Células COS-1: Um cavalo de batalha celular em estudos de expressão génica

A linha celular COS-1 é uma célula semelhante a um fibroblasto que tem origem no tecido renal de um macaco e é frequentemente utilizada pelos investigadores para investigar o vírus do macaco, SV40. Estas células são facilmente transfectadas e frequentemente utilizadas para criar proteínas recombinantes para várias experiências bioquímicas, moleculares e de biologia celular.

Este artigo fornecerá detalhes abrangentes sobre a linha celular COS-1, cobrindo todas as informações essenciais de que necessita. Especificamente, obterá conhecimentos sobre o seguinte:

  1. Linha celular COS-1: Origem e informações gerais.
  2. Prós e contras das células COS-1
  3. Aplicações de investigação das células COS-1
  4. Células COS-1: Publicações
  5. Recursos para a linha de células COS-1, incluindo protocolos, vídeos e muito mais
  6. Cultura de células COS-1

1.linha celular COS-1: Origem e informações gerais.

Antes de iniciar qualquer trabalho com uma linha celular, é essencial ter uma compreensão fundamental da própria linha celular. Isto inclui informações como a origem das células, como foram isoladas e as suas caraterísticas. Nesta secção, vamos aprofundar os conceitos básicos das células COS-1.

O que é a linha celular COS-1?

A linha celular COS-1 inclui células semelhantes a fibroblastos que J.W.F. Cowell e colegas criaram pela primeira vez em 1981. Estas células foram geradas através da transformação de uma linha de células epiteliais de macaco verde conhecida como CV-1 com uma forma mutante do vírus símio SV40. Subsequentemente, a linha celular COS-1 estabelecida foi caracterizada minuciosamente para restaurar a região do genoma do SV40 que tinha sido previamente eliminada da origem da replicação. Estas células expressam antigénios T grandes e outras proteínas necessárias para replicar corretamente genomas circulares, como os plasmídeos.

Chlorocebus aethiops (macaco verde africano)

As células COS-1 têm uma morfologia semelhante à dos fibroblastos e aderem a superfícies, espalhando-se como uma monocamada. Atualmente, não se conhecem variantes genéticas da linha celular COS-1. No entanto, uma linha celular relacionada, a COS-7, também teve origem nas células CV-1 e apresenta caraterísticas semelhantes.

2.prós e contras das células COS-1

A linha celular COS-1 tem vantagens e limitações únicas, que discutiremos de seguida.

Vantagens

  • Facilidade de transfecção: A linha de células COS-1 é facilmente transfectada através de vários métodos, incluindo abordagens físicas e químicas.
  • Produção de lentivírus: A linha celular COS-1 é um hospedeiro de embalagem adequado para a produção de partículas de lentivírus recombinantes de alta qualidade sem etapas adicionais de purificação. Estas células aderem firmemente a superfícies de plástico, o que evita a contaminação dos sobrenadantes de transfecção que contêm partículas virais [1].
  • Expressão génica: A linha celular COS-1 é amplamente utilizada para estudos de análise da expressão transiente e estável, produzindo muitas proteínas recombinantes através da transfecção com plasmídeos circulares contendo a origem de replicação SV40 [2].

Limitações

  • Linha celular não humana: Como as células COS-1 são originárias de primatas não humanos, as proteínas recombinantes produzidas por esta linha celular são apenas adequadas para experiências laboratoriais e não podem ser recomendadas para uso humano.

3.aplicações de investigação das células COS-1

Uma das considerações mais importantes quando se discute uma linha celular é a sua aplicação na investigação. Esta secção explorará as aplicações de investigação mais proeminentes das células COS-1.

