Células BV2 - Investigação do Sistema Nervoso Central Explicada com Células Microgliais BV2
A BV2 é uma linha de células microgliais derivadas do rato, amplamente utilizada na investigação em neurociência. Esta linha celular imortalizada pode servir de modelo in vitro para estudar doenças neurodegenerativas e condições e processos celulares associados, ou seja, neuroinflamação. Para além disso, as células BV2 são consideradas um sistema modelo alternativo para a microglia primária.
Este artigo abordará a origem, informações sobre a cultura de células e aplicações de investigação de uma linha de células microgliais de ratinho, a BV2. Em particular, abordaremos o seguinte:
- Origem e caraterísticas gerais das células BV2
- Linha celular BV2: Informações sobre a cultura
- Vantagens e limitações das células BV2
- Aplicações da linha celular BV2 na investigação
- Células BV2: Publicações de investigação
- Recursos para a linha de células BV2: Protocolos, vídeos e muito mais
1. Origem e caraterísticas gerais das células BV2
Esta secção do artigo explica a origem da linha de células BV2 e as caraterísticas gerais que a distinguem de outras linhas de células microgliais. Aqui, irá estudar: O que são as células BV2? De onde vêm as células BV2? Qual é o tamanho de uma célula BV2?
- A linha de células microgliais BV2 foi obtida a partir da microglia de recém-nascidos C57/BL6. A linha de células foi imortalizada através da infeção de células com o retrovírus J2 portador do oncogene v-raf/v-myc [1].
- As células BV2 não estimuladas possuem uma morfologia hipertrofiada, semelhante a uma ameba. Esta morfologia revela um estado altamente ativado e inflamatório das células BV2 em comparação com a microglia primária [2].
- O diâmetro registado para a linha de células BV-2 varia entre 10 e 15 μm.
Linha celular BV2 Vs ECO 2
Ambas são linhas de células microgliais de ratinho, mas distintas uma da outra. A principal diferença reside no facto de a BV2 ter sido imortalizada por manipulação genética, enquanto a ECO 2 foi imortalizada espontaneamente. Além disso, a ECO 2 possui as mesmas caraterísticas gerais que a BV2, mas requer a suplementação do fator estimulador de colónias-1 (CSF-1) para a sua cultura.
2.linha celular BV2: Informações sobre a cultura
Antes de manusear e manter uma cultura de linha celular, a informação sobre a cultura de células é crucial. Esta secção do artigo irá ajudá-lo a conhecer todos os pontos-chave para a cultura de linhas celulares BV2. Em particular, falaremos sobre o seguinte: Qual é o tempo de duplicação da BV2? Que meios são utilizados para cultivar células BV2? A linha de células BV2 é aderente ou em suspensão? Como é que se descongelam as células BV2?
Pontos-chave para a cultura de células BV2
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Tempo de duplicação: |
As células microgliais BV2 crescem muito rapidamente, com um tempo médio de duplicação das células BV2 de 34,5 horas. |
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Aderente ou em suspensão: |
A BV2 é uma linha celular aderente. |
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Rácio de divisão: |
Esta linha de células microgliais aderentes é subcultivada num rácio de divisão de 1:2 a 1:4. As células são lavadas com PBS e incubadas com Accutase (solução de dissociação). Após 10 minutos, são centrifugadas e colhidas. Estas células são então adicionadas a novos frascos de meios de crescimento de acordo com a proporção de divisão recomendada. |
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Meio de crescimento: |
O meio RPMI 1640 é utilizado para a cultura da linha de células BV2. O meio RPMI BV2 é suplementado com 10% de FBS, 2,0 mM de glutamina estável, 2,0 g/L NaHCO3 para um crescimento celular ideal. O meio é renovado 2 a 3 vezes por semana. |
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Condições de crescimento: |
As culturas de BV2 são mantidas numa incubadora humidificada a 37°C com um fornecimento contínuo de 5% de CO2. |
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Armazenamento: |
Os frascos de células BV2 congeladas são mantidos a uma temperatura inferior a -150 °C, quer na fase de vapor do azoto líquido, quer num congelador elétrico. |
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Processo e meio de congelação: |
Os meios de congelação CM-1 ou CM-ACF são recomendados para as linhas celulares BV2. As células são congeladas utilizando um processo de congelação lento que permite apenas uma queda de temperatura de 1°C por minuto para manter a viabilidade celular. |
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Processo de descongelação: |
O frasco de células BV2 congeladas é rapidamente agitado num banho de água (37°C) durante 40 a 60 segundos até ficar um pequeno aglomerado de gelo. As células descongeladas são adicionadas ao meio de cultura fresco e centrifugadas para eliminar os componentes do meio de congelação. As células recolhidas são novamente ressuspensas e colocadas num frasco de cultura para crescimento. |
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Nível de biossegurança: |
Recomenda-se o nível de biossegurança 1 para a cultura da linha de células BV2. |
3.vantagens e limitações das células BV2
Tal como outras linhas celulares, as células BV2 também estão associadas a algumas vantagens e limitações. Algumas delas são aqui mencionadas.
