HT22-cellelinje
HT22 er en murin nevroncellelinje som ofte brukes i nevrovitenskapelig forskning. Den er verdifull for å studere nevrodegenerative lidelser og teste potensielle nevrobeskyttende terapier eller behandlinger. Dessuten er HT22-cellene glutamatfølsomme og brukes derfor til å undersøke glutamatindusert toksisitet eller nevronisk skade.
- Vekstmedium
- DMEM-medium brukes til dyrking av HT22-celler. Det tilsettes 10 % FBS, 4,5 g/l glukose, 4 mM L-glutamin, 1,5 g/l NaHCO3 og 1,0 mM natriumpyruvat for optimal cellevekst.
- Fordoblingstid
- Doblingstiden for HT22-celler er omtrent 15 timer.
- Veksttype
- HT22-celler er vedheftende.
- Biosikkerhetsnivå
- BSL-1
- Tilgjengelig fra
- Cytion — Bestill HT22
Denne artikkelen belyser de viktigste aspektene ved HT22-celler som kan være til hjelp i ditt forskningsarbeid. Den vil hovedsakelig omhandle:
- Generelle egenskaper og opprinnelse til HT22-celler
- Informasjon om dyrking av HT22-cellelinjen
- Fordeler og ulemper ved HT22-cellelinjen
- Forskningsanvendelser av HT22-cellelinjen
- Forskningspublikasjoner om HT22-celler
- Ressurser for HT22-celler: Protokoller, videoer og mer
Generelle egenskaper og opprinnelse til HT22-celler
Denne delen av artikkelen vil belyse opprinnelsen og de generelle egenskapene til HT22-celler. Det er nødvendig å kjenne til denne informasjonen om en cellelinje før man begynner å arbeide med den. Her vil du lære: Hva er HT22-celler? Hva er morfologien til HT22-hippocampus-celler? Hva er størrelsen på HT22-celler?
HT22 er en kontinuerlig cellelinje avledet fra hippocampus-regionen i musens hjerne. Det er en subklon av den opprinnelige HT-4-cellelinjen utviklet ved immortalisering av murint nevronvev via et temperaturfølsomt polyomavirus, simian virus 40 (SV40) T-antigen.
Disse cellene skiller seg fra modne hippocampus-celler ved at de mangler glutamat- og kolinerge reseptorer, slik som modne nevroner med opprinnelse i hippocampus. De er derfor ikke egnet for forskning knyttet til hukommelse [1].
HT22-celler har et epitelcellelignende utseende.
Informasjon om dyrking av HT22-cellelinjen
HT22-celler brukes i forskningslaboratorier innen nevrovitenskap. Før de dyrker disse cellene, søker forskerne etter viktig informasjon om cellekultivering som gjør arbeidet deres enkelt og effektivt. Denne delen dekker alle viktige punkter for dyrking av HT22-celler. Du vil lære: Hva er doblingstiden for HT22-celler? Hvordan dyrker man HT22-celler? Hva er protokollen for dyrking av HT22-celler? Hva er dyrkningsmediet for HT22-celler?
Viktige punkter for dyrking av HT22-celler
Fordoblingstid:
Doblingstiden for HT22-celler er omtrent 15 timer.
Adherent eller i suspensjon:
HT22-celler er vedheftende.
Subkultiveringsforhold:
Subkultiveringsforholdet for HT22-hippocampus-celler er 1:3 til 1:6. Kort fortalt fjernes mediet, og adherente celler skylles med 1 x PBS. Accutase-disosieringsløsning tilsettes i kolben, og cellene inkuberes i 8 til 10 minutter ved romtemperatur. Deretter tilsettes ferskt dyrkningsmedium, og cellene samles opp i et hylse for sentrifugering. Den oppnådde cellepelleten resuspenderes forsiktig, og cellene dispenseres i en dyrkningskolbe for vekst.
Vekstmedium:
DMEM-medium brukes til dyrking av HT22-celler. Det tilsettes 10 % FBS, 4,5 g/l glukose, 4 mM L-glutamin, 1,5 g/l NaHCO3 og 1,0 mM natriumpyruvat for optimal cellevekst.
Vekstbetingelser:
HT22-cellekulturer oppbevares i en fuktet inkubator (37 °C) med 5 % CO2-tilførsel.
Oppbevaring:
Frosne HT22-celler kan lagres ved temperaturer under -150 °C, enten i dampfasen av flytende nitrogen eller i en elektrisk fryser med ultralav temperatur for langvarig lagring.
Fryseprosess og medium:
HT22-celler kan fryses i CM-1- eller CM-ACF-medier ved hjelp av en langsom fryseprosess. Denne prosessen tillater kun en temperaturreduksjon på 1 °C per minutt, beskytter cellene mot sjokk og bidrar til å opprettholde deres levedyktighet.
Tineprosess:
Cellene tines i et vannbad ved 37 °C i 40 til 60 sekunder til det gjenstår en liten isklump. Deretter tilsettes dyrkningsmedium til cellene, og de sentrifugeres for å fjerne komponenter fra frysemediet. Cellepelleten resuspenderes, og cellene helles over i en ny kolbe som inneholder dyrkningsmedium. Deretter inkuberes cellene ved 37 °C i en inkubator i minst 24 timer.
Biosikkerhetsnivå:
Laboratorieforhold på biosikkerhetsnivå 1 er obligatorisk for dyrking av HT22-celler.
Fordeler og ulemper ved HT22-cellelinjen
HT22-hippocampus-celler har noen fordeler og ulemper som skiller dem fra andre nevronale cellelinjer. Her nevnes noen viktige fordeler og ulemper ved cellelinjen.
