DU-145-celler – En omfattende veiledning for forskere
DU-145 er en human prostatakarsinomcellelinje som er mye brukt i biomedisinsk forskning. Disse cellene fungerer som en uvurderlig modell for å studere prostatakreftbiologi, legemiddeltesting og utvikling. I tillegg bruker forskere også DU-145-celler til å undersøke molekylære mekanismer som ligger til grunn for utvikling, vekst og progresjon av prostatakreft.
- Vekstmedium
- EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) med medietilskudd, dvs. 10 % føtal bovint serum (FBS), 2 mM L-glutamin, 2,2 g/L NaHCO3 og EBSS. Mediet skiftes 2 til 3 ganger per uke.
- Fordoblingstid
- Fordoblingstiden for DU-145 varierer mellom 30 og 40 timer.
- Veksttype
- DU-145 er en vedheftende cellelinje.
- Biosikkerhetsnivå
- BSL-1
- Tilgjengelig fra
- Cytion — Bestill DU-145
Generell informasjon og opprinnelse til DU-145-cellelinjen
Det er viktig å forstå en cellelinjes grunnleggende egenskaper og opprinnelse før man begynner å arbeide med den. Denne delen gir en omfattende forståelse av egenskapene og opprinnelsen til DU-145-cellelinjen. Du vil lære: Hva er DU145-kreftceller? Hva er morfologien til DU145-celler? Hva er forskjellen mellom PC-3 og DU145?
- DU-145, en human prostatakreftcellelinje, ble isolert fra hjernen til en kaukasisk mann (69 år) med metastatisk prostatakarsinom. Disse cellene ble først deponert av K.R. Stone og kolleger i 1978.
- I likhet med PC-3-prostatakreftceller uttrykker også DU-145 androgenreseptorer. Når disse cellene utsettes for behandling med androgenligander, viser de imidlertid ingen aktivitet av androgenreseptorresponsive gener og anses derfor som androgenuavhengige celler.
- DU-145-celler har en epitelial morfologi.
- DU-145-celler er hypotriploide og har et modalt kromosomtall på 64. De viser flere markørkromosomer, som del (11) (q23), t(11q12q), 16q+, del (1) (p32) og del (9) (p11).
PC-3 mot DU145
Begge prostatakreftcellelinjene er androgenreseptor-uavhengige. De skiller seg fra hverandre når det gjelder tumorigenisk og metastatisk potensial. Når den injiseres i en immunsvekket mus, danner PC-3-cellelinjen et svært metastatisk adenokarsinom av grad IV. I motsetning til dette utvikler DU-145-cellelinjen prostatakreft med moderat metastatisk potensial [1].
Dyrking av DU-145-celler
DU-145-cellelinjen er mye brukt i forskningslaboratorier for prostatakreft. Du bør lære deg følgende viktige punkter for å gjøre dyrkingen enkel og effektiv. Dette avsnittet inneholder informasjon om DU145-mediet, doblingstid, cellekulturforhold og protokoller.
Viktige punkter for dyrking av DU-145-celler
Populasjonens doblingstid:
Fordoblingstiden for DU-145 varierer mellom 30 og 40 timer.
Adherent eller i suspensjon:
DU-145 er en vedheftende cellelinje.
Utsåingstetthet:
DU-145-celler sås med en anbefalt celletetthet på 2 x 104 celler/cm2. Ved denne tettheten danner cellene et sammenvokst monolag på nesten 4 dager. For utsåing vaskes cellene med 1 x fosfatbuffersaltvann og inkuberes med passasjeløsning, Accutase. Etter 8 til 10 minutters inkubering ved romtemperatur tilsettes cellene ferskt dyrkningsmedium og sentrifugeres. Den oppsamlede cellepelleten resuspenderes forsiktig, og cellene helles over i nye dyrkningsflasker for vekst.
Vekstmedium:
EMEM (Eagle's Minimum Essential Medium) med mediumtilskudd, dvs. 10 % føtal bovint serum (FBS), 2 mM L-glutamin, 2,2 g/L NaHCO3 og EBSS. Mediet fornyes 2 til 3 ganger per uke.