Vantagens
As vantagens da linha de células BV2 incluem
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Caraterísticas semelhantes às da microglia primária |
As células BV2 possuem algumas caraterísticas primárias semelhantes às da microglia e são utilizadas como modelo alternativo para estudar as funções e respostas da microglia. Expressam F4/80, CD11b e Iba1, que são biomarcadores essenciais da microglia primária. |
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Imortalização |
As células BV2 são imortalizadas, o que lhes permite um crescimento contínuo. Esta caraterística torna-as ideais para experiências de cultura de células a longo prazo. |
Limitações
As limitações associadas às células BV2 são
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Linha celular de origem murina |
A linha celular BV2 é derivada da microglia do rato. Os resultados da investigação utilizando células BV2 podem ter uma aplicabilidade limitada a doenças e investigação específicas do ser humano. |
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Modelo in vitro |
As células BV2 servem de modelo in vitro para o estudo das funções microgliais. No entanto, é importante notar que podem não reproduzir totalmente as caraterísticas e a complexidade das células microgliais no cérebro in vivo. |
4.aplicações da linha celular BV2 na investigação
A linha celular BV2 oferece várias aplicações na investigação em neurociências. Nesta secção, são mencionadas algumas utilizações comuns das células BV2 na investigação.
Investigação de doenças neurodegenerativas: A linha celular microglial murina BV2 é um instrumento de investigação valioso para estudar doenças neurodegenerativas como a doença de Parkinson, a doença de Alzheimer e a esclerose múltipla. Os investigadores estudaram a neurotoxicidade e a patologia das doenças e avaliaram agentes terapêuticos utilizando linhas celulares BV2. Por exemplo, um estudo realizado em 2020 avaliou o efeito anti-inflamatório e neuroprotector de um hidroxistilbeno natural, a raponticina, presente na planta Rheum rhaponticum, utilizando células BV2 activadas por lipopolissacarídeos como modelo da doença de Parkinson. O composto atenua a ativação das células BV2 mediada por lipopolissacarídeos (LPS), inibindo a óxido nítrico sintase e reduzindo as espécies reactivas de oxigénio e os mediadores pró-inflamatórios. Resumidamente, a raponticina exerce efeitos anti-inflamatórios e neuroprotectores no modelo microglial induzido por LPS (BV2) [3]. Do mesmo modo, um estudo investigou o envolvimento das vias de sinalização na neuroinflamação. Os investigadores desenvolveram um modelo de inflamação através da ativação do BV2 mediada por lipopolissacarídeos. Verificaram que o eixo de sinalização AKT/Nrf-2/HO-1-NF-κB está envolvido na neuroinflamação. Além disso, avaliaram também a beta-naftoflavona (BNF), um flavonoide natural, quanto aos seus efeitos anti-inflamatórios e neuroprotectores, utilizando este modelo. O composto exerceu estes efeitos terapêuticos através da inibição da ativação do BV2 [4]. Do mesmo modo, a investigação utilizou células BV2 e estudou o efeito benéfico do fármaco zonisamida na disfunção mitocondrial das células microgliais. Os resultados deste estudo apoiam a utilização clínica da zonisamida no tratamento da doença de Parkinson [5].
