Células B16-F10 - Explorando a linha celular de melanoma B16-F10 na pesquisa de metástases
As célulasB16-F10 constituem uma linha celular de melanoma proveniente do rato C57BL/6J. São amplamente utilizadas na investigação do cancro da pele. Os investigadores utilizam estas células para estudar o desenvolvimento e a progressão dos tumores e as intervenções terapêuticas. Este artigo abordará os aspectos fundamentais das células de melanoma B16-F10. Incluirá, nomeadamente
- Origem e caraterísticas gerais da linha celular B16-F10
- Informações sobre a cultura de células B16-F10
- Células B16-F10: Vantagens e desvantagens
- Aplicações de investigação das células B16-F10
- Publicações sobre a linha de células B16-F10
- Recursos para a linha de células B16-F10: Protocolos, vídeos e muito mais
1. Origem e caraterísticas gerais da linha celular B16-F10
Esta secção fornece-lhe informações sobre a origem e os atributos distintivos das células tumorais do melanoma B16F10. Ajudá-lo-á a utilizar a linha celular de forma eficiente no seu trabalho de investigação. Aprenderá, principalmente, o seguinte O que são as células B16-F10? De que é que a B16F10 deriva? Qual é a morfologia da linha de células B16F12? Qual é o tamanho da célula B16F10?
- A B16-F10 é um subclone da linha de células tumorais B16 derivada de tecido cutâneo de ratinhos C57BL/6J. Neste caso, as células de melanoma B16F10 foram desenvolvidas após a injeção intravenosa da linha B16 em ratinhos imunocomprometidos ou singénicos. Estas células foram selecionadas pelo seu potencial para formar colónias pulmonares metastáticas in vivo e depois estabelecidas após dez ciclos de formação de colónias pulmonares in vitro [1]. Foi desenvolvida por Fidler e colegas em 1976.
- As linhas celulares B16-F10 têm um aspeto epitelial e fusiforme.
- O tamanho aproximado das células B16-F10 é de 15,4 ± 1,4 μm [2].
Células B16-F1 e B16-F10
As células B16-F1 e B16-F10 foram derivadas da linha celular progenitora B16. Ambas tiveram a mesma origem e possuem caraterísticas quase semelhantes. No entanto, a principal diferença é a sua capacidade metastática. As células B16-F10 têm um potencial metastático elevado, enquanto as B16-F1 têm um potencial metastático baixo [3].
2.informações sobre a cultura de células B16-F10
Antes de manusear e cultivar uma linha celular, é necessário conhecer o seu tempo de duplicação, meios de crescimento, condições e protocolos de cultura de células. Esta secção irá discutir: Qual é o tempo de duplicação das células b16-f10? Como é que se cultivam células B16F10? Qual é o meio de cultura das células B16-F10? Que condições de cultura são recomendadas para as células B16-F10?
Pontos-chave para a cultura de células B16-F10
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Tempo de duplicação: |
O tempo de duplicação das células B16-F10 é de aproximadamente 20,1 horas. Pode variar entre 17 e 21 horas, dependendo das condições de cultura. |
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Aderente ou em suspensão: |
A B16-F10 é uma linha celular aderente. As células crescem rapidamente e formam monocamadas. |
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Rácio de divisão: |
As células B16-F10 são subcultivadas num rácio de divisão de 1:2 a 1:4. As células são lavadas com tampão fosfato salino (1x) e depois incubadas com a solução de passagem Accutase durante 8 a 10 minutos à temperatura ambiente. As células são adicionadas com meio fresco e centrifugadas. O pellet de células colhido é novamente ressuspenso e as células são distribuídas para um novo frasco com meio de cultura fresco, de acordo com o rácio de divisão. |
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Meio de cultura: |
As células B16-F10 são cultivadas em meio DMEM. O meio é suplementado com 10% de FBS, 4 mM de L-Glutamina, 1,5 g/L de NaHCO3, 4,5 g/L de Glicose e 1,0 mM de Piruvato de Sódio para um crescimento celular ideal. O meio deve ser substituído 2 a 3 vezes por semana. |
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Condições de crescimento: |
As células B16-F10 são cultivadas numa incubadora humidificada a 37 °C com um fornecimento de 5% de CO2. |
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Armazenamento: |
As células congeladas são armazenadas a uma temperatura inferior a -150 °C num congelador elétrico de temperatura ultra baixa ou na fase de vapor do azoto líquido para manter a viabilidade celular. |
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Processo de congelação e meio: |
As células B16-F10 são congeladas em meios CM-1 ou CM-ACF para armazenamento. Para o efeito, recomenda-se um processo de congelação lento que permita apenas uma diminuição da temperatura de 1°C por minuto, para evitar que as células sofram qualquer choque. |
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Processo de descongelação: |
As células B16-F10 congeladas são descongeladas num banho de água a 37°C pré-definido durante 40 a 60 segundos. Em seguida, as células são adicionadas a meio fresco e centrifugadas para remover os componentes do meio de congelação. As células recolhidas são ressuspensas num meio de crescimento e colocadas em frascos para cultura. |
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Nível de Biossegurança: |
É necessário um laboratório de nível de biossegurança 1 para manusear e manter a linha de células B16-F10. |
3.células B16-F10: Vantagens e desvantagens
Tal como outras linhas celulares, a B16-F10 também apresenta algumas vantagens e desvantagens. Nesta secção, são discutidos alguns prós e contras significativos desta linha celular de melanoma cutâneo.
