HT-29-cellelinje
HT-29 er en human kolorektal kreftcellelinje med et bredt spekter av anvendelser innen kreft- og toksikologisk forskning. Disse cellene er for eksempel følsomme for standard kjemoterapeutiske behandlinger mot kolorektal kreft. I tillegg er HT-29-cellelinjen en godt karakterisert in vitro-modell for å undersøke tarmepitelets respons på bakterieinfeksjon. HT-29-cellene etterligner egenskapene til modne tarmceller, dvs. enterocytter, og er dermed egnet for studier av vedheft og mekanismer.
- Vekstmedium
- Se produktsiden
- Fordoblingstid
- Se produktsiden
- Veksttype
- Adherent
- Biosikkerhetsnivå
- BSL-1
- Tilgjengelig fra
- Cytion — Bestill HT-29
HT-29-celler: Opprinnelse og generell informasjon
Før du bruker en cellelinje, bør du kjenne til de generelle egenskapene og opprinnelsen til cellelinjen. Denne delen vil hjelpe deg med å lære: Hva er HT-29-celler? Er HT-29 en cellelinje for tykktarmskreft? Hva er morfologien til HT-29-celler?
Hva er HT-29-cellelinjen? HT-29 er en kolorektal adenokarsinomcellelinje etablert i 1964 av Trempe og Fogh. Cellene stammer opprinnelig fra primærtumoren til en kaukasisk kvinne (44 år) med kolorektalt adenokarsinom [1]. Siden etableringen har denne cellelinjen blitt brukt til å studere kreftbiologi.
Morfologi av HT-29-celler: HT-29-cellelinjen har generelt epitel-lignende morfologi. Differensierte celler vokser i monolag, danner tette celle-celle-forbindelser og har en apikal børstekant. Hvis disse cellene dyrkes i glukosemangelmedium eller gis induktorer som butyrat eller syre, viser de enterocyttlignende trekk.
Cellestørrelse: Diameteren på HT-29-kolorektal kreftcellelinjen er 11 μm.
Genom og ploidi: Det modale antallet kromosomer for HT-29-cellelinjen er 71. Det kan variere fra 68 til 72. Videre er det strømlinjeformede kromosomtallet for HT-29-celler hypertriploid, med 2S-komponenten forekommende med en frekvens på 2,4 %.
Hva er HT29 MTX? HT29 MTX er en metotreksatresistent cellelinje isolert fra den opprinnelige HT-29 humane tykktarmskreftcellelinjen ved tilpasning til 10 µM metotreksat. Disse cellene har egenskaper som modne slimutskillende bægerceller.
Informasjon om cellekulturen til HT-29-cellelinjen
Å kjenne til de grunnleggende dyrkingskravene til en cellelinje kan gjøre arbeidet ditt med den enklere. Du bør vite: hva er doblingstiden for HT-29-cellelinjen? Hva er utsåtstettheten for HT-29-celler? Hvilket medium skal brukes for HT-29-celler?
Fordoblingstid
Den gjennomsnittlige doblingstiden for HT-29-cellelinjen er 24 timer.
Adherent/suspensjon
HT-29 er en vedheftende cellelinje.
Utsåingstetthet
Den anbefalte utsåingstettheten for HT-29-celler er 3 x 104 celler/cm2. Dyrkede celler vaskes med 1 X PBS og løsnes etter inkubasjon med Accutase i 8–10 minutter. Ferskt medium tilsettes, og cellene sentrifugeres. Cellepelleten resuspenderes, og cellene fordeles i nye kolber med anbefalt celletetthet.
Vekstmedium
Eagle's Minimum Essential Medium (EMEM) tilsatt 2,5 mM L-glutamin og 10 % FBS brukes for optimal dyrking av HT-29-celler. Mediet bør skiftes 2 til 3 ganger i uken.
Vekstbetingelser
HT-29-celler krever en fuktet inkubator med en temperatur på 37 °C og 5 % CO2-tilførsel for vekst.
Oppbevaring
Disse cellene oppbevares i dampfasen av flytende nitrogen ved under -195 °C.
Frysemedium og prosess
Frysemediet som brukes for HT-29-cellelinjen er CM-1 eller CM-ACF. Cellene fryses ved hjelp av en langsom fryseprosess som medfører et temperaturfall på 1 °C og effektivt beskytter cellenes levedyktighet.
