HT22-cellelinje
HT22 er en murin nevroncellelinje som ofte brukes i nevrovitenskapelig forskning. Den er verdifull for å studere nevrogenerative lidelser og teste potensielle nevrobeskyttende terapier eller behandlinger. HT22-cellene er dessuten glutamatfølsomme, og brukes derfor til å undersøke glutamatindusert toksisitet eller nevronskader.
Denne artikkelen belyser de viktigste aspektene ved HT22-celler som kan hjelpe deg i forskningsarbeidet ditt. Den vil hovedsakelig ta for seg
- Generelle egenskaper og opprinnelse til HT22-celler
- Informasjon om dyrking av HT22-cellelinjen
- Fordeler og ulemper med HT22-cellelinjen
- Forskningsapplikasjoner av HT22-cellelinjen
- Forskningspublikasjoner med HT22-celler
- Ressurser for HT22-celler: Protokoller, videoer og mer
1. Generelle egenskaper og opprinnelse til HT22-celler
Denne delen av artikkelen vil belyse HT22-cellenes opprinnelse og generelle egenskaper. Det er nødvendig å kjenne til denne informasjonen om en cellelinje før du begynner å arbeide med den. Her vil du lære mer: Hva er HT22-celler? Hva er morfologien til HT22 hippocampusceller? Hva er størrelsen på HT22-celler?
HT22 er en kontinuerlig cellelinje avledet fra hippocampusregionen i musehjernen. Det er en subklon av HT-4-cellelinjen som er utviklet ved udødeliggjøring av murint nevronalt vev via et temperaturfølsomt polyomavirus simian virus 40 (SV40) T-antigen.
Disse cellene skiller seg fra modne hippocampusceller ved at de mangler glutamat- og kolinerge reseptorer, slik som modne nevroner av hippocampusopprinnelse. De er derfor ikke egnet for hukommelsesrelaterte forskningsstudier [1].
HT22-celler har et epitelcellelignende utseende.
2. Informasjon om dyrking av HT22-cellelinjen
HT22-celler brukes i nevrovitenskapelige forskningslaboratorier. Før forskerne dyrker disse cellene, er de på utkikk etter viktig informasjon om celledyrking som gjør arbeidet deres enkelt og effektivt. Denne delen dekker alle de viktigste punktene for dyrking av HT22-celler. Du vil få vite følgende Hva er HT22-cellenes fordoblingstid? Hvordan dyrker du HT22-celler? Hva er HT22-cellekulturprotokollen? Hva er HT22-cellemediet?
Nøkkelpunkter for dyrking av HT22-celler
|
Doblingstid: |
HT22-cellenes fordoblingstid er ca. 15 timer. |
|
Adherent eller i suspensjon: |
HT22-celler er adherente. |
|
Forhold mellom subkultivering: |
Subkultiveringsforholdet for HT22 hippocampusceller er 1:3 til 1:6. Kort fortalt fjernes mediet, og de adherente cellene skylles med 1 x PBS. Accutase dissosiasjonsløsning tilsettes i kolben, og cellene inkuberes i 8 til 10 minutter ved omgivelsestemperatur. Deretter tilsettes nytt dyrkingsmedium, og cellene samles opp i et hetteglass for sentrifugering. Cellepelleten som oppnås, resuspenderes forsiktig, og cellene fordeles i en dyrkingskolbe for vekst. |
|
Vekstmedium: |
DMEM-medium brukes til dyrking av HT22-celler. Det er supplert med 10 % FBS, 4,5 g/L glukose, 4 mM L-glutamin, 1,5 g/L NaHCO3 og 1,0 mM natriumpyruvat for optimal cellevekst. |
|
Vekstbetingelser: |
HT22-cellekulturer oppbevares i en befuktet inkubator (37 °C temperatur) med 5 %CO2-tilførsel . |
|
Oppbevaring: |
Frosne HT22-celler kan langtidslagres ved temperaturer under -150 °C, enten i dampfasen av flytende nitrogen eller i en elektrisk fryser med ekstremt lav temperatur. |
|
Fryseprosess og medium: |
HT22-celler kan fryses ned i CM-1- eller CM-ACF-medium ved hjelp av en langsom nedfrysingsmetode. Denne prosessen gjør at temperaturen i prøven bare synker med 1 °C per minutt, beskytter cellene mot sjokk og bidrar til å opprettholde levedyktigheten. |
|
Tineprosess: |
Cellene tines i et vannbad på 37 °C i 40 til 60 sekunder til det bare er en liten isklump igjen. Deretter tilsettes dyrkingsmedium til cellene, og de sentrifugeres for å eliminere komponenter fra frysemediet. Cellepelleten resuspenderes, og cellene helles over i en ny kolbe med dyrkningsmedium. Deretter inkuberes cellene ved 37 °C i en inkubator i minst 24 timer. |
|
Biosikkerhetsnivå: |
Laboratorieinnstillinger på biosikkerhetsnivå 1 er obligatorisk for dyrking av HT22-celler. |
3. Fordeler og ulemper med HT22-cellelinjen
HT22 hippocampusceller er forbundet med noen fordeler og ulemper som skiller dem fra andre nevronale cellelinjer. Her nevnes noen bemerkelsesverdige fordeler og ulemper ved cellelinjen.
Fordeler og ulemper
Fordelene med den murine nevroncellelinjen HT22 er
-
Rask veksthastighet
HT22-celler har en fordoblingstid på 15 timer, noe som muliggjør raske og effektive eksperimenter og bidrar til raske forskningsresultater.
