As células Hep2 e o seu papel na investigação do cancro da laringe
As células Hep 2 constituem um modelo in vitro fundamental, amplamente utilizado em diversos domínios da investigação biomédica, tais como a reumatologia, a investigação do cancro e a imunologia. Originárias do carcinoma laríngeo, estas células humanas têm sido essenciais para elucidar o tecido de origem e as características específicas das neoplasias laríngeas. A sua importância é amplamente reconhecida na investigação translacional do cancro, onde têm contribuído significativamente para a nossa compreensão da natureza laríngea e da origem dos cancros, marcando uma presença substancial nas publicações de investigação sobre o cancro da laringe [1].
- Meio de crescimento
- O EMEM (meio essencial mínimo de Eagle) é utilizado para cultivar células Hep 2. Este meio é suplementado com 10% de FBS, 1,0 g/L de glicose, 2,2 g/L de NaHCO3, 2,0 mM de L-glutamina, 1% de NEAA e 1 mM de piruvato de sódio para um crescimento celular ideal. O meio deve ser renovado 2 a 3 vezes por semana.
- Tempo de duplicação
- O tempo de duplicação relatado para as células Hep 2 é de aproximadamente 40 horas.
- Tipo de crescimento
- As células Hep 2 são aderentes e crescem em monocamadas.
- Nível de biossegurança
- BSL-1
- Disponível em
- Cytion — Encomendar Hep2
Origem e características gerais das células Hep 2
A origem e as características gerais de uma linha celular definem a sua aplicabilidade na investigação. Esta secção irá ajudá-lo a conhecer a origem e algumas características salientes das células Hep 2. Por exemplo, irá descobrir: O que é a linha celular HEp-2? Qual é a origem das células Hep 2? E qual é a morfologia das células Hep 2?
- A Hep 2, uma linha celular epitelial humana imortal, foi descrita pela primeira vez por H.W. Toolan como células de carcinoma laríngeo em 1954. No entanto, recentemente, foi relatado que a linha celular Hep 2 é composta por células de adenocarcinoma cervical e teve origem na contaminação da linha celular Hela [2].
- As células Hep 2 contêm cromossomas marcadores Hela e revelam-se positivas para queratina e sequências de ADN do papilomavírus humano, conforme confirmado através de coloração com imunoperoxidase e PCR, respetivamente.
- A Hep 2, derivada da linha celular Hela, possui uma morfologia de tipo epitelial.
- A linha celular Hep 2 apresenta aberrações cromossómicas tanto estruturais como numéricas, com um cariótipo quase triploide [3].
Linha celular HEp-2: Informações sobre a cultura
Antes de trabalhar com uma linha celular, é necessário conhecer os seguintes pontos-chave para a sua cultura. Estas informações podem ser úteis para cultivar e manter eficazmente a linha celular. Deve saber: Qual é o tempo de duplicação das células HEp-2? As células Hep 2 são aderentes? Qual é a densidade de sementeira das células Hep 2?
Tempo de duplicação da população:
O tempo de duplicação relatado para as células Hep 2 é de aproximadamente 40 horas.
Adesivas ou em suspensão:
As células Hep 2 são aderentes e crescem em monocamadas.
Densidade de sementeira:
Uma densidade de sementeira de 1 x 10⁴ células/cm² é ideal para a cultura de células Hep 2. Para a sementeira, as células Hep 2 aderentes são lavadas com solução 1x PBS, seguida de incubação com solução de dissociação Accutase. Após 8–10 minutos de incubação à temperatura ambiente, as células são ressuspensas em meio e centrifugadas. As células recolhidas são então dispensadas em meio fresco e transferidas para novos frascos para cultura.
Meio de crescimento:
Utiliza-se EMEM ou meio essencial mínimo de Eagle para cultivar células Hep 2. Este meio é suplementado com 10% de FBS, 1,0 g/L de glicose, 2,2 g/L de NaHCO3, 2,0 mM de L-glutamina, 1% de NEAA e 1 mM de piruvato de sódio para um crescimento celular ideal. O meio deve ser renovado 2 a 3 vezes por semana.
Condições de crescimento:
Tal como outras linhas celulares de mamíferos, as Hep 2 também são cultivadas numa incubadora humidificada, regulada para uma temperatura de 37 °C e com um fornecimento contínuo de 5% de CO2.
Armazenamento:
As células Hep 2 podem ser armazenadas em congeladores elétricos de temperatura ultrabaixa (abaixo de -150 °C) ou em fase de vapor de nitrogénio líquido para armazenamento a longo prazo.
Processo de congelação e meio:
Os meios de congelamento recomendados para as células Hep 2 são o CM-1 ou o CM-ACF. As células devem ser congeladas utilizando um processo de congelamento lento que permita uma descida gradual da temperatura de 1 °C e proteja a viabilidade celular.