Tineprosess
Frosne HT-29-celler tines i et vannbad innstilt på 37 °C. Disse cellene kan resuspenderes og dispenseres direkte i en kolbe med ferskt vekstmedium. Alternativt kan de tine cellene sentrifugeres for å fjerne elementer fra frysemidlet, resuspenderes i ferskt medium og dyrkes i flasker.
Biosikkerhetsnivå
Biosikkerhetsnivå 1 brukes til håndtering og vedlikehold av HT-29-cellelinjen.
HT-29-celler: Fordeler og begrensninger
Hver cellelinje har unike fordeler og ulemper som skiller den fra andre cellelinjer. Dette avsnittet vil omhandle de viktigste fordelene og begrensningene knyttet til HT-29-celler.
Fordeler
De viktigste fordelene med HT-29-celler er:
-
Enkel å dyrke
HT-29-cellelinjen er enkel å håndtere og vedlikeholde, uten komplekse krav til dyrking. Den dyrkes mye i forskningslaboratorier.
-
In vitro-modell av tarmceller
HT-29-celler kan differensiere seg til modne tarmceller (enterocytter og slimproduserende celler) under spesifikke dyrkingsforhold. De brukes som en cellemodell for å studere fordøyelse og biotilgjengelighet.
-
Høy transfeksjonseffektivitet
HT-29-tykktarmskreftceller har høy transfeksjonseffektivitet, noe som gjør dem egnet for studier av genuttrykk og regulering. Både midlertidige og stabile transfeksjonseksperimenter kan utføres ved hjelp av ulike metoder.
-
Legemiddelfølsomhet
HT-29-celler er følsomme for kjemoterapeutiske legemidler som fluorouracil og oksaliplatin, som ofte brukes i behandling av tykktarmskreft. De brukes til å studere legemiddelresistens og screene potensielle terapeutiske legemidler for kolorektal karsinom.
Begrensninger
-
Heterogenitet
HT-29-celler viser, i likhet med andre kreftcellelinjer, heterogenitet og danner ikke nødvendigvis en ensartet cellepopulasjon. Dette kan påvirke reproduksibiliteten av resultatene i visse analyser og føre til mindre variasjoner i eksperimentelle utfall.
-
Begrenset differensiering
HT-29-celler har begrenset differensieringspotensial. De differensierer seg ikke fullstendig til tarm- eller tykktarmsceller, men viser bare noen få karakteristiske trekk. Denne begrensningen kan begrense bruken av dem i studier av mer komplekse biologiske prosesser.
HT-29-celler: Anvendelser
HT-29-cellelinjen dyrkes i stor utstrekning i forskningslaboratorier på grunn av sitt brede spekter av anvendelser. Dette avsnittet vil kun dekke noen få viktige anvendelser av HT-29-celler.
Kreftforskning: HT-29 er en kolorektal adenokarsinomcellelinje, og brukes derfor til å studere kreftprogresjon, utvikling og underliggende molekylære mekanismer. En studie gjennomført i 2018 brukte HT-29-cellelinjen til å undersøke cellemolekylene som er ansvarlige for metastasering. Denne studien observerte at vimentin- og CXCR4-genene regulerer cellemetastase. Mens transfeksjon av mikroRNA-193a-5p-mimik kan redusere mRNA-nivåene av disse genene og med hell redusere kreftcellemetastase [2].
Toksikologisk forskning: HT-29-cellelinjen brukes mye i toksikologisk forskning. Disse kolorektale karsinomcellene brukes til å vurdere toksisiteten til ulike legemiddelkandidater ved hjelp av ulike analyser. For eksempel undersøkte en studie toksisitetspotensialet til et etanolisk ekstrakt av planten Syzygium cumini på HT-29-cellelinjen. Resultatene viste en betydelig undertrykkelse av HT-29-celleveksten, noe som indikerer ekstraktets lovende kreftbekjempende egenskaper [3].
Mikrobiologi: HT-29 kan brukes som et vertscellesystem for å undersøke patogenesen til potensielle mikrober, dvs. bakterier og virus. Forskere kan infisere HT-29-celler med mikrober for å undersøke deres virulens og vertsrespons. En slik studie brukte HT-29-celler for å undersøke melkesyrebakteriers probiotiske egenskaper [4]. En annen studie brukte HT-29-celler for å evaluere effekten og sikkerheten ved bakteriofagbehandlinger [5].
