Células B16-F10 - Exploração da linha celular de melanoma B16-F10 na investigação sobre metástases
As células B16-F10 constituem uma linha celular de melanoma derivada do rato C57BL/6J. São amplamente utilizadas na investigação do cancro da pele. Os investigadores utilizam estas células para estudar o desenvolvimento e a progressão do tumor, bem como as intervenções terapêuticas. Este artigo abordará os aspetos fundamentais das células de melanoma B16-F10. Em particular, incluirá:
- Meio de crescimento
- As células B16-F10 são cultivadas no meio DMEM. O meio é suplementado com 10% de FBS, 4 mM de L-glutamina, 1,5 g/L de NaHCO3, 4,5 g/L de glicose e 1,0 mM de piruvato de sódio para um crescimento celular ideal. O meio deve ser substituído 2 a 3 vezes por semana.
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação das células B16-F10 é de aproximadamente 20,1 horas. Pode variar entre 17 e 21 horas, dependendo das condições de cultura.
- Tipo de crescimento
- A B16-F10 é uma linha celular aderente. As células crescem rapidamente e formam monocamadas.
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível em
- Cytion — Encomendar B16-F10
- Origem e características gerais da linha celular B16-F10
- Informações sobre a cultura das células B16-F10
- Células B16-F10: Vantagens e desvantagens
- Aplicações de investigação das células B16-F10
- Publicações que apresentam a linha celular B16-F10
- Recursos para a linha celular B16-F10: protocolos, vídeos e muito mais
- Origem e características gerais da linha celular B16-F10
- Informações sobre a cultura das células B16-F10
- Células B16-F10: vantagens e desvantagens
- Aplicações de investigação das células B16-F10
- 5. Publicações sobre a linha celular B16-F10
- Recursos para a linha celular B16-F10: protocolos, vídeos e muito mais
- Perguntas frequentes
Origem e características gerais da linha celular B16-F10
Esta secção irá dar-lhe uma visão sobre a origem e as características distintivas das células tumorais de melanoma B16-F10. Irá ajudá-lo a utilizar a linha celular de forma eficiente no seu trabalho de investigação. Principalmente, irá aprender: O que são as células B16-F10? De onde é derivada a B16F10? Qual é a morfologia da linha celular B16F12? Qual é o tamanho da célula B16F10?
- A B16-F10 é um subclone da linha celular tumoral B16 derivada do tecido cutâneo de ratos C57BL/6J. Neste contexto, as células de melanoma B16F10 foram desenvolvidas após a injeção intravenosa da linha B16 em ratos imunocomprometidos ou singénicos. Estas células foram selecionadas pelo seu potencial para formar colónias pulmonares metastáticas in vivo e, posteriormente, estabelecidas após dez ciclos de formação de colónias pulmonares in vitro [1]. Foi desenvolvida por Fidler e colegas em 1976.
- As linhas celulares B16-F10 têm uma aparência epitelial e fusiforme.
- O tamanho aproximado das células B16-F10 é de 15,4 ± 1,4 μm [2].
Células B16-F1 e B16-F10
As células B16-F1 e B16-F10 derivaram da linha celular parental B16. Ambas têm a mesma origem e possuem características quase semelhantes. No entanto, a principal diferença reside na sua capacidade metastática. As células B16-F10 têm um potencial metastático elevado, enquanto as células B16-F1 têm um potencial metastático baixo [3].
Informações sobre o cultivo de células B16-F10
Antes de manusear e cultivar uma linha celular, é necessário conhecer o seu tempo de duplicação, meios de crescimento, condições e protocolos de cultura celular. Esta secção irá abordar: Qual é o tempo de duplicação das células B16-F10? Como se cultivam as células B16-F10? Qual é o meio de cultura das células B16-F10? Quais são as condições de cultura recomendadas para as células B16-F10?
Pontos-chave para a cultura de células B16-F10
Tempo de duplicação:
O tempo de duplicação das células B16-F10 é de aproximadamente 20,1 horas. Pode variar entre 17 e 21 horas, dependendo das condições de cultura.
Adesivas ou em suspensão:
A B16-F10 é uma linha celular aderente. As células crescem rapidamente e formam monocamadas.