Processo de descongelação:
O frasco com as células congeladas é rapidamente descongelado por agitação em banho-maria a 37 °C até restar um pequeno pedaço de gelo. As células são então adicionadas a meio fresco e centrifugadas para remover os componentes do meio de congelamento. Posteriormente, o sedimento celular é ressuspenso no meio e as células são distribuídas em frascos de cultura. As células precisam de repousar durante quase 24 horas para aderirem.
Nível de biossegurança
Recomenda-se um laboratório de nível de biossegurança 1 para o manuseamento e manutenção de culturas de células Hep 2.
Vantagens e limitações das células Hep 2
Quase todas as linhas celulares apresentam uma combinação única de vantagens e limitações que contribuem para a sua utilização no campo da investigação. Esta secção irá descrever alguns dos principais prós e contras associados à linha celular Hep 2.
Vantagens
As principais vantagens da linha celular Hep 2 são:
- Origem humana: A Hep 2 é derivada de células epiteliais humanas, tornando-a um modelo in vitro valioso para o estudo de doenças humanas e infeções virais.
- Detecção de ANA: A linha celular Hep 2 possui um conjunto de proteínas nativas que apresenta numerosos antigénios, tornando-a um excelente substrato para a detecção de anticorpos antinucleares (ANA). Esta característica permite um rastreio específico e altamente sensível de ANA no soro, tornando-a uma ferramenta de diagnóstico crucial para a identificação de doenças do tecido conjuntivo.
Limitações
- Anomalias cromossómicas: As células Hep 2 apresentam múltiplas anomalias cromossómicas numéricas e estruturais. Estas anomalias podem afetar o comportamento celular e restringir a sua aplicabilidade em certas experiências laboratoriais.
- Tumorigenicidade: A Hep 2, uma linha celular epitelial humana derivada de tumor, pode possuir anomalias genéticas tipicamente ausentes nas células epiteliais. Consequentemente, a utilização de células Hep 2 pode ser limitada em estudos específicos centrados na fisiologia celular normal.
Expansão das aplicações da linha celular Hep 2 na investigação biomédica
A linha celular Hep 2 destaca-se como um modelo exemplar para uma multiplicidade de aplicações na investigação biomédica. Reconhecidas pela sua versatilidade, estas células desempenham papéis críticos em experiências in vitro, que vão desde a análise de recetores até ao estudo de doenças complexas.
Exploração de mecanismos tumorigénicos e alvos terapêuticos com células Hep 2
As células Hep 2, por serem tumorigénicas, são fundamentais para aprofundar as complexidades da biologia do cancro. Proporcionam insights sobre as vias de sinalização do cancro e estudos mecanísticos, sendo um pilar na triagem e avaliação de medicamentos anticancerígenos. Por exemplo, um estudo perspicaz utilizou Hep 2 para delinear a influência do miRNA-33a na proliferação de células cancerígenas. As descobertas esclareceram os efeitos antiproliferativos do miRNA-33a através da sua interação com o PIM1, um oncogene conhecido, sugerindo um novo alvo terapêutico [4]. Noutro caso, as células Hep 2 foram utilizadas para avaliar o potencial terapêutico das nanopartículas de óxido de zinco de Marsdenia tenacissima, destacando a sua eficácia antiproliferativa e apoptótica [5].
Avançar a investigação virológica com os insights das células Hep 2
A suscetibilidade das células Hep 2 a vários vírus humanos torna-as um recurso inestimável na investigação virológica. Têm sido utilizadas com eficácia na expressão de genes virais do SARS-CoV-2 para desvendar a complexa interação entre o vírus e os mecanismos celulares do hospedeiro [6]. Esta aplicação é particularmente crucial na era atual, em que compreender e combater infeções virais como a COVID-19 é uma prioridade global.
Decifrando as funções celulares: manipulação genética nas células Hep 2
A adaptabilidade da linha celular Hep 2 à manipulação genética sublinha a sua utilidade em estudos mecanísticos. Os investigadores aproveitam esta característica para modular a expressão genética e elucidar os papéis de genes específicos nas funções celulares. Um estudo notável envolveu a superexpressão da proteína de ligação ao ARN RBM6 em células Hep 2, o que facilitou a investigação do seu potencial supressor de tumores, fornecendo informações valiosas sobre os fundamentos moleculares do cancro [7].
Melhorar o diagnóstico de doenças através de aplicações da linha celular Hep 2
Para além destes domínios de investigação, as células Hep 2 são aclamadas pelas suas capacidades de diagnóstico, especialmente na deteção de ANAs, que são fundamentais no diagnóstico de doenças autoimunes, como o lúpus eritematoso sistémico. A precisão com que as células Hep 2 podem apresentar ANAs apoia o diagnóstico e o desenvolvimento de tratamentos direcionados, melhorando a nossa compreensão das patologias autoimunes e a assistência prestada aos doentes.