Vantagens
A linha celular B16-F10 é amplamente utilizada na investigação do cancro. As vantagens das células B16-F10 são
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Potencial metastático |
As células B16F10 do melanoma cutâneo apresentam um elevado potencial metastático, o que as torna valiosas para o estudo da metástase do cancro e dos mecanismos subjacentes. |
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Modelo tumoral in vitro |
As células B16-F10 servem de modelo in vitro para o estudo da progressão e do crescimento do cancro, ajudando os investigadores a compreender os mecanismos celulares e moleculares que conduzem ao cancro. |
Desvantagens
As desvantagens associadas à linha celular B16-F10 são as seguintes
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Linha celular derivada do ratinho |
A B16-F10 é uma linha celular derivada do rato, o que limita a sua aplicabilidade a estudos específicos em humanos. Os resultados da investigação com estas células nem sempre se traduzem verdadeiramente na biologia humana. |
4.aplicações de investigação das células B16-F10
A linha celular B16-F10 é amplamente utilizada na investigação do cancro. São aqui analisadas algumas aplicações prometedoras desta linha celular.
- Investigação do cancro: A linha celular B16-F10 é um modelo valioso para estudar os processos celulares do cancro, incluindo a proliferação, a invasão, a migração e a morte celular ou apoptose. Além disso, ajuda os investigadores a obter informações sobre os mecanismos moleculares e as vias que conduzem estes processos celulares. Um estudo realizado em 2018 explorou o papel do CCR5 (recetor de quimiocina C-C tipo cinco) na transição de células epiteliais para células mesenquimais e metástases de células de melanoma. Os resultados revelaram que a deficiência de CCR5 restringe o crescimento do tumor e as metástases, ao passo que uma expressão elevada leva a um maior crescimento e metástases das células B16-F10. Outras investigações referiram que o CCR5 regula a expressão de TGFβ1, que regula a sinalização PI3K/AKT/GSK3β para promover a transição epitelial para mesenquimal e a migração celular [4].
- Ensaio e desenvolvimento de medicamentos: As células tumorais do melanoma B16F10 são altamente agressivas e, por conseguinte, adequadas para testar potenciais medicamentos e tratamentos anti-tumorais. Os investigadores utilizam estas células e avaliam o efeito de diferentes compostos no crescimento, proliferação e metástase das células, ajudando no desenvolvimento de medicamentos. Um estudo realizado em 2018 por Valentina Nanni e colegas investigou os efeitos terapêuticos do extrato hidroalcoólico das flores de Spartium junceum . O estudo propôs que o extrato de flores foi eficaz na indução da senescência em células B16-F10, o que leva ao crescimento celular e à supressão da melanogénese, pelo que pode exercer potenciais actividades anti-cancerígenas [5].
5.publicações com a linha celular B16-F10
Aqui estão algumas publicações de investigação importantes que apresentam a linha celular de melanoma B16-F10:
Este estudo foi publicado na revista Nutrients (2020). Propôs que o extrato etanólico de Sorghum bicolor tem um efeito anti-melanogénico em células de melanoma cutâneo B16F10.
Calcitriol Inibe a Proliferação e Potencialmente Induz Apoptose em Células B16-F10
A pesquisa publicada no Medical Science Monitor Basic Research (2022) propôs que o medicamento calcitriol exerce efeitos antitumorais nas células de melanoma B16-F10, inibindo a proliferação e induzindo a apoptose.
Este artigo foi publicado na revista Biochemical and Biophysical Research Communications (2022). Os resultados revelaram que os cardóis, lípidos resorcinólicos, exercem uma intensa citotoxicidade na linha celular B16-F10.
O estudo publicado na Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine (2018) explorou o potencial antimetastático do extrato de exocarpo de Ginkgo biloba usando células B16-F10.
Esta pesquisa no World Neurosurgery (2018) propôs que a timoquinona pode ser uma terapia eficaz contra lesões metastáticas intracerebrais, pois suprime o crescimento celular B16-F10 e induz apoptose.
6.recursos para a linha celular B16-F10: Protocolos, vídeos e muito mais
As células endoteliais B16F10 são amplamente utilizadas na investigação do cancro da pele. Aqui estão alguns recursos online que explicam os seus protocolos de cultura e transfecção:
- Transfecção de células de melanoma B16F10: Este vídeo tutorial pode ajudá-lo a aprender o protocolo de transfecção das células B16-F10.
- Transfecção de células B16-F10: Este documento explica o protocolo de transfecção de ADN in vitro para células de melanoma cutâneo B16F10.
A ligação seguinte contém o protocolo de cultura de células B16-F10:
- Subcultura de células B16-F10: Este sítio Web contém informações úteis sobre as células tumorais do melanoma B16F10. Inclui meios de crescimento, tempo de duplicação, condições de cultura e protocolo para subcultura de células e manuseamento de culturas criopreservadas e proliferativas.
Referências
- Poste, G., et al., Comparação das propriedades metastáticas de clones de melanoma B16 isolados de linhas celulares em cultura, tumores subcutâneos e metástases pulmonares individuais. Cancer Research, 1982. 42(7): p. 2770-2778.
- Nakamura, M., D. Ono e S. Sugita, mecanofenotipagem de variantes de células de melanoma B16 para a avaliação da eficácia do tratamento com galato de (-) - epigalocatequina usando um dispositivo microfluídico cônico. Micromachines, 2019. 10(3): p. 207.
- Danciu, C., et al., Comportamento de quatro sub-linhas diferentes de células de melanoma murino B16: Pele C57BL/6J. Int J Exp Pathol, 2015. 96(2): p. 73-80.
- Liu, J., et al., A alta expressão de CCR5 no melanoma aumenta a transição epitelial-mesenquimal e a metástase via TGFβ1. O Jornal de Patologia, 2019. 247(4): p. 481-493.
- Nanni, V., et al., Extrato hidroalcoólico de flores de Spartium junceum L. inibe o crescimento e a melanogênese em células B16-F10 induzindo a senescência. Phytomedicine, 2018. 46: p. 1-10.