Fordeler
Fordelene med den murine nevronale cellelinjen HT22 er:
-
Rask vekst
HT22-celler har en doblingstid på 15 timer, noe som muliggjør rask og effektiv eksperimentering og bidrar til raske forskningsresultater.
-
Immortalisering
HT22 er en immortalisert cellelinje, noe som sikrer kontinuerlig vekst over lengre perioder. Dette gir jevn tilgang på celler, reduserer tid og kostnader og muliggjør langvarige eksperimenter med konsistente resultater.
Ulemper
Ulempene ved HT22-celler er:
-
Mus-opprinnelse
HT22-cellelinjen stammer fra hippocampusvev fra mus, noe som kanskje ikke fullt ut gjenspeiler kompleksiteten i menneskelige nervecellers fysiologi og atferd, noe som begrenser deres translasjonelle relevans.
4. Forskningsanvendelser av HT22-cellelinjen
HT22-cellene brukes mye i nevrobiologisk forskning. Noen lovende anvendelser av denne cellelinjen diskuteres i denne delen av artikkelen:
- Nevrovitenskapelig forskning: HT22-celler brukes mye i forskning på nevrodegenerative sykdommer, for eksempel Alzheimers og Parkinsons sykdom. De anses som et verdifullt forskningsverktøy for å studere nevrotoksisitet og mekanismer for oksidativt stress knyttet til disse sykdommene. Forskning utført i 2020 fant at PI3K/AKT/CREB-signalveien er involvert i hyperglykemi-indusert nevral toksisitet i HT22-celler [2]. Tilsvarende foreslo en nylig studie at Nrf2/HO-1-signalveien og NF-κB-signalaksen spiller en viktig rolle i HT22-amyloid-beta-toksisitet [3].
- Legemiddelscreening: HT22-celler brukes i stor utstrekning til legemiddeltesting og screening. De hjelper forskere med å identifisere potensielle terapeutiske midler som viser nevrobeskyttende effekter for å bekjempe nevrodegenerative sykdommer. En studie utført i 2019 undersøkte det nevrobeskyttende potensialet til tetrahydrocurcumin-forbindelsen i glutamatbehandlede HT22-hippocampus-celler. Her induserer glutamat oksidativt stress i HT22-celler og forårsaker celledød ved å aktivere mitogenaktiverte proteinkinaser [4].
5. Forskningspublikasjoner som omhandler HT22-celler
Her er noen interessante forskningsartikler om HT22-cellelinjen:
Denne studien i International Journal of Molecular Medicine (2019) foreslo det nevrobeskyttende potensialet til crocin, et stoff isolert fra Crocus sativus L., i L-glutamat-skadede HT22-celler.
Denne publikasjonen i Neuropharmacology (2018) rapporterte at oksindolderivater beskytter mot HT22-celledød forårsaket av oksidativt stress.
Ginsenosid Rb2 demper glutamat-mediert oksidativt stress og nevronalt celledød i HT22-celler
Denne forskningsartikkelen ble publisert i Journal of Ginseng Research i 2019. Denne studien undersøkte de nevrobeskyttende effektene av et naturprodukt, ginsenosid Rb2, ved bruk av HT22-cellelinjen. Studien fant at ginsenosid Rb2 effektivt reduserte glutamatindusert oksidativt stress og celledød i murine hippocampus-celler HT22.
Denne studien i Ecotoxicology and Environmental Safety (2021) evaluerte det cytotoksiske potensialet til sølvnanopartikler i HT22-cellelinjen.
Ferrostatin-1 beskytter HT-22-celler mot oksidativ toksisitet
Denne forskningsartikkelen ble publisert i 2020 i Neural regeneration research. Den foreslo at ferrostatin-1, en hemmer av ferroptose, forhindrer oksidativ toksisitet i HT22-hippokampusceller.
Ressurser for HT22-celler: Protokoller, videoer og mer
Noen nettressurser om HT22-cellene forklarer protokollene for transfeksjon, differensiering og cellekultur:
- HT22-transfeksjon: Dette dokumentet inneholder en optimalisert protokoll for HT22-transfeksjon i 24- og 96-brønners cellekulturplater.
- HT22-celledifferensiering: Denne artikkelen gir deg en omfattende veiledning om HT22-differensieringsprotokollen.
Følgende lenke inneholder protokollen for HT22-cellekultur:
- HT22-celle-subkultivering: Denne lenken vil hjelpe deg med å lære subkultiveringsprotokollen for HT22-cellelinjen. Videre vil den hjelpe deg med å lære protokollen for å indusere nevrotoksisitet i celler.
- HT22-hippocampus-celler: Dette nettstedet inneholder mye nyttig informasjon om HT22-cellers doblingstid, medier og cellekulturprotokoller.
Referanser
- He, M., et al., Differensiering gjør HT22-nevroner mottakelige for eksitotoksisitet. Neural Regen Res, 2013. 8(14): s. 1297-306.
- Zhang, S., et al., Fisetin forhindrer HT22-celler fra høyt glukoseindusert nevrotoksisitet via PI3K/Akt/CREB-signalveien. Frontiers in Neuroscience, 2020. 14: s. 241.
- Zhang, R.-l., et al., Beskyttende effekter av berberin mot β-amyloid-indusert nevrotoksisitet i HT22-celler via Nrf2/HO‐1-banen. Bioorganic Chemistry, 2023. 133: s. 106-210.
- Park, C.-H., et al., Nevrobeskyttende effekter av tetrahydrocurcumin mot glutamatindusert oksidativt stress i hippocampus-HT22-celler. Molecules, 2019. 25(1): s. 144.