5. Forskningspublikasjoner om HT-29-celler
Denne delen vil belyse noen viktige publikasjoner om HT-29-celler som vil hjelpe deg med å utforme forskningsstudien din.
Denne studien foreslo etanoluttrekk av Syzygium cumini som et potensielt kreftbekjempende middel mot den kolorektale kreftcellelinjen HT-29. Utdraget hemmet veksten av kreftceller betydelig.
Denne publikasjonen i Bioscience Reports testet kreftbekjempende aktivitet av et stoff, Tetradrine, på HT-29-celler. Resultatene viste at tetrandrine hemmer kreftcellers spredning og vekst via regulering av cellesignalveier.
Denne studien foreslo at miRNA-193a-5p potensielt kan regulere HT-29-cellemetastaser ved å regulere metastaserelaterte gener.
Denne artikkelen ble publisert i Nature Scientific Reports i 2018. Denne studien benyttet den tumorigeniske HT-29-cellelinjen som en tarmcellemodell for å evaluere effekten av den foreslåtte bakteriofagbehandlingen.
I denne studien brukte forskerne HT-29-celler for å undersøke de probiotiske egenskapene til melkesyrebakterier. Interessant nok viste studien at laktobaciller hindrer patogene bakterier i å feste seg til tykktarmsceller.
HT-29-celler Ressurser: Protokoller, videoer og mer
Denne delen vil dekke noen online ressurser tilgjengelig om HT-29-celler som vil hjelpe deg å lære om vedlikehold, dyrking og transfeksjonsprotokoller.
Protokoller for cellekultur
Følgende ressurser vil veilede deg om subkultivering av HT-29-celler.
- Dyrking av HT-29-celler: Denne lenken gir grunnleggende kunnskap om vekstmedium, tining og subkultivering av HT-29-celler.
- Vedlikehold av HT-29-kulturer: Denne artikkelen inneholder all nyttig informasjon om dyrking og vedlikehold av HT-29-celler.
Transfeksjonsprotokoller
HT-29-cellelinjen har høy transfeksjonseffektivitet og brukes ofte i studier av genuttrykk. Følgende ressurser beskriver mulige transfeksjonsprotokoller for disse cellene.
- Transfeksjon av HT-29: Denne lenken inneholder en detaljert protokoll for transfeksjon av HT-29-celler.
- Transfeksjon av HT-29-cellelinjen: Dette dokumentet beskriver transfeksjonsprotokollen for HT-29-cellelinjen med plasmid-DNA.
Videoer relatert til HT-29-cellelinjen
Her er noen videoer om dyrking og vedlikehold av denne tumorigeniske cellelinjen.
- Passering av celler: Denne videoen viser protokollen for passering av celler for vedheftende cellelinjer.
- Transfeksjon av HT-29-celler: Denne videoen vil veilede deg om transfeksjonsmetoden som brukes for HT-29-celler.
Vi forventer at informasjonen i denne artikkelen er verdifull og tilstrekkelig for at du skal kunne håndtere og vedlikeholde HT-29-cellelinjen. Hvis du planlegger å bruke HT-29-celler i studien din, kan du bestille dem hos oss.
Referanser
- Martínez-Maqueda, D., B. Miralles og I. Recio, HT29-cellelinje. The Impact of Food Bioactives on Health: in vitro and ex vivo models, 2015: s. 113–124.
- Shirafkan, N., et al., microRNA‐193a‐5p hemmer migrasjon av humane HT‐29 tykktarmskreftceller via undertrykkelse av metastaseringsveien. Journal of cellular biochemistry, 2019. 120(5): s. 8775-8783.
- Khodavirdipour, A., R. Zarean og R. Safaralizadeh, Evaluering av den krefthemmende effekten av etanolisk ekstrakt av Syzygium cumini på HT-29-kolorektalcellelinjen. Journal of gastrointestinal cancer, 2021. 52: s. 575–581.
- Fonseca, H.C., et al., Probiotiske egenskaper hos laktobaciller og deres evne til å hemme adhesjonen av enteropatogene bakterier til Caco-2- og HT-29-celler. Probiotics and antimicrobial proteins, 2021. 13: s. 102–112.
- Shan, J., et al., Bakteriofager er mer virulente mot bakterier med menneskelige celler enn de er i bakteriekultur; innsikt fra HT-29-celler. Scientific reports, 2018. 8(1): s. 5091.