Células DLD-1: Aplicações e perspectivas das células DLD-1 na investigação do cancro colorrectal
A DLD-1 é uma linha celular de carcinoma colorrectal humano utilizada habitualmente na investigação do cancro. É uma ferramenta valiosa para investigar vários aspectos do cancro do cólon, incluindo o desenvolvimento do tumor, a progressão, os mecanismos moleculares subjacentes e a resposta a agentes terapêuticos. Assim, a DLD-1 é excelente para compreender a doença e desenvolver potenciais estratégias de tratamento.
Este artigo fornece informações importantes sobre a linha celular DLD-1 que deve conhecer antes de trabalhar com ela. Abrangerá:
- Caraterísticas gerais e origem das células DLD-1
- Informações sobre a cultura da linha celular DLD-1
- Linha celular DLD-1: Vantagens e limitações
- Aplicações de investigação da linha celular DLD-1
- Publicações de investigação sobre células DLD-1
- Recursos para a linha celular DLD-1: Protocolos, vídeos e muito mais
1. Caraterísticas gerais e origem das células DLD-1
Antes de trabalhar com uma linha celular, a primeira consideração de um investigador é a sua origem e os seus atributos gerais. Esta secção do artigo é uma introdução detalhada à linha celular DLD-1. Abordará as seguintes perguntas frequentes: O que são as células DLD-1? O que é uma linha celular de cancro DLD-1? Quais são as mutações da linha celular DLD-1? Qual é o tamanho de uma célula DLD-1? Qual é a morfologia das células DLD-1?
- A DLD-1, uma linha celular de cancro do cólon, teve origem no intestino grosso de um doente do sexo masculino de 67 anos com adenocarcinoma colorrectal. Foi isolada por D.L. Dexter e colegas em 1977-1979. Esta linha celular partilha a mesma origem com as linhas celulares HCT-8, HCT-15 e HRT-18.
- Tal como os cancros colorrectais, as células DLD-1 possuem um fenótipo de instabilidade de microssatélites [1].
- As mutações em DLD-1 incluem KRAS, P53, BRAF, BRCA1 e BRCA2. Devido ao estatuto de DLD-1 P53, à mutação DLD-1 BRCA, DLD-1 BRCA2 e DLD-1 KRAS, estas células são consideradas ideais para estudos sobre o cancro.
- Estas células possuem uma morfologia de tipo epitelial.
- O tamanho da linha de células DLD-1 é de aproximadamente 15 µm.
- A linha celular de cancro colorrectal humano DLD-1 possui um cariótipo pseudodiplóide. Cerca de 86% das células possuem um número cromossómico modal de 46. No entanto, a poliploidia pode também existir em 17,1% da população celular.
2.informações sobre a cultura da linha celular DLD-1
Antes de cultivar qualquer linha celular, é necessário conhecer os requisitos básicos da cultura de células. Esta secção destacará os pontos importantes que deve conhecer antes de começar a trabalhar com a linha celular DLD-1. Isto inclui: O que é o tempo de duplicação da DLD-1? O que é o meio de cultura DLD-1? Qual é a densidade de sementeira das células DLD-1? Como se faz a cultura de células DLD-1?
Pontos-chave para a cultura de células DLD-1
|
Tempo de duplicação: |
O tempo de duplicação de DLD-1 é de aproximadamente 15 horas. |
|
Aderente ou em suspensão: |
A DLD-1 é uma linha celular de cancro do cólon humano aderente. As células crescem em monocamadas. |
|
Densidade de sementeira: |
As células DLD-1 são semeadas a uma densidade de 1 a 2 x104 células/cm2. As células aderentes são lavadas com tampão fosfato salino (PBS) a 1x e incubadas com solução de passagem (Accutase) à temperatura ambiente. Após uma incubação de 8 a 10 minutos, as células desprendidas são adicionadas ao meio de cultura e centrifugadas. O pellet de células é então cuidadosamente ressuspendido e as células são vertidas para novos recipientes de cultura contendo meio de crescimento. |
|
Meio de cultura: |
Para a cultura de células DLD-1, utiliza-se RPMI 1640 com suplementos de meio, incluindo 10% de soro fetal bovino FBS, 2,1 mM de glutamina estável e 2,0 g/L NaHCO3. O meio deve ser substituído 2-3 vezes por semana. |
|
Condições de crescimento: |
As culturas de DLD-1 são mantidas numa incubadora humidificada a 37°C com um fornecimento de 5% de CO2. |
|
Armazenamento: |
As células DLD-1 são armazenadas na fase de vapor do azoto líquido ou num congelador elétrico de temperatura ultrabaixa (a uma temperatura inferior a -150°C). |
|
Processo e meio de congelação: |
Os meios de congelação CM-1 ou CM-ACF podem ser utilizados para congelar as células DLD-1. Recomenda-se sempre um processo de congelação lento, que permita uma diminuição gradual da temperatura de 1°C, evitando assim o choque das células e protegendo a sua viabilidade. |
|
Processo de descongelação: |
As células congeladas são descongeladas num banho de água pré-ajustado a uma temperatura de 37 °C durante 40 a 60 segundos, até que reste um pequeno aglomerado de gelo. Em seguida, as células são adicionadas a um meio fresco e centrifugadas. Este passo é necessário para remover das células os componentes do meio de congelação. As células recolhidas são ressuspensas num meio de crescimento e colocadas no frasco para crescimento. |
|
Nível de biossegurança: |
A linha de células DLD-1 é mantida nos laboratórios de nível de biossegurança 1. |
3.linha celular DLD-1: Vantagens e limitações
Nesta secção do artigo, vamos analisar as vantagens e limitações da linha celular de cancro do cólon DLD-1.
