Células B16 - Guia fundamental para as células de melanoma B16 na investigação oncológica

B16 é a linha celular de cancro da pele (melanoma) de origem murina. Esta linha celular é um modelo in vitro eficaz para estudar os cancros da pele humanos. É frequentemente utilizada para investigar a formação de tumores sólidos e a metástase de células cancerígenas.

Este artigo ajudá-lo-á a compreender os princípios básicos da linha celular de melanoma B16. Mais concretamente, abordará os seguintes aspectos:

1.caraterísticas gerais e origem da linha celular B16

Esta secção do artigo aborda as caraterísticas da linha celular de melanoma B16. Ficará a conhecer as respostas às seguintes perguntas frequentes. Por exemplo, o que é a linha celular de cancro B16? De onde provêm as células B16? Qual é o tamanho das células B16?

A linha de células B16 foi criada em 1954. Estas células foram derivadas de ratinhos C57BL/6J que desenvolveram espontaneamente um tumor na pele, nos Laboratórios Jackson, no Maine.
São células epiteliais produtoras de melanina com capacidade de metastização no baço, fígado e pulmões.
As células do melanoma B16 crescem em monocamadas e apresentam uma morfologia celular de tipo epitelial e fusiforme.
O tamanho da linha de células B16 é de aproximadamente 15,4 μm.
Existem subclones distintos de células B16, incluindo B16GMCSF, B164A5, B16FLT3 e B16F10. Estas sub-linhas são diferentes das células B16 originais e mantêm algumas caraterísticas específicas. Por exemplo, apresentam diferenças em termos de morfologia, tamanho das células e outras propriedades. A B16F10 tem uma elevada capacidade de metastização pulmonar e a B164A5 é a linha celular de cancro da pele mais agressiva em comparação com a B16F10, a B16-GMCSF e a B16FLT3 [1].

animação 3D de um grande plano de um cancro da pele em crescimento, como o melanoma maligno, que inflama o tecido circundante.

2.informações sobre a cultura da linha de células B16

Antes de manter ou cultivar uma linha celular, pode procurar informações importantes sobre o tempo de duplicação, tipo de célula, meios de crescimento, condições de cultura, etc. Esta secção contém todas as informações necessárias para a cultura de células B16.

Pontos-chave para a cultura de células B16

Tempo de duplicação da população:	O tempo médio de duplicação da população de células B16 é estimado em 24 horas.
Aderentes ou em suspensão:	As células B16 são aderentes e crescem em monocamadas.
Densidade de sementeira:	Recomenda-se a sementeira de células B16 a uma densidade de 1 a 2 x¹⁰⁴ ^células/cm2. As células B16 aderentes são lavadas com 1 x PBS e dissociam-se da superfície utilizando a solução de Accutase. As células são centrifugadas e o pellet de células é ressuspendido no meio de crescimento. Posteriormente, estas células são distribuídas num novo frasco para crescimento.
Meio de cultura:	As células B16 são cultivadas em meio EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) contendo 10 % de soro fetal bovino (FBS). O meio de cultura deve ser renovado 2-3 vezes por semana.
Condições de crescimento:	Para a cultura da linha de células B16, utiliza-se uma incubadora humidificada com 5 % de_CO2 e uma temperatura de 37 °C.
Armazenamento:	Estas células são armazenadas a uma temperatura inferior a -150 °C ou na fase de vapor do azoto líquido para proteger a viabilidade celular.
Processo e meio de congelação:	O meio de congelação CM-1 ou CM-ACF é utilizado para congelar as células B16 através de um processo de congelação lenta.
Processo de descongelação:	As células B16 congeladas são descongeladas a 37 °C num banho de água com um agente antimicrobiano. As células descongeladas podem ser diretamente cultivadas, distribuindo-as em frascos com meio de crescimento. Além disso, estas células podem ser centrifugadas para remover os componentes do meio de congelação e depois cultivadas em novos meios.
Nível de biossegurança:	A linha celular B16 deve ser manuseada ou mantida num laboratório de nível de biossegurança um.