Vekstbetingelser:
DU-145-kulturer oppbevares i en fuktet inkubator ved 37 °C med en 5 % CO2-kilde.
Oppbevaring:
DU-145-celler oppbevares i dampfasen av flytende nitrogen eller ved temperaturer under -150 °C i en elektrisk fryser for å opprettholde cellenes levedyktighet over lengre tid.
Fryseprosess og medium:
CM-1 eller CM-ACF frysemedier anbefales for DU-145 prostatakreftceller. En langsom frysemetode som lar temperaturen synke gradvis med 1 °C, velges for å fryse cellene. Dette forhindrer at cellene utsettes for sjokk og bidrar til å opprettholde deres levedyktighet.
Tineprosess:
Frosne DU-145-celleampuller tines raskt i et 37 °C varmt vannbad i 40 til 60 sekunder. Deretter tilsettes cellene dyrkningsmedium og sentrifugeres for å fjerne komponenter fra frysemediet. De høstede cellene resuspenderes i et vekstmedium og helles i kolben for vekst. Gjenoppretting etter frysing tar nesten 24 timer.
Biosikkerhetsnivå:
Biosikkerhetsnivå 1 er påkrevd for å dyrke den androgenreseptor-uavhengige cellelinjen DU145.
DU-145-cellelinjen: Fordeler og begrensninger
I likhet med andre cellelinjer har prostatakreftcellelinjen DU-145 både fordeler og ulemper. Disse egenskapene kan hjelpe deg med å avgjøre om den skal brukes i din forskning. De viktigste fordelene og ulempene ved DU-145-celler er nevnt nedenfor.
Fordeler
Fordelene med DU-145-celler er:
Tumorigenisitet
DU-145 er en aggressiv, tumorigenisk prostatakreftcellelinje med moderat metastatisk potensial. Brukes til å utvikle DU145-xenotransplantatmodellen i immunsvekkede mus for å studere prostatakreftbiologi, utvikling og vekst in vitro og in vivo.
Androgenreseptor-uavhengighet
DU-145-prostatakreftceller er androgenreseptor-uavhengige. De er ikke avhengige av androgener for vekst og viser ingen respons på celle- og molekylært nivå når de behandles med androgener. Ideell for forskning på hormon-uavhengige mekanismer ved prostatakreft.
Begrensninger
Begrensningene ved DU-145-cellelinjen er:
In vitro-modell
DU-145 er en in vitro-cellemodell av metastatisk prostatakarsinom, så den representerer kanskje ikke fullt ut kompleksiteten i primære prostatatumorer. Videre kan den kanskje ikke representere alle typer og undertyper av prostatakreft på grunn av spesifikke egenskaper som androgenreseptor-uavhengighet.
Forskningsanvendelser av DU-145-celler
DU-145-prostatakreftcellelinjen har et bredt spekter av forskningsanvendelser. Noen lovende anvendelser er oppført her.
- Prostatakreftbiologi: DU-145 er en relevant modell for å studere prostatakreftbiologi. Forskere bruker disse cellene til å undersøke molekylære mekanismer som driver kreftutvikling, progresjon og metastase. Videre undersøkes også genetiske forandringer som ofte er forbundet med prostatakreft. Forskning utført i 2021 undersøkte DU-145-cellene for å identifisere potensielle biomarkører for effektive diagnostiske og terapeutiske implikasjoner. Studien foreslo aktin gamma 1 (ACTG1) som en potensiell biomarkør for prostatakreft, da det fremmer kreftcelleproliferasjon og regulerer metastasering via aktivering av MAPK/ERK-signalveien [2].
