Linha celular A375 - Um guia para a investigação do melanoma
A375 é uma linha celular de melanoma humano amplamente utilizada na investigação em toxicologia e imuno-oncologia. Os investigadores utilizam esta linha celular para estudar a biologia do cancro e as vias de sinalização, testar ou analisar potenciais agentes anticancerígenos e desenvolver terapêuticas novas e eficazes.
Origem e caraterísticas gerais das células A375
Conhecer a origem e as caraterísticas gerais de uma linha celular pode ajudá-lo a planear a sua utilização na investigação. Esta secção do artigo abordará a origem e as caraterísticas da linha celular A375. Por exemplo, o que é a linha celular A375? Quais são as caraterísticas da linha celular A375? De onde provêm as células A375? Qual é a morfologia das células de melanoma A375? Qual é o tamanho das células A375?
- A linha celular de cancro da pele A375 teve origem na cultura de explantes de um tumor sólido de uma mulher de 54 anos com melanoma maligno [1].
- As células A375 têm uma morfologia de tipo epitelial.
- O tamanho das células A375 é relativamente mais pequeno em comparação com outras linhas celulares. Possuem um diâmetro de cerca de 12 µm.
- As células de melanoma A375 são hipotriplóides. O número modal de cromossomas para esta linha celular é 62. Normalmente, cada célula tem nove cromossomas marcadores e uma cópia dos cromossomas normais N2, N6 e N22.
Células A375: Informações sobre a cultura de células
As culturas de células A375 são fáceis de manter. Não têm quaisquer requisitos exigentes em termos de cultura de células. Esta secção irá ajudá-lo a obter as informações necessárias sobre cultura de células. Por exemplo, qual é o tempo de duplicação das células A375. Quais são os meios da linha celular A375? Qual é a densidade de sementeira de A375? As células de melanoma A375 são aderentes?
Pontos-chave para a cultura de células A375
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Tempo de duplicação da população: |
O tempo de duplicação de A375 é de 20 horas. |
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Aderente ou em suspensão: |
A375 é uma linha celular de melanoma humano aderente. |
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Densidade de sementeira: |
a densidadecelular de 1 x104 células/cm2 é ideal para culturas de células A375. As células aderentes são lavadas com 1 x tampão fosfato salino (PBS) e incubadas com solução de passagem (Accutase). Em seguida, as células foram adicionadas ao meio de cultura e centrifugadas. As células colhidas foram ressuspensas num meio de cultura e distribuídas em novos frascos para crescimento. |
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Meio de cultura: |
O DMEM é recomendado como meio ideal para A375 quando suplementado com 10% de soro fetal bovino (FBS), 4,5 g/L de glucose, 1,5 g/L de NaHCO3, 4 mM de L-Glutamina e 1,0 mM de piruvato de sódio. O meio A375 deve ser renovado 2-3 dias por semana. |
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Condições de crescimento: |
As células de melanoma A375 são cultivadas numa incubadora humidificada (37°C) com um fornecimento de 5% de CO2. |
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Armazenamento: |
As células A375 congeladas devem ser mantidas a uma temperatura inferior a -150°C na fase de vapor do azoto líquido ou num congelador elétrico. |
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Processo de congelação e meio: |
Os meios CM-1 ou CM-ACF são utilizados para congelar a linha de células A375. Optou-se por um processo de congelação lento que permite uma diminuição gradual da temperatura de 1°C para proteger a viabilidade das células. |
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Processo de descongelação: |
O frasco de células de melanoma A375 congeladas é rapidamente agitado em banho-maria durante 40 a 60 segundos até restar apenas um pequeno aglomerado de gelo. As células são adicionadas com meio fresco e centrifugadas para remover os elementos do meio de congelação. O pellet de células obtido foi novamente ressuspenso e vertido para novos frascos. |
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Nível de biossegurança: |
As culturas de A375 são manuseadas e mantidas em laboratórios de nível 1 de biossegurança. |
Vantagens e limitações da linha celular A375
Tal como outras linhas celulares, a linha celular de melanoma A375 está associada a uma combinação única de vantagens e limitações, o que a torna uma ferramenta valiosa para a investigação do cancro do melanoma. Esta secção enumera apenas alguns prós e contras significativos da linha celular A375.
Vantagens
As vantagens significativas das células A375 são mencionadas a seguir:
- Modelo de tumor de melanoma: A linha celular A375 foi derivada de um tumor de melanoma maligno, servindo assim como um modelo tumoral inestimável para investigar a biologia do melanoma e as intervenções terapêuticas. Estas células apresentam propriedades semelhantes às do melanoma, tais como uma elevada taxa de proliferação e invasividade.
- Tumorigenicidade: As células A375 são altamente tumorigénicas, o que significa que podem formar tumores. As células A375 produzem melanomas amelanóticos agressivos em ratinhos NIH Swiss tratados com soro anti-timócito (um agente imunossupressor).
