Linha celular HT22
A HT22 é uma linha celular neuronal murina frequentemente utilizada na investigação em neurociências. É valiosa para o estudo de doenças neurodegenerativas e para testar potenciais terapias ou tratamentos neuroprotetores. Além disso, as células HT22 são sensíveis ao glutamato, sendo, por isso, utilizadas para investigar a toxicidade induzida pelo glutamato ou danos neuronais.
- Meio de crescimento
- Utiliza-se o meio DMEM para a cultura de células HT22. Este é suplementado com 10% de FBS, 4,5 g/L de glicose, 4 mM de L-glutamina, 1,5 g/L de NaHCO3 e 1,0 mM de piruvato de sódio para um crescimento celular ideal.
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação das células HT22 é de aproximadamente 15 horas.
- Tipo de crescimento
- As células HT22 são aderentes.
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível em
- Cytion — Encomendar HT22
Este artigo destaca os aspetos essenciais das células HT22 que podem ajudá-lo no seu trabalho de investigação. Abordará principalmente:
- Atributos gerais e origem das células HT22
- Informações sobre a cultura da linha celular HT22
- Vantagens e desvantagens da linha celular HT22
- Aplicações de investigação da linha celular HT22
- Publicações de investigação que apresentam as células HT22
- Recursos para as células HT22: protocolos, vídeos e muito mais
Características gerais e origem das células HT22
Esta secção do artigo irá esclarecer a origem e as características gerais das células HT22. É necessário conhecer estas informações sobre uma linha celular antes de iniciar o trabalho com a mesma. Aqui, irá aprender: O que são as células HT22? Qual é a morfologia das células hipocampais HT22? Qual é o tamanho das células HT22?
A HT22 é uma linha celular contínua derivada da região do hipocampo do cérebro de ratinho. Trata-se de um subclone da linha celular parental HT-4, desenvolvida através da imortalização de tecidos neuronais murinos por meio do antígeno T do poliomavírus sensível à temperatura, o vírus simiano 40 (SV40).
Estas células diferem das células hipocampais maduras, uma vez que não possuem recetores de glutamato e colinérgicos, ao contrário dos neurónios maduros de origem hipocampal. Assim, não são adequadas para estudos de investigação relacionados com a memória [1].
As células HT22 têm uma aparência semelhante à das células epiteliais.
Informações sobre a cultura da linha celular HT22
As células HT22 são utilizadas em laboratórios de investigação em neurociência. Antes de cultivar estas células, os investigadores procuram informações essenciais sobre a cultura celular que tornem o seu trabalho fácil e eficiente. Esta secção abrange todos os pontos-chave para a cultura de células HT22. Irá saber: Qual é o tempo de duplicação das células HT22? Como se cultivam as células HT22? Qual é o protocolo de cultura celular HT22? Qual é o meio de cultura celular HT22?
Pontos-chave para a cultura de células HT22
Tempo de duplicação:
O tempo de duplicação das células HT22 é de aproximadamente 15 horas.
Adesivas ou em suspensão:
As células HT22 são aderentes.
Rácio de subcultivo:
A proporção de subcultivo para as células do hipocampo HT22 é de 1:3 a 1:6. Resumidamente, o meio é removido e as células aderentes são enxaguadas com PBS 1x. Adiciona-se a solução de dissociação Accutase ao frasco e as células são incubadas durante 8 a 10 minutos à temperatura ambiente. Posteriormente, adiciona-se meio de cultura fresco e as células são recolhidas num frasco para centrifugação. O sedimento celular obtido é cuidadosamente ressuspenso e as células são transferidas para um frasco de cultura para crescimento.
Meio de crescimento:
Utiliza-se meio DMEM para a cultura de células HT22. Este é suplementado com 10% de FBS, 4,5 g/L de glicose, 4 mM de L-glutamina, 1,5 g/L de NaHCO3 e 1,0 mM de piruvato de sódio para um crescimento celular ideal.
Condições de crescimento:
As culturas de células HT22 são mantidas numa incubadora humidificada (temperatura de 37 °C) com um fornecimento de 5% de CO2.
Armazenamento:
As células HT22 congeladas podem ser armazenadas a temperaturas inferiores a -150 °C, quer na fase de vapor de nitrogénio líquido, quer num congelador elétrico de temperatura ultrabaixa, para armazenamento a longo prazo.
Processo de congelação e meio:
As células HT22 podem ser congeladas em meios CM-1 ou CM-ACF utilizando um método de congelamento lento. Este processo permite apenas uma diminuição de 1 °C na temperatura da amostra por minuto, protege as células do choque e ajuda a manter a sua viabilidade.
Processo de descongelação:
As células são descongeladas num banho-maria a 37 °C durante 40 a 60 segundos, até restar um pequeno pedaço de gelo. Posteriormente, adiciona-se meio de cultura às células, que são centrifugadas para eliminar os componentes do meio de congelamento. O sedimento celular é ressuspenso e as células são transferidas para um novo frasco contendo meio de cultura. Em seguida, as células são incubadas a 37 °C numa incubadora durante pelo menos 24 horas.
Nível de biossegurança:
São obrigatórias instalações laboratoriais de nível de biossegurança 1 para a cultura de células HT22.
Vantagens e desvantagens da linha celular HT22
As células do hipocampo HT22 apresentam alguns prós e contras que as diferenciam de outras linhas celulares neuronais. Algumas vantagens e desvantagens notáveis da linha celular são mencionadas aqui.