Através destas diversas aplicações, as células Hep 2 têm contribuído significativamente para os avanços na investigação translacional do cancro, no estudo das infeções virais e na exploração dos mecanismos celulares. A sua contribuição para a geração de dados clinicamente relevantes é inestimável, confirmando o seu papel indispensável tanto no laboratório como na clínica. À medida que a investigação continua a evoluir, a linha celular Hep 2 irá certamente permanecer na vanguarda, auxiliando na descoberta de novos tratamentos e expandindo o nosso conhecimento sobre a saúde e as doenças humanas.
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Células Hep 2: Publicações de investigação
A seguir apresentam-se algumas publicações de investigação interessantes e mais citadas sobre as células Hep 2.
- A síntese de nanopartículas de óxido de zinco a partir de Marsdenia tenacissima inibe a proliferação celular e induz a apoptose em células cancerígenas da laringe (Hep-2)
Este artigo, publicado no Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology (2019), explorou o potencial anticancerígeno das nanopartículas de óxido de zinco de Marsdenia tenacissima biossintetizadas na linha celular Hep 2. - Nanopartículas de PLGA bioformuladas carregadas com hesperidina neutralizam a via apoptótica intrínseca mediada pelas mitocôndrias em células
cancerígenas Este artigo foi publicado no Journal of Inorganic and Organometallic Polymers and Materials em 2021. Este estudo examinou as propriedades anticancerígenas de nanopartículas de ácido polilático-co-glicólico (PLGA) bioformuladas e carregadas com hesperidina em células Hep 2. - Atividade antiviral do extrato etanólico de Lophatherum gracile contra a infeção
pelo vírus sincicial respiratório Esta publicação no Journal of Ethnopharmacology em 2019 utilizou células Hep 2 para estudar a infeção pelo vírus sincicial respiratório e selecionar medicamentos antivirais contra o mesmo. O estudo relatou o promissor potencial antiviral do extrato etanólico de uma planta medicinal, ou seja, Lophatherum gracile, contra a infeção pelo vírus sincicial respiratório. - Avaliação de extratos aquosos de quatro plantas aromáticas quanto à sua atividade contra a adesão de Candida albicans às células
epiteliais HEp-2 humanas Esta investigação foi publicada no Gene Reports (2020). Este estudo explorou o potencial inibidor de extratos aquosos de quatro plantas aromáticas contra a adesão de Candida albicans às células epiteliais Hep 2 humanas. - A proteína de sinalização induzível por Wnt1-1 regula a glicólise e a quimiorresistência do carcinoma de células escamosas da laringe através da via
YAP1/TEAD1/GLUT1 Este estudo foi publicado no Journal of Cellular Physiology em 2019. O estudo relata que a proteína de sinalização induzível por Wnt1 (WISP1) interage com a via YAP1/TEAD1/GLUT1 e regula o metabolismo da glicose e a quimiorresistência na linha celular Hep 2.
Recursos para a linha celular Hep2: protocolos, vídeos e muito mais
A Hep 2 é uma linha celular bem conhecida. Existem vários recursos disponíveis sobre a linha celular Hep 2.
- Subcultura da linha celular Hep 2: Este vídeo é um guia passo a passo para a subcultura de células Hep 2.
- Rastreio de anticorpos antinucleares (ANA) em células Hep 2: Este vídeo explica o rastreio de anticorpos antinucleares (ANA) utilizando a linha celular Hep 2.
- Cultura de Hep 2: Esta ligação contém informações básicas sobre cultura celular das células Hep 2. Inclui divisão celular, congelamento e descongelamento de células.
Perguntas frequentes sobre as células HEp-2 na investigação biomédica
Referências
- Fusi, M. e S. Dotti, Adaptação da linha celular HEp-2 a sistemas de cultura totalmente isentos de derivados animais e análise em tempo real do crescimento celular. Biotechniques, 2021. 70(6): p. 319-326.
- Gorphe, P., Uma revisão abrangente da linha celular Hep-2 na investigação translacional do cancro da laringe. Am J Cancer Res, 2019. 9(4): p. 644-649.
- Wang, M., et al., Os fibroblastos associados ao cancro num tumor laríngeo xenotransplantado estabelecido em HEp-2 humano não derivam de células cancerígenas através da transição epitelial-mesenquimal, estando fenotipicamente ativados mas cariotipicamente normais. PLoS One, 2015. 10(2): p. e0117405.
- Karatas, O.F., Potencial antiproliferativo do miR-33a em células Hep-2 de cancro da laringe através do alvo PIM1. Head Neck, 2018. 40(11): p. 2455-2461.
- Wang, Y., et al., A síntese de nanopartículas de óxido de zinco a partir de Marsdenia tenacissima inibe a proliferação celular e induz a apoptose em células de cancro da laringe (Hep-2). Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology, 2019. 201: p. 111624.
- Zhang, J., et al., Um estudo sistémico e molecular da localização subcelular das proteínas do SARS-CoV-2. Signal Transduct Target Ther, 2020. 5(1): p. 269.
- Wang, Q., et al., A proteína de ligação ao ARN RBM6, enquanto gene supressor de tumores, reprime o crescimento e a progressão do carcinoma laríngeo. Gene, 2019. 697: p. 26-34.