Camada semi-confluente de células de melanoma B16 sob ampliação de 10x e 20x.

3. linha celular B16: Vantagens e desvantagens

Tal como outras linhas celulares, a B16 possui uma mistura única de vantagens e desvantagens. Nesta secção, são enumerados alguns prós e contras significativos desta linha celular de melanoma.

Vantagens

A B16 é a primeira ferramenta murina eficaz amplamente utilizada na investigação de metástases devido às vantagens que oferece. Algumas das vantagens desta linha celular de cancro da pele são

Fácil de cultivar	A linha celular B16 é fácil de cultivar em laboratórios de investigação. É amplamente utilizada para estudar a biologia das células cancerígenas, as vias de sinalização e muito mais.
Crescimento rápido	A linha celular de melanoma B16 apresenta uma elevada taxa de proliferação, o que a torna adequada para estudar os processos de divisão e crescimento celular.
Tumorigenicidade	A B16 é uma linha celular tumorigénica com propriedades semelhantes às do tumor, tais como invasão, migração e proliferação. É valiosa para o estudo da formação, progressão e metástase de tumores.

Desvantagens

As desvantagens associadas à linha celular B16 são as seguintes

Falta de relevância humana	Devido ao facto de a B16 ser uma linha celular de melanoma de ratinho, pode não representar com exatidão a biologia do cancro da pele humano, limitando a transponibilidade dos resultados da investigação.
Heterogeneidade	As células B16 são heterogéneas, apresentando propriedades genéticas e fenotípicas variadas na mesma cultura. Este facto pode afetar a fiabilidade e a reprodutibilidade dos resultados.

4. aplicações das células B16

A linha celular B16 é amplamente utilizada em estudos de investigação. Algumas das aplicações prometedoras desta linha celular são

Biologia tumoral: Esta linha celular de cancro da pele murino é tumorigénica e amplamente utilizada para compreender a biologia dos tumores. Foram realizados vários estudos para explorar os mecanismos celulares subjacentes ao crescimento, proliferação e metástases das células tumorais utilizando células B16. Um estudo de investigação realizado em 2020 utilizou células B16 para investigar o papel do RNA longo não codificante, LncRNA MEG3, na formação, crescimento e metástase do melanoma. Esta pesquisa descobriu que o RNA não codificante modula o eixo miRNA-21/E-Caderina para estimular esses eventos celulares [2]. Da mesma forma, foi efectuada uma pesquisa para investigar o papel potencial da sinalização Notch1 na imunossupressão induzida por tumores utilizando células B16 [3].
Descoberta de medicamentos: As células B16 são utilizadas para validar e testar os potenciais efeitos terapêuticos dos candidatos a fármacos. Um estudo avaliou o efeito anti-tumoral do ácido neogambógico, um composto natural, utilizando uma linha de células B16. Os resultados do estudo revelaram que este composto modula a via de sinalização PI3K/Akt/mTOR para causar a morte das células cancerosas [4]. Outro estudo investigou o efeito anti-melanoma do Ginsenoside Rg3, uma saponina, utilizando a linha celular B16. A investigação propôs que este composto natural causava atividade antitumoral através da regulação negativa das vias ERK e Akt [5].

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5.publicações de investigação com células B16

Aqui estão algumas publicações de investigação importantes sobre a linha celular de melanoma B16.

O LncRNA MEG3 promove o crescimento, metástase e formação de melanoma através da modulação do eixo miR-21/E-caderina

Esta publicação na revista Cancer Cell International (2020) propôs que o RNA longo não codificante MEG3 aumenta a formação, o crescimento e a metástase das células de melanoma B16 através da modulação do eixo miRNA-21/E-Caderina.