- Legemiddelscreening og -utvikling: DU-145-prostatakreftceller brukes mye til å teste cytotoksisiteten og effekten av potensielle kreftmedisiner. Dette hjelper forskere med å identifisere nye medisiner, forstå medikamentresistens og underliggende molekylære mekanismer. En studie utført i 2022 undersøkte den cytotoksiske effekten av en harpiksaktig blanding, propolis eller bi-lim, i prostatakreftcellelinjene PC-3 og DU-145. Studien viste veksthemmende effekter av dette naturlige stoffet i begge cellelinjene og pekte på dets potensial som kreftmedisin [3]. En annen studie ble gjennomført i 2019 som undersøkte de antiproliferative effektene av et naturlig stoff, betain, i DU-145-prostatakreftceller. Forskningen viste at betain utøver antiproliferative aktiviteter ved å øke oksidativt stress-mediert celledød og betennelse i DU-145-celler [4].
5. Forskningspublikasjoner om DU-145-celler
Følgende er noen forskningspublikasjoner om DU-145-cellelinjen.
Denne studien i Biological Trace Element Research, 2020, foreslo at sinksulfat (ZnSo4) utøver antiproliferative effekter i DU-145-celler ved å indusere apoptose, morfologiske endringer, oksidativ skade og betennelse.
Denne forskningsartikkelen ble publisert i BMC Complementary Medicine and Therapies i 2020. Denne studien undersøkte det cytotoksiske og antimetastatiske potensialet til en plante, Annona muricata L. barkekstrakt, og dets bioaktive annonacin i DU-145-cellelinjen.
Denne publikasjonen i IUBMB Life (2019) foreslo at interaksjonen mellom det lange ikke-kodende RNA LOXL1-AS1 og miR-let-7a-5p samt EGFR-signalveien regulerer doxorubicinresistensen i DU-145-prostatakreftceller.
Denne artikkelen i Anti-Cancer Agents in Medicinal Chemistry (2020) fastslo at nedregulering av Discoidin Domain Receptor1 (DDR1)-genet forårsaker død av DU-145-celler og hemmer epitel-til-mesenkym-overgang (EMT) via aktivering av Pyk2/MKK7-signalveien.
Denne studien i Journal of Food Biochemistry (2019) foreslo at Casticin, et polymetoksyflavon, hemmer migrasjon og invasjon av DU-145-celler ved å regulere Ras/Akt/NF-κB-signalering.
Ressurser for DU-145-cellelinjen: Protokoller, videoer og mer
Det finnes mange nettressurser om DU-145-prostatakreftcellelinjen. I denne delen vil vi nevne noen ressurser som forklarer håndtering, vedlikehold og transfeksjonsprotokoll for disse cellene:
- DU-145-transfeksjon: Denne videoopplæringen er en trinnvis veiledning for å lære protokollen for transfeksjon av DU-145-celler.
Protokollen for DU-145-cellekultur er nevnt her.
- DU-145-subkultivering: Denne lenken hjelper deg med å lære protokollen for subkultivering av DU-145-celler.
- DU-145-celler: Dette nettstedet inneholder mye nyttig informasjon om DU-145-cellelinjen, inkludert DU145-medium, protokoll for subkultivering og håndtering av proliferative og kryokonserverte kulturer.
Referanser
- Lima, A.R., et al., Diskriminering mellom eksometabolomet til normale og kreftceller i menneskelig prostata ved hjelp av GC-MS. Vitenskapelige rapporter, 2018. 8(1): s. 5539.
- Xiao, L., et al., Silencing ACTG1 expression induces prostate cancer epithelial mesenchymal transition through MAPK/ERK signaling pathway. DNA and Cell Biology, 2021. 40(11): s. 1445-1455.
- Gogacz, M., et al., Antikrefteffekter av propolisekstrakter oppnådd ved kaldseparasjonsmetoden på PC-3- og DU-145-prostatakreftcellelinjer. Molecules, 2022. 27(23): s. 8245.
- Kar, F., et al., Betain hemmer celleproliferasjon ved å øke oksidativt stress-mediert apoptose og betennelse i den humane prostatakreftcellelinjen DU-145. Cell Stress and Chaperones, 2019. 24: s. 871-881.