  • Produção de proteínas recombinantes: A linha celular COS-1 é amplamente utilizada para a produção de proteínas recombinantes através da transfecção transitória ou estável de vectores circulares que contêm a origem de replicação SV40. Num estudo recente, os biólogos utilizaram a linha celular COS-1 para produzir gonadotropina coriónica equina, uma hormona reprodutora recombinante para aplicações reprodutivas [3]. Do mesmo modo, outro estudo utilizou células COS-1 para produzir um anticorpo monoclonal recombinante de galinha contra um tipo específico de vírus da gripe [4].
  • Produção de partículas de tipo viral: As células COS-1 servem como hospedeiros de embalagem para a produção de lentivírus de alta qualidade e podem ser utilizadas para gerar vacinas virais. Um estudo utilizou a linha celular COS-1 para produzir partículas semelhantes ao vírus da dengue não infecciosas mas altamente imunogénicas, que são candidatos eficazes a vacinas [5].

4.células COS-1: Publicações

Algumas publicações notáveis sobre as células COS-1 são:

Células COS-1 em confluência alta e baixa

5.recursos para a linha de células COS-1, incluindo protocolos, vídeos e muito mais

Protocolos de cultura de células

  • Cultura de células COS-1: Esta ligação contém informações valiosas sobre a divisão, congelação e descongelação de células COS-1.
  • Células COS-1: Esta ligação contém informações básicas sobre a linha de células COS-1.

Protocolos de transfecção

Aqui estão algumas fontes que descrevem o método de transfecção para células COS-1.

Vídeos relacionados com a linha de células COS-1

Os seguintes recursos de vídeo podem ajudar a obter informações gerais sobre a cultura, manutenção e transfecção de células COS-1.

6.cultivo de células COS-1

Caraterísticas

Informação

Tempo de duplicação

Aproximadamente 48 horas

Aderente ou em suspensão

Aderente cresce como uma monocamada na superfície do frasco de cultura

Densidade de sementeira

2 a 4 x 10^4 células/cm²; as células aderentes são lavadas com 1x PBS, tratadas com Accutase, centrifugadas, ressuspendidas e distribuídas num novo frasco

Meio de crescimento

Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) com 10% de FBS; o meio deve ser substituído 2 a 3 vezes por semana

Condições de crescimento (temperatura, CO2)

Necessita de uma incubadora humidificada com 5% de CO2 e 37°C de temperatura

Armazenamento

Temperatura inferior a -150°C na fase de vapor do azoto líquido

Processo e meio de congelação

Um método de congelação lenta com uma diminuição de temperatura de apenas 1 °C utilizando meios CM-1 ou CM-ACF

Processo de descongelação

Descongelar as células congeladas incubando-as num banho de água a 37°C durante 40-60 segundos com agitação rápida. Centrifugar as células para remover o meio de congelação, ressuspender o pellet e distribuir num frasco de cultura com meio fresco. A adesão demora aproximadamente 24 horas.

Nível de biossegurança

Recomenda-se o nível de biossegurança 1 para o manuseamento de células COS-1

Esperamos que este artigo tenha fornecido uma grande quantidade de informação para o ajudar a começar a trabalhar com células COS-1. Encomende-nos se pretender utilizar esta linha celular no seu estudo de investigação.

Referências

  1. Smith, S.L. e T. Shioda, Advantages of COS-1 monkey kidney epithelial cells as packaging host for small-volume production of high-quality recombinant lentiviruses. Journal of virological methods, 2009. 157(1): p. 47-54.
  2. MacKenzie, C.J. e T. Shioda, COS-1Cells as Packaging Host for Production of Lentiviruses. Protocolos actuais em biologia celular, 2011. 50(1): p. 26.7. 1-26.7. 15.
  3. Bhardwaj, A., et al., Análise da expressão da gonadotropina coriónica equina recombinante em três sistemas hospedeiros: E. coli BL21C, lisado de células de inseto Sf e células de mamífero COS-1. Jornal Indiano de Investigação Animal, 2021. 55(1): p. 40-45.
  4. Wang, F., et al., Geração de um anticorpo monoclonal recombinante de galinha contra a neuraminidase do vírus da gripe aviária H9N2. AMB Express, 2020. 10: p. 1-7.
  5. Galula, J.U., G.-J.J. Chang, e D.-Y. Chao, Produção e purificação de partículas semelhantes ao vírus da dengue a partir de células COS-1. Bio-protocolo, 2019. 9(12): p. e3280-e3280.

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