Um novo derivado do psoraleno-MPFC aumenta a melanogénese através da ativação das vias de sinalização p38 MAPK e PKA em células B16

Este artigo foi publicado no International Journal of Molecular Medicine em 2018. Este estudo investigou o efeito melanogénico e os mecanismos de um derivado do psoraleno - 4-metil-6-fenil-2H-furo[3,2-g] cromen-2-ona (MPFC) em células B16. O estudo propôs que este derivado promove a melanogénese através da estimulação da sinalização celular por PKA e p38 MAPK.

A sinalização Notch1 em células de melanoma promoveu imunossupressão induzida por tumor via regulação positiva de TGF-β1

Esta pesquisa foi publicada em 2018 no Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. Os resultados do estudo sugerem que a ativação da sinalização Notch1 nas células B16 pode impedir a imunidade antitumoral através do aumento da expressão do gene TGF-β1.

O ácido neogambógico induz a apoptose de células de melanoma B16 através da via de sinalização PI3K/Akt/mTOR

Este estudo foi conduzido por Chunlan Wu e seus colegas em 2020 e publicado na revista Ata Biochimica Polonica. Esta investigação afirma que o ácido neogambógico, um composto natural, pode causar a morte das células do melanoma B16 através da modulação da cascata de sinalização PI3K/Akt/mTOR.

Um complexo de irídio (III) como potente agente anticancerígeno induz apoptose e autofagia em células B16 através da inibição da via AKT/mTOR

Este trabalho de investigação foi publicado no European Journal of Medicinal Chemistry em 2018. Neste estudo, os investigadores investigaram a atividade anti-cancerígena de um composto, o complexo de irídio (III), utilizando células de melanoma B16.

Ailanthone induz a paragem do ciclo celular e a apoptose em células de melanoma B16 e A375

Este estudo propôs que um bioativo vegetal, Ailanthone, possui potencial anticancerígeno, uma vez que pode induzir apoptose e paragem do ciclo celular em células de melanoma B16 e A375. Este artigo foi publicado na Biomolecules em 2019.

6. recursos para a linha de células B16: Protocolos, vídeos e muito mais

Existem recursos limitados sobre a linha celular B16 que explicam os seus protocolos de cultura e transfecção.

Cultura de células de melanoma: Este vídeo fornece dicas valiosas para a cultura de linhas celulares de melanoma.
Subcultura de uma linha celular: Este vídeo explica um protocolo geral de subcultura para uma linha celular.
Transfecção da linha de células B16F10: Este vídeo explica o protocolo de transfecção para uma sub-linha de células de melanoma B16. Pode ajudá-lo a otimizar o protocolo de transfecção para células B16.

Seguem-se alguns protocolos de cultura celular para células B16.

Cultura de células B16: Este sítio Web contém todas as informações necessárias para a cultura de células B16, incluindo meios de crescimento, subcultura, descongelação e congelação de células.

Referências

Danciu, C., et al., Behaviour of four different B 16 murine melanoma cell sublines: Pele C57 BL/6J. Revista internacional de patologia experimental, 2015. 96(2): p. 73-80.
Wu, L., et al., LncRNA MEG3 promove o crescimento, metástase e formação de melanoma através da modulação do eixo miR-21 / E-caderina. Cancer cell international, 2020. 20: p. 1-14.
Yang, Z., et al., A sinalização Notch1 em células de melanoma promoveu imunossupressão induzida por tumor via regulação positiva de TGF-β1. Jornal de Pesquisa Experimental e Clínica do Câncer, 2018. 37(1): p. 1-13.
Wu, C., et al., O ácido neogambógico induz a apoptose de células B16 de melanoma através da via de sinalização PI3K / Akt / mTOR. Ata Biochimica Polonica, 2020. 67(2): p. 197-202.
Meng, L., et al., Atividade antitumoral do ginsenosídeo Rg3 no melanoma através da regulação negativa das vias ERK e Akt. Jornal Internacional de Oncologia, 2019. 54(6): p. 2069-2079.