Células DLD-1: Aplicações e perspetivas das células DLD-1 na investigação do cancro colorretal
A DLD-1 é uma linha celular de carcinoma colorretal humano comumente utilizada na investigação do cancro. É uma ferramenta valiosa para investigar vários aspetos do cancro do cólon, incluindo o desenvolvimento do tumor, a progressão, os mecanismos moleculares subjacentes e a resposta a agentes terapêuticos. Assim, a DLD-1 é fundamental para a compreensão da doença e o desenvolvimento de potenciais estratégias de tratamento.
- Meio de crescimento
- Utiliza-se RPMI 1640 com suplementos de meio, incluindo 10% de soro fetal bovino (FBS), 2,1 mM de glutamina estável e 2,0 g/L de NaHCO3 para cultivar células DLD-1. O meio deve ser substituído 2 a 3 vezes por semana.
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação da DLD-1 é de aproximadamente 15 horas.
- Tipo de crescimento
- A DLD-1 é uma linha celular aderente de cancro do cólon humano. As células crescem em monocamadas.
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível em
- Cytion — Encomendar DLD-1
- Características gerais e origem das células DLD-1
- Informações sobre a cultura da linha celular DLD-1
- Linha celular DLD-1: Vantagens e limitações
- Aplicações de investigação da linha celular DLD-1
- 5. Publicações de investigação sobre as células DLD-1
- Recursos para a linha celular DLD-1: protocolos, vídeos e muito mais
- Perguntas frequentes
Características gerais e origem das células DLD-1
Antes de trabalhar com uma linha celular, a primeira consideração de um investigador é a sua origem e atributos gerais. Esta secção do artigo é uma introdução detalhada à linha celular DLD-1. Abordará as seguintes perguntas frequentes: O que são as células DLD-1? O que é uma linha celular cancerígena DLD-1? Quais são as mutações da linha celular DLD-1? Qual é o tamanho de uma célula DLD-1? Qual é a morfologia das células DLD-1?
- A DLD-1, uma linha celular de cancro do cólon, teve origem no intestino grosso de um doente do sexo masculino de 67 anos com adenocarcinoma colorretal. Foi isolada por D.L. Dexter e colegas entre 1977 e 1979. Esta linha celular partilha a mesma origem com as linhas celulares HCT-8, HCT-15 e HRT-18.
- Tal como os cancros colorretais, as células DLD-1 apresentam um fenótipo de instabilidade de microssatélites [1].
- As mutações da DLD-1 incluem KRAS, P53, BRAF, BRCA1 e BRCA2. Devido ao estado do P53 na DLD-1, bem como às mutações BRCA, BRCA2 e KRAS na DLD-1, estas células são consideradas ideais para estudos sobre o cancro.
- Estas células possuem uma morfologia de tipo epitelial.
- O tamanho da linha celular DLD-1 é de aproximadamente 15 µm.
- A linha celular de cancro colorretal humano DLD-1 possui um cariótipo pseudodiploide. Cerca de 86% das células possuem um número modal de cromossomas de 46. No entanto, a poliploidia também pode existir em 17,1% da população celular.
Informações sobre a cultura da linha celular DLD-1
Antes de cultivar qualquer linha celular, é necessário conhecer os seus requisitos básicos de cultura celular. Esta secção irá destacar os pontos importantes que deve conhecer antes de iniciar o trabalho com a linha celular DLD-1. Isto inclui: Qual é o tempo de duplicação da DLD-1? Qual é o meio de cultura DLD-1? Qual é a densidade de sementeira das células DLD-1? Como se cultivam as células DLD-1?
Pontos-chave para a cultura de células DLD-1
Tempo de duplicação:
O tempo de duplicação da DLD-1 é de aproximadamente 15 horas.
Adereentes ou em suspensão:
A DLD-1 é uma linha celular aderente de cancro do cólon humano. As células crescem em monocamadas.
Densidade de sementeira:
As células DLD-1 são semeadas a uma densidade de 1 a 2 x 10⁴ células/cm². As células aderentes são lavadas com solução salina tamponada com fosfato (PBS) 1x e incubadas com solução de passagem (Accutase) à temperatura ambiente. Após uma incubação de 8 a 10 minutos, as células desprendidas são adicionadas ao meio de cultura e centrifugadas. O sedimento celular é então cuidadosamente ressuspenso e as células são transferidas para novos recipientes de cultura contendo meio de crescimento.
Meio de crescimento:
Utiliza-se RPMI 1640 com suplementos de meio, incluindo 10% de soro fetal bovino (FBS), 2,1 mM de glutamina estável e 2,0 g/L de NaHCO3 para cultivar células DLD-1. Os meios devem ser substituídos 2 a 3 vezes por semana.
Condições de crescimento:
As culturas de DLD-1 são mantidas numa incubadora humidificada a 37 °C com um fornecimento de 5% de CO2.
Armazenamento:
As células DLD-1 são armazenadas na fase de vapor de nitrogénio líquido ou num congelador elétrico de temperatura ultrabaixa (a uma temperatura inferior a -150 °C).
Processo de congelação e meio:
Podem ser utilizados meios de congelamento CM-1 ou CM-ACF para congelar as células DLD-1. Recomenda-se sempre um processo de congelamento lento, permitindo uma diminuição gradual da temperatura de 1 °C, evitando assim o choque nas células e protegendo a sua viabilidade.
Processo de descongelação:
As células congeladas são descongeladas num banho-maria pré-ajustado a uma temperatura de 37 °C durante 40 a 60 segundos, até restar apenas um pequeno pedaço de gelo. Posteriormente, as células são adicionadas a um meio fresco e centrifugadas. Este passo é necessário para remover os componentes do meio de congelamento das células. As células recolhidas são ressuspensas num meio de crescimento e dispensadas no frasco para crescimento.
