Linha celular HT22
A HT22 é uma linha de células neuronais murinas normalmente utilizada na investigação em neurociência. É útil para estudar doenças neurogenerativas e testar potenciais terapias ou tratamentos neuroprotectores. Além disso, as células HT22 são sensíveis ao glutamato, pelo que são utilizadas para investigar a toxicidade induzida pelo glutamato ou os danos neuronais.
Este artigo destaca os aspectos imperativos das células HT22 que o podem ajudar no seu trabalho de investigação. Abordará principalmente
- Atributos gerais e origem das células HT22
- Informações sobre a cultura da linha celular HT22
- Vantagens e desvantagens da linha celular HT22
- Aplicações de investigação da linha celular HT22
- Publicações de investigação sobre as células HT22
- Recursos para células HT22: Protocolos, vídeos e muito mais
1. Caraterísticas gerais e origem das células HT22
Esta secção do artigo irá esclarecer a origem e as caraterísticas gerais das células HT22. É necessário conhecer esta informação sobre uma linha celular antes de começar a trabalhar com ela. Aqui, ficará a saber: O que são as células HT22? Qual é a morfologia das células HT22 do hipocampo? Qual é o tamanho das células HT22?
A HT22 é uma linha celular contínua derivada da região do hipocampo do cérebro do rato. É um subclone da linha celular parental HT-4 desenvolvida por imortalização de tecidos neuronais murinos através de um antigénio T do poliomavírus sensível à temperatura do vírus símio 40 (SV40).
Estas células diferem das células maduras do hipocampo, uma vez que não possuem receptores de glutamato e colinérgicos, como os neurónios maduros de origem hipocampal. Assim, não são adequadas para estudos de investigação relacionados com a memória [1].
As células HT22 têm um aspeto semelhante ao das células epiteliais.
2. Informações sobre a cultura da linha celular HT22
As células HT22 são utilizadas em laboratórios de investigação em neurociências. Antes de cultivar estas células, os investigadores procuram informações essenciais sobre a cultura de células que tornem o seu trabalho mais fácil e eficiente. Esta secção abrange todos os pontos-chave para a cultura de células HT22. Ficará a saber: Qual é o tempo de duplicação das células HT22? Como é que se cultivam células HT22? Qual é o protocolo de cultura de células HT22? O que é o meio de cultura de células HT22?
Pontos-chave para a cultura de células HT22
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Tempo de duplicação: |
O tempo de duplicação das células HT22 é de aproximadamente 15 horas. |
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Aderentes ou em suspensão: |
As células HT22 são aderentes. |
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Rácio de subcultura: |
O rácio de sub-cultivo para as células do hipocampo HT22 é de 1:3 a 1:6. Em resumo, o meio é removido e as células aderentes são lavadas com 1 x PBS. A solução de dissociação de accutase é adicionada ao frasco e as células são incubadas durante 8 a 10 minutos à temperatura ambiente. Em seguida, adiciona-se um novo meio de cultura e as células são recolhidas num frasco para centrifugação. O pellet de células obtido é cuidadosamente ressuspendido e as células são distribuídas num frasco de cultura para crescimento. |
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Meio de cultura: |
O meio DMEM é utilizado para a cultura de células HT22. É suplementado com 10% de FBS, 4,5 g/L de glicose, 4 mM de L-glutamina, 1,5 g/L de NaHCO3 e 1,0 mM de piruvato de sódio para um crescimento celular ótimo. |
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Condições de crescimento: |
As culturas de células HT22 são mantidas numa incubadora humidificada (temperatura de 37 °C) com umfornecimento de 5%de CO2 . |
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Armazenamento: |
As células HT22 congeladas podem ser armazenadas a uma temperatura inferior a -150 °C, quer na fase de vapor do azoto líquido, quer num congelador elétrico de temperatura ultrabaixa a longo prazo. |
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Processo e meio de congelação: |
As células HT22 podem ser congeladas em meios CM-1 ou CM-ACF utilizando um método de congelação lenta. Este processo permite apenas uma diminuição de 1 °C na temperatura da amostra por minuto, protege as células do choque e ajuda a manter a sua viabilidade. |
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Processo de descongelação: |
As células são descongeladas num banho de água a 37 °C durante 40 a 60 segundos até que reste um pequeno aglomerado de gelo. Em seguida, adiciona-se meio de cultura às células e estas são centrifugadas para eliminar os componentes do meio de congelação. O pellet de células é ressuspenso e as células são vertidas para um novo frasco com meio de cultura. De seguida, as células são incubadas a 37 °C numa incubadora durante, pelo menos, 24 horas. |
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Nível de biossegurança: |
Os laboratórios de nível de biossegurança 1 são obrigatórios para a cultura de células HT22. |
3. Vantagens e desvantagens da linha celular HT22
As células hipocampais HT22 estão associadas a alguns prós e contras que as diferenciam de outras linhas celulares neuronais. Algumas vantagens e desvantagens notáveis da linha celular são mencionadas aqui.
Vantagens
As vantagens da linha celular neuronal murina HT22 são
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Taxa de crescimento rápido
As células HT22 têm um tempo de duplicação de 15 horas, permitindo uma experimentação rápida e eficiente e ajudando a obter resultados de investigação atempados.