5.células BV2: Publicações de investigação
Seguem-se alguns estudos de investigação interessantes e mais citados sobre as células BV2.
Esta investigação foi publicada no Journal of Alzheimer's Disease (2015). O estudo propôs que a molécula de mtDNA derivada do dano mitocondrial DAMP (padrão molecular associado ao dano) pode causar alterações inflamatórias nas células microgliais (BV2). Assim, podem também contribuir para a neuroinflamação da doença de Alzheimer.
Este artigo publicado em FARMACIA (2021) usou células BV2 e determinou o efeito terapêutico da Decocção Huanglian Jiedu (HLJDD) na doença de Alzheimer. O estudo descobriu que o HLJDD promove a fagocitose de beta amiloide BV2 aumentando a expressão da proteína Trm2, conforme validado por meio da análise de western blot BV2.
A alfa-sinucleína ativa a microglia BV2 em função do seu estado de agregação
Este artigo de investigação publicado na Biochemical and Biophysical Research Communications (2016) propôs que a alfa-sinucleína, uma proteína solúvel no sistema nervoso central adulto, pode ativar as células BV2 dependendo do seu estado de agregação.
Esta investigação foi publicada na revista Neuroscience Letters em 2013. Este estudo afirma que os exossomas segregados pelas células microgliais BV2 activadas pela alfa-sinucleína podem ser mediadores essenciais da neurodegeneração na doença de Parkinson.
Este estudo foi publicado na Frontiers Cellular Neuroscience (2019). Ele propôs que a Idebenona, um antioxidante, modula a polarização microglial e reduz a inflamação em células BV2 ativadas por lipopolissacarídeos e modelo de camundongos com doença de Parkinson induzida por 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina (MPTP).
6.recursos para a linha de células BV2: Protocolos, vídeos e muito mais
Os recursos online disponíveis sobre a BV2 são limitados. Aqui estão alguns deles.
- Subcultura da linha celular BV2: Esta hiperligação do website consiste num breve protocolo para subcultura de linhas celulares BV2.
- Descongelamento de células congeladas: Este vídeo ajuda-o a aprender o protocolo básico para descongelar e cultivar células congeladas.
O protocolo de cultura de células BV2 é mencionado aqui.
- Cultura de células BV2: Esta ligação do sítio Web contém o protocolo de cultura de células BV2. Além disso, também fornece meios de cultura celular e composições de meios de congelação para a linha de células BV2.
Referências
- Wang, Y., Y. Peng, e H. Yan, Comentário: Modelos de cultura de células neuroinflamatórias in vitro e as aplicações potenciais para distúrbios neurológicos. Front Pharmacol, 2021. 12: p. 792614.
- Sarkar, S., et al., Caracterização e análise comparativa de um novo modelo de células microgliais de camundongo para estudar mecanismos neuroinflamatórios durante insultos neurotóxicos. Neurotoxicologia, 2018. 67: p. 129-140.
- Zhao, F., et al., Efeito neuroprotetor da raponticina contra a doença de Parkinson: Insights do modelo BV-2 in vitro e do modelo de ratos induzidos por MPTP in vivo. Jornal de Toxicologia Bioquímica e Molecular, 2021. 35(1): p. e22631.
- Gao, X., et al., Beta-naftoflavona inibe a inflamação induzida por LPS em células BV-2 via eixo de sinalização AKT / Nrf-2 / HO-1-NF-κB. Imunobiologia, 2020. 225(4): p. 151965.
- Tada, S., et al., Zonisamide melhora a mitocondriopatia microglial em modelos de doença de Parkinson. Ciências do Cérebro, 2022. 12(2): p. 268.