-
Udødeliggjøring
HT22 er en udødeliggjort cellelinje, noe som sikrer kontinuerlig vekst over lengre perioder. Dette gir jevn tilgang på celler, reduserer tidsbruk og kostnader, og legger til rette for langsiktige eksperimenter med konsistente resultater.
Ulemper
Ulempene med HT22-celler er følgende:
-
Murin opprinnelse
HT22-cellelinjen ble avledet fra hippocampusvev fra musehjerner, som kanskje ikke fullt ut representerer kompleksiteten i fysiologien og atferden til humane nevronceller, noe som begrenser deres translasjonsrelevans.
4. forskningsanvendelser av HT22-cellelinjen
HT22-celler er mye brukt i nevrobiologisk forskning. I denne delen av artikkelen diskuterer vi noen lovende bruksområder for denne cellelinjen:
- Nevrovitenskapelig forskning: HT22-celler er mye brukt i forskning på nevrodegenerative sykdommer, f.eks. Alzheimers og Parkinsons sykdom. De anses som et verdifullt forskningsverktøy for å studere nevrotoksisitet og oksidative stressmekanismer knyttet til disse sykdommene. Forskning utført i 2020 viste at PI3K/AKT/CREB-stien er involvert i hyperglykemi-indusert nevral toksisitet i HT22-celler [2]. Tilsvarende ble det i en nylig studie foreslått at Nrf2/HO-1-veien og NF- κB-signalaksen spiller en viktig rolle i HT22-amyloidbetatoksisitet [3].
- Screening av legemidler: HT22-celler brukes i stor utstrekning til testing og screening av legemidler. De hjelper forskere med å identifisere potensielle terapeutiske midler som har nevrobeskyttende effekter i kampen mot nevrodegenerative sykdommer. I en studie utført i 2019 ble det nevrobeskyttende potensialet til tetrahydrokurkuminforbindelsen i glutamatbehandlede HT22-hippocampusceller undersøkt. Her induserer glutamat oksidativt stress i HT22-celler og forårsaker celledød ved å aktivere mitogenaktiverte proteinkinaser [4].
5. Forskningspublikasjoner som omhandler HT22-celler
Her er noen interessante forskningsartikler som omhandler HT22-cellelinjen:
Denne studien i International Journal of Molecular Medicine (2019) foreslår det nevrobeskyttende potensialet til crocin, en forbindelse isolert fra Crocus sativus L., iL-glutamatskadedeHT22-celler.
Denne publikasjonen i Neuropharmacology (2018) rapporterte at oksindolderivater beskytter mot HT22-celledød indusert av oksidativt stress.
Ginsenosid Rb2 undertrykker glutamatmediert oksidativt stress og nevronal celledød i HT22-celler
Denne forskningsartikkelen ble publisert i Journal of Ginseng Research i 2019. Denne studien undersøkte de nevrobeskyttende effektene av et naturlig produkt, ginsenosid Rb2, ved hjelp av HT22-cellelinjen. Studien fant at ginsenosid rb2 effektivt reduserte glutamatindusert oksidativt stress og celledød i murine hippocampusceller HT22.
Denne studien i Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) evaluerte det cytotoksiske potensialet til sølvnanopartikler i HT22-cellelinjen.
Ferrostatin-1 beskytter HT-22-celler mot oksidativ toksisitet
Denne forskningsartikkelen ble publisert i 2020 i Neural regeneration research. Den foreslo at ferrostatin-1, en hemmer av ferroptose, forhindrer oksidativ toksisitet i HT22 hippocampusceller.
6. Ressurser for HT22-celler: Protokoller, videoer og mer
Noen nettressurser om HT22-celler forklarer protokollene for transfeksjon, differensiering og cellekultur:
- HT22-transfeksjon: Dette dokumentet inneholder en optimalisert protokoll for HT22-transfeksjon i 24- og 96-brønners cellekulturplater.
- HT22-celledifferensiering: Denne artikkelen gir deg omfattende veiledning om HT22-differensieringsprotokollen.
Følgende lenke inneholder HT22-celledyrkingsprotokollen:
- Subkulturering av HT22-celler: Denne lenken vil hjelpe deg med å lære subkultiveringsprotokollen for HT22-cellelinjen. Videre vil den hjelpe deg med å lære protokollen for indusering av nevrotoksisitet i celler.
- HT22 hippocampusceller: Dette nettstedet inneholder mye nyttig informasjon om HT22-cellenes fordoblingstid, medier og celledyrkingsprotokoller.
Referanser
- He, M., et al., Differensiering gjør HT22-nevroner mer mottakelige for eksitotoksisitet. Neural Regen Res, 2013. 8(14): p. 1297-306.
- Zhang, S., et al., Fisetin forhindrer HT22-celler fra høy glukoseindusert nevrotoksisitet via PI3K / Akt / CREB-signalvei. Grenser i nevrovitenskap, 2020. 14: p. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Beskyttende effekter av berberin mot β-amyloidindusert nevrotoksisitet i HT22-celler via Nrf2 / HO-1-banen. Bioorganisk kjemi, 2023. 133: p. 106-210.
- Park, C.-H., et al., Nevrobeskyttende effekter av tetrahydrocurcumin mot glutamatindusert oksidativt stress i hippocampale HT22-celler. Molekyler, 2019. 25(1): p. 144.