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Imortalização
A HT22 é uma linha celular imortalizada, assegurando um crescimento contínuo durante períodos alargados. Isto proporciona uma disponibilidade consistente de células, reduz o tempo e o custo e facilita as experiências a longo prazo com resultados consistentes.
Desvantagens
As desvantagens das células HT22 são:
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Origem murina
A linha celular HT22 foi derivada de tecido do hipocampo do cérebro do rato, que pode não representar totalmente a complexidade da fisiologia e do comportamento das células neuronais humanas, limitando a sua relevância translacional.
4. aplicações de investigação da linha celular HT22
As células HT22 são amplamente utilizadas na investigação neurobiológica. Nesta secção do artigo, são discutidas algumas aplicações promissoras desta linha celular:
- Investigação em neurociências: As células HT22 são amplamente utilizadas na investigação de doenças neurodegenerativas, ou seja, as doenças de Alzheimer e de Parkinson. São consideradas uma ferramenta de investigação valiosa para estudar a neurotoxicidade e os mecanismos de stress oxidativo relacionados com estas doenças. Uma investigação realizada em 2020 revelou que a via PI3K/AKT/CREB está envolvida na toxicidade neural induzida pela hiperglicemia em células HT22 [2]. Do mesmo modo, um estudo recente propôs que a via Nrf2/HO-1 e o eixo de sinalização NF-κB desempenham papéis significativos na toxicidade da beta amiloide HT22 [3].
- Rastreio de medicamentos: As células HT22 são amplamente utilizadas para efeitos de ensaio e rastreio de medicamentos. Ajudam os investigadores a identificar potenciais agentes terapêuticos que exibem efeitos neuroprotectores para combater as doenças neurodegenerativas. Um estudo realizado em 2019 explorou o potencial neuroprotector do composto tetrahidro curcumina em células do hipocampo HT22 tratadas com glutamato. Neste caso, o glutamato induz o stress oxidativo nas células HT22 e causa a morte celular através da ativação de proteínas quinases activadas por mitogénio [4].
5. Publicações de investigação com células HT22
Aqui estão alguns artigos de investigação interessantes sobre a linha celular HT22:
Este estudo no International Journal of Molecular Medicine (2019) propôs o potencial neuroprotector da crocina, um composto isolado do Crocus sativus L. nascélulas HT22danificadas peloL-glutamato.
Esta publicação em Neuropharmacology (2018) relatou que os derivados de oxindole protegem contra a morte celular HT22 induzida por estresse oxidativo.
Este trabalho de investigação foi publicado no Journal of Ginseng Research em 2019. Este estudo explorou os efeitos neuroprotectores de um produto natural, o ginsenosídeo Rb2, utilizando a linha celular HT22. O estudo concluiu que o ginsenosídeo rb2 reduziu eficazmente o stress oxidativo induzido pelo glutamato e a morte celular nas células hipocampais murinas HT22.
Este estudo em Ecotoxicologia e Segurança Ambiental (2021) avaliou o potencial citotóxico das nanopartículas de prata na linha celular HT22.
Ferrostatina-1 protege as células HT-22 da toxicidade oxidativa
Este artigo de investigação foi publicado em 2020 na revista Neural regeneration research. Propôs que a ferrostatina-1, um inibidor da ferroptose, previne a toxicidade oxidativa nas células do hipocampo HT22.
6. Recursos para células HT22: Protocolos, Vídeos e Mais
Alguns recursos online sobre as células HT22 explicam os seus protocolos de transfecção, diferenciação e cultura de células:
- Transfecção de HT22: Este documento contém um protocolo optimizado para transfecção de HT22 em placas de cultura de células de 24 e 96 poços.
- Diferenciação de células HT22: Este artigo orienta-o de forma abrangente sobre o protocolo de diferenciação das células HT22.
A seguinte ligação contém o protocolo de cultura de células HT22:
- Subcultura de células HT22: Esta ligação ajudá-lo-á a aprender o protocolo de subcultura para a linha de células HT22. Além disso, ajudá-lo-á a aprender o protocolo de indução de neurotoxicidade nas células.
- Células do hipocampo HT22: Este sítio Web contém muitas informações úteis sobre o tempo de duplicação das células HT22, meios e protocolos de cultura de células.
Referências
- He, M., et al., A diferenciação torna a suscetibilidade à excitotoxicidade nos neurónios HT22. Neural Regen Res, 2013. 8(14): p. 1297-306.
- Zhang, S., et al., Fisetin previne as células HT22 da neurotoxicidade induzida por alta glicose através da via de sinalização PI3K / Akt / CREB. Fronteiras em Neurociência, 2020. 14: p. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Efeitos protetores da berberina contra a neurotoxicidade induzida por β-amiloide em células HT22 através da via Nrf2 / HO-1. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: p. 106-210.
- Park, C.-H., et al., Efeitos neuroprotetores da tetrahidrocurcumina contra o estresse oxidativo induzido pelo glutamato em células HT22 do hipocampo. Moléculas, 2019. 25(1): p. 144.