Nível de biossegurança:
A linha celular DLD-1 é mantida em laboratórios de nível de biossegurança 1.
Linha celular DLD-1: Vantagens e limitações
Nesta secção do artigo, iremos analisar as vantagens e limitações da linha celular DLD-1 do cancro do cólon.
Vantagens
As principais vantagens da linha celular DLD-1 são:
Modelo de cancro colorretal
As células DLD-1 possuem mutações comumente encontradas em doentes com cancro colorretal, tais como a mutação DLD-1 KRAS, DLD-1 BRCA e DLD-1 BRCA2. Esta relevância torna-as um modelo celular clinicamente adequado para o estudo desta doença.
Linha Celular Tumorigénica
As células DLD-1 são tumorigénicas. Podem causar tumores quando injetadas em ratos nude. Por conseguinte, os investigadores utilizam estas células para desenvolver modelos de tumores por xenoenxerto que ajudam a investigar a formação, o desenvolvimento e a progressão do tumor in vivo.
Limitações
As limitações associadas às células DLD-1 são:
Heterogeneidade
As populações de células de cancro do cólon DLD-1 apresentam heterogeneidade genética e fenotípica. Isto pode influenciar a generalização dos resultados da investigação.
Aplicações de investigação da linha celular DLD-1
A linha celular DLD-1 oferece uma variedade de aplicações na investigação do cancro. Algumas aplicações proeminentes são discutidas nesta secção.
- Estudo do cancro: As células DLD-1 servem como um valioso modelo in vitro para compreender os mecanismos moleculares subjacentes ao crescimento, desenvolvimento e progressão do cancro colorretal. Além disso, são utilizadas para estudar a expressão genética, as vias de sinalização e a influência de mutações genéticas específicas no comportamento das células cancerígenas. Uma investigação realizada em 2022 observou que a cascata de sinalização PI3K/Akt/YAP regula a migração e a invasão da linha celular de cancro colorretal DLD-1 [2].
- Desenvolvimento de medicamentos: Os investigadores utilizam a linha celular DLD-1 para testar a eficácia de medicamentos anticancerígenos e avaliar o seu potencial no tratamento do cancro do cólon. Isto contribui para o desenvolvimento de medicamentos e para o combate eficaz à doença. Um estudo realizado em 2022 utilizou a linha celular de cancro DLD-1 e explorou a atividade anticancerígena das ftalocianinas de silício, compostos sintetizados quimicamente. Os resultados do estudo sugeriram que estes compostos são potentes agentes anticancerígenos [3]. Curiosamente, outra investigação descobriu o potencial anticancerígeno de uma proteína P8 derivada de probióticos utilizando células DLD-1 [4].
5. Publicações científicas sobre as células DLD-1
Esta secção irá destacar algumas publicações interessantes e frequentemente citadas que abordam a linha celular de carcinoma do cólon DLD-1.
Esta publicação encontra-se no Journal of Biologically Active Products from Nature (2022). O estudo descobriu que a diosmina, um flavonoide, induziu a morte celular nas células DLD-1 e também causou a paragem do ciclo celular; assim, pode ser um potencial agente anticancerígeno.
Este estudo publicado na revista Animal Cells and Systems (2018) propôs que a bromelaína, uma enzima, reprime a mutação KRAS na DLD-1 e exerce efeitos citotóxicos potentes.
Este artigo de investigação foi publicado em 2019 na revista “Environmental Toxicology”. O estudo explorou os efeitos antitumorais de um composto natural, o bergapteno, utilizando uma linha celular colorretal DLD-1.
Este estudo publicado no Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials (2023) concluiu que os nanocompósitos de curcumina/óxido de ferro são altamente eficazes contra as células cancerígenas colorretais DLD-1.
Este artigo de investigação foi publicado em 2020 no Turkish Journal of Biology. O estudo propôs que um produto natural, a ativação da AKT mediada pela epibrassinolida em células DLD-1, estimula a autofagia relacionada com as poliaminas.
Recursos para a linha celular DLD-1: protocolos, vídeos e muito mais
Seguem-se alguns recursos sobre as células DLD-1:
- Transfecção de DLD-1: Este tutorial em vídeo é um guia abrangente sobre o protocolo de transfecção in vitro de DLD-1.
- Células DLD-1: Este artigo de investigação descreve sucintamente os requisitos de cultura celular DLD-1, incluindo meios e condições de cultura. Além disso, pode ajudá-lo a aprender o protocolo de transfecção utilizado para as células DLD-1.
Os links a seguir contêm o protocolo para a cultura de DLD-1, células de cancro do cólon derivadas de humanos.
- Linha celular DLD-1: Este site fornece informações básicas sobre a linha celular DLD-1. Ajudá-lo-á a aprender diferentes protocolos de cultura de células DLD-1, incluindo subcultura e manuseamento de culturas criopreservadas e em proliferação.
Referências
- Gavrilas, L.I., et al., Genes pró-apoptóticos como novos alvos para tratamentos únicos e combinatórios com resveratrol e curcumina no cancro colorretal. Food & function, 2019. 10(6): p. 3717-3726.
- Takeda, T., et al., A sinalização PI3K/Akt/YAP promove a migração e invasão de células de cancro colorretal DLD-1. Oncology Letters, 2022. 23(4): p. 1-9.
- Farajzadeh, N., et al., Atividade anticancerígena de novas ftalocianinas de silício contra a linha celular de adenocarcinoma colorretal (DLD-1). New Journal of Chemistry, 2022. 46(41): p. 19863-19873.
- An, B.C., et al., Papéis anticancerígenos da proteína P8 derivada de probióticos na linha celular de cancro colorretal DLD-1. International Journal of Molecular Sciences, 2023. 24(12): p. 9857.