Vantagens
As vantagens da linha celular neuronal murina HT22 são:
-
Taxa de crescimento rápida
As células HT22 têm um tempo de duplicação de 15 horas, permitindo uma experimentação rápida e eficiente e contribuindo para resultados de investigação atempados.
-
Imortalização
A HT22 é uma linha celular imortalizada, garantindo um crescimento contínuo durante longos períodos. Isto proporciona uma disponibilidade consistente de células, reduz o tempo e os custos e facilita experiências a longo prazo com resultados consistentes.
Desvantagens
As desvantagens das células HT22 são:
-
Origem murina
A linha celular HT22 foi derivada de tecido do hipocampo do cérebro de ratos, o que pode não representar totalmente a complexidade da fisiologia e do comportamento das células neuronais humanas, limitando a sua relevância translacional.
4. Aplicações de investigação da linha celular HT22
As células HT22 são amplamente utilizadas na investigação em neurobiologia. Algumas aplicações promissoras desta linha celular são discutidas nesta secção do artigo:
- Investigação em neurociência: As células HT22 são amplamente utilizadas na investigação de doenças neurodegenerativas, nomeadamente a doença de Alzheimer e a doença de Parkinson. São consideradas uma ferramenta de investigação valiosa para o estudo da neurotoxicidade e dos mecanismos de stress oxidativo relacionados com estas doenças. Uma investigação realizada em 2020 descobriu que a via PI3K/AKT/CREB está envolvida na toxicidade neural induzida pela hiperglicemia nas células HT22 [2]. Da mesma forma, um estudo recente propôs que a via Nrf2/HO-1 e o eixo de sinalização NF-κB desempenham papéis significativos na toxicidade da beta-amilóide nas células HT22 [3].
- Triagem de fármacos: as células HT22 são amplamente utilizadas para fins de teste e triagem de fármacos. Elas ajudam os investigadores a identificar potenciais agentes terapêuticos que exibam efeitos neuroprotetores para combater doenças neurodegenerativas. Um estudo realizado em 2019 explorou o potencial neuroprotetor do composto tetrahidrocurcumina em células do hipocampo HT22 tratadas com glutamato. Neste contexto, o glutamato induz o stress oxidativo nas células HT22 e provoca a morte celular através da ativação de proteínas quinases ativadas por mitógenos [4].
5. Publicações científicas que abordam as células HT22
Aqui estão alguns artigos de investigação interessantes sobre a linha celular HT22:
Este estudo publicado no International Journal of Molecular Medicine (2019) propôs o potencial neuroprotetor da crocina, um composto isolado do Crocus sativus L., nas células HT22 danificadas pelo L-glutamato.
Esta publicação na Neuropharmacology (2018) relatou que os derivados de oxindol protegem contra a morte celular das células HT22 induzida pelo stress oxidativo.
Este artigo de investigação foi publicado no Journal of Ginseng Research em 2019. Este estudo explorou os efeitos neuroprotetores de um produto natural, o ginsenosídeo Rb2, utilizando a linha celular HT22. O estudo constatou que o ginsenosídeo Rb2 reduziu eficazmente o stress oxidativo induzido pelo glutamato e a morte celular nas células HT22 do hipocampo murino.
Este estudo publicado na revista Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) avaliou o potencial citotóxico das nanopartículas de prata na linha celular HT22.
A ferrostatina-1 protege as células HT-22 da toxicidade oxidativa
Este artigo de investigação foi publicado em 2020 na revista Neural regeneration research. Propôs que a ferrostatina-1, um inibidor da ferroptose, previne a toxicidade oxidativa nas células do hipocampo HT22.
Recursos para as células HT22: protocolos, vídeos e muito mais
Alguns recursos online sobre as células HT22 explicam os seus protocolos de transfecção, diferenciação e cultura celular:
- Transfecção de HT22: Este documento contém um protocolo otimizado para a transfecção de HT22 em placas de cultura celular de 24 e 96 poços.
- Diferenciação de células HT22: Este artigo irá orientá-lo de forma abrangente sobre o protocolo de diferenciação das células HT22.
A ligação seguinte contém o protocolo de cultura celular HT22:
- Subcultivo de células HT22: Este link irá ajudá-lo a aprender o protocolo de subcultivo para a linha celular HT22. Além disso, irá ajudá-lo a aprender o protocolo para induzir neurotoxicidade nas células.
- Células do hipocampo HT22: Este site contém muita informação útil sobre o tempo de duplicação das células HT22, meios de cultura e protocolos de cultura celular.
Referências
- He, M., et al., A diferenciação torna as neurónios HT22 suscetíveis à excitotoxicidade. Neural Regen Res, 2013. 8(14): p. 1297-306.
- Zhang, S., et al., A fisetina previne a neurotoxicidade induzida por níveis elevados de glicose nas células HT22 através da via de sinalização PI3K/Akt/CREB. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: p. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Efeitos protetores da berberina contra a neurotoxicidade induzida por β-amilóide em células HT22 através da via Nrf2/HO‐1. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: p. 106-210.
- Park, C.-H., et al., Efeitos neuroprotetores da tetrahidrocurcumina contra o stress oxidativo induzido pelo glutamato em células HT22 do hipocampo. Molecules, 2019. 25(1): p. 144.