Rácio de divisão:
As células B16-F10 são subcultivadas com uma proporção de divisão de 1:2 a 1:4. As células são lavadas com solução salina tamponada com fosfato (1x) e, em seguida, incubadas com solução de passagem Accutase durante 8 a 10 minutos à temperatura ambiente. É adicionado meio fresco às células e estas são centrifugadas. O sedimento celular colhido é novamente ressuspenso e as células são distribuídas para o novo frasco contendo meio de cultura fresco, de acordo com a proporção de divisão.
Meio de crescimento:
As células B16-F10 são cultivadas no meio DMEM. O meio é suplementado com 10% de FBS, 4 mM de L-glutamina, 1,5 g/L de NaHCO3, 4,5 g/L de glicose e 1,0 mM de piruvato de sódio para um crescimento celular ideal. O meio deve ser substituído 2 a 3 vezes por semana.
Condições de crescimento:
As células B16-F10 são cultivadas numa incubadora humidificada a 37 °C com um fornecimento de 5% de CO2.
Armazenamento:
As células congeladas são armazenadas a temperaturas inferiores a -150 °C num congelador elétrico de temperatura ultrabaixa ou na fase de vapor de nitrogénio líquido para manter a viabilidade celular.
Processo de congelação e meio:
As células B16-F10 são congeladas em meios CM-1 ou CM-ACF para armazenamento. Para tal, recomenda-se um processo de congelamento lento que permita apenas uma diminuição de 1 °C na temperatura por minuto, a fim de evitar qualquer choque nas células.
Processo de descongelação:
As células B16-F10 congeladas são descongeladas num banho-maria pré-ajustado a 37 °C durante 40 a 60 segundos. Em seguida, as células são adicionadas a um meio fresco e centrifugadas para remover os componentes do meio de congelamento. As células recolhidas são ressuspensas num meio de crescimento e vertidas em frascos para cultura.
Nível de biossegurança:
É necessário um laboratório de nível de biossegurança 1 para manusear e manter a linha celular B16-F10.
Células B16-F10: Vantagens e desvantagens
Tal como outras linhas celulares, a B16-F10 também apresenta algumas vantagens e desvantagens. Nesta secção, são discutidos alguns prós e contras significativos desta linha celular de melanoma cutâneo.
Vantagens
A linha celular B16-F10 é amplamente utilizada na investigação do cancro. As vantagens das células B16-F10 são:
Potencial metastático
As células B16F10 de melanoma cutâneo apresentam um elevado potencial metastático, tornando-as valiosas para o estudo da metástase do cancro e dos mecanismos subjacentes.
Modelo tumoral in vitro
As células B16-F10 servem como modelo in vitro para o estudo da progressão e crescimento do cancro, ajudando os investigadores a compreender os mecanismos celulares e moleculares que impulsionam o cancro.
Desvantagens
As desvantagens associadas à linha celular B16-F10 são:
Linha celular derivada de ratinho
A B16-F10 é uma linha celular derivada de ratos, o que limita a sua aplicabilidade a estudos específicos do ser humano. Os resultados da investigação com estas células podem nem sempre ser verdadeiramente transponíveis para a biologia humana.
Aplicações de investigação das células B16-F10
A linha celular B16-F10 é amplamente utilizada na investigação do cancro. Algumas aplicações promissoras desta linha celular são discutidas aqui.
- Investigação sobre o cancro: A linha celular B16-F10 é um modelo valioso para estudar os processos das células cancerígenas, incluindo a proliferação, invasão, migração e morte celular ou apoptose. Além disso, ajuda os investigadores a compreender melhor os mecanismos e vias moleculares que impulsionam estes processos celulares. Um estudo realizado em 2018 explorou o papel do CCR5 (receptor de quimiocinas C-C tipo cinco) na transição epitelial-mesenquimal e na metástase das células de melanoma. Os resultados revelaram que a deficiência de CCR5 restringe o crescimento tumoral e a metástase, enquanto que uma expressão elevada conduz a um crescimento e metástase aumentados das células B16-F10. Outras investigações relataram que o CCR5 regula a expressão de TGFβ1, que, por sua vez, regula a via de sinalização PI3K/AKT/GSK3β para promover a transição epitelial-mesenquimal e a migração celular [4].