- Bem caracterizada: A375 é uma linha celular geneticamente bem caracterizada. Possui mutações genéticas específicas como o melanoma. As mutações da A375 incluem a alteração do gene BRAF da A375, tornando-a sensível a inibidores específicos do BRAF. Este perfil genético faz com que as células A375 sejam uma excelente ferramenta de investigação do cancro para estudar as vias moleculares subjacentes e as terapias orientadas.
Limitações
As limitações associadas às células A375 são as seguintes
- Limitações in vitro: A375 é um modelo tumoral in vitro. Embora imite as caraterísticas do melanoma, não pode representar totalmente a complexidade dos tumores de melanoma. Por conseguinte, é necessário ter cuidado quando os resultados in vitro são generalizados para estudos clínicos.
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Aplicações de investigação da linha de células A375
A linha celular A375 tem aplicações extensivas na investigação do cancro. Eis algumas das áreas comuns em que as células A375 são utilizadas.
- Investigação do cancro: As células A375 têm aplicações generalizadas na investigação do melanoma. Os investigadores utilizaram estas células para investigar a biologia do cancro da pele, os processos e os mecanismos de sinalização celular subjacentes, incluindo a proliferação, migração e invasão celulares. Isto pode também ajudar os investigadores a identificar novos alvos terapêuticos moleculares. Um estudo realizado por Lin Zhu e colegas em 2019 utilizou células de melanoma A375 altamente agressivas e descobriu o papel do microRNA-3662 no crescimento e invasão das células de melanoma A375. Os resultados do estudo afirmam que o microRNA-3662 tem como alvo o gene ZEB1 e regula o crescimento das células de melanoma in vitro e in vivo no modelo de tumor A375 [2]. Do mesmo modo, uma investigação realizada em 2018 concluiu que as vias PI3K/AKT e MAPK/ERK estão envolvidas na proliferação e metástase da linha celular A375 [3].
- Descoberta e teste de medicamentos: A linha celular A375 é um modelo tumoral in vitro útil para testar e rastrear potenciais agentes anticancerígenos. Os investigadores avaliam a toxicidade e a eficácia de novos fármacos quimioterapêuticos, compostos e outras terapias utilizando estas células de melanoma A375. Por exemplo, um estudo explorou as propriedades anticancerígenas das micro e nanovesículas derivadas da toranja nas células cancerígenas do melanoma humano A375. Os resultados revelaram que as micro e nanovesículas induzem a paragem do ciclo celular e a apoptose e dificultam a expressão de genes na proliferação, migração e invasão celular [4].
Células A375: Publicações
São aqui mencionadas algumas publicações de investigação importantes sobre as células A375.
Este estudo foi publicado no Journal of Oncology em 2019. O estudo propôs que o co-tratamento com vitamina D e análogos melhora a atividade anticancerígena da cisplatina e da dacarbazina em células de melanoma A375.
Esta investigação foi publicada no Journal of Herbal Medicine em 2022. Este estudo explorou os efeitos anti-melanoma do gel de aloe vera em células de melanoma A375.
Este estudo na Oncogene (2021) propôs que o membro da família da fermitina 2 (FERMT2 ou kindlin-2) incentiva a progressão do melanoma através da ativação da MAPK através da ligação com p-α-Pix e Rac1.
Este estudo no The American Journal of Dermatopathology (2019) propôs que o FARP1 pode facilitar o desenvolvimento e a progressão do melanoma cutâneo. Assim, pode ser um alvo terapêutico útil.
Este artigo de investigação foi publicado na revista Bioengineered (2019). Este estudo explorou a atividade citotóxica e apoptótica de um extrato de planta Phyllodium elegans em linhas celulares de carcinoma humano, incluindo A375.
Recursos para a linha celular A375: Protocolos, vídeos e muito mais
Seguem-se alguns recursos online sobre as células A375.
- Transfecção de células A375: Este tutorial em vídeo ajudá-lo-á a aprender passo a passo a transfecção de células A375.
- Cultura de células: Este vídeo contém informações muito úteis sobre a cultura de linhas celulares.
Os protocolos de cultura celular para as células A375 estão listados aqui.
- Linha celular A375: Esta hiperligação contém informações úteis sobre a cultura e manutenção da linha celular A375, incluindo meios A375 e manuseamento de culturas A375 congeladas e em proliferação.
Perguntas frequentes (FAQ) sobre as células A375
Referências
- Avram, S., et al., Padronização de modelos de melanoma humano A375 em membrana corioalantóica de embrião de galinha e camundongos Balb / c nude. Oncol Rep, 2017. 38(1): p. 89-99.
- Zhu, L., et al., MicroRNA-3662 tem como alvo ZEB1 e atenua a invasão da linha celular de melanoma altamente agressiva A375. Cancer Manag Res, 2019. 11: p. 5845-5856.
- Peng, X., et al., Oxyfadichalcone C inibe a proliferação e metástase de células de melanoma A375 através da supressão das vias PI3K / Akt e MAPK / ERK. Ciências da vida, 2018. 206: p. 35-44.
- Stanly, C., et al., Micro e nanovesículas derivadas de toranja mostram perfis metabólicos distintos e atividades anticâncer na linha celular de melanoma humano A375. Cells, 2020. 9(12): p. 2722.