Vantagens
As principais vantagens da linha celular DLD-1 são
|
Modelo de cancro colorrectal |
As células DLD-1 possuem mutações frequentemente encontradas em doentes com cancro colorrectal, tais como a mutação KRAS da DLD-1, BRCA da DLD-1 e BRCA2 da DLD-1. Esta relevância torna-as um modelo celular clinicamente adequado para o estudo desta doença. |
|
Linha celular tumorigénica |
As células DLD-1 são tumorigénicas. Podem causar tumores quando injectadas em ratinhos nus. Por conseguinte, os investigadores utilizam estas células para desenvolver modelos de tumores xenoenxertados que ajudam a investigar a formação, o desenvolvimento e a progressão de tumores in vivo. |
Limitações
As limitações associadas às células DLD-1 são as seguintes
|
Heterogeneidade |
As populações de células de cancro do cólon DLD-1 apresentam heterogeneidade genética e fenotípica. Este facto pode influenciar a generalização dos resultados da investigação. |
4.aplicações de investigação da linha celular DLD-1
A linha celular DLD-1 oferece uma série de aplicações na investigação do cancro. Nesta secção, são analisadas algumas das aplicações mais importantes.
- Estudo do cancro: As células DLD-1 constituem um modelo in vitro valioso para compreender os mecanismos moleculares subjacentes ao crescimento, desenvolvimento e progressão do cancro colorrectal. Além disso, são utilizadas para estudar a expressão dos genes, as vias de sinalização e a influência de mutações genéticas específicas no comportamento das células cancerosas. Uma investigação realizada em 2022 observou que a cascata de sinalização PI3K/Akt/YAP regula a migração e a invasão da linha celular de cancro colorrectal DLD-1 [2].
- Desenvolvimento de medicamentos: Os investigadores utilizam a linha celular DLD-1 para testar a eficácia dos medicamentos anticancerígenos e avaliar o seu potencial para o tratamento do cancro do cólon. Isto ajuda no desenvolvimento de medicamentos e no combate eficaz à doença. Um estudo realizado em 2022 utilizou a linha celular de cancro DLD-1 e explorou a atividade anticancerígena das ftalocianinas de silício, compostos sintetizados quimicamente. Os resultados do estudo sugeriram esses compostos como potentes agentes anticâncer [3]. Curiosamente, outra pesquisa encontrou o potencial anticâncer de uma proteína P8 derivada de probiótico usando células DLD-1 [4].
5.publicações de investigação sobre células DLD-1
Esta secção destaca algumas publicações interessantes e frequentemente citadas sobre a linha celular de carcinoma do cólon DLD-1.
Esta publicação encontra-se no Journal of Biologically Active Products da Nature (2022). O estudo descobriu que a diosmina, um flavonoide, induziu a morte celular nas células DLD-1 e também causou a paragem do ciclo celular; assim, pode ser um potencial agente anticancerígeno.
A bromelaína suprime eficazmente o cancro colorrectal Kras-mutante estimulando a ferroptose
Este estudo em Animal Cells and Systems (2018) propôs que a bromelaína, uma enzima, reprime a mutação DLD-1 KRAS e exerce efeitos citotóxicos potentes.
Este artigo de investigação foi publicado em 2019 na revista "Environmental Toxicology". O estudo explorou os efeitos antitumorais de um composto natural, Bergapten, utilizando uma linha celular corectal DLD-1.
Este estudo publicado no Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials (2023) concluiu que os nanocompósitos de curcumina/óxido de ferro são altamente eficazes contra as células de cancro colorrectal DLD-1.
Este artigo de investigação foi publicado em 2020 no Turkish Journal of Biology. O estudo propôs que um produto natural, a ativação de AKT mediada por epibrassinolida em células DLD-1, estimula a autofagia relacionada com poliaminas.
6.recursos para a linha de células DLD-1: Protocolos, vídeos e muito mais
Seguem-se alguns recursos sobre as células DLD-1:
- Transfecção de DLD-1: Este tutorial em vídeo é um guia completo sobre o protocolo de transfecção in vitro de DLD-1.
- Células DLD-1: Este artigo de investigação descreve sucintamente os requisitos da cultura de células DLD-1, incluindo meios e condições de cultura. Além disso, pode ajudá-lo a aprender o protocolo de transfecção utilizado para as células DLD-1.
As ligações seguintes contêm o protocolo de cultura de células DLD-1, células de cancro do cólon derivadas de seres humanos.
- Linha celular DLD-1: Este sítio Web fornece informações básicas sobre a linha celular DLD-1. Ajudá-lo-á a aprender diferentes protocolos de cultura de células DLD-1, incluindo subcultura e manuseamento de culturas criopreservadas e em proliferação.
Referências
- Gavrilas, L.I., et al., Genes pró-apoptóticos como novos alvos para tratamentos únicos e combinatórios com resveratrol e curcumina no cancro colorretal. Food & function, 2019. 10(6): p. 3717-3726.
- Takeda, T., et al., A sinalização PI3K / Akt / YAP promove a migração e invasão decélulas de câncer colorretal DLD-1. Oncology Letters, 2022. 23(4): p. 1-9.
- Farajzadeh, N., et al., Atividade anticâncer de novas ftalocianinas de silício contra a linha celular de adenocarcinoma colorretal (DLD-1). Novo Jornal de Química, 2022. 46(41): p. 19863-19873.
- An, BC, et al., Funções anticancerígenas da proteína P8 derivada de probióticos na linha celular de câncer colorretal DLD-1. Revista Internacional de Ciências Moleculares, 2023. 24(12): p. 9857.