- Testes e desenvolvimento de medicamentos: As células tumorais de melanoma B16F10 são altamente agressivas e, por isso, adequadas para testar potenciais medicamentos e tratamentos antitumorais. Os investigadores utilizam estas células e avaliam o efeito de diferentes compostos no crescimento, proliferação e metástase celular, auxiliando o desenvolvimento de medicamentos. Um estudo realizado em 2018 por Valentina Nanni e colegas investigou os efeitos terapêuticos do extrato hidroalcoólico de flores de Spartium junceum. O estudo sugeriu que o extrato de flores era eficaz na indução da senescência nas células B16-F10, o que leva à supressão do crescimento celular e da melanogénese, podendo, assim, exercer potenciais atividades anticancerígenas [5].
5. Publicações que apresentam a linha celular B16-F10
Aqui estão algumas publicações de investigação significativas que apresentam a linha celular de melanoma B16-F10:
Este estudo foi publicado na revista Nutrients (2020). Propôs que o extrato etanólico de Sorghum bicolor tem um efeito antimelanogénico nas células de melanoma cutâneo B16F10.
O calcitriol inibe a proliferação e induz potencialmente a apoptose nas células B16–F10
A investigação publicada na revista Medical Science Monitor Basic Research (2022) propôs que o fármaco calcitriol exerce efeitos antitumorais nas células de melanoma B16-F10, inibindo a proliferação e induzindo a apoptose.
Este artigo foi publicado na revista Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). Os resultados revelaram que os cardóis, lípidos resorcinólicos, exercem intensa citotoxicidade na linha celular B16-F10.
O estudo publicado na revista Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018) explorou o potencial antimetastático do extrato do exocarpo de Ginkgo biloba utilizando células B16-F10.
Esta investigação publicada na World Neurosurgery (2018) propôs que a timoquinona pode ser uma terapia eficaz contra lesões metastáticas intracerebrais, uma vez que suprime o crescimento das células B16-F10 e induz a apoptose.
Recursos para a linha celular B16-F10: protocolos, vídeos e muito mais
As células endoteliais B16F10 são amplamente utilizadas na investigação do cancro da pele. Aqui estão alguns recursos online que explicam os seus protocolos de cultura e transfecção:
- Transfecção de células de melanoma B16F10: Este tutorial em vídeo pode ajudá-lo a aprender o protocolo de transfecção para células B16-F10.
- Transfecção de B16-F10: Este documento explica o protocolo de transfecção de ADN in vitro para células de melanoma cutâneo B16F10.
A ligação seguinte contém o protocolo de cultura celular para células B16-F10:
- Subcultura de B16-F10: Este site contém informações úteis sobre as células tumorais de melanoma B16F10. Inclui meios de crescimento, tempo de duplicação, condições de cultura e protocolo para subcultura de células, bem como o manuseamento de culturas criopreservadas e proliferativas.
Referências
- Poste, G., et al., Comparação das propriedades metastáticas de clones de melanoma B16 isolados de linhas celulares cultivadas, tumores subcutâneos e metástases pulmonares individuais. Cancer Research, 1982. 42(7): p. 2770-2778.
- Nakamura, M., D. Ono e S. Sugita, Mecanofenotipagem de variantes de células de melanoma B16 para a avaliação da eficácia do tratamento com (-)-galato de epigalocatequina utilizando um dispositivo microfluídico cónico. Micromachines, 2019. 10(3): p. 207.
- Danciu, C., et al., Comportamento de quatro sublinhagens diferentes de células de melanoma murino B16: pele C57BL/6J. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): p. 73-80.
- Liu, J., et al., A elevada expressão de CCR5 no melanoma potencia a transição epitelial-mesenquimal e a metástase através do TGFβ1. The Journal of Pathology, 2019. 247(4): p. 481-493.
- Nanni, V., et al., O extrato hidroalcoólico das flores de Spartium junceum L. inibe o crescimento e a melanogénese nas células B16-F10 através da indução da senescência. Phytomedicine, 2018. 46: p. 1-10.