospedeiro, permitindo a introdução de material genético exógeno nas células para vários fins de investigação.

Limitações

Após as vantagens, passemos às limitações associadas à utilização das linhas celulares Jurkat E6.1:

• Transfecção de células com vetor viral

  A transfecção das células Jurkat E6.1 é um desafio devido à sua origem nas células T. Normalmente, são necessários vectores virais dispendiosos e demorados para a modificação genética. Os vectores não virais demonstraram uma baixa eficiência de transfecção e uma toxicidade significativa nas células Jurkat.

• Contaminação bacteriana

  As culturas de células Jurkat E6.1 devem ser monitorizadas quanto a uma potencial contaminação bacteriana para garantir a integridade dos resultados experimentais.

• Contaminação viral

  As linhas celulares Jurkat E6.1 expressam vários receptores de quimiocinas e baixos níveis de CD4, facilitando a entrada viral. Isto torna-as susceptíveis aos vírus que infectam as células T, como o HTLV e o VIH.

6.recursos: Protocolos, vídeos e mais

Esta secção aborda os métodos e protocolos para a cultura de células e transfecção, bem como vídeos educativos relacionados com esta linha celular:

Protocolos de cultura de células

Aqui estão alguns procedimentos básicos de cultura a seguir para esta linha celular:

• POP de cultura de células, Propagação de Jurkat: A Universidade da Califórnia também disponibilizou um método no seu navegador USCS Genome para a cultura do clone Jurkat E6-1.
• Jurkat, Clone E6-1 Cultura e manuseamento: A Elabscience incluiu um protocolo de manuseamento da cultura no seu sítio de descrição do produto.

Protocolos de transfecção

Aqui está a lista dos diferentes protocolos de transfecção disponíveis:

• Protocolo de Transfecção de Células Jurkat Reagente Lipofectamine LTX: Um protocolo de transfecção de células Jurkat utilizando o Reagente Lipofectamine LTX, da ThermoFisher.
• Protocolo Amaxa™ 4D-Nucleofector™ para Jurkat clone E6.1 [ATCC®]: O Lonza Group AG forneceu o protocolo de transfecção para o clone Jurkat E6.1 da ATCC usando a unidade 4D-Nucleofector® X.

Vídeos sobre Jurkat E6.1

Existem vários vídeos excelentes que abrangem conceitos de cultura de células, procedimentos, proliferação, plaqueamento e outros tópicos.

• Passagem de células:Noções básicas de cultura de células: Este é um excelente vídeo para o guia básico de passagem de linhas de células humanas da ThermoFisher.
• Descongelamento de Células: Noções básicas de cultura de células: Este vídeo fornece instruções básicas sobre a cultura e descongelação de células pela ThermoFisher.
• Protocolo de Transfecção de ADN de Plasmídeo: Este vídeo centrou-se no protocolo de transfecção de ADN de plasmídeo com Lipofectamine® LTX e Plus™ Reagent, da ThermoFisher.
• Medir a apoptose utilizando células Jurkat em suspensão tratadas com 3 Micromolar Staurosporine: Este vídeo demonstra como realizar um ensaio de apoptose no citómetro de imagem Celigo utilizando os reagentes Hoechst e caspase 3/7 da